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Daniel Bello, Miguel A. Otero, Grizel Ortega, Emilia Carrera Estado del arte en la produccin microbiolgica de Polihidroxialcanoatos ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caa de Azcar, vol. XLIII, nm. 2, mayo-agosto, 2009, pp. 3-13, Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar Cuba
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=223120662002

ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caa de Azcar, ISSN (Versin impresa): 0138-6204 revista@icidca.edu.cu Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar Cuba

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Daniel Bello, Miguel A. Otero, Grizel Ortega y Emilia Carrera Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar (ICIDCA) e.mail: daniel.bello@icidca.edu.cu

RESUMEN Se aborda la produccin microbiolgica de polihidroxialcanoatos. Se describen los principales microorganismos utilizados, los medios de cultivo y se citan las principales compaas involucradas en la produccin a escala industrial de esta familia de bioplsticos. Se presentan los principales problemas relacionados con la produccin a escala comercial de estos biomateriales, as como las principales tendencias y estrategias para hacer estas producciones competitivas con relacin a los plsticos derivados del petrleo. Palabras clave: polihidroxialcanoatos, plsticos biodegradables, fuentes renovables. ABSTRACT The present paper has to do with the microbial production of Polyhydroxyalkanoates. The major microorganisms used for these productions are described, as well as the cultures media and the enterprises involved in the industrial productions of this family of Bioplastics. The main problems related with the commercial production of this biomaterials are treated, also the tendencies and strategies for making these productions competitive in comparison with petrochemical plastics. Key words: polyhydroxyalkanoates, biodegradable plastics, renewable sources.

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INTRODUCCIN Cada da resultan mayores los esfuerzos legislativos, a nivel mundial, con el objetivo de potenciar la produccin de nuevos materiales no contaminantes del medio ambiente a partir de fuentes renovables de energa. El desarrollo de biomateriales como los plsticos biodegradables, abre una posibilidad de reducir los daos medioambientales que causa, en todo tipo de ecosistemas, la continua produccin y acumulacin de plsticos producidos a partir de fuentes fsiles de energa. Dentro de los plsticos biodegradables, los Polihidroxialcanoatos (PHAs) son uno de los que mayor actividad investigativa generan en la actualidad. Los PHAs son polisteres de origen natural, que algunos microorganismos acumulan en el citoplasma bajo ciertas y determinadas condiciones de cultivo. Los PHAs presentan altas tazas de biodegradabilidad, son biocompatibles y tienen propiedades fsico-mecnicas comparables a las de los plsticos convencionales producidos a partir de petroqumicos (1,2). Estas caractersticas unidas al problema mundial del agotamiento de los combustibles fsiles (3), sita a los PHAs como posibles sustitutos de los plsticos convencionales, sobre todo en aplicaciones industriales de vida corta, independientemente del amplio campo que tienen estos polmeros en la medicina debido a su inocuidad. El problema fundamental que todava afronta la produccin de este polmero es su elevado costo, aproximadamente 10 USD/Kg, en comparacin con el costo de los plsticos convencionales que oscila alrededor de 1 USD/Kg de polmero producido (1). PHB Industrial S.A (Brasil) ha logrado reducir los costos de produccin de estos polmeros hasta aproximadamente 5 USD/Kg, esta reduccin se debe fundamentalmente, al bajo costo del cultivo de la caa de azcar, y al abaratamiento de la energa elctrica producida a partir del bagazo (4,5). A pesar de esto, la produccin a gran escala de los PHAs continua latente. Las inversiones en la fermentacin y recobrado del producto, as como el alto costo de los sustratos carbonados frenan su expansin y hace que estas producciones no sean competitivas
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cuando se comparan con la produccin de plsticos derivados del petrleo (1,6). Teniendo en cuenta esto, en la actualidad una gran parte de las investigaciones sobre PHAs est dirigida a reducir los costos de produccin de estos polmeros. La bsqueda de opciones de una industria diversificada es una estrategia del sector azucarero mundial. Dentro de las alternativas ms promisorias se encuentra la produccin de polmeros biodegradables a partir de melazas lo cual se inserta, a escala mundial, en el desarrollo de programas de produccin de nuevos materiales no contaminantes del medio ambiente. El objetivo del presente trabajo es hacer una revisin actualizada de los principales microorganismos destinados a la produccin industrial de Polihidroxialcanoatos, adems de profundizar en las condiciones, medios de cultivo y en las principales tendencias y estrategias para hacer estas producciones competitivas con relacin a los plsticos derivados del petrleo. DESCUBRIMIENTO DE LOS POLIHIDROXIALCANOATOS COMO MATERIAL DE RESERVA CELULAR La presencia de inclusiones sudanoflicas solubles en cloroformo fue inicialmente observado en Azotobacter chroococcum a inicios del siglo pasado (7,8). Inclusiones similares fueron observadas en 1923 por Maurice Lemoigne en Bacillus megaterium. Posteriormente, Lemoigne report que stas contenan un alto porciento de cido poli 3hidroxibutrico (PHB) (9,10). Lemoigne y colaboradores reportaron sus estudios sobre PHB en 27 publicaciones desde 1923 hasta 1951 (6). El redescubrimiento del PHB ocurri simultneamente y fue publicado de forma independiente en 1957 y 1958 por microbilogos de Gran Bretaa y Estados Unidos, respectivamente. Wilkinson y colaboradores (1958), en la Universidad de Edimburgo, aislaron grnulos de PHB morfolgicamente intactos utilizando tratamiento alcalino a partir de Bacillus cereus (11). En la Universidad de California, Doudoroff y colaboradores (1959) encontraron que el PHB era el producto primario de la asimilacin y oxidacin de compuestos orgnicos por bacterias fototrpicas (12).
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En un resumen del papel que jugaban los polmeros de reserva en la regulacin de la energa, publicado en 1973 (13), el PHB recibi su primer reconocimiento extensivo como material de reserva en bacterias, anlogo al almidn en plantas y al glucgeno en humanos. En 1974, Wallen y Rohwedder reportaron la identificacin de otros PHAs diferentes al PHB. As describieron PHAs con 3hidroxivalerato y 3-hidroxihexanoato como unidades monomricas mayoritaria y minoritaria respectivamente (14). Una dcada despus, el anlisis de sedimentos marinos por cromatografa gaseosa revel la presencia de 3-hidroxibutirato y 3-hidroxivalerato como componentes predominantes dentro de 11 unidades monomricas de hidroxicidos. En el mismo trabajo se demostr que durante el crecimiento en cultivo discontinuo de Bacillus megaterium, las clulas acumulaban un polmero que contena como unidades monomricas: 95% 3-hidroxibutirato, 3% de 3-hidroxiheptanoato, 2% de hidroxicidos de 8 tomos de carbonos y trazas de otros tres tipos diferentes de hidroxicidos (15). La identificacin de otras unidades monomricas como constituyentes de los polihidroxialcanoatos tuvo una gran importancia debido a que ampli el rango de propiedades de estos polmeros, potenciando su campo de aplicacin y por consiguiente su inters comercial (6). PRODUCCIN
DE POLIHIDROXIALCANOATOS

ducen son difciles de cultivar o no acumulan cantidades significativas del polmero. Dentro de los microorganismos con capacidad para acumular PHAs slo se han utilizado algunas bacterias entre las que se encuentran: Alcaligenes eutrophus (20), Alcaligenes latus (21), Azotobacter vinelandii (22, 23), Pseudomonas oleovorans (19, 24) y cepas recombinantes de Alcaligenes eutrophus (25), Escherichia coli (26, 27) y Klebsiella aerogenes (28). Estas bacterias han sido seleccionadas esencialmente porque pueden ser cultivadas hasta altas concentraciones celulares, en perodos cortos de tiempo lo que garantiza una alta productividad del proceso (1). Estrategias de fermentacin La sntesis de PHAs ha sido y contina siendo investigada bsicamente en cultivo discontinuo. Este tipo de cultivo es de fcil manipulacin y es muy conveniente usarlo en experimentos de crecimiento y seleccin de microorganismos productores de PHAs (29). Las bacterias empleadas para producir PHAs se pueden dividir en dos grandes grupos de acuerdo con las condiciones de cultivo requeridas para la sntesis del polmero. El primer grupo de bacterias requiere de limitacin en el medio de cultivo de uno de los nutrientes esenciales como: N, P, Mg, K, O y S y de un exceso de la fuente de carbono para sintetizar eficientemente los PHAs (1). El segundo grupo de bacterias no requiere de limitacin de nutrientes para la sntesis de los PHAs y puede acumular el polmero durante su crecimiento. Alcaligenes eutrophus, Protomonas extorquens, Pseudomonas oleovorans y muchas otras bacterias pertenecen a este primer grupo, mientras algunas bacterias como Alcaligenes latus, mutantes de Azotobacter vinelandii y recombinantes de E. coli que poseen el operon para la biosntesis de PHAs a partir de Alcaligenes eutrophus pertenecen al segundo grupo (1). Tanto el cultivo discontinuo incrementado como el continuo pueden ser utilizados para la produccin de PHAs con altas productividades. Para el cultivo incrementado de las bacterias que pertenecen al pri5

Aunque se ha reportado en la literatura la produccin de muchos tipos diferentes de PHAs, slo algunos se han producido en cantidades apreciables, para permitir su caracterizacin y/o utilizacin en aplicaciones industriales. Estos son el Poli (3-hidroxibutirato) (16), el Poli(3-hidroxibutiratoco-3-hidroxivalerato) (16), el Poli (3-hidroxivalerato) (17), el Poli(4-hidroxibutirato) (18) y el Poli(3-hidroxihexanoato-co-3hidroxioctanoato) (19). Los otros PHAs se han producido en pequeas cantidades debido a que los sustratos, en muchas ocasiones anlogos a las unidades monomricas del polmero, son muy caros o txicos a las clulas o porque las bacterias que lo proICIDCA No. 2, 2009

mer grupo, el incremento en dos etapas es el que ms frecuentemente se emplea (1). Las clulas son cultivadas hasta una concentracin deseada, sin limitacin de ningn nutriente esencial y posteriormente, un nutriente esencial se limita en el medio para inducir la acumulacin de PHAs en la clula. Durante este estado de limitacin de un nutriente esencial, la concentracin residual celular (definida como la concentracin celular menos la concentracin de PHAs) debe permanecer casi constante y la concentracin celular se incrementa slo por el aumento de la concentracin intracelular de PHAs. Alcaligenes eutrophus, la bacteria ms comnmente empleada para la produccin comercial de Poli (3-hidroxibutirato) y Poli (3-hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato), acumula una gran cantidad del polmero (hasta un 80% del peso seco) cuando hay una limitacin total de nitrgeno y fsforo en el medio (20). Sin embargo, la mayora de las bacterias restantes que pertenecen al primer grupo de microorganismos como Pseudomonas oleovorans (19), acumulan mayores niveles de PHAs cuando el nutriente esencial no se elimina completamente del medio. Para obtener altas productividades con las bacterias del primer grupo es necesario que los medios de cultivo sean suplementados con una relacin ptima entre las fuentes de carbono y los nutrientes esenciales. Una limitacin prematura de algn nutriente esencial puede dar como resultado una baja concentracin celular y por tanto un bajo rendimiento del polmero y una baja productividad en el proceso. Si la limitacin de nutriente se demora en tiempo, las clulas no tendrn la capacidad de acumular mucho polmero y tiene como resultado un bajo contenido de PHA en las clulas y una baja productividad del proceso. Estas premisas han sido demostradas experimentalmente en A. eutrophus con el nitrgeno como elemento limitante en el medio de cultivo (20). De esta forma se reportan concentraciones finales de PHB de 71 y 92 g/L en comparacin con concentraciones celulares de 30 y 55 g/L respectivamente. Cuando la carencia de nitrgeno en el medio se prolonga hasta que se alcanza una concentracin celular
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de 70 g/L, la concentracin final de PHB alcanza los 121 g/L. Sin embargo, cuando la carencia de nitrgeno se dilata en tiempo hasta alcanzar una concentracin celular de 90 g/L, dismunuyen la produccin del polmero y la productividad del proceso (20). En el segundo grupo de bacterias, la produccin de PHAs no es dependiente de la limitacin de nutrientes esenciales en el medio de cultivo. Por esta razn se utilizan con frecuencia fuentes de nitrgeno complejas como licor de maz, peptona y extracto de levadura que incrementan el crecimiento celular y al mismo tiempo la acumulacin de PHAs (23). El crecimiento celular y la acumulacin de PHAs necesitan estar balanceados para evitar una acumulacin incompleta del polmero en las clulas o una prematura terminacin de la fermentacin a bajas concentraciones celulares. Como los PHAs se acumulan en el citoplasma, la concentracin celular residual determina la cantidad de PHAs que potencialmente pueden producirse. Un alto contenido de PHAs con una baja concentracin celular residual resultar en un bajo acumulado de PHAs y en una baja productividad del proceso. Tambin una concentracin celular residual alta con un bajo contenido de PHA puede reducir la concentracin final de PHA, el rendimiento y la productividad. Una concentracin celular residual alta con un elevado acumulado intracelular de PHAs brindar los mejores resultados en trminos de rendimiento y productividad (1). Tericamente, el cultivo continuo es ms productivo. Pseudomonas oleovorans es una de las bacterias que ms se ha estudiado bajo estas condiciones de cultivo (19, 24), fue cultivada variando la taza de dilucin en un medio que contena octano al 15% (v/v) con el in amonio como nutriente limitante. Cuando se increment la taza de dilucin desde 0,09 a 0,46 h-1 la concentracin celular y el contenido de PHA disminuyeron desde 2,25 g/L y 46,7% a 1,32 g/L y 8,3% respectivamente (24). Incrementando la taza de transferencia de oxgeno y optimizando la estrategia de alimentacin se puede alcanzar una concentracin celular de 11,6 g/L y una productividad de 0,58 g/L/h.
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Aunque el cultivo continuo de otros PHAs no ha sido reportado, se ha sugerido que puede emplearse, en la mayora de las bacterias que pertenecen al primer grupo, un cultivo continuo en dos etapas. Para las bacterias del primer grupo, que no requieran grandes cambios en la concentracin del nutriente limitante entre la fase de crecimiento celular y la acumulacin del polmero, como por ejemplo en P. oleovorans, se puede utilizar un cultivo continuo en una etapa (19). En el caso de las bacterias del segundo grupo puede emplearse el cultivo continuo en una etapa (1). Fuentes de carbono ms empleadas Excluyendo el proceso de recobrado, la economa de la produccin de los PHAs est determinada en gran medida por el costo de la fuente de carbono y por el rendimiento que se obtiene de la produccin de los mismos. La eficiencia en la conversin del sustrato es importante y puede predecirse a partir de la fisiologa y la bioqumica de la sntesis de los PHAs. En la produccin de PHAs se han empleado diferentes fuentes de carbono como por ejemplo: carbohidratos, aceites, alcoholes, cidos, alcanos, etc. El rendimiento terico del PHB, basado en la reaccin estequiomtrica, ha sido estimado para muchas de estas fuentes de carbono (1). Se tomaron en cuenta para este anlisis la regeneracin de los nucletidos de nicotinamida que actan como cofactores en la sntesis de los PHAs (30). La introduccin de fuentes de carbono crudas como: las mieles de caa y remolacha, aceites vegetales, hidrolizados de carbohidratos (yuca y maz) pueden influir positivamente en la reduccin de los costos de produccin de los PHAs ya que sus precios son mucho ms baratos que los precios que exhiben los sustratos carbonados puros (1,31). Produccin a gran escala de polihidroxialcanoatos A pesar de que los PHAs se descubrieron desde los inicios de la dcada de 1920 su produccin a gran escala se ha visto limitada debido fundamentalmente a los altos
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costos de las materias primas empleadas para su produccin. Despus de varios intentos la compaa inglesa Imperio Qumico Industrial (ICI), motivada por la crisis del petroleo de la dcada de 1970, comienza a producir y comercializar polisteres de origen bacteriano con el nombre de BIOPOLTM, constituido por Poli (3-hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) (32). La produccin de este co-polmero se llevaba a cabo a partir un cultivo discontinuo incrementado de A. eutrophus en medios suplementados con glucosa y cido propinico como fuentes de carbono (1,32) y se previ una produccin inicial de 300 t/anuales (1). El problema fundamental que afronta el desarrollo de este tipo de polmeros es su elevado costo de produccin (alrededor de 10 USD/Kg) comparado con el costo de los plsticos convencionales (por ejemplo el polipropileno < 1 USD/Kg). Este elevado costo de produccin de los PHAs est marcado por el elevado costo de los sustratos carbonados y los procesos de recobrado y purificacin (1). A inicios de este siglo fue inaugurada en Brasil una planta para la produccin a gran escala de PHAs. La empresa PHB industrial S.A con potencial para producir hasta 3 000 t anuales de Biocycle ampliar sus capacidades en los prximos aos con costos de produccin de 5 USD/Kg de Biocycle. El mrito de los investigadores brasileos residi en que lograron reducir considerablemente el costo de produccin si se compara con los plsticos biodegradables sintetizados en Estados Unidos y Europa. All, stos son fabricados partiendo de otras materias primas, como azcar de remolacha y maz. Esa reduccin se produjo fundamentalmente en funcin del bajo costo del cultivo de la caa, en lo cual cuenta la energa elctrica barata, producida con el bagazo de caa (4,5). El Biocycle se est empleando en la produccin de materiales plsticos de rpida utilizacin (desechables) y para crear equipamiento mdico para uso veterinario y en humanos. A pesar de esto la produccin a gran escala de los PHAs continua latente. Las inversiones en la fermentacin y recobrado del producto, as como los altos costos de los sustratos carbonados frenan su expansin.
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REDUCCIN

DE LOS COSTOS DE PRODUCCIN DE LOS POLIHIDROXIALCANOATOS

El alto costo de los sustratos carbonados y de los procesos de recobrado que involucran el consumo de grandes volmenes de solventes puros, incrementan considerablemente el costo de produccin de los polihidroxialcanoatos. Esto hace que sus producciones a gran escala no sean competitivas cuando se compara con la produccin de plsticos a partir de derivados del petrleo (1). Teniendo en cuenta esto, en la actualidad una gran parte de las investigaciones sobre PHAs est dirigida a reducir los costos de produccin de estos polmeros. Para cumplimentar este objetivo se hace necesario la bsqueda de nuevas cepas salvajes capaces de acumular mayores niveles de PHAs en el citoplasma celular y la utilizacin, en el proceso fermentativo, de fuentes de carbono crudas como las mieles finales de caa de azcar o remolacha. Adems, es indispensable la implementacin de procesos de recobrado y purficacin de los polmeros ms sencillos y econmicos. Un gran nmero de investigaciones estn dirigidas a producir PHAs en recombinantes, aunque todava sin xito a escala industrial. Produccin de polihidroxialcanoatos a partir de mieles finales de caa de azcar y remolacha Los azcares como la glucosa y la sacarosa son las fuentes de carbono ms comunes que se emplean en la produccin de PHAs (33). El precio de estos sustratos carbonados puros incrementa considerablemente el precio de la produccin de PHAs. El uso de sustratos crudos provenientes de sectores como el agrcola, el alimenticio y el caero pudiera reducir considerablemente el costo inicial de estas producciones. Las mieles finales de caa de azcar y de remolacha son sustratos con elevadas potencialidades para ser utilizadas en la produccin de polmeros biodegradables. Las mieles son un sustrato rico con un alto contenido de azcares libres, vitaminas, cofactores y micronutrientes que potencian el crecimiento y la produccin de estos polmeros en el citoplasma celular.
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El efecto de la concentracin de miel de caa en la produccin de PHB fue estudiado por Beaulieu y colaboradores en Alcaligenes eutrophus DSM 545. En el estudio se demostr que la produccin de PHB fue alta cuando se ensayaron concentraciones de miel en el medio entre 0.1-0.3 g/L. Sin embargo, los rendimientos en biomasa (39-48%) y en produccin de PHB (17-26%) variaron significativamente dependiendo de la fuente de nitrgeno empleada y de la concentracin de miel en el medio de cultivo. El mayor acumulado de PHB con relacin al peso seco celular fue superior cuando el medio se suplement con mieles de caa al 0.1% (p/v). Adems reportaron efecto inhibitorio en el crecimiento cuando usaron mieles de caa al 0.5% (p/v) (34). Gouda y colaboradores (2001) hicieron una evaluacin similar pero en Bacillus megaterium. Se ensayaron concentraciones de miel de caa entre 1-5% (p/v) y se estim el crecimiento y la produccin de PHB y de otros PHAs despus de 48 horas de fermentacin. El mayor crecimiento lo obtuvieron cuando utilizaron mieles de caa de azcar al 3% (p/v). Se observ un efecto inhibitorio en el crecimiento del microorganismo cuando utilizaron la miel al 5% (p/v). El mximo rendimiento en la produccin de PHB (46,5 %) con respecto al peso seco celular lo obtuvieron cuando el medio se suplement con miel de caa al 2% (p/v). Concentraciones superiores produjeron un efecto inhibitorio en la produccin de PHB (35). Wu y colaboradores (2001) evaluaron la produccin de PHB utilizando la cepa de Bacillus sp. JMa 5. En cultivos discontinuos con un contenido de 210 g/L de miel de caa, la densidad celular alcanz los 30 g/L despus de 8 h de cultivo. En cultivo discontinuo incrementado se obtuvo un peso seco de 70 g/L despus de 30 h de fermentacin. La cepa acumul entre 25 - 35% de PHB con relacin al peso seco celular. Adems la produccin de PHB estuvo asociada al crecimiento (36) Yilmaz y Beyatli (2005) utilizando mieles de remolacha estudiaron el efecto de la concentracin de miel en la produccin de PHB en una cepa de Bacillus cereus M5. Los autores reportaron la mxima produccin de peso seco celular (0,440 g/L) en medios que contenan mieles de remolacha al 4%
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(p/v). La mayor produccin de PHB (73.84% de PHB/Peso seco celular) se obtuvo en medios que contenan 1% (p/v) de miel de remolacha. Adems reportaron que la productividad del sistema decreca cuando se incrementaba la concentracin de miel de remolacha en el medio. A pesar de que Yilmaz y Beyatli lograron un elevado acumulado de PHB en las clulas, la produccin del polmero (g/L) y la productividad del proceso fueron muy bajas debido a que no lograron en la fermentacin altas concentraciones celulares (37). Por su parte Celik y colaboradores (2005), estudiaron la acumulacin de PHB en Pseudomonas cepacia G13 utilizando medios suplementados con miel de remolacha a diferentes concentraciones (1-6 g de miel /100 ml de agua). El mayor rendimiento en la produccin de PHB en esta cepa fue de un 70% con respecto al peso seco celular cuando se utiliz miel de remolacha al 3% (p/v). Tambin Mercan y Beyatli (2005) estudiaron la influencia de la utilizacin de las mieles de remolacha en la produccin de PHB. Para esto cultivaron cepas de Rhizobium meliloti, Rhizobium viciae y Bradyrhizobium japonicum. Todos los microorganismos utilizados acumularon PHB a las concentraciones de miel de remolacha ensayadas. El mayor acumulado de PHB fue obtenido en Rhizobium meliloti (56,31% de PHB con relacin al peso seco celular) en medios que contenan 0,5% (p/v) de miel (38). Bello (2008) tambin evalu las mieles finales de caa de azcar y remolacha en la produccin de PHB en varias especies de Bacillus. Los mejores resultados de estos estudios los brind una cepa de Bacillus megaterium que acumul hasta un 50% de su peso seco en forma de PHB empleando un medio de cultivo mnimo que contena miel de caa o remolacha 1% (p/v) como fuente de carbono adems de extracto de levadura 1 g/L y cloruro de sodio 2,5 g/L. Los estudios se realizaron en cultivo discontinuo en fermentadores de hasta 5,0 L (39). EXPRESIN DE GENES INVOLUCRADOS EN LA BIOSNTESIS DE LOS PHAS EN OTROS HOSPEDEROS La expresin de genes involucrados en la biosntesis de los PHAs en otros hospedeICIDCA No. 2, 2009

ros se hizo realidad una vez que fueron clonados los tres genes que participan en la sntesis del PHB en R. eutrophus (40) y que estn ubicados en un slo opern (41). E. coli recombiante como productor de Polihidroxialcanoatos La fisiologa, bioqumica y gentica de E. coli ha sido estudiada en detalle, esto hace a este microorganismo el hospedero perfecto para la expresin de genes heterlogos. La biosntesis de PHAs puede producirse despus del aislamiento y clonaje del opern phaCAB de R. eutrophus (40,42,43, 44). Comercialmente E. coli se considera el mejor productor de PHAs debido a la amplia gama de fuentes de carbono baratas que puede metabolizar, adems de ser ms fcil y menos costoso el proceso de purificacin del polmero a partir de sus caldos de cultivos (45). Adems de esto es importante destacar que E. coli no tiene una PHA despolimerasa intracelular por lo que no hay degradacin intracelular del polmero (46). Utilizando mutantes especficos de E. coli, se ha podido producir el copolmero de P(3HB-3HV) (47). Empleando un mutante de E. coli para la -oxidacin, la PHA sintasa de P. aeruginosa fue incapaz de producir mcl-PHA, indicando que la ruta metablica de la -oxidacin en E. coli aporta unidades monomricas de hidroxicidos para la biosntesis de PHAs (48,49). A partir de la ruta biosinttica de los PHAs en Azotobacter sp. cepa FA8, Nikel y colaboradores (2006), evaluaron la capacidad para producir PHB en una cepa recombinate de E. coli (K24K) utilizando suero de leche y licor de remojo de maz como fuentes de carbono y nitrgeno respectivamente. Despus de 24 horas de cultivo las clulas de E. coli recombinante acumularon hasta 72,9% de PHB con relacin al peso seco celular con una productividad que alcanz los 2,13 gramos del polmero por litro de cultivo por hora. La cepa recombinante presentada en este trabajo produce una significativa cantidad de PHB en medio mnimo de sales suplementado con fuentes de carbono y nitrgeno de origen agroindustrial (50).
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Resumiendo, E. coli ofrece un ambiente fisiolgico bien definido para la construccin y manipulacin de varias rutas metablicas para producir un amplio rango de PHAs a partir de fuentes de carbono de menor costo. Plantas transgnicas productoras de PHAs Los esfuerzos iniciales en la produccin de PHAs en plantas se llevaron a cabo en Arabidopsis thaliana, resultando en una baja produccin del polmero (51). El PHB se produjo con mayor eficiencia en los plastidios de la planta transgnica. Tambin se produjo PHB en plantas transgnicas de algodn (Gossypium hirsutum L. cv DP50) (52). Mittendorf y colaboradores (1998) produjeron mcl-PHA en A. thaliana utilizando el gen que codifica para la PHA sintasa en P. aeruginosa. Esta investigacin revel que la -oxidacin de las plantas puede generar un amplio rango de monmeros de 3-hidroxialcanoatos saturados e insaturados que pueden incorporarse en la sntesis de los PHAs (53). Tambin se ha reportado la generacin de metabolitos precursores para la produccin comercial del copolmero de P(3HB3HV) en plantas (54). Adems existen evidencias que sugieren la posibilidad de producir el copolmero de P(3HB-co-4HB) en plantas (55). Todos estos descubrimientos indican que es posible la sntesis sitio especfica de PHAs en plantas transgnicas, por otra parte se ha sugerido que para la produccin a gran escala de los PHAs, las semillas de algunas cosechas podran ser un sitio ideal para la acumulacin del polmero en las plantas (55). CONCLUSIONES La produccin de plsticos biodegradables a partir de fuentes renovables de energa es una tecnologa sostenible desde el punto de vista ambiental, sin embargo su produccin a escala comercial ha estado limitada por el alto costo del proceso que hace que estas producciones no sean competitivas con relacin a los plsticos deriva10

dos del petrleo. Unas pocas compaas a nivel mundial estn acometiendo estas producciones con costos relativamente elevados y solo justificables para aplicaciones de elevado impacto como las vinculadas a la Industria Mdico-Farmacutica. Las estrategias para disminuir los costos de produccin de los plsticos biodegradables incluyen: el empleo de fuentes de carbono de bajo costo para lo cual los residuos agroindustriales son un candidato potencial. Por otra parte, el empleo de microorganismos recombinantes garantizar el aumento de la produccin y la productividad general del proceso. Adems es necesaria la implementacin de mtodos de recuperacin del producto de bajo coste y "amigables" con el medio ambiente. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Lee, S.Y. Plastic bacteria? Progress and prospects for polyhydoxyalcanoate production in bacteria. Trends in Biotechnology 14 (11): p. 431-438, 1996. 2. Sudesh, K.; Abe, H.; Doi, Y. Synthesis, structure and properties of polyhydroxyalkanoates: Biological polyesters. Prog. Polym. Sci. 25 (10): p. 1503-1555, 2000. 3. Declaracin del Consejo Mundial de la Energa (CME). La industria energtica revela su modelo para abordar el cambio climtico, www.worldenergy.org, p.1-4, 2007. 4. Vasconcelos, Y. Un plstico hecho a base de azcar. Revista Pesquisa FAPESP 80: p. 1-3, 2002. 5. Molinari, D. PHB Industrial planned to start its operations in 2008, new plant will produce biocycle, a biodegradable plastic whose raw material is sugar. Brazilian bulletin dedicated to technological innovation, Unicamp Innovation, University of Campinas, Brasil. Title: Poly-betahydroxybutyrate (PHB) production by a Bacillus cereus M5 strain in sugarbeet molasses, 2007. 6. Lenz, R.W., Marchessault, R.H. Bacterial Polyesters: Biosynthesis, Biodegradable Plastics and Biotechnology. Biomacromolecules, 6(1): p. 1-8, 2005. 7. Meyer, A. Praktikum der botanischen bakterienkunde, Jena, 1903.
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Reconocimiento del CITMA y del Bur Municipal del PCC

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