[UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO] GENERAL Precipitacin Salina

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La precipitacin salina de las protenas es una tcnica en donde se logra la precipitacin de una fraccin de protenas mediante el aumento de la fuerza inica del medio. Grandes cantidades de una sal agregada a una solucin de protenas, disminuye la interaccin protena- H2O porque quita la capa de solvatacin, predominando la interaccin protena-protena y generando la precipitacin de las mismas. La concentracin salina a la que se produce la precipitacin no es igual para todas las protenas, lo que permite usar sta propiedad para la separacin y purificacin de protenas particulares a partir de mezclas complejas. Comnmente se usa sulfato de amonio (NH4)2SO4 para tal fin, a causa de su gran solubilidad (760 g de sulfato de amonio/1000 ml. de agua a una temperatura de 20C) y porque el in sulfato divalente permite alcanzar altas fuerzas inicas. La adicin gradual de sta sal permite el fraccionamiento de una mezcla de protenas, las cuales son precipitadas pero no desnaturalizadas. La cantidad de protenas en la muestra analizada puede estimarse por diversos mtodos. La mayora de las protenas absorben a 280 nm, y a bajas concentraciones, lo hacen de manera proporcional con su concentracin. Este es un mtodo rpido y sencillo pero tiene la desventaja es que la muestra debe estar pura, ya que otras molculas no-proteicas como el DNA, tambin absorben a esa longitud de onda. Por otro lado, los ensayos colorimtricos involucran la adicin de una sustancia qumica que es capaz de reaccionar con determinados residuos aminoaciditos. El resultado de estas reacciones es el cambio de color en la solucin, que es cuantificado mediante una medida de absorbancia. En general, estos mtodos son ms sensibles que la Cuantificacin por absorbancia directa a 280 nm. Posteriormente, para determinar la concentracin de protenas totales de la muestra a analizar los resultados de absorbancia se interpola a un curva de calibracin construida utilizando una protena estndar, por lo general albmina srica bovina (BSA bovine seric albumin), cuya concentracin es conocida. Los ensayos colorimtricos ms utilizados son:

Ensayo de Bradford (595nm): es uno de los ms sensibles. Es rpido y muy

sencillo y adems no presenta interferencia con sustancias reductoras como el DTT y el -mercaptoetanol, que s interfieren con Los ensayos de Lowry y BCA. La desventaja es que es altamente sensible a detergentes y lpidos.

Ensayo de Lowry (750 nm): se trata de una reaccin de redox con los enlaces
peptdicos y con los laminocidos Tyr, Trp y Cys. Es rpido, sencillo y relativamente sensible. Como desventaja, es afectado por un amplio rango de compuestos no proteicos como EDTA, sulfato de amonio, Tritn X-100. Sin embargo existen variables que pueden realizarse para evitar estas interferencias, que estn disponibles comercialmente.

Ensayo BCA (Bicinchoninine acid assay) (562nm): Es ms sensible que Lowry

y puede realizarse en un amplio rango de temperaturas. Tambin es sencillo, pero requiere de tiempos de incubacin un poco ms largos. Los complejos coloreados son Facultad de Ciencias Biologicas|- Biologa Pesquera 1

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muy estables. Aunque es altamente susceptible a interferencias, no interfiere con detergentes y lpidos.

Dialisis
La dilisis (del griego dilisis, significando disolucin, da, significa a travs, y lysis, separacin) es un proceso mediante el cual se extraen las toxinas y el exceso de agua de la sangre, normalmente como terapia renal sustitutiva tras la prdida de la funcin renal en personas con fallo renal. La dilisis puede usarse para aquellos con un trastorno agudo de la funcin renal (insuficiencia renal aguda) o progresiva pero empeorando crnicamente la funcin renal - un estado conocido como enfermedad renal crnica en etapa 5 (antes conocida como insuficiencia renal crnica). Esta ltima forma puede desarrollarse durante meses o aos, pero en contraste con la insuficiente renal aguda, no suele ser reversible, considerndose la dilisis como una "medida de espera" hasta que se pueda realizar un trasplante renal, o a veces como la nica medida de apoyo en los casos en los que un trasplante sera inapropiado.

Mquina de hemodilisis
Mientras estn sanos, los riones mantienen el equilibrio hidroelectroltico del cuerpo. Aquellos productos finales del metabolismo que el cuerpo no puede eliminar con la respiracin son excretados tambin a travs de los riones. Tambin participan en el sistema endocrino produciendo eritropoyetina y calcitriol. La eritropoyetina est implicada en la produccin de eritrocitos y el calcitriol en la formacin de hueso.2 La dilisis es un tratamiento imperfecto para reemplazar la funcin renal ya que no sustituye las funciones endocrinas del rin. Los tratamientos de dilisis reemplazan algunas de esas funciones a travs de la difusin (eliminacin de desechos) y ultrafiltracin (eliminacin de lquidos).3 Este proceso debe realizarse en un cuarto higinico para evitar el riesgo de contraer alguna infeccin en la sangre durante el proceso.

Historia
l mdico holands Willen Kolff construy la primera mquina de dilisis en 1943 durante la ocupacin nazi de Holanda.4 Debido a la escasez de recursos, Kolff tuvo que improvisar y construir una mquina inicial usando pieles de salchichas, latas de Facultad de Ciencias Biologicas|- Biologa Pesquera 2

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bebidas, una lavadora y otros objetos disponibles en la poca. En los dos aos siguientes, Kolff us esta mquina para tratar a 16 pacientes de fallo renal agudo, pero no obtuvo buenos resultados. Entonces, en 1945, una mujer en coma de 67 aos recuper la conciencia tras 11 horas de hemodilisis, y vivi otros siete aos ante de morir de una enfermedad no relacionada. Fue la primera paciente tratada exitosamente con dilisis.

Principio
La dilisis funciona segn los principios de la difusin de los solutos y la ultrafiltracin de fluidos a travs de membranas semipermeables. La difusin se describe como una propiedad de las sustancias en el agua en el que las sustancias tienden a moverse del rea con mayor concentracin a la zona con menor concentracin. La sangre fluye de un lado de la membrana semipermeable y un lquido de dilisis especial fluye en el sentido opuesto. La membrana semipermeable es una fina capa de material que contiene agujeros de varios tamaos o poros. Los solutos pequeos pasan a travs de la membrana, pero esta bloquea el paso de grandes sustancias (por ejemplo, eritrocitos y grandes protenas). Esto imita el proceso de filtracin que ocurre en los riones, donde las sustancias ms grandes de la sangre se separan de las pequeas en los glomrulos. Los dos tipos principales de dilisis, la hemodilisis y la dilisis peritoneal, eliminan los desechos y el exceso de agua de la sangre de manera distinta.1 La hemodilisis elimina desechos y agua haciendo que la sangre circule fuera del cuerpo a travs de un filtro externo, llamado dializador, que contiene una membrana semipermeable. La sangre fluye en un sentido y el lquido de dilisis en el opuesto. El flujo contracorriente maximiza el gradiente de concentracin de solutos entre ambos lquidos, que ayuda a eliminar ms urea y creatinina de la sangre. La concentracin de solutos (por ejemplo, de potasio, fsforo y urea) es indeseablemente alta en la sangre, pero baja o ausente en el lquido de dilisis, por lo que el reemplazo constante de este ltimo lquido asegura que la concentracin de estos solutos permanezca baja en un lado de la membrana. El lquido de dilisis tiene concentraciones de minerales, como el potasio y el calcio, similares a los de la sangre sana. Para otro soluto, como el bicarbonato, su concentracin en el lquido de dilisis es un poco ms alto que en la sangre normal para favorecer la difusin de este a la sangre para actuar como tampn y neutralizar la acidosis metablica a menudo presente en esos pacientes. Los niveles de componentes del lquido de dilisis normalmente estn prescritos por el nefrlogo de acuerdo a las necesidades del paciente. En la dilisis peritoneal, los desechos y el agua son eliminados de la sangre del interior del cuerpo usando la membrana peritoneal del peritoneo como una membrana semipermeable natural. Los desechos y el exceso de agua salen de la sangre, a travs de la membrana peritoneal, y un lquido especial de dilisis, con composicin similar al plasma sanguneo, entra en la cavidad abdominal. Facultad de Ciencias Biologicas|- Biologa Pesquera 3

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Tipos Dilisis renal

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En medicina, la dilisis renal es un tipo de terapia de reemplazo renal usada para proporcionar un reemplazo artificial para la funcin perdida del rin debido a un fallo renal. Es un tratamiento de soporte vital y no trata ninguna de las enfermedades del rin. La dilisis puede ser usada para pacientes muy enfermos que han perdido repentinamente su funcin renal (falla renal aguda) o para pacientes absolutamente estables que han perdido permanentemente su funcin renal (enfermedad renal en estado terminal), siempre y cuando se tomen las medidas correctas al realizarla sin olvidar la higiene para evitar la contraccin. La operacin para este tipo de problema debe hacerla un mdico especializado de lo contrario puede pasar a mayores consecuencias Dilisis peritoneal Diagrama esquemtico de la dilisis peritoneal En la dilisis peritoneal, una solucin estril especial, corre a travs de un tubo a la cavidad peritoneal, la cavidad abdominal alrededor del intestino, donde la membrana peritoneal acta como membrana semipermeable. El lquido se deja all por un perodo de tiempo para absorber los residuos, y despus se quita a travs del tubo va un procedimiento estril. Esto generalmente se repite un nmero de veces durante el da. En este caso, la ultrafiltracin ocurre va smosis, pues la solucin de dilisis se provee en varias fuerzas osmticas para permitir un cierto control sobre la cantidad de lquido a ser removido. El proceso es igual de eficiente que la hemodilisis, pero el proceso de ultrafiltracin es ms lento y suave y es realizado en el lugar de habitacin del paciente. Esto les da ms control sobre sus vidas que una opcin de dilisis basada en un hospital o clnica.

Hemofiltracin
La hemofiltracin es un tratamiento similar a la hemodilisis, pero en este caso, la membrana es mucho ms porosa y permite el paso de una cantidad mucho ms grande de agua y solutos a travs de ella. El lquido que pasa a travs de la membrana (el filtrado) es desechado y la sangre restante en el circuito tiene sus deseados solutos y volumen fluido reemplazado por la adiccin de un lquido especial de hemofiltracin. Es una terapia continua y lenta con sesiones que duran tpicamente entre 12 y 24 horas, generalmente diariamente. Esto, y el hecho de que la ultrafiltracin es muy lenta y por lo tanto suave, la hace ideal para los pacientes en unidades de cuidado intensivo, donde es comn la falla renal aguda.

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[UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO] GENERAL Hemodiafiltracin

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La hemodiafiltracin es una combinacin de hemodilisis y hemofiltracin, en ella es incorporado un hemofiltro a un circuito estndar de hemodilisis. La hemodiafiltracin se comienza a usar en algunos centros de dilisis para la terapia crnica de mantenimiento. Dilisis en bioqumica En lo referido al pasaje celular sin gasto de energa, la dilisis es el pasaje de agua ms soluto de un lugar de mayor concentracin a un lugar de menor concentracin. En bioqumica, la dilisis es el proceso de separar las molculas en una solucin por la diferencia en sus ndices de difusin a travs de una membrana semipermeable. La dilisis es una tcnica comn de laboratorio, y funciona con el mismo principio que dilisis mdica. Tpicamente una solucin de varios tipos de molculas es puesta en un bolso semipermeable de dilisis, como por ejemplo, en una membrana de la celulosa con poros, y el bolso es sellado. El bolso de dilisis sellado se coloca en un envase con una solucin diferente, o agua pura. Las molculas lo suficientemente pequeas como para pasar a travs de los poros (a menudo agua, sales y otras molculas pequeas) tienden a moverse hacia adentro o hacia afuera del bolso de dilisis en la direccin de la concentracin ms baja. Molculas ms grandes (a menudo protenas, ADN, o polisacridos) que tiene dimensiones significativamente mayores que el dimetro del poro son retenidas dentro del bolso de dilisis. Una razn comn de usar esta tcnica puede ser para quitar la sal de una solucin de la protena. La tcnica no distinguir efectivamente entre protenas. Dilisis en Lubricacin La dilisis de aceites es un proceso de recuperacin y mantenimiento de lubricantes, enfocado a retirar agua, gases y partculas contaminantes que aceleran los procesos de oxidacin del mismo. El proceso consiste en calentar el aceite hasta temperaturas de 100 C y someterlo a presiones de vaco de 27 de Hg aproximadamente, durante este proceso, el aceite se filtra hasta dejarlo con el cdigo de limpieza ISO recomendado por el fabricante del mecanismo lubricado, permite que al final del proceso de dilisis, el aceite queda en ptimas condiciones para ser utilizado en la misma aplicacin donde se vena utilizando y con un porcentaje de vida igual mayor al que tena al iniciar el proceso de dilisis..!!

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