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I CONGRESO NACIONAL DE INVESTIGACIN - IASD 1

2011 Direccin General de Investigacin


UNIVERSIDAD PERUANA UNIN
Estudio del aguaymanto (Physalis peruviana) como fuente de Vitamina C
Cahuapaza-Condori, Carmen Yudith
2
; Matos-Chamorro, Alfredo
1

Resumen
El objetivo de la presente revisin es dar a conocer la importancia del fruto del aguaymanto (Physalis peruviana)
como fuente de vitamina. El consumo de esta vitamina es importante ya que es un nutriente que el organismo no
puede sintetizar y son esenciales, en muy pequeas cantidades, para el metabolismo normal de otros nutrientes.
Colombia es considerado el primer productor de aguaymanto (Physalis peruviana) a nivel mundial; pero este fruto
es oriundo de los Andes peruanos. Es considerado como un fruto promisorio en nuestro pas, por ende se han
realizado varios estudios por diferentes mtodos para determinar su contenido de vitamina C.
La vitamina C o cido ascrbico (AA) es una vitamina muy termolbil, por ello es importante estudiar su cintica
de deterioro para conocer su comportamiento en funcin de tiempo y temperatura; tambin es susceptible a otros
factores como exposicin a la luz, pH, concentracin de oxgeno, entre otros. La metodologa de cromatografa
lquida de alta resolucin (CLAR) garantiza los lmites de deteccin y cuantificacin ms bajos, adems facilitan la
eliminacin de los efectos causados por la matriz.
En conclusin el aguaymanto (Physalis peruviana) es fuente de vitamina C, estudios realizados reportaron un
contenido de 20-40 mg/100g. Su consumo como fuente de vitamina C es beneficioso, as como tambin,
interviene en la absorcin del hierro.
Palabras clave: Aguaymanto (Physalis peruviana), vitamina C, cintica de deterioro.
Aguaymanto Study (Physalis peruviana) as a source of Vitamin C
Summary
The aim of this review is to show the importance of the fruit of aguaymanto (Physalis peruviana) as a source
of vitamin. Consumption of this vitamin is important because it is a nutrient that the body can not synthesize and
are essential in very smallquantities for normal metabolism of other nutrients.
Colombia is considered the largest producer of aguaymanto (Physalis peruviana) in the world, but this fruit
is from Peruvian Andes. It is considered a promising fruit in our country, therefore there have been
several studies by different methods to determine his content of vitamin C.
Vitamin C or ascorbic acid (AA) is known as a very labile vitamin, so it is important to study the kinetics of
deterioration to know its behavior as a function of time and temperature is also susceptible to other factors such
as exposure to light, pH , oxygen concentration, among others. As the high pressure liquid chromatography
(HPLC), the methodology that ensures the detection and quantification limits lower, which also facilitate the
elimination of the effects caused by the matrix.
In conclusion aguaymanto (Physalis peruviana) is a source of vitamin C, studies reported from 20-
40 mg/100g content. Its use as a source of vitamin C is beneficial, and also involved in iron absorption .
Keywords: Aguaymanto (Physalis peruviana), vitamin C, kinetics of degradation.
Introduccin
El aguaymanto (Physalis peruviana), fruta tpica de
los Andes Suramericanos, actualmente es objeto
de estudio desde el punto de vista agronmico y
teraputico, sin embargo, en necesario establecer
un tiempo lmite en el cual sus propiedades fsicas
y nutritivas permanezcan estables o con prdidas
significativas durante la etapa de poscosecha
(Gutierrez y otros Mayo, 2007).
El aguaymanto (Physalis peruviana) contiene entre
otros nutrientes compuestos bioactivos como el
1
Universidad Peruana Unin. amatoch@upeu.edu.pe
2
E.A.P. de Ingeniera de Alimentos, Universidad Peruana Unin.
carmencahuapaza@gmail.com
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cido ascrbico, -caroteno (provitamina A)
compuestos fenlicos, entre otras vitaminas que
podra proporcionar un efecto fisiolgico-
beneficioso en la salud, en el funcionamiento del
organismo o en el bienestar, mayor que el
proporcionado por los nutrientes sencillos que
contiene, dado que se conoce que existe un
alimento con estas caractersticas (Encina y otros
2007).
Gutirrez y otros (Marzo, 2007) mencionan que el
cido ascrbico (AA) es un nutriente esencial
para los humanos. Una baja ingesta causa una
enfermedad, por deficiencia, conocida como
escorbuto. Este cido est presente en forma
natural en muchas frutas y verduras.
El AA, es considerado factor de control de calidad
en los alimentos, puesto que es una sustancia
inestable bajo diferentes condiciones ambientales
(intensidad luminosa, temperatura, etc.) y su
disponibilidad en un determinado alimento es
ndice de vida til dentro de un proceso de
almacenamiento o tratamiento (Gutirrez y otros
Mayo, 2007).
El AA es conocido como una vitamina termolbil;
varios autores, (Johnson y Vieira, citados por
V003) han estudiado la cintica de degradacin
trmica en jugos y frutas naturales, bajo
diferentes condiciones de tratamiento; por
ejemplo, la oxidacin del AA al cido
dehidroascrbico y dicetogulnico, hace que se
pierda la actividad vitamnica, razn por la cual, el
seguimiento de la variacin en la concentracin
del AA en alimentos, es relevante para establecer
los mecanismos que afectan su estabilidad y por
tanto influyen en el tiempo de vida til de los
mismos (Gutirrez y otros Marzo, 2007).
Fennema (citado por Velazco 2009), seala que
el AA es muy sensible a la oxidacin,
especialmente cuando la reaccin est catalizada
por iones metlicos como cobre y fierro, asimismo,
el calor y la luz aceleran el proceso. En tanto que
factores como el pH, la concentracin de oxgeno
y la actividad del agua, influyen poderosamente en
la actividad de la reaccin.
El objetivo de este estudio es dar a conocer al
aguaymanto como una fuente de vitamina C, as
como los diferentes factores que afectarn su
estabilidad.
Aguaymanto (Physalis peruviana)
Historia
El aguaymanto es originaria del Per, aunque
existen indicios de que proviene del Brasil y fue
aclimatada en los altiplanos del Per y Chile,
donde crece como planta silvestre y semi-silvestre
en zonas altas entre los 1500 y 3000 msnm, a
Sudfrica fue introducida como fruto antiescorbuto
(Fischer y otros 2000).
Zapata (20001) seala que el aguaymanto o
Physalis se cultiva fuera del Per, y con otros
nombres desde el siglo XVIII en varios pases
entre los cuales est, Colombia (uchuva), frica
del sur (cape gosseberry).
Annimo (2007) reporta las siguientes
denominaciones: aguayllumantu, puchi puchi,
uchuva (Aymara), pasa capul, tomate silvestre,
tomate de sierra.
Por su parte Fischer y otros (2000) la clasifican por
idioma; en espaol: uvilla, copa capul, agua y
mate, amor de bolsa, cereza del Per, cuchuva,
miltomate, motobobo, embolsado, sacabuche,
cereza de judas, yuyo de hojas, cereza de
invierno, cereza de la tierra, tomate de cscara; en
ingles: Capeggoseberry (grosella del Cabo),
peruvian grandcherry (cereza del Per),
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grauncherry.
Descripcin Botnica
El aguaymanto (Physalis peruviana) pertenece a la
familia de las Solanceas y al gnero Physalis
(Tabla 1), cuenta con ms de ochenta variedades
que se encuentran en estado silvestre y que se
caracterizan porque sus frutos estn encerrados
dentro de un cliz o cpsula (Figura 1). Es
originaria del Per, es la especie ms conocida de
este gnero (Calvo 2009).

Tabla 1 Clasificacin botnica del aguaymanto





Fuente: Fischer y otros (2000).

Con respecto a las variedades Fischer y otros
(2000) mencionan que el gnero Physalis, incluye
unas 100 especies herbceas perennes y anuales,
cuyos frutos se forman y permanecen dentro del
cliz. La Physalis peruviana es la ms utilizada por
su fruto azucarado, tambin las frutas de las
especies Physalis angulata y Pysalis minima, que
crecen en el sudeste de Asia como malezas, con
comestibles; de igual manera los frutos de la
Physalis ixocarpa y la Physalis pruinosa.





Figura 1 Aguaymnato (Physalis peruviana)

Colombia es el primer productor mundial de
aguaymanto, seguido por Sudfrica. Se cultiva de
manera significativa en Zimbabwe, Kenya,
Ecuador, Per, Bolivia y Mxico (Calvo 2009).
Castro y otros (2008) confirman que Colombia es
el primer productor mundial de aguaymanto con
11500 ton/ao.
Calvo (2009) describe al aguaymanto como una
planta de tipo arbustivo con una raz fibrosa que se
encuentra a ms de 60 cm de profundidad en el
suelo, posee un tallo largo quebradizo de color
verde; las hojas son enteras similares a un
corazn pubescente y de disposicin alterna. Las
flores son hermafroditas de cinco spalos, con una
corola amarilla y de forma tubular; el fruto es una
baya carnosa en forma de globo, con un dimetro
que oscila entre 1.25 y 2.5 cm y con un peso entre
4 y 10 g; est cubierto por un cliz formado por
cinco spalos que le protege contra insectos,
pjaros, patgenos y condiciones climticas
externas. Su pulpa presenta un sabor cido
azucarado (semicido) y contiene de 100 a 300
semillas pequeas de forma lenticular (Figura 2).
Figura 2 Planta, cliz y fruto del Aguaymanto

Clima y suelo
En un cultivo que se desarrolla muy bien en
altitudes altas, entre 1800 y 2800 msnm, con
temperaturas promedio entre 13 y 15 C. La planta
es susceptible a temperaturas externas; las
temperaturas muy altas pueden perjudicar la
Reino Vegetal
Tipo Fanergamas
Clase Dicotilednea
Subclase Metaclamidea
Orden Tubiflora
Familia Solancea
Gnero Physalis
Especie Physalis Peruviana L.
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floracin y fructificacin, as como las
temperaturas nocturnas inferiores a 10 C de
manera constante impiden que prospere,
igualmente una lluvia persistente afecta la
condicin de la planta. La temperatura y la luz
juegan un papel muy importante en el tamao,
color, contenido nutricional, sabor y tiempo de
maduracin del fruto. Para obtener un fruto de
buena calidad se requiere una intensidad lumnica
equivalente entre 1.500 y 2.000 horas luz/ao. La
precipitacin anual ptima debe oscilar entre 1000
y 2000 mm bien distribuidos a lo largo del ao, con
una humedad relativa entre 70% y 80%. El
suministro de agua durante los periodos secos es
importante para evitar que se rajen los frutos. El
aguaymanto prefiere aquellos suelos con textura
areno-arcillosa con buen drenaje y alto contenido
de materia orgnica y un pH que debe estar entre
5.5 y 6.8 (Calvo 2009).
Composicin Nutricional
Repo-Carrasco y Wu (citado por Rodrguez 2006)
sealan que el aguaymanto, es una planta
originaria de los Andes Peruanos con alto
potencial de multiplicacin ya que crece en suelos
pobres. Una planta puede reproducir cerca de 300
frutos, son bayas de color naranja amarillo, de
forma globosa, con un peso entre 4-5 g y sabor
agridulce. Es extremadamente rica en Vitamina A
(648 UI/100g) y tiene buenos contenidos de
Vitamina C (26 mg), fibra (4.8 g), protenas (1.9 g),
fsforo, hierro, potasio y zinc (Tabla 2).






Tabla 2 Composicin nutricional del aguaymanto
(Physalis peruviana)











Fuente: Camacho (citado por Annimo 2007).
Fisher (citado por Calvo 2009) seala que segn
el National Research Council, el jugo de la uchuva
madura tiene altos contenidos de pectinasa, lo que
disminuye los costos en la elaboracin de
mermeladas y otros preparativos similares.
Por otro lado Muoz y otros (2007) reportaron los
siguientes contenidos de cidos fenlicos y
flavonoles en aguaymanto: 4.97, 1.78, 1.67, 4.44,
0.68 mg/kg g peso fresco de cido clorognico,
cido cafeico, rutina, cido ferlico, y quercetina
respectivamente.

Propiedades o beneficios
Se le han atribuido muchas propiedades
medicinales talos como antiasmtico, diurtico,
antisptico, sedante, analgsico, fortifica el nervio
ptico, alivia problemas de garganta, elimina
parsitos intestinales y amebas; adems se

Factor Nutricio-
nal
Contenido por 100 g
de pulpa
Agua 76.9
Caloras 54
Protenas 1.1
Cenizas 1.0
Fibras 4.8
Grasa 0.4
Carbohidratos 13.1
Fsforo 38 mg
Hierro 1.2 mg
Calcio 7.0 mg
Vitamina A 648 U.I
Tiamina 0.18 mg
Riboflavina 0.03 mg
cido Ascrbico 26 mg
Niacina 1.3 mg
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reportan sus propiedades antidiabticas (Ramadan
y Ahmad citados por Rodrguez 2007)
recomendando el consumo de 5 frutos diarios. No
existiendo estudios previos que indiquen sus
posibles efectos adversos (Rodrguez 2007).
En Colombia se le atribuyen propiedades
medicinales tales como las de purificar la sangre,
disminuir la albmina de los riones, aliviar
problemas en la garganta, prstata y bronquiales,
fortificar el nervio ptico, limpiar las cataratas y
prevenir la osteoporosis (Calvo 2009).
Usos y consumo
El fruto de aguaymanto puede consumirse sin
procesar, como fruta deshidratada, tambin se
incorpora en jugos, mermeladas, helados, dulces y
jaleas (Calvo 2009).
En los ltimos aos, debido a la expansin de la
medicina alternativa, el aguaymanto ha sido una
de las frutas predilectas por los entendidos en la
materia. Por otro lado; el aguaymanto se consume
como nctar, mermelada, yogurt, helado, en
extracto, fruta fresca, pulpa congelada o como
ingredientes en exquisitos potajes de la floreciente
gastronoma Novoandina (Avalos 2008).
Produccin en el Per
Annimo (2007) seala que los principales
departamentos que producen aguaymanto son
Ayacucho, Cusco, Cajamarca, Apurmac y
Huancavelica (Tabla 3).
Tabla 3 - reas prioritarias en el Per
Fuente: Annimo (2007).

Mujica y otros (1999) indica que el valor nutritivo
de los frutales nativos radica en su excelente
aporte de vitaminas, en especial es notable el
contenido de vitamina A en el aguaymanto y de
vitamina C en el tomate de rbol y el tumbo (Tabla
4). Estos productos tienen adems una buena
aceptacin por la poblacin nativa.

Tabla 4 - Composicin qumica en vitaminas de
algunos frutales andinos nativos
Fuente: (a) National Reserch Council, 1989; (b)
Ministerio de Salud/INS/Centro Nac. De Alimentacin
y Nutricin, 1996; (c) Ministerio de Salud/ININMS,
1987 citados por Mujica y otros (1999).

Vitamina C
UAM (2003) seala a las vitaminas como
sustancias orgnicas, no relacionadas
estructuralmente entre si, que precisan ser
ingeridas en pequeas cantidades con la dieta;
stas se clasifican de acuerdo a su liposolubilidad
en 2 grandes grupos: vitaminas hidrosolubles
(complejo vitamnico B y vitamina C) y vitaminas
liposolubles (vitamina A, D, E y K).
El cido L-ascrbico es un compuesto de 6
carbonos relacionado estructuralmente con la
glucosa. Es un agente con una elevada capacidad
reductora, tanto el cido ascrbico como su forma
oxidada (cido L-dehidroascrbico) presentan
actividad biolgica y son interconvertibles por una
reaccin de oxidacin/reduccin (Figura 3). En la
mayora de los tejidos el cido ascrbico existe en
la forma reducida (90%) (Thompkinson citado por
Romero 2008).
Zona Norte Amazonas
Chachapoyas, Rodrguez de
Mendoza
Zona
Centro
Junn Tarma (Huasahuasi)
Ancash Aija, Bolognesi, Ocros, Recuay
Hunuco
Provincia de Hunuco, Centro poblado de
Pachachupan Distrito de Chincha
Zona Sur
Cusco
Huallabama, Urubamba Distrito
de Macchu Picchu, Ollaytambo
Huaraz
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Figura 3 Formas del cido ascrbico

Annimo (2006) seala que la vitamina C o AA
tiene caractersticas reductoras por sus dos grupos
donadores de protones (Figura 4).




Figura 4 cido ascrbico y pKas de sus grupos
Fuente: Fennema (citado por Annimo 2006)

Annimo (2006) seala que la mayora de las
reacciones metablicas del cido ascrbico se
deben a su fuerte potencial reductor (Nishikimi,
citado por Annimo 2006). Su actividad
antioxidante deriva del desplazamiento de cido L-
ascrbico a su forma oxidada L-dehidroascrbico
(Figura 5). Estas dos formas moleculares
principales del cido ascrbico se encuentran en
equilibrio y ambas presentan actividad biolgica.
Figura 5 Formas moleculares en equilibrio de la
Vitamina C (Fennema citado por Annimo 2006).
La mayora de las especies animales pueden
sintetizar la vitamina C a partir de la glucosa, pero
los seres humanos no podemos producirla, por lo
que nos vemos obligados a consumirla en la
dieta. La vitamina C es un polialcohol con un grupo
cido (Garca 2005).
La vitamina C se incluye bajo la denominacin de
cido ascrbico (2,3-enediol-L-gulona-1,4-lactona)
y al dehidroascrbico (2,3-dicetogluonato); ambos
son inestables y el primero se convierte rpida y
espontneamente en el segundo, mientras que en
nuestro organismo el AA se transforma
reversiblemente por oxidacin en cido
dehidroascrbico, que tambin posee actividad
vitamnica, pero menor estabilidad (Rebollo y otros
2005).
Adems de su importancia nutricional, la vitamina
C juega un papel fundamental en la tecnologa
alimentaria. Esta vitamina se usa habitualmente
como aditivo por su actividad antioxidante; esta
proteccin se basa en un mecanismo muy sencillo:
la vitamina C se oxida muy fcilmente y evita as la
oxidacin de otros componentes (Garca 2005).
Estabilidad de la Vitamina C
La vitamina ms sensible o lbil es el cido
Ascrbico o Vitamina C, que se pierde fcilmente
por parmetros tales como, oxidacin e interaccin
con otros metales (Castillo 2002).
Garca (2005) menciona tambin que la vitamina C
es sensible al calor, a la deshidratacin, y al
almacenamiento; la acidez, en cambio reduce la
prdida.
Para estudiar la prdida de la vitamina C, hay que
tener en claro que el cido L-ascrbico tiene una
oxidacin reversible a cido dehidroascrbico, y
que este ltimo es muy inestable a la accin del
calor. Los factores que aceleran esta reaccin de
oxidacin son: el oxgeno del aire, la presencia de
luz, los lcalis, la presencia de metales como el
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Cobre (Castillo 2002).
El AA es conocido como una vitamina termolbil;
varios autores, (Johnson y Vieira, citados por
Gutirrez y otros Marzo, 2007) han estudiado la
cintica de degradacin trmica en jugos y frutas
naturales, bajo diferentes condiciones de
tratamiento; por ejemplo, la oxidacin del AA al
cido dehidroascrbico y dicetogulnico, hace que
se pierda la actividad vitamnica, razn por la cual,
el seguimiento de la variacin en la concentracin
del AA en alimentos, es relevante para establecer
los mecanismos que afectan su estabilidad y por
tanto influyen en el tiempo de vida til de los
mismos (Gutirrez y otros Marzo, 2007).
Otra forma de destruccin del cido ascrbico es a
travs de las reacciones de oxidacin efectuadas
por la enzima cido ascrbico oxidasa que puede
estar presente y no recibe la correcta inactivacin
al inicio del proceso; la fruta en mal estado puede
originar el ingreso de oxgeno dentro de la fruta,
para el aceleramiento de la degradacin de la
vitamina C (Castillo 2002).
Deficiencia de Vitamina C
La deficiencia de vitamina c se asocia con varias
formas de anemia, pero no est claro si esta
vitamina est directamente implicada en la
hematopoyesis o si la anemia aumenta
indirectamente las interacciones de la vitamina C
con el cido flico y el metabolismo de hierro
(Oski, citado por Romero 2008).
Garca (2005) seala que el efecto de un dficit de
vitamina C presenta casos de escorbuto, que se
caracteriza por hemorragias en encas y cada de
dientes, debilitamiento de las defensas,
dificultades de cicatrizacin, hinchazn de tejidos,
falta de apetito, debilidad muscular, fatiga, mayor
tendencia a las infecciones, hipertensin.
Importancia Nutricional
El AA se precisa en la dieta del ser humano ya que
este no tiene la capacidad de sintetizarlo por lo
que requiere consumirlo a diario (Ramrez 2008)
Acta como cofactor en las reacciones
metablicas de hidroxilacin en la sntesis del
colgeno (Jaffe, citado por Annimo 2006). Es
esencial para la formacin normal de huesos y
dientes y para reforzar paredes capilares
(Annimo 2006).
Es indispensable para el mantenimiento de todos
los tejidos, puesto que participa en reacciones de
hidroxilacin como el metabolismo del colesterol;
acta como antioxidante en proteccin contra los
radicales libres, en colaboracin con la vitamina E,
permite almacenar calcio y fsforo en el hueso,
favorece la absorcin de hierro de alimentos
vegetales (Garca 2005).
En su papel como agente reductor, la vitamina C
puede facilitar la absorcin del hierro desde el
tracto gastrointestinal y permitir su movilizacin
desde las reservas; el hierro y el cido ascrbico
forman un complejo quelante-hierro que es ms
soluble en el medio alcalino del intestino delgado
y, por lo tanto, ms fcil es su absorcin (Bothwell
y otros, citado por Romero 2008).
La suplementacin con vitamina C puede
aumentar la absorcin del hierro de la dieta. Sin
embargo, el cido ascrbico debe ser consumido
casi a la misma vez que el hierro para ser eficaz
(Cook y otros citados por Romero 2008). Adems
la vitamina C puede contrarrestar la inhibicin de
la absorcin del hierro producida por los fitatos y
taninos de la dieta (Hallberg y otros citados por
Romero 2008).
El cido ascrbico puede, al mismo tiempo, activar
la enzima cido flico reductasa, para formar el
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cido tetrahidroflico, la forma activa del cido
flico que previene la anemia megaloblstica
(Oski, citado por Romero 2008). Tambin puede
prevenir la prdida de hierro debido a hemorragias
asociadas con la deficiencia en vitamina C.
Badui (citado por Ramrez 2008) seala que ayuda
a la absorcin del hierro (distinto al del grupo
hemo de la mioglobina), por lo que es fundamental
en la dieta de los pueblos que basan su
alimentacin en granos y semillas debido a esto,
comercialmente ya se han desarrollado complejos
de hierro-cido ascrbico, estables a pH cidos
que se adicionan a las harinas de trigo.
Segn Quintero (2003) entre las frutas y vegetales
con contenidos elevados de este nutriente se
recomienda los ctricos, el kiwi, las cerezas,
tomates, coliflor, entre otros (Tabla 5).
Tabla 5 - Alimentos fuente de vitamina C con base
en el valor diario (VD=60 mg)
Fuente: Quintero (2003)
Mtodos para determinar Vitamina C
La determinacin de AA por diferentes tcnicas
analticas, ha sido ampliamente estudiada,
teniendo en cuenta las propiedades fisicoqumicas
de la molcula (King y Torres citados por Gutierrez
Marzo, 2007).
Torregrosa (citado por Gutierrez Marzo, 2007)
describe la cuantificacin del AA por tcnicas
polarogrficas, dadas las caractersticas redox del
analito; empleando la gota de mercurio como
electrodo de trabajo, pulso diferencial con
velocidad de barrido de 10 mV/s y cuantificacin
por adicin estndar.
El uso de la espectroscopa Ultravioleta-Visible
(UV-Vis), para la determinacin del AA, es
ampliamente utilizada en investigaciones con
alimentos, pues este cido presenta transiciones
electrnicas fuertes en la regin UV, facilitando su
identificacin y cuantificacin por esta tcnica
(Arya 1998).
La cromatografa lquida de alta resolucin
(CLAR), garantiza lmites de deteccin y
cuantificacin ms bajos, que facilita adems la
eliminacin de los efectos causados por la matriz
(interferencias en otros mtodos de anlisis); esta
tcnica se utiliza como herramienta esencial en los
estudios cinticos detallados (Rizzolo 2002).
Ramrez (2008) menciona que para determinar
cuantitativamente la vitamina C, se suele usar el
mtodo de titulacin mediante el empleo del 2,6-
dicloroindofenol que se basa en la reduccin del
indicador por accin del cido ascrbico (no
considera el cido dehidroascrbico) sin embargo,
en ocasiones resulta poco exacto porque este
efecto reductor no es nico de la vitamina C, y
porque, adems, el punto de la titulacin no es
preciso, sobre todo si estn presentes otros
pigmentos. Por estas razones, se han desarrollado
diversas tcnicas espectrofotomtricas as como
cromatogrficas con buenos resultados.

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Referencias
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