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LAS ENZIMAS COMO CATALIZADORES DE UNA INDUSTRIA SOSTENIBLE DE PROCESOS QUMICOS MAS COMPLEJOS.

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Las enzimas son catalizadores de origen biolgico que parecen cumplir muchos de los requisitos necesarios para impulsar esta nueva industria qumica: i.-son catalizadores muy activos en medios acuosos y en condiciones muy suaves de temperatura, presin, pH, etc. ii. Son catalizadores muy especficos: pueden modificar un nico substrato en una mezcla de substratos muy similares e incluso pueden discernir entre dos ismeros de una mezcla racmica de un compuesto quiral, iii.- son catalizadores muy selectivos: pueden modificar un nico enlace o un nico grupo funcional en una molcula que tenga varias estructuras modificables. As pues, las enzimas parecen en principio muy tiles para un gran nmero de procesos de enorme inters social e industrial. LAS ENZIMAS EN LOS SERES VIVOS Y EN UN REACTOR QUMICO: LA INGENIERA ENZIMTICA. A pesar de esas excelentes propiedades catalticas y sus enormes y variadas posibilidades de utilizacin industrial, las enzimas han ido evolucionando por la presin de seleccin natural a travs del tiempo para cumplir mejor las necesidades fisiolgicas de los seres vivos y no para ser utilizadas en reactores qumicos industriales. As las enzimas son catalizadores solubles, generalmente muy inestables y que sufren inhibiciones por substratos y productos. Adems muchas veces no tienen todas las propiedades ideales (actividad, selectividad, etc.) cuando queremos que catalizen procesos distintos de los naturales (p.e. sntesis en lugar de hidrlisis) sobre substratos no naturales y en condiciones experimentales no convencionales (p.e. disolventes orgnicos no-txicos). La descripcin, a ESCALA LABORATORIO, de nuevas enzimas y nuevos procesos de posible inters industrial es realmente "espectacular" pero no es suficiente para que ese proceso se convierta en una realidad industrial. Para ello, es preciso disear estas biotransformaciones en condiciones donde se obtengan velocidades de reaccin muy altas, rendimientos termodinmicos cuantitativos y todo ello, en condiciones medio-ambientales benignas donde los biocatalizadores sean estables durante muchos ciclos de reaccin y los substratos tengan una elevada solubilidad, etc. Esta conversin de INTERESANTES PROCESOS POSIBLES en REALIDADES INDUSTRIALES SOSTENIBLES es un problema realmente apasionante, pues nos obliga a optimizar procesos qumicos difciles (regioselectivos, esteroespecficos, etc.) sobre compuestos qumicos poco manejables (p.e. substancias bioactivas lbiles y difciles de disolver) y catalizados por bio-macromolculas a su vez lbiles y muy complejas (las enzimas).

LAS ENZIMAS DE TERMFILOS COMO CATALIZADORES INDUSTRIALES. Siguiendo los criterios de la evolucin natural de las enzimas de organismos termfilos se han ido haciendo termo-resistentes. En este caso el criterio de seleccin biolgica coincide en principio con los intereses de la industria qumica. Adems la termoresistencias de las enzimas de termfilos esta muchas veces asociada con una mayor resistencia a otros agentes inactivantes diferentes del calor, pe., los disolventes orgnicos. En principio las enzimas de termfilos parecen excelentes candidatos como catalizadores industriales. En numerosas ocasiones, las enzimas de termfilos muestran un extrao comportamiento de actividad con la temperatura, presentando muy baja actividad a temperaturas bajas o moderadas (pe. temperatura ambiente). Por ello a pesar de su gran estabilidad, las enzimas de termfilos presentan tambin algunas limitaciones de aplicacin industrial. El estudio de este complejo comportamiento actividad-temperatura y su posible solucin constituye uno de los hitos ms interesantes de la biotecnologa enzimtica pues permitira el uso masivo de estas enzimas, con una excelente termo-resistencia, en todo tipo de aplicaciones analticas e industriales. Muchos procesos enzimticos industriales pueden o deben realizarse a temperaturas altas (reacciones con substratos hidrofbicos para aumentar su solubilidad, qumica de alimentos para prevenir contaminaciones y para acoplarse a procesos de esterilizacin, etc). En estos casos las enzimas de organismos termfilos pueden ser una excelente solucin como biocatalizadores industriales. Muchas enzimas de termfilos de inters industrial son enzimas minoritarias dentro organismos difciles de crecer y por ello hasta hace unos pocos aos su aplicabilidad industrial era bastante improbable. Hoy en da, gracias a las tcnicas de ingeniera gentica, estas enzimas minoritarias de termfilos se pueden superexpresar en organismos hospedantes muy fciles de crecer y se pueden obtener en muy grandes cantidades susceptibles de ser aplicadas como catalizadores industriales. PURIFICACIN DE ENZIMAS INDUSTRIALES RECOMBINANTES E TERMFILOS: CONSTRUCCIN DE PROTENAS CON COLAS DE POLI-HIS. La super-expresin de enzimas de termfilos recombinantes como protenas extracelulares en hospedantes mesfilos podra simplificar mucho su extraccin y purificacin. Estas protenas recombinantes extracelulares podran ser extradas con un elevado grado de pureza a partir del sobrenadante del tanque de fermentacin. Posteriormente estas enzimas de termfilos expresadas en organismos mesfilos, se podran purificar posteriormente por tratamiento trmico:

las protenas de mesfilos precipitaran mayoritariamente durante el tratamiento trmico y en cambio las enzimas de termfilos lo resistiran con facilidad. Este mtodo de purificacin es muy sencillo y de bajo coste, podra ser muy til para purificar enzimas industriales de uso en qumica orgnica donde la purificacin total de la enzima no suele ser necesaria. Sin embargo, si nuestra enzima recombinante es intracelular o si ha de utilizase en qumica de alimentos, qumica analtica etc. necesitamos mejorar mucho ms la purificacin, hasta obtener enzimas 100 % puras y al mismo tiempo con un precio muy asequible. Por ejemplo, los alimentos son mezclas complejas de muchsimas substancias y necesitamos estar seguros de que la nica enzima presente en los birreactores de tratamiento sea la enzima de inters. La presencia de otras enzimas con otras actividades catalticas (p.e. proteasas, esterasas, lipasas, oxidasas, etc) podra modificar la estructura de otros componentes del alimento y modificar sus propiedades de un modo que nosotros no queremos modificar. La adicin de una cola de 6 His en uno de los extremos de una enzima de inters industrial puede ser un mtodo muy interesante de preparar la enzima recombinante para una purificacin total por cromatografa de afinidad sobre quelatos metlicos. La adicin de una pequea cola de 6 His es una modificacin muy pequea de la enzima recombinante y en principio no debiera producir cambios importantes en su estructura y su funcin {actividad estabilidad, etc). Sin embargo esta cola de 6 His (si queda suficientemente expuesta al exterior de la protena recombinante) va tener una alta afinidad hacia columnas cromatogrficas de quelatos metlicos. En principio, una afinidad mucho mayor que las que poseen las protenas naturales producidas por el organismo hospedante. As, a escala laboratorio podramos adsorber tanto las protenas naturales como la protena recombinante a matrices de quelatos metlicos comerciales. Posteriormente se iran eluyendo, p.e., con un gradiente de imidazol, primeramente las protenas naturales y posteriormente las protenas recombinantes con un muy elevado grado de pureza. En la presente Tesis Doctoral discutiremos, en uno de sus captulos, la optimizacin de estos procesos cromatogrficos, pensando en su posible utilizacin industrial e intentando lograr tambin la selectividad en el primer proceso de adsorcin de la enzima recombinante y las protenas naturales sobre matrices cromatogrficas diseadas a medida.

Bibliografa. http://digital.csic.es/bitstream/10261/2715/1/05200202.pdf