UD-13: MUESTRAS BIOLGICAS HUMANAS

Obtencin, recogida de muestras y transporte de muestras.

Material de laboratorio para la obtencin, conservacin y transporte de muestras. Preservacin de la muestra.

Dra. Carmen Herrero Barbudo. MP2. Ciclo Formativo de Grado superior. Tcnico de Diagnstico Clnico. Curso 2012-2013.

Obtencin y recogida de muestras

Muestra: Una porcin pequea, seleccionada para su examen, de una cantidad de material mucho mayor
Una muestra debe cumplir las siguientes condiciones: i) ser representativa del sistema en el momento del muestreo,
ii) tener un volumen suficientemente pequeo como para facilitar su transporte y manipulacin,
iii) preservar los valores del parmetro o los parmetros a determinar hasta el momento de su anlisis,

iv) poseer una correcta identificacin.

La estadstica de muestreo se basa en el principio de que : Todas las partculas o porciones del material , deben tener la misma probabilidad de ser tomadas y es vital para la obtencin de una muestra de la forma mas sencilla y representativa posible.

LOTE Muestra: Porcin pequea, seleccionada para su examen, de una cantidad de material mucho mayor.
Cantidad identificable de productos caractersticas presumiblemente uniformes con

MUESTRA BRUTA
Es la que se obtiene directamente del lote. Su n y tamao viene determinado por el tamao del lote.

MUESTRA DE LABORATORIO MUESTRA ANALTICA Muestra ms reducida obtenida a partir de la muestra bruta por procesos de reduccin y que debe tener la misma composicin que esta. Partes no analizables

REPRESENTATIVIDAD!!

MUESTRA ANALTICA

PORCIN ANALTICA

Definiciones

Muestreo: Como proceso procedimiento

Los esquemas de muestreo se pueden obtener de bibliografa y/o

normas oficiales, ASTM (American Society for Testing and

Materials), AOAC (Association of Official Analytical Chemists ),NBS (National Bureau of Statistics ... ). En los laboratorios clnicos, existen los PNT, los protocolos normalizados de trabajo.

La Toma de Muestra es la etapa ms importante del proceso analtico;

si es representativa servir junto a la medida para obtener informacin. Si por el contrario es inapropiada no debemos realizar el anlisis podramos obtener errores qumicos y gasto intil.

Quin se implica en el Muestreo? Conviene que sea el qumico. De no

ser as, considera, que de cualquier error, se culpar al laboratorio.

El plan de toma de muestra se disear para :

- Evitar la contaminacin de la muestra

- Elegir el momento de la toma - Preservar los analitos - Determinar el nmero de muestras a tomar - Definir el tamao y la distribucin (temporo-espacial).

Se recomienda emplear mtodos analticos reconocidos , debiendo conocerse : Limites de deteccin Limite de cuantificacin Sensibilidad Precisin Exactitud

Tambin una idea aproximada de las concentraciones esperables del analito a determinar.
Ya que es de importancia para seleccionar los mtodos de anlisis y las operaciones de tratamiento previo.

Seleccin de los envases y de los sistemas de recoleccin , como de los reactivos para preservar las muestras, para evitar prdidas de analitos (por volatilizacin, absorcin, precipitacin , degradacin biolgica , etc). Transporte y conservacin (sensibilidad a la luz, reactividad ,etc ) . Pretratamiento de muestras preconcentracin . Eliminacin de interferencias . Transformacin de analitos en una especie con mayor sensibilidad analtica .

CONSERVACIN DE LA MUESTRA

El objetivo de una muestra es permitirnos conocer las condiciones de un sistema en el momento del muestreo, por lo cual, no slo es imprescindible que la muestra sea representativa, sino que sus propiedades deben permanecer inalteradas durante todo el proceso de manipulacin y anlisis.
De esta manera, el valor determinado debe ser lo ms prximo posible al valor que tendra el parmetro en estudio en la muestra sin manipular.

Un tema de vital importancia en la conservacin de muestras, es el de los materiales con los que estn fabricados los elementos que vayan a entrar en contacto con la muestra. Dichos materiales, deben cumplir una serie de requisitos para que su interaccin con la muestra sea lo ms baja posible y garanticen el aislamiento de la misma del entorno y eviten su contaminacin.

Entre estas caractersticas de los envases se destacan: No ser solubles en el agua ni en otros componentes que pueda contener la muestra, No presentar adsorcin de las sustancias a analizar, sobre todo de aquellos constituyentes que se deban analizar a nivel de concentraciones muy pequeas) (ejemplo : micronutrientes vitaminas o iones ), No reaccionar con los componentes de la muestra,

En caso de muestras para anlisis de parmetros biolgicos deben ser estriles y que en su composicin no existan sustancias txicas para las bacterias, que afecten su viabilidad.

Otras caractersticas exigibles a los recipientes y equipos destinados a la obtencin de muestras, en el caso de ciertos parmetros especficos, son: Ser impermeables a gases, cuando vayan a realizarse determinaciones de sustancias gaseosas o voltiles como determinacin de gases en sangre arterial (02 y C02 ) Ser opacos en el caso de parmetros fuertemente influenciables por la luz, compuestos fotosensibles.

Los recipientes para las muestras generalmente estn hechos de plstico o de vidrio, y se utilizan de acuerdo con la naturaleza de la muestra y sus componentes. Los recipientes de vidrio se utilizan en aquellos anlisis en donde se utilicen disolventes orgnicos.

Por otra parte los recipientes de plstico -excepto los teflonados (politetrafluoroetileno, TFE)- deben descartarse para muestras que contengan compuestos orgnicos, estos materiales liberan sustancias del plstico (por ejemplo, steres del plstico).

Las tapas de los envases, generalmente de plstico, tambin pueden ser un problema, por lo que se debe usar empaques o sptum de metal o tefln, acorde a la determinacin a efectuar. Para situaciones crticas, es adecuada la inclusin de un blanco del recipiente para demostrar la ausencia de interferencias. Usar los de vidrio para todos los anlisis de compuestos orgnicos voltiles, semivoltiles, aceites y grasas.

En general, la mayora de los parmetros a analizar son inestables en el tiempo.

Es por ello que generalmente, se hace necesario indicar el perodo de almacenaje mximo que soporta la muestra sin que el parmetro sufra una modificacin apreciable. Hay parmetros que necesariamente deben ser determinados en el momento del muestreo (determinacin in situ), como es el caso de la temperatura, (por ejem. Para la determinacin de la La vitamina C, es necesario obtener la muestra (plasma) y mantenerla en fro, es termosensible y estabilizarla con cido Metafosfrico al 10% al 50% v/v) Estos tiempos de conservacin se ven ampliados por el uso de ciertas sustancias y condiciones que ayudan a preservar las muestras, se utilizan para estabilizarlas inmediatamente despus de ser recogidas)

Naturaleza de los cambios en la muestra: Los cambios qumicos son funcin de las condiciones fsicas y suceden en la estructura de ciertos constituyentes. Los cationes metlicos pueden precipitarse como hidrxidos o formar complejos con otros constituyentes como el hierro. Bajo determinadas condiciones oxidantes o reductoras, los iones pueden cambiar de estado de valencia; otros constituyentes se pueden disolver o volatilizar con el paso del tiempo.

Tcnicas de preservacin: Los mtodos de preservacin incluyen las siguientes operaciones: Control del pH Adicin de reactivos Uso de botellas mbar y opacas Refrigeracin Filtracin Congelacin; y obran para: (a) Retardar la accin biolgica, (b) Retardar la hidrlisis de los compuestos o complejos qumicos, (c) Reducir la volatilidad de los constituyentes, y (d) Reducir los efectos de absorcin.

Debido a las diferentes condiciones de transporte y almacenaje, as como a los conservantes estabilizantes especficos de cada ensayo empleados, es necesario tomar ms de una muestra de un mismo sistema, en funcin de los parmetros a determinar y de las condiciones necesarias para preservar los valores de cada uno de ellos. En muchos casos las condiciones son incompatibles entre s, de forma que hay que prever qu parmetro o familia de parmetros se pueden determinar de cada muestra acondicionada, y qu volumen de muestra necesitamos para un anlisis correcto de dichos parmetros.

Fuentes de error en la recogida de la muestra

Contaminacin Prdidas de analito

Variaciones de la composicin y forma qumica

Contaminacin:

El medio ambiente. Polvo y contaminantes en el aire. Muestreo en s: herramientas, impurezas de ciertos materiales en el laboratorio, conservantes y estabilizantes. Personal: A travs del sudor, cosmticos, contacto, etc.

Por prdidas: Adsorcin (en paredes de recipientes y herramientas) Interacciones en general con el material del recipiente. Prdidas por salpicaduras, en el proceso de agitacin y preparacin de la muestra. Prdidas en procesos de tratamiento (secado, evaporacin, precipitacin, mineralizacin, etc).

Por variaciones de la composicin qumica de la muestra:

Prdidas de agua que ocasionan variaciones en el peso. Adsorcin de agua (muestras secas o liofilizadas). Segregacin de partculas slidas de diferente tamao, forma y densidad (agitacin vigorosa). Formacin de gradientes de concentracin Procesos de oxidacin, hidrlisis, desnaturalizacin, fermentacin, reacciones fotoqumicas, efectos microbiolgicos.

PLAN DE MUESTREO
Toma de muestra planificada, detallada y puesta por escrito. El plan de muestreo debe especificar: Objetivos.

Dnde? Quin ha de hacerlo? Procedimiento. Grado de homogeneidad probable. Periodicidad del muestreo. Instrumentacin a utilizar. N de muestras y submuestras. Condiciones de conservacin y transporte. Identificacin de las muestras, etc...

MUESTREO DE LQUIDOS Pueden ser muestras discretas, compuestas o muestreo continuo.

Tomadas manual o automticamente (automuestradores )

Es conveniente : Toma por duplicado.

Lugar de la toma de muestra.

Frecuencia de muestreo. Volumen de muestra. Tubo (vidrio, polietileno). Sistema de almacenamiento. Distribucin de analitos en la masa a muestrear.

TRANSPORTE Y CONSERVACIN DE LA MUESTRA

Garantizar la estabilidad y concentracin de la muestra con el tiempo. Preservacin de la integridad de la muestra:

Adicin de sustancias qumicas (estabilizacin). Control de temperatura (4C). Contenedores de muestras especiales. Uso de tcnicas de separacin.
Generalmente es suficiente mantenerlas entre 2 y 4 C si es poco tiempo. Las muestras biolgicas es aconsejable congelarlas. La sangre se aconseja rehomogeneizar despus del transporte. Deben conservarse evitando la humedad (en desecadores) o la oxidacin atmosfrica, evitando al mximo la exposicin al aire y luz. Algunas muestras deben secarse previamente en estufa a 110 C Las muestras biolgicas para conservarlas tiempo deben guardarse en bolsas de plstico congeladas en nitrgeno lquido o ser liofilizadas.

Entrega de las muestras en el laboratorio

Las muestras se deben entregar en el laboratorio lo ms pronto que sea posible despus del muestreo, en el transcurso de dos das como mximo; si el tiempo de almacenamiento y preservacin es menor, debe planificarse el procedimiento para asegurar su entrega oportuna en el laboratorio. En caso de que las muestras sean enviadas por correo a travs de una empresa responsable, se debe incluir el formato de la compaa transportadora dentro de la documentacin del control y vigilancia de la muestra, como tambin adecuar las condiciones de mantenimiento apropiadas.
Recepcin y registro de la muestra Descripcin de la muestra, estado de conservacin. Asignacin de la muestra para anlisis Una vez la muestra est en el laboratorio, el auditor y los analistas son responsables de su cuidado y vigilancia.

Preservacin de muestras de agua, segn analito:

TRATAMIENTO DE LA MUESTRA

Preparacin de la muestra Trituracin y molienda (ej. En el anlisis de tejidos) Cribado Mezclado Reduccin Trituracin y molienda Homogeneidad y mejor reaccin con los reactivos Cambios de composicin (calor, >rea superficial) Diferente dureza de los componentes Contaminacin (desgaste de utensilios)
Mezclado y reduccin Conos y cuarteo Humedad de las muestras Agua esencial y no esencial Secado

Disolucin de la muestra

Disolucin en agua o disoluciones acuosas de cidos y bases comunes (sales inorgnicas) Disolventes orgnicos (compuestos orgnicos) Digestin con cidos o bases fuertes (ac. Clorhdrico, ntrico, sulfrico, fluorhdrico, perclrico, mezclas oxidantes, amoniaco o hidrxidos de metales alcalinos) Descomposicin con slidos fundidos Silicatos, ciertos xidos minerales, algunas aleaciones de hierro Fundente: sales de metales alcalinos a alta concentracin (1:10). Alta temperatura (300-1000C) Contaminacin, alto contenido en sales, perdidas por volatilizacin, ataque del recipiente. Fundentes bsicos: Carbonatos, hidrxidos, perxidos y boratos de metales alcalinos. Fundentes cidos: pirosulfatos, fluoruros, xido brico. Descomposicin de materia orgnica Mineralizacin hmeda (sulfrico conc. sulfrico+ntrico, perclrico+ntrico) Mineralizacin seca (prdidas por arrastre de partculas y prdidas de compuestos voltiles.

DISOLUCION DE MUESTRAS SOLIDAS

Elegir un disolvente apropiado: semejante disuelve a semejante:

Disolventes no polares como CCl4 , CHCl3 , CS2 , ... disueven sustancias no polares (inorgnicos como S o I2 ) Disolventes de polaridad media como etanol para cidos orgnicos , aminas , etc..

Disolventes polares como el agua para sustancias inicas..

Uso de cidos: No oxidantes : HCl, HF , HBr , HI, H3PO4 , H2SO4 dil y HClO4 Para rocas carbonatadas y algunos sulfuros pueden usarse cidos diluidos. Ataque de cementos, escorias, vidrios, silicatos,

fosfatos.

Oxidantes : HNO3 conc. HClO4 conc. H2SO4 conc. Los cidos concentrados implican ms acidez, a veces oxidacin y el efecto acomplejante del anin.

Etiquetas Para prevenir confusiones en la identificacin de las muestras, pegar al frasco de muestra antes de o en el momento del muestreo, etiquetas adhesivas en las que se anote, con tinta a prueba de agua, por lo menos la siguiente informacin: nmero de muestra, nombre del recolector, fecha, hora y lugar de recoleccin, y preservacin realizada.

realiza

Seguridad de la persona que la toma de muestra

La recoleccin de numerosas muestras pueden considerarse, en principio, como peligrosas para la salud de la persona que lleva a cabo la tarea.
Una proteccin mnima implica el cuidado de los ojos, el uso de guantes de ltex o de otro tipo, y de botas y ropa adecuadas. A veces puede ser necesario emplear mascarillas y respiradores de oxgeno cuando el muestreo se realiza en pozos o reas cerradas, y en acmulos de residuos qumicos.

Algunas consideraciones prcticas

Toma de muestra

Validez de los resultados

Tratamiento de muestra

Preservacin

La Toma de Muestra para un Laboratorio de Toxicologa es de vital importancia para lograr una adecuada identificacin y cuantificacin posterior.

Previo al anlisis, todas las muestras biolgicas deben ser almacenadas a 4 C y mantenidas a esa temperatura durante 3 4 semanas, en situaciones que se requieran futuros anlisis.
En los casos de implicaciones mdico legales, la muestra a analizar debe ser almacenada a 20C hasta que la investigacin haya concluido.

La Toma de Muestra para un Laboratorio de Toxicologa es de vital importancia para lograr una adecuada identificacin y cuantificacin posterior. Previo al anlisis, todas las muestras biolgicas deben ser almacenadas a 4 C y mantenidas a esa temperatura durante 3 4 semanas, en situaciones que se requieran futuros anlisis. En los casos de implicancias mdico legales, la muestra a analizar debe ser almacenada a 20C hasta que la investigacin haya concluido.

Conclusiones

Para evitar un muestreo incorrecto

1) Tener en cuenta el objetivo del muestreo. 2) Considerar el tamao de la muestra, el tipo de envase y de tapa , la naturaleza de los envases, el tipo de conservante , los tiempos de representatividad de la muestra , el tipo de anlisis a practicar. 3) 4) Evitar la contaminacin de la muestra. Proteger la muestra de cualquier cambio qumico, fsico o biolgico antes del anlisis.

5) Tener en cuenta el transporte de la muestra. 6) Considerar las tcnicas de pretratamiento de las muestras. 7) Realizar las determinaciones in situ de aquellos parmetros que as lo requieren. 8) La toma de muestra debe realizarla por todo lo expuesto por especialista en el tema , y no dejarla librada a manos inadecuadas.

Bibliografa

Situacin actual de almacenamiento de las muestras en muestras biolgicas humanas (5-7). www.seqc.es Gua Prctica para la recogida y almacenamiento de muestras biolgicas humanas. Centro de Investigaciones Biomdicas,230 p www.aemps.gob.es/investigacionClinica/.../docs/guia_completa.pdf