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“EQUIPO 7”
OBJETIVO
Predeterminar si se ha liberado
enzimaticamente ácido sulfhídrico (H2S)
gaseoso a partir de los aminoácidos
sulfurados azufrados para producir una
reacción coloreada visible, negra en
presencia de un sistema indicador de H2S.
BIOQUIMIC
A
La proteólisis de la proteína produce a.a. individuales;
ciertas bacterias heterotróficas pueden liberar
enzimáticamente el azufre de los diversos a.a.
azufrados, produciendo H2S gaseoso peptona, cisteína,
cistina, metionina y tiosulfato son fuentes de azufre,
pero las especies utilizan diferentes compuestos o a.a.
azufrados para producir H2S. las enzimas responsables
de esta actividad son la cisteína, desulfhidrasa y la
tiosulfato reductasa. los a.a. azufrados son:
El catabolismo anaerobio de la cisteina
produce H2S, ácido pirúvico y amoniaco.
Existen muchos medios de cultivo como la
peptona y hierro para detectar la
producción H2S entre los miembros de la
familia Enterobacteriaceae. Los indicadores
de sulfuro varían entre los medios de
cultivo: hierro peptonizado, sulfato ferroso,
sulfato de amonio ferroso o férrico, citrato
férrico, tiosulfato de sodio, sulfito de
bismuto o acetato de plomo; pero el
principio es el mismo.
En uno de estos medios, el KIA, los
indicadores de h2s son una sal, el citrato
de amonio férrico, y otro producto químico,
el tiosulfato de sodio. ambos indicadores
deben estar presentes, puesto que el
procedimiento final es en dos pasos.
PASO 1.
El tiosulfato es un intermediario en la reducción de
sulfato a H2S por las bacterias reductoras de sulfatos.
La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio en una
reacción de reducción que da un sulfito y un sulfato.
debe haber un pH ácido y una fuente de iones H+ en el
KIA para que tenga lugar la reducción de tiosulfato. hay
dos carbohidratos presentes para proporcionar la acidez
y el exceso de iones H+. éste es un proceso de
respiración anaerobia, donde el átomo de azufre sirve
como
aceptor de electrones para la oxidación de los sustratos
orgánicos.
El tiosulfato S2O32- reemplaza al sulfato como aceptor
de electrones y es la fuente de azufre del
microorganismo.
SULFURO
Agar con lisina y hierro Ayuda a la identificación de Tiosulfato de sodio Citrato de amonio
(LIA) microorganismos entéricos férrico
gramnegativos
Agar con azúcar triple y Ayuda a la identificación de Tiosulfato de sodio Sulfato ferroso,
hierro (TSI) microorganismos entéricos sulfato de amonio
gramnegativos ferroso
Agar con azúcar triple y hierro
(TSI)
Ingredientes. pH 7.4±0.2
Extracto de carne......................3g
Extracto de Levadura................3g
Peptona....................................15g
Peptona Proteosa, Difco...........5g
Dextrosa.....................................1g
Lactosa.....................................10g
Sacarosa...................................10g
Sulfato Ferroso.......................0.2g
Cloruro de Sodio.......................5g
Tiosulfato de Sodio................0.3g
Agar..........................................12g
Rojo de Fenol.....................0.024g
Agua desionizada…..……..1000mL
Agar con lisina y hierro (LIA)
Ingredientes. pH 6.7±0.2
Peptona de gelatina……....………
5g
Extracto de levadura………….....3g
Glucosa (dextrosa)………..……….
1g
L-Lisina·HCL………………………..
10g
Citrato de amonio férrico………0g
Tiosulfato de sodio..............0.04g
Púrpura de bromocresol.....0.02g
Agar…………....……………………
….15g
Agua desionizada…..……..1000mL
Agar Salmonella-Shigella (SS)
Ingredientes. pH 7±0.2
Peptona de caseína/carne........5g
Extracto de carne…………….……
5g
Lactosa…………....………………
….10g
Citrato de sodio..….................8.5g
Mezcla de sales biliares……….8.5g
Tiosulfato de sodio...........…..8.5g
Citrato férico......................…….1g
Rojo neutro………....………...
0.025g
Verde brillante………...….0.00033g
Agua desionizada……...….1000mL
Prueba con tiras de PbAc