ÍNDICE DE CONTENIDO

GENERALIDADES DE LA MICROBIOLOGÍA ____________________________ 4
Membrana citoplasmática bacteriana _________________________________________ 4 Pared bacteriana___________________________________________________________ 4 Endospora bacteriana ______________________________________________________ 4 Metabolismo microbiano ____________________________________________________ 5 Crecimiento microbiano_____________________________________________________ 5

INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL __________________ 6 MICROORGANISMOS DE INTERÉS INDUSTRIAL _______________________ 7 MANTENIMIENTO Y CONSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS INDUSTRIALES ______________________________________________________ 9 BÚSQUEDA DE NUEVOS METABOLITOS ______________________________ 10 MEJORA DE CEPAS DE INTERÉS INDUSTRIAL ________________________ 12 SUSTRATOS PARAMICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL _____________________ 15
Sustratos usados como fuentes de carbono ____________________________________ 15 Sustratos usados como fuentes de nitrógeno ___________________________________ 16

MÉTODOS DE FERMENTACIÓN A GRAN ESCALA______________________ 17
Modos de operación del biorreactor __________________________________________ 17 Biorreactores_____________________________________________________________ 17 Tipos de biorreactores _____________________________________________________ 18 Instrumentación y control del proceso ________________________________________ 18 Escalado_________________________________________________________________ 19 Técnicas de esterilización___________________________________________________ 19
Del medio de cultivo _____________________________________________________________19 Del aire de fermentación __________________________________________________________19

Proceso fermentativo ______________________________________________________ 19

RECUPERACIÓN DE PRODUCTOS FINALES ___________________________ 20
Separación de las células ___________________________________________________ 20
Filtración ______________________________________________________________________20 Centrifugación __________________________________________________________________20

Rotura celular ____________________________________________________________ 20 Aislamiento preliminar ____________________________________________________ 21 Purificación ______________________________________________________________ 21 Secado __________________________________________________________________ 21 Recuperación de productos de ADN recombinante______________________________ 21 Rendimiento _____________________________________________________________ 22

PRODUCCIÓN DE ALCOHOLES ______________________________________ 23

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Procesos de producción de etanol ____________________________________________ 23
Preparación del sustrato___________________________________________________________23 Fermentación ___________________________________________________________________23 Purificación ____________________________________________________________________24

Producción de acetona/butanol ______________________________________________ 24

PRODUCCIÓN DE ÁCIDOS ORGÁNICOS _______________________________ 25
Ácido cítrico _____________________________________________________________ 25
Medio nutricional _______________________________________________________________25 Procesos de producción ___________________________________________________________26 Procesos en superficie (o koji, del japonés). _________________________________________26 Procesos sumergidos o en profundidad. ____________________________________________26 Purificación ____________________________________________________________________26

Ácido acético _____________________________________________________________ 26
Producción_____________________________________________________________________27 Método Orleans _______________________________________________________________27 Método alemán _______________________________________________________________27 Generadores por goteo o reactor Frigs______________________________________________27 Procesos sumergidos ___________________________________________________________27

Ácido láctico _____________________________________________________________ 27 Ácido málico _____________________________________________________________ 27 Ácido fumárico ___________________________________________________________ 28

PRODUCCIÓN DE NUCLEÓTIDOS, AMINOÁCIDOS Y VITAMINAS________ 29
Nucleótidos ______________________________________________________________ 29
Hidrólisis enzimática del ARN._____________________________________________________29 Hidrólisis química del ARN. _______________________________________________________29 Fermentación del IMP. ___________________________________________________________29 Fermentación del GMP.___________________________________________________________29 Síntesis indirecta:______________________________________________________________29 Síntesis directa________________________________________________________________30

Aminoácidos _____________________________________________________________ 30
Glutamato _____________________________________________________________________30 Otros aminoácidos _______________________________________________________________30

Vitaminas________________________________________________________________ 30
Riboflavina (B2)_________________________________________________________________31 Cobalamina (B12)________________________________________________________________31 Ácido ascórbico (C)______________________________________________________________31

PRODUCCIÓN DE ENZIMAS _________________________________________ 32
Producción comercial ______________________________________________________ 32
Selección de cepas_______________________________________________________________32 Procesos de producción ___________________________________________________________32 Sobre sustrato sólido (procesos Koji) ______________________________________________32 Procesos en biorreactores _______________________________________________________32 Aplicaciones ___________________________________________________________________33 Detergentes.__________________________________________________________________33 Producción de quesos. __________________________________________________________33 Procesado del almidón__________________________________________________________33 Industria papelera. _____________________________________________________________33 Elaboración de zumos.__________________________________________________________33 Elaboración de vinos. __________________________________________________________33 Industria textil ________________________________________________________________34 Síntesis orgánica.______________________________________________________________34

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PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS __________________ 35
Antibióticos β-lactámicos ___________________________________________________ 35
Penicilinas _____________________________________________________________________35 Cefalosporinas __________________________________________________________________36 Nuevos productos _______________________________________________________________36

Antibióticos peptídicos _____________________________________________________ 36 Antibióticos carbohidratados _______________________________________________ 36 Antibióticos macrolídicos___________________________________________________ 37 Tetraciclinas _____________________________________________________________ 37 Antibióticos aromáticos ____________________________________________________ 37
Cloranfenicol ___________________________________________________________________37 Griseofulvina ___________________________________________________________________37

PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE VACUNAS _______________________ 38
Métodos de producción ____________________________________________________ 38
Sistemas tradicionales ____________________________________________________________38 Vacunas de subunidades (técnicas de ADN recombinante) _______________________________38 Vacunas peptídicas ______________________________________________________________39

PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE PROTEÍNAS TERAPÉUTICAS _____ 40
DNAsa __________________________________________________________________ 40 Eritropoietina (EPO) ______________________________________________________ 40 Somatropina _____________________________________________________________ 40 Insulina _________________________________________________________________ 40 Interferón _______________________________________________________________ 41 Interleuquinas ____________________________________________________________ 41 Activador del tejido plasminógeno ___________________________________________ 41 Colágeno ________________________________________________________________ 41

PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE SCP ____________________________ 42
Producción de proteína unicelular ___________________________________________ 42
Sustratos ______________________________________________________________________42 Procesos de producción ___________________________________________________________43

Producción de levadura para panadería ______________________________________ 43

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GENERALIDADES DE LA MICROBIOLOGÍA
Microorganismo es todo organismo vivo que no es visible a simple vista: bacterias, algas, hongos, protozoos,... Se subdividen según los tipos de estructura celular: • Procariotas, que son las bacterias y arqueas (consideradas como bacterias simples y, por tanto, las menos evolucionadas). • Eucariotas, que son hongos, levaduras, protozoos, algas,... Los virus merecen una mención aparte dentro de esta clasificación, ya que no pueden ser considerados seres vivos en el sentido estricto (no poseen metabolismo, son incapaces de autorreplicarse, etc.) La principal diferencia entre procariotas y eucariotas es que los procariotas, a diferencia de los eucariotas, no poseen ninguna estructura nucleada que agrupe el material genético en una sola región, sino que éste se halla disperso por el citoplasma bacteriano. Además, los procariotas poseen una menor información genética y carecen de estructuras membranosas que delimiten orgánulos internos de funciones diferenciadas. Así, constan de una única macroestructura que desempeña múltiples funciones.

Membrana citoplasmática bacteriana
La estructura y composición son casi las mismas que en el caso eucariota. Sus funciones son: • Transporte de moléculas, efectuado por proteínas transportadoras embebidas en la membrana. • Contiene la cadena de transporte electrónico, que permite la fosforilación oxidativa y la producción de ATP. • Interviene en fenómenos de quimiotaxis (movimiento inducido por ciertos compuestos químicos, llamados quimioefectores), debido a que contiene receptores para los quimioefectores. • Juega un papel fundamental en la biosíntesis de moléculas como lípidos o polisacáridos. • Excreta proteínas que cumplen determinadas funciones en el exterior celular.

Pared bacteriana
Su principal función es dar rigidez a la bacteria, previniendo efectos osmóticos adversos, como la plasmólisis, además de preservarla de otras condiciones adversas. De hecho, una bacteria sin pared sólo puede sobrevivir en un medio isotónico con su citoplasma. La pared celular es una estructura tridimensional basada en la repetición de dos azúcares (Nacetilglucosamida y N-acetilmurano –NAG y NAM-), así como de un tetrapéptido. La principal diferenciación aplicada a las bacterias atiende al tipo de pared bacteriana: grampositivas o gramnegativas, o sea, sensibles o no a la tinción de Gram. En bacterias grampositivas, la estructura repetitiva es de gran tamaño y compacta, con pocas moléculas de otro tipo embebidas en la pared; mientras que en las gramnegativas es de tamaño notablemente menor, poseen muchas moléculas embebidas y presentan un denominado espacio periplásmico entre la pared bacteriana y la membrana plasmática. Así, una pared gramnegativa posee más funciones que una grampositiva.

Endospora bacteriana
Ciertas bacterias poseen dos estados en su ciclo vital: como célula vegetativa y como espora, no dándose ambos estados simultáneamente. El proceso de esporulación (formación de la espora) es bastante largo (810 horas). A diferencia con otras formas de vida, la espora no es un medio de reproducción, sino un cambio fisiológico. Las características más importantes de la espora son: - Presentan una mayor resistencia a condiciones extremas: altas temperaturas, compuestos químicos, desecación, radiaciones,... - Presenta una actividad metabólica casi nula. - Presenta una serie de capas de recubrimiento características: el exosporio, 3 cubiertas y el córtex. El exosporio y las cubiertas son proteicas, mientras que la otra es similar a la pared celular. - Prácticamente carece de agua, lo que le dota de resistencia térmica. - Contienen ácido dipicolínico, que asociado a iones calcio, permite mantener la estructura. Esta sustancia es típica de la endospora, ya que no se presenta en la célula vegetativa.

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el del nitrógeno. bien sea cíclica para organismos que no producen oxígeno. y representa el tiempo que tardan los microorganismos en adaptarse a las condiciones del medio. ya sean aerobios o anaerobios. por ejemplo. se usan para sintetizar productos de interés. La esporulación presenta dos aplicaciones fundamentales: . Este tiempo es variable según la especie y los factores ambientales y nutricionales. que unidas al material genético. Así. Debido a la acumulación de excreciones tóxicas al medio por la gran población microbiana.En la rama sanitaria. por lo que el número de células permanece aproximadamente constante. Representa un tiempo variable dependiente de las condiciones del medio. Crecimiento microbiano Se refiere al aumento del número de células de un cultivo. Este proceso se caracteriza por el tiempo de generación. La forma de obtención del ATP por parte de los microorganismos es muy variada: • los organismos fotosintéticos obtienen el ATP por fosforilación. . las células van muriendo. El estado de espora. puede mantenerse por un tiempo ilimitado. 5 .Fase Lag. la curva de crecimiento microbiano es siempre la misma. así como el paulatino descenso de los nutrientes del mismo. Cuando finaliza. • Los organismos fermentativos obtienen el ATP a través de fosforilaciones a nivel de sustrato. la fuente de carbono puede ser compuestos inorgánicos (autotrofos) u orgánicos (heterotrofos). .Fase de muerte. ya que son ciertas bacterias los únicos organismos capaces de efectuar las reacciones que permiten fijar el nitrógeno atmosférico y convertirlo en las formas en que pueden asimilarlo el resto de los seres vivos.En la industria. así como una explosión demográfica debido a las condiciones favorables del medio. El equilibrio entre células que nacen y células que mueren se rompe.Contiene pequeñas proteínas ácido-solubles (SASP’s). la célula está preparada para desarrollar su actividad y multiplicarse utilizando los recursos que el medio le ofrece. Existe un metabolismo muy importante. De este modo.Fase estacionaria. hasta alcanzarse un equilibrio entre el número de células que nacen y las que mueren. pueden obtener la energía de la luz (fototrofos) o de reacciones de ciertos compuestos químicos (litótrofos o quimiotrofos).Fase de crecimiento. . de modo que va disminuyendo el número total de células hasta alcanzar un mínimo aproximadamente constante. de retardo o de adaptación. causado por la aparición de condiciones adversas en el medio. Asimismo. por procesos oxidativos parciales. ya que dura sólo unos minutos). Independientemente del tiempo de generación. dividiéndose en cuatro fases: . ya que dota a las bacterias de mayor resistencia a los tratamientos. hasta que un medio favorable induzca la germinación de la espora (proceso muy rápido. . - Metabolismo microbiano La diversidad en cuanto a rutas metabólicas entre las bacterias es enorme. la esterilización debe realizarse en condiciones más críticas. o acíclica para organismos que sí lo producen. los microorganismos pueden ser fotoautotrofos. Consiste en el periodo de mayor actividad de las células. por lo que. quimioautotrofos o quimioheterotrofos (son muy raros los microorganismos fotoheterotrofos). disminuyen los daños causados en éste por las radiaciones ultravioletas y disminuyen las mutaciones. que es el necesario para que la población se duplique. • Los organismos respiratorios obtienen el ATP por fosforilación oxidativa.

destacan dos ramas principales: • La Biotecnología tradicional. vino. • Toman como base para su crecimiento sustratos económicos. las necesidades industriales son demasiado elevadas. Por ello. que se basa en técnicas de ingeniería genética para obtener nuevos productos. descubiertos poco antes. así como los cultivos en continuo y el conocimiento en procesos anaerobios. Es por ello que las cepas salvajes son sometidas a diversas alteraciones con el fin de inculcar a éstas las características buscadas. • Sencilla manipulación genética. como ocurría con la fabricación de queso. La biotecnología. sin embargo. es en la Segunda Guerra Mundial donde la necesidad de antibióticos. por tecnologías de ADN recombinante. supone un problema ético y legal importante. etc. y deben patentarse en alguna de las colecciones de cultivo existentes por el mundo. en los años 70 se perfeccionan las técnicas de inmovilización de células para aumentar el rendimiento económico de los cultivos (en medios sólidos. • La nueva biotecnología. y a pesar de su abundancia. La Biotecnología surge a finales de los 70 como punto de unión de diversas ciencias con el fin común de aprovechar los organismos vivos y sus cualidades para obtener beneficios económicos. como glicerol o acetona. cerveza. por lo que la búsqueda de una determinada especie con unas ciertas características es bastante compleja. 6 . que se basa en la mejora de procesos ya establecidos. para los microorganismos. sólo unas pocas presentan actualmente interés industrial. También con estas técnicas se pueden obtener cepas capaces de degradar productos xenobióticos (productos no degradables de origen humano). • Contemplan una amplia diversidad metabólica. la vida media de los cultivos es mucho mayor. Sin embargo. dado que se desconocen sus efectos a largo plazo. Esto permite que. entre los que destacan los Pseudomonas. Así. debido a sus peculiares características: • Elevada tasa de desarrollo. o bien para obtener productos ya conocidos por vías alternativas. entre otros. lo que supone un alto número posible de productos y sustratos. Por ello.INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL Desde tiempos ancestrales se han obtenido productos en cuya fabricación han intervenido los microorganismos. las cepas industriales pueden ser muy diferentes de las salvajes originales. como hormonas humanas. Los primeros procesos industriales que aprovecharon la acción de microorganismos fueron procesos de obtención de alcohol y ácidos láctico y cítrico. la legislación impone unas restrictivas medidas de seguridad con el fin de impedir la liberación de cepas modificadas al medio ambiente. o sea. o incluso incorporar a los microorganismos de la maquinaria enzimática suficiente como para producir sustancias ajenas a ellos. aunque no se haya tenido conciencia de ello. que en poco tiempo de cultivo son capaces de iniciar la producción al máximo de sus capacidades. La Primera Guerra Mundial potenció la fabricación de otros productos necesarios para la guerra por vía microbiana. Se aplica fundamentalmente a microorganismos. ácidos orgánicos o antibióticos. se pueda mejorar la producción. Sin embargo. debido al relativamente pequeño tamaño de su ADN. además de que facilita la separación del producto). ya que la modificación del material genético de los microorganismos puede conducir a consecuencias inesperadas y potencialmente peligrosas. entre los que se puede llevar a cabo casi cualquier reacción metabólica. Dentro de la biotecnología. da el impulso definitivo al estudio de las capacidades industriales de los microorganismos. por lo general. yogur. Sin embargo. Existe una amplísima diversidad de microorganismos. XX. Además. como la producción de etanol. La primera prueba de la existencia de microorganismos se debe a los "animálculos” que Leuweenhoek observó gracias a su sistema de lentes en el siglo XVIII. no fueron estudiados hasta el siglo siguiente por Pasteur. a principios del s.

de una especie pura.MICROORGANISMOS DE INTERÉS INDUSTRIAL La principal característica de los microorganismos es su elevada razón superficie / volumen (debido a su reducido tamaño). por lo general. que por lo general son residuos de otras industrias. como pectinasas (útiles para la elaboración de zumos). Síntesis de antibióticos. Por lo general. Esto supone una gran capacidad de absorción y sintetización de sustancias. Son estables genéticamente en el tiempo. Setas. ya que esto facilita la separación de las células del producto. como melazas. ya que una vez que se altera el material genético. sin presencia de otras células de otras especies diferentes). Es preferible que el tamaño de las células sea el mayor posible. son especies capaces de producir esporulación. lo que requiere una modificación genética adicional de las cepas. Los principales usos de las distintas clases de microorganismos son: Industria panadera Bebidas alcohólicas Fuente de vitaminas y de proteína unicelular (SCP. ciertas especies. tales como ciertas hormonas. más facilitada está la separación. lo que permite una mayor facilidad de obtención de las cepas industriales buscadas. con diversos fines terapéuticos. Sin embargo. Otras características importantes de los microorganismos usados en industria son: Disponibilidad de cultivos axénicos (o sea. Son de rápido crecimiento. son frecuentes las mutaciones. además de que facilita su conservación al hacerlas más resistentes. en definitiva. las cepas han de ser capaces de crecer aunque las condiciones no sean las óptimas ideales. Hongos Síntesis de ácidos orgánicos (sobre todo. son bastante más fáciles de manipular que otras. como Esclerichia coli. lo que facilita su manejo e inoculación. a pesar de que hayan sido modificadas genéticamente en el proceso de obtención de la cepa industrial. Deben ser más o menos fáciles de manipular genéticamente. una mayor tasa metabólica. Así. Esta característica es importante. lo que permite iniciar la producción en periodos cortos de tiempo. Síntesis de proteínas de origen no microbiano. Lácticos Embutidos y conservas Bacterias lácticas (el Probióticos (productos Bacterias grupo más importante) de efectos beneficiosos para la salud) Ácido láctico Saccharomyces cerevisiae Kluyveromyces fragilis Aspergillus niger (sobre todo en síntesis de ácidos orgánicos) Penicillium notatum 7 . Pueden crecer en medios líquidos de bajo coste. derivados de soja y ciertos quesos Producción de diversas enzimas. Dado que las condiciones del medio de cultivo son variables (por tratarse de cultivos a gran escala). como la penicilina. para minimizar los riesgos en caso de que alguna célula viva escapara del fermentador al medio ambiente o al consumo. Síntesis de alcaloides. Las cepas utilizadas han de carecer de carácter patógeno. de Levaduras gran importancia en zonas con carencias de alimentos). por lo que cuanto mayor sea el tamaño. esto presenta a su vez un inconveniente: son sustratos complejos y difíciles de metabolizar. cítrico y filamentosos láctico). importante complemento dietético de bajo coste. Esto se debe a que los procesos de separación son. filtraciones o centrifugaciones.

Actinomicetos (similares a hongos por morfología y tipo de crecimiento. presentes en suelos) Bacillus - Antibióticos Enzimas Inhibidores enzimáticos Corinebacterias. utilizadas en industria quesera y en síntesis de potenciadores de sabor Clostridium (organismos estrictamente anaerobios) Antibióticos peptídicos Bacillus thuringiensis Enzimas proteasas Insecticidas Síntesis de disolventes Degradación de sustratos complejos en combinación con otras especies de microorganismos 8 .

Este método. El inconveniente de este método es el gran aumento de la concentración de sales en el proceso de descongelación. Congelación. aumenta el riesgo de variabilidad genética en la cepa. Consiste en la eliminación de agua del microorganismo. se sella a vacío. Actinomicetos y clostridios. No es la más apropiada para la industria. Consiste en el paso de un inóculo de un cultivo agotado en otro fresco (preferentemente. Actinomicetos y arena estéril o silica gel.En bacterias lácticas. se usan dos técnicas: Adición de compuestos protectores. como dimetilsulfóxido. ya que cada especie presenta sus preferencias de conservación: Subcultivo. Para evitarlo. No existe un único método. de modo que se formen primero los cristales en el medio exterior. industriales (-70 ºC) o nitrógeno líquido (hasta –200 ºC). bastante bajo. Según la técnica empleada. Para evitar que el proceso de desecación dañe las células. Esto provocará la pérdida de agua de la célula por ósmosis. Para evitar la formación de cristales en el interior de las células. ya que presenta tres grandes inconvenientes: El tiempo de persistencia de las células es. Subcultivo Desecación Congelación Liofilización Escasa supervivencia y Saccharomyces . En él.En tierra o arena da buenos resultados en clostridios. etc. Se usan congeladores normales (unos –30 ºC). reduciendo así el metabolismo. se usa la genética. se usan medios de congelación poco salinos. congelación en . por lo general. . que pueden producir daños en sus estructuras. da buenos resultados suspensiones en tierra. a la que las células pueden ser muy vulnerables. hay una de supervivencia y alta supervivencia aceptable alta variabilidad cerevisiae. al finalizar el proceso. Al igual que antes.Para esporas de mohos estabilidad genética. Se puede producir contaminación fácilmente. Debido a la manipulación continua. Desecación. Un método alternativo es el del L-secado. se requiere la adopción de técnicas de conservación apropiadas que permitan preservar sus propiedades.Para esporas de mohos. líquido estéril. la temperatura de congelación varía. sólido). ya que permite unos tiempos de conservación bastante altos. junto con la congelación. clostridios 9 . Este tiempo puede aumentarse por refrigeración a unos 4 ºC. y alta estabilidad genética. actinomicetos. y también . pero también es mayor el coste.Para levaduras. El proceso se produce a temperatura ambiente una vez añadidos los protectores. da resultados nitrógeno de una intermedios en precedida actinomicetos y desecación. se añaden compuestos protectores. se sella y se lleva a refrigeración. Se hace una congelación previa antes de pasar al liofilizador. Congelación lenta.Para mohos. Cuanto más baja sea la temperatura.). . 50 % . nitrógeno líquido. se sella el cultivo y se conserva en refrigeración. el agua se sublimará por bajada de presión y el cultivo microbiano queda en el seno de una matriz porosa protectora (que por lo general es leche descremada o sacarosa). . mejor es la conservación. Consiste en pequeños discos gelatinosos que se impregnan con el cultivo líquido y se secan por un proceso activo (temperatura.Para levaduras. dada la alta frecuencia de manipulación.MANTENIMIENTO Y CONSERVACIÓN MICROORGANISMOS INDUSTRIALES DE Dado el alto coste de obtención de las cepas industriales. es el más valorado. Liofilización. Finalizado el proceso. Debido a las características del método.

existen diversas técnicas de selección (las dos primeras para seleccionar un microorganismo concreto y las otras dos para obtener un nuevo producto o una vía alternativa de síntesis de un producto ya conocido. Escrutinio al azar. es limitar la mutación al gen que queremos modificar. Consiste en obtener la cepa de su hábitat común en la naturaleza. la selección o screening consiste en la aplicación de procedimientos altamente selectivos para detectar y aislar exclusivamente las células o metabolitos de interés a partir de una gran población de microorganismos distintos. Reproducción asexual. Para este proceso. A través de factores ambientales a los que sean sensibles las células que no posean la característica buscada. al menos. en la misma placa Petri y simultáneamente. Escrutinio racional. con rendimientos más elevados y dotando a los productos de ciertas características importantes. es el medio de reproducción menos frecuente entre los microorganismos. debido a que es una fuente natural de variabilidad genética. Así. y se favorece cuando hay coincidencias en la secuencia (se facilita el trabajo de las enzimas de restricción usadas en estos procesos. La creación de nuevos genomas microbianos utiliza técnicas de ingeniería genética. La creación de los nuevos genomas puede hacerse por diversos métodos: Mutagénesis. 2. Requiere realizar ensayos de cultivo de todas y cada una de las células tratadas. Se distinguen varios métodos. etc. (mecanismos que introducen material Consiste en la introducción de DNA extraño en la célula a través Transducción genético extraño en de su infección por un virus bacteriano. a los que se pueden aplicar compuestos coloreados). ya sean especies nuevas o especies modificadas. y esperar su acción sobre las células.BÚSQUEDA DE NUEVOS METABOLITOS Es costosa la búsqueda de nuevos productos o microorganismos capaces de producirlos. en función del microorganismo al que se pretenda cambiar el material genético. Es una técnica aplicable a cualquier tipo de microorganismo. Por ello. Consiste en la observación de alguna característica secundaria asociada a la actividad buscada y fácilmente observable. para poder separar las que presenten la cualidad buscada (aunque no sea posible analizar cuantitativamente dicha característica. Una vez hallado el microorganismo en su hábitat. Dichas técnicas son: Consiste en la penetración de DNA libre presente en el medio en Bacterias Transformación el interior celular. y permite obtener cepas con nuevas características o con características propias mejoradas y potenciadas. Por definición. por lo que puede no darse si quiera la característica buscada. en discos separados. por lo que puede darse cualquier tipo de variación sobre cualquier gen (o sobre varios de ellos). hay que mejorarla y preservarla de futuras alteraciones. b. Selección de cepas mejoradas genéticamente. Sin embargo. Reproducción sexual. Este gasto puede disminuirse si se efectúa la siembra sobre discos de agar. lo que interesa. Es la más tradicional. por ejemplo. los mecanismos de degradación de la lactosa. Así. Presenta dos problemas principales: es muy complicado identificar el producto o cepa de interés. no lo hacen todas de la forma deseada. cuando sometemos una cepa salvaje a mejora genética para obtener la cepa optimizada para su uso industrial. El potencial del mundo microbiano en este aspecto es enorme: sólo el 1% aproximadamente de las especies microbianas es conocido con cierta profundidad como para conocer sus intereses potenciales. El problema de esta técnica es que la mutación producida es al azar. que son las que usan bordes complementarios en los fragmentos unidos). y una vez obtenida la cepa aislada. 10 . y las que lo siguen. podremos ir eliminando las células no modificadas. Estos procesos requieren que el DNA introducido y el celular sean de estructuras similares. lo que supone un alto gasto económico y temporal. Selección ambiental. no todas las células sufren el proceso de mutación. como resistencia a antibióticos o degradación de compuestos cromógenos (como por ejemplo. como isómeros puros. Sería la más adecuada. Existen dos métodos de separación de cepas: a. es necesario emplear programas de selección. lo que permite cultivar varias células. para lo que hay que pasar a cultivos líquidos individuales).): 1. lo cual no es fácil de conseguir. por lo que sólo puede aplicarse a ciertos hongos. Consiste en la adición de una agente mutágeno. que permiten separar las células que nos interesan del resto del cultivo. es necesario establecer los métodos de separación apropiados para obtener la cepa de interés de forma rápida y con la mayor selectividad posible.

Así. • Las condiciones ambientales determinan mucho su síntesis. aunque en determinadas condiciones la síntesis de estas sustancias le confiera algún beneficio. Los primarios son aquellos que la célula produce porque son imprescindibles para efectuar sus funciones vitales. modificar su como etilenglicol. hay que disminuir las Especies con gran protoplastos repulsiones electrostáticas entre sus membranas citoplasmáticas dificultad para (con carga negativa). 11 . Consiste en sintetizar un producto químico para que luego el microorganismo efectúe alguna reacción enzimática sobre él y así transformarlo en producto. se transfieren plásmidos entre las dos células. Esto genera mutaciones en las dos células por recombinación del DNA. También se material genético favorece dicho proceso adicionando Ca2+. a través de la cual se convierte en producto mejorado. dando lugar a una nueva característica de la especie. En general. para poder mejorarlo y aumentar la producción. al producirse la escisión del plásmido. por lo que se hace necesario añadir agentes. 1. mientras que los secundarios son aquellos que la célula produce y no son vitales para que ella realice sus funciones vitales. se mantiene la información genética que define la ruta metabólica que la origina. 2. por lo general. que disminuyan dicha repulsión. son células mucho más sensibles. Biotransformación. con lo que (para hongos) aparecen temporalmente poros en las cubiertas celulares. De este modo. • Algunos metabolitos secundarios se obtienen como una familia de sustancias estrechamente relacionadas. por lo general relacionadas entre sí. sobre todo a fenómenos osmóticos. los productos de interés industrial son metabolitos secundarios. éste pasa a ser un metabolito primario. Sin embargo. En general. puede haber errores. La teoría más aceptada sobre el origen del metabolismo secundario es la de Zähner. por lo que hay que cuidar que el trabajo sea en medios isotónicos. con lisozimas). ya que dicha pared es la principal barrera al paso de DNA. intercambiándose fragmentos del DNA bacteriano entre las bacterias. Es una técnica muy rápida y de buenos resultados. Se obtienen por procesos químicos o enzimáticos (más concretamente. pero como en ocasiones los plásmidos están fusionados con el cromosoma Conjugación bacteriano. Hongos Recombinación Se debe al proceso natural de reproducción sexual que siguen filamentosos mitótica estos microorganismos. cuando una determinada sustancia producida por dicho metabolismo resulta beneficiosa para la célula. cuando un metabolito secundario otorga a una célula una gran ventaja sobre otras que no lo tienen. Las principales características de los metabolitos secundarios son: • Suelen ser producidos en exclusiva por un número limitado de especies. Fusión de Para que los protoplastos se fusionen. Según ésta.la célula) Consiste en la formación de un puente físico entre dos bacterias (una de ellas debe tener pili para que esto sea posible). por lo que es importante conocer los detalles del proceso de síntesis. lo que facilita la entrada de DNA. Las células producen dos tipos de compuestos químicos: metabolitos primarios y secundarios. Se aplican Electroporación pequeñas y breves corrientes eléctricas al cultivo. de modo que las células pasan al llamado estado competente (mayor disposición a la entrada de DNA). Modificación química. más complejos. el metabolismo secundario es un campo de pruebas de la célula. Consiste en usar un metabolito microbiano como precursor de una reacción química ajena al microorganismo. • En general. Los protoplastos son células sin pared celular. las rutas metabólicas que los sintetizan están reguladas por mecanismos distintos a los de los metabolitos primarios y son.

mejorando los resultados de la mutación.Unión de diferentes alelos que generan cantidades crecientes de metabolito. a través de varios mecanismos distintos: . y más dispersos se hallen en el genoma. En el caso de la inhibición acumulativa. Cuando la ruta es ramificada. • Eliminar la síntesis de compuestos colaterales para aumentar la pureza del producto. Esto. ii. Las principales razones que llevan a realizar los procesos de mejora genética. La primera etapa de la parte común de la vía metabólica está regulada por distintas isoenzimas. Dado que cuanto más se manipula un microorganismo mutado. Así. mayor es el riesgo de que la mutación degenere.MEJORA DE CEPAS DE INTERÉS INDUSTRIAL No todas las especies presentan la misma disposición a la modificación genética.Retroinhibición. influyentes todos en la economía del proceso. es necesario mantener células mutadas originales en reserva sin utilizar. de las primeras de la ruta) una vez que alcanza cierta concentración en la ruta. para facilitar su separación. El producto final de cada ruta “hija” actúa como inhibidor de la primera enzima que ya no efectúa una reacción común al resto de las rutas relacionadas. para poder cruzarlas posteriormente con las células alteradas para recuperar las características originales. la inhibición sobre la ruta se produce también por todos los productos finales. se alteran características originales que afectaban a la eficiencia del proceso de fermentación. que están reguladas de forma independiente. por recombinación con células de la cepa original. Además de alterar los mecanismos celulares para la obtención del producto que nos interese. Regulación de la actividad enzimática. sin embargo. Esto se consigue mediante: . Esto se debe a que. por lo que interesa disminuir el consumo de oxígeno o. Estos mecanismos pueden ser: 1. Por ello. La dificultad de este proceso depende de la complejidad de modificar los genes que rigen el producto. dichas características pueden recuperarse. los microorganismos utilizados son aerobios. es necesario conocer las posibilidades de regulación de la ruta que lo produce. disminuir el tiempo de fermentación (permite efectuar una producción mayor en menos tiempo) o aumentar la capacidad del microorganismo para nutrirse satisfactoriamente de un sustrato más barato. más complicada será la regulación y control del proceso). más caros y complejos son los equipos. optimizarlo al máximo). . • Adecuar las características del microorganismo a las condiciones ambientales del lugar donde se lleve a cabo la fermentación: requerimientos de oxígeno (ya que. cuanto mayor sea el requerimiento de oxígeno. iv. o a lo sumo. . al menos. • Obtención de microorganismos capaces de sintetizar productos de interés biológico que no sean de origen microbiano. al alterar las características que nos interesan. La regulación a este nivel puede producirse. La recombinación es el proceso que permite aumentar la variabilidad genética por medio de la unión de la información genética contenida en dos genotipos. por lo general. iii. en ocasiones.Recombinación con cepas salvajes que suelen tener mejores características fermentativas. En el caso de inhibición multivalente. pero no se requiere que 12 . obtiene resultados inferiores a los teóricos posibles. en función de la especie de microorganismo y la complejidad de la información genética requerida por la característica que queremos incorporar al microorganismo (número y tipo de genes.Sustitución de alelos mutantes desfavorables tras diversos ciclos de mutación. a su vez. Consiste en que uno de los productos de la ruta metabólica actúa como inhibidor de una de las enzimas (por lo general. disminuir la producción de éstos. entonces puede darse de varias formas: i. son: • Incrementar la baja producción que se obtiene a partir de cepas salvajes. mediante las técnicas de DNA recombinante. debido a que posiblemente se alteren otras características celulares que hacen disminuir el rendimiento posible. cuantos más genes estén implicados. la inhibición de la ruta se consigue sólo cuando todos los productos finales en los que desemboca alcanzan la concentración necesaria.

por lo general. Este método de regulación aparece.). que controlan el transporte de sustancias hacia y desde la célula. por determinadas circunstancias. destacando la obtención de cepas auxotrofas y la eliminación de compuestos colaterales. por lo que han de suministrarse en el medio de cultivo. Así. Los genes implicados son: . que dan resistencia a la célula frente a la acción del metabolito secundario (en el caso de que éste presentara actividad antimicrobiana). .Eliminación de la retroalimentación: obtención de mutantes auxotrofos.Degradación de enzimas. . 13 . indica una gran cantidad de formas energéticas del ATP. Afecta. Los procesos de regulación anteriores afectan. por lo que se activan las rutas que lo consumen (anabólicas) al tiempo que se inhiben las que lo producen. . pero ésta no es capaz de usarlo como sustrato para su reacción.Regulatorios. . si eliminamos la capacidad de la célula para sintetizar una sustancia que actúa como inhibidor del proceso que nos interesa.Obtención de mutantes resistentes a antimetabolitos. 4. se inhiben las rutas anabólicas y se activan las que lo producen (catabólicas). Consiste en la activación o inhibición de una enzima debido a cambios conformacionales reversibles causados por la unión o no de un determinado grupo químico o molécula a la enzima. .- todos alcancen la concentración necesaria para detener la ruta. Carga energética. . sobre todo. pero pueden tener ciertos efectos laterales sobre el secundario. sino sólo cuando. por lo que se usan para aumentar su producción.La atenuación actúa en conjunto con los 2 sistemas anteriores. podemos hacer que la célula no requiera el producto final de la ruta o bien dotarla de capacidad para actuar sobre el antimetabolito. Exceso de producción de metabolitos primarios. Un antimetabolito es una sustancia de estructura tan similar a la de un metabolito que es capaz de unirse a la enzima. 2. . Existen tres mecanismos fundamentales de regulación: . Regulación y superproducción de metabolitos secundarios.. sobre todo. se regulan por los mismos mecanismos que los primarios. Estos metabolitos son más complejos de regular.5ADP AMP + ADP + ATP Cuando el valor de este cociente es próximo a 1. que codifican las enzimas implicadas en la síntesis del compuesto. a las rutas de síntesis de aminoácidos. . = ATP + 0. Consiste en la degradación de enzimas inducibles por medio de la acción de otras proteasas específicas. Afecta. impedimos la inhibición de la ruta. Se define la carga metabólica como: C. Hay tres procesos para ello: . sino que el proceso es más gradual.Convertir una enzima inducible en constitutiva. Asimismo.De resistencia. a enzimas inducibles. vitaminas. hemos de añadir el compuesto eliminado al medio de cultivo en cantidad suficiente como para que no se detenga el crecimiento celular pero tampoco la ruta deseada.Estructurales. se necesitan en un momento dado o aparece en la célula el sustrato sobre el que actúan. ya que están controlados por cuatro tipos de genes. Para evitar la detención del crecimiento celular. Las enzimas inducibles son aquellas que no están siempre presentes en la célula. . en células en la etapa de crecimiento estacionario. Regulación de la síntesis de enzimas.La inducción consiste en que el propio sustrato actúa como activador del sistema genético que codifica la enzima. Este proceso permite que un producto que no es siempre requerido por la célula salvo cuando aparece el sustrato en el medio esté siempre activo. a metabolitos primarios..La represión consiste en la detención de la transcripción de enzima por la acción inhibitoria del producto final que genera. A pesar de ello. Controla la síntesis de enzima modificando el ARNm que daría lugar a su síntesis. cuando el valor se aproxima a 0. 3.Modificación de enzimas. Así.E. Un organismo auxotrofo para un determinado compuesto es aquel que no es capaz de sintetizar un producto que requiere para realizar sus funciones (algunos aminoácidos.. Así. sobre todo.De permeabilidad. que están implicados en el metabolismo primario. el producto de interés debe ser anterior en la ruta al punto de inserción del antimetabolito.

Por comparación tras la incubación de ambos cultivos.). La ingeniería genética aplicada a la microbiología industrial permite introducir secuencias específicas de DNA en una célula. se impresiona éste en el terciopelo y se inocula éste en el medio mínimo. que no contiene los nutrientes necesarios para las especies auxotrofas (por lo que éstas no se desarrollarán). sobre todo en biotecnología (prevención de enfermedades génicas. es frecuente tratar primero la muestra con penicilina en medio mínimo.) y protección ambiental (degradación de productos xenobióticos. • Selección de mutantes. Una vez delimitado el gen a clonar en el genoma. etc. obtención de medicamentos.. localizamos en el medio completo las colonias que no se han desarrollado en el mínimo. Para el caso de auxotrofos se aplica la técnica de los dobles cultivos: uno en medio completo (contiene todas las sustancias que pueda requerir la célula) y otro en medio mínimo. las cepas auxotrofas (que no se desarrollarán en medio mínimo) no se verán afectadas. y que son las colonias auxotrofas. 14 . un fago o un cósmido (plásmido que contiene los genes que codifican la síntesis de la cápsida de un fago λ). Para ello. lo que se consigue a través de mecanismos genéticos. Como la penicilina actúa sólo sobre células en crecimiento. Para hacer una selección de mutantes selectiva. Las técnicas de ingeniería genética tienen diversas aplicaciones. Éstos serán los vehículos a través de los cuales se introducirá el DNA en la célula. La técnica consiste en que las colonias de microorganismos estén en el mismo sitio en ambos medios. Para facilitar este proceso. Para reducir el número de pruebas de este proceso y aumentar el número de auxotrofos de partida. para ello. mientras que el resto morirán. se usa un taco de madera de igual forma que el fondo del cultivo y recubierto de terciopelo. podemos adicionar antibióticos o antimetabolitos a los que sólo la cepa mutada es resistente.. por lo que sólo ellas permanecen activas en el cultivo. • Inserción del gen en un plásmido. Otra forma de detectar los mutantes deseados es alterar algún carácter enzimático que origine una propiedad fácilmente observable. se aumentará la competencia por presencia de iones calcio y/o electroporación. las etapas a seguir son: • Obtener la secuencia genética a clonar.. eligiendo la que mejor se ajusta al proceso. Una vez efectuado el cultivo sobre el medio completo. se hacen coincidir las zonas adyacentes al gen con las secuencias de corte de las distintas enzimas de restricción. es aconsejable efectuar tratamientos cíclicos con distintos agentes mutágenos sobre las cepas mutadas. Esto se realiza por acción de las endonucleasas de restricción. • Introducción en la célula hospedadora.Para evitar desechar cepas que puedan presentar características interesantes.

lo que puede interesarnos o no. el metabolismo del microorganismo puede desequilibrarse hacia procesos que no son los habituales. Debido a la actividad microbiana. condiciones. clima. Muchos de ellos son Al igual que el almidón. Dada su composición. para su degradación. etc. Los sustratos se escogen. mientras que a escala industrial esto no es posible por no ser económicamente viable. en función de si los productos producidos son los que buscamos. básicos para que los microorganismos efectúen sus funciones. aunque sí como complemento de medios con bajo contenido en carbono. La consecuencia es la cerveza proteínas y pépticos) disminución de los nutrientes asimilables por los microorganismos. están perfectamente definidos en cuanto a composición. pureza. aunque se Etanol están adaptando procesos para sintetizar diferentes sustancias usándolo como sustrato. • Cierto contenido en oligoelementos y sales minerales. como la no lo posee. y carboxilo de proteínas y azúcares. Si el microorganismo pero otros. por lo general. Se usa en Metanol producción de proteína unicelular y de ciertas vitaminas. Han de presentarse en formas asequibles por las células (no son válidas todas las formas). por hidrólisis química u obtención su degradación. su composición es desconocida y variable.SUSTRATOS PARAMICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL Las características de los procesos microbianos a escala industrial presentan grandes diferencias con los procesos a escala de laboratorio. Si no fuese así. dando cebada en la variadas y ricas fuentes de compuestos de degradación muy fabricación de nitrógeno (aminoácidos. por cercanía a la zona. • Su composición ha de ser lo suficientemente equilibrada: sin exceso ni limitación de ningún nutriente necesario. se pueden producir condensaciones de Maillard durante el Proviene como Presenta fuentes de carbono proceso de esterilizado. lo que puede llegar a inhibir el crecimiento microbiano. microorganismos. por lo que se utilizan generalmente residuos de otras industrias. plantas como sales y . la celulosa directamente aprovechables requiere de un sistema enzimático especial por los microorganismos.Composición muy variable. Los sustratos industriales presentan el gran inconveniente de que. ya que así se disminuyen los costes de transporte. así prima (zona.). requieren el medio. Es necesario degradarlos cuando los Son polímeros de azúcares microorganismos carecen de las amilasas: que requieren la presencia por adición de amilasas al medio de de amilasas específicas para cultivo. según origen Presenta formas asimilables (caña o remolacha) y cultivo de la materia Residuos de las de carbono y nitrógeno. Estos residuos han de cumplir los siguientes requisitos para poder ser usados como sustrato: • Contener una fuente de carbono y nitrógeno suficientemente rica. se añaden tampones.Puede contener compuestos tóxicos de azucareras oligoelementos suficientes.. Melazas Extracto de malta Almidón y dextrinas Desechos de madera e industrias papeleras Aceites vegetales Alcoholes de bajo número de carbonos 15 . es necesario proporcionarlo en celulosa. Esto es particularmente crítico en lo referente a sustratos: en laboratorio. de mutantes capaces de producir amilasas. etc. el pH del medio puede sufrir grandes variaciones. efectuar una hidrólisis química o tratamiento especial. Para minimizar estos efectos. usar cepas mutadas capaces de degradarla. Estas reacciones residuo del fácilmente asimilables se producen entre grupos amino y malteado de la (azúcares sencillos). complejos. Sustratos usados como fuentes de carbono . • Tamponadores de pH. Se usa principalmente para la obtención de ácido acético. No son válidos como única fuente de carbono. además de por su composición. Son pocos los microorganismos capaces de utilizarlo.

ya que son muy indicadas para los hongos y actinomicetos que efectúan dichos procesos Líquidos de Procede de industrias Contiene fuentes muy ricas de nitrógeno fácilmente maceración del alimentarias asimilables. lo que se hace es enriquecer los sustratos con especies químicas ricas en nitrógeno. por lo que su mayor inconveniente es que su precio está determinado por el precio del petróleo.Alcanos de 12 a 18 carbonos Son subproductos del petróleo. de levadura. . como urea o nitrato amónico. Presentan los mismos Extracto de por plasmólisis (debido a la . Estados intermedios de Son más homogéneas en su .Contienen una gran inconvenientes de adición de gran cantidad de variedad en fuentes de composición que las levadura NaCl) o termólisis. . hay pocas diferencias. nitrógeno (aminoácidos. Se usan mucho como sustratos para la producción de Harina de soja antibióticos. Sólo son válidos para unos pocos microorganismos..Es el extracto más usado Se obtienen de levaduras.Son bastante caras. melazas. para el aporte de nitrógeno. Sustratos usados como fuentes de nitrógeno En ocasiones. pero dentro de diversos orígenes..) y carbohidratos.Su composición varía Peptonas degradación de proteínas composición que el extracto según el origen. maíz 16 . péptidos. de una misma clase..

debido a que la espuma puede generar diferencias de temperatura y concentraciones dentro del tanque. Se retiran productos y sustrato agotado al mismo tiempo que se aporta la misma cantidad de sustrato fresco. lo que facilita la recuperación y purificación. predominante sobre el .. y ciertos productos sólo se sintetizan en la fase estacionaria.. El sustrato se aporta de forma secuencial (no todo el sustrato es añadido al principio). entre otros. que en la mayoría de los casos es acero inoxidable. Adición de antiespumantes. hasta el punto de que.Transferencia de materia y calor. 3. c. con la excepción de: a. Además. para evitar gradientes de nutrientes.Productividad lo más elevada posible.Obtención del producto en la mayor concentración . Adición de oxígeno.Velocidad de crecimiento del microorganismo (en producto (búsqueda de las condiciones óptimas). impidiendo que se estimulen mutaciones. Cinética de crecimiento y producción del microorganismo. que pueden alterar el desarrollo microbiano y la producción.. Se trata de sistemas cerrados en los que no se varían externamente las condiciones iniciales (lo que supone que la composición del medio va variando continuamente en el tiempo conforme se desarrolla el cultivo). Diseño y modo de operación. Semicontinuo.Coeficientes de rendimiento de producción. rendimiento). para evitar las variaciones de pH originadas por la actividad microbiana. Para ello. Es el más utilizado por su sencillez. cuentan con diversos sistemas que permiten conocer cuándo se obtiene el nivel de producción adecuado. Discontinuo. Inclusión de sistemas de oxigenación adecuados a las exigencias del microorganismo. Control de las condiciones ambientales.Eficiencia de la conversión del sustrato en . a pesar de su importancia. posible. en ciertos procesos. Características hidrodinámicas del reactor: es necesario minimizar los fenómenos de transporte en el reactor.MÉTODOS DE FERMENTACIÓN A GRAN ESCALA Es preciso conjugar los aspectos microbiológicos del sistema de producción con los puramente técnicos. presentan numerosos inconvenientes técnicos. que sólo podemos conocer el nivel de crecimiento del microorganismo. 17 . Esterilización lo más barata posible. lo que se evita haciendo un aporte secuencial de los nutrientes. Potencial para el escalado creciente de producción. Adición de buffers. por lo que no sabemos cuándo se habrá alcanzado el nivel de producción deseado. Aunque teóricamente es el régimen de trabajo ideal. Se debe a que. lo que complica aún más el proceso. . las condiciones óptimas para el crecimiento y para la producción serán diferentes. temperatura. etc. se llega a obviar. . Biorreactores Están fabricados en materiales capaces de mantener las condiciones óptimas de presión. . para poder empezar a retirar caldo fermentativo e introducir sustrato fresco. de gran importancia. temperatura. y según el proceso. Las células que quedan actúan como inóculos. Continuo. b.Tasa de producción.. ya que diferencias mínimas pueden alterar gravemente la producción. A tener en cuenta: Aspectos microbianos Aspectos técnicos . la concentración de nutrientes ejerce efectos inhibitorios sobre el proceso o el crecimiento del microorganismo. Asegurar la estabilidad genética del microorganismo. muchas ocasiones. Modos de operación del biorreactor 1. Los criterios básicos de diseño de un biorreactor son: Características bioquímicas del cultivo a realizar. 2. Estos inconvenientes son.

por lo que no es viable el almacenamiento por tiempo indefinido. Sondas de enzimas inmovilizadas. De lecho fijo o empaquetado. o atrapamiento mecánico en matriz o membrana) o químicos (enlaces covalentes). Es más difícil obtener concentraciones altas. De enzimas o células inmovilizadas. Presentan el inconveniente de que. es aconsejable disponer de diversos medidores. la alimentación se produce de forma vertical en sentido ascendente. Los medidores son sencillos de manejar. CO2. y por lo tanto permite conocer las condiciones óptimas para la producción. Instrumentación y control del proceso La información aportada por estas variables permite conocer la marcha del proceso fermentativo. 5. El microorganismo permanece suspendido (debido a burbujeo continuo. por lo que se mide como diferencia entre los flujos de entrada y salida. El sustrato se hace pasar lentamente por la matriz empaquetada que contiene al microorganismo (un proceso semicontinuo. Capacidad para soportar altas presiones. y la estabilidad y actividad enzimáticas. Adopción de refrigeradores. En grandes fermentadores. Los aparatos instrumentales son de difícil esterilización y baja fiabilidad. suprimiendo posibles gradientes. dados su alto coste y complejidad. En columna de burbujas. Favorecen la mutación de las cepas. Temperatura. necesarias para la recuperación y purificación. como consecuencia del sustrato líquido ascendente. aunque permiten trabajar también en discontinuo). 2. 4. Permiten reutilizar continuamente el biocatalizador. Oxígeno disuelto en el caldo de fermentación. 2. 5. Por lo general.- - Sistemas de muestreo para determinar las condiciones internas del biorreactor. De lecho fluidizado. Resistencia a la corrosión. 6. lo que supone la consideración de un tiempo de residencia en dicha matriz. Los principales inconvenientes de la producción en continuo: En ocasiones. No son muy corrientes. 18 . 1. Informan sobre el nivel de producción de un determinado metabolito. El sustrato es el medio líquido en el que están inmersas las células. el más usado. aportándose éste por la parte inferior del reactor. Tipos de biorreactores 1. lo que no es fácil de conseguir) en el fermentador. Se usan sensores situados cerca de las enzimas inmovilizadas de interés. Se insufla gas comprimido por la parte inferior que. La información suministrada por el procesado de los datos obtenidos permitirá controlar el proceso de forma más eficiente. producción y rendimiento. 3. De lecho de goteo. Se usan electrodos de membrana o técnicas espectrofotométricas o cromatográficas. La vida útil del producto puede ser limitada. para mantener constantes las condiciones de temperatura (la actividad microbiana genera una gran cantidad de calor. Biomasa. dado que las células pueden participar en varios procesos fermentativos. Materiales no tóxicos (ni para el microorganismo ni para el consumo). aumenta la inestabilidad genética. permite homogeneizar el interior del reactor. pH. 4. 3. Son los más interesantes y novedosos. Los microorganismos se encuentran en una matriz empaquetada. Se obtiene indirectamente por balances de materia. Influye en la cinética de las reacciones. que puede afectar negativamente a la producción). Son los más tradicionales (similares a los de lecho fijo). junto con una serie de bucles externos. por lo que la producción en continuo genera grandes cantidades en stock. disminuyendo los costes. Los de enzimas presentan grandes ventajas. pero es difícil aislar la enzima que nos interesa. aumentando la productividad. la demanda del producto es estacional. ya que un grupo de células puede participar en varios ciclos de producción. Afecta a la permeabilidad de la pared celular y al grado en que se producen las reacciones catalizadas por las enzimas presentes en ella. Dicha inmovilización puede efectuarse por medios físicos (adsorción.

25 y 1 vvm de O2. es de alto coste (si no se puede reaprovechar el agua) y altera la composición del medio. el almacenamiento a baja temperatura (poco útil). Precultivo. Las condiciones de producción a pequeña escala no son. por lo general. Se coloca el inóculo en contacto con los nutrientes que le servirán de sustrato y las condiciones en las que crecerá. que consiste en la recuperación de las células conservadas en condiciones adecuadas para su aplicación industrial. lo que evita las contaminaciones. los procesos de transporte y el comportamiento celular son diferentes. • Sobrepresión (de 0. Sus ventajas son que permiten reutilizar el agua y no alteran la composición del medio. extrapolables a la escala industrial. o bien la aplicación directa del vapor sobre el medio de cultivo. al tiempo que el tamaño del cultivo se va aumentando en proporción 1:10. no es viable) o liofilización (consigue un mayor número de células viables al usar agentes protectores). congelación (aunque rápida. • Entre 0. principalmente. 2. ya que permite homogeneizar el medio de cultivo.1 y 3% para bacterias. 19 . Técnicas de esterilización Del medio de cultivo Se usan preferentemente métodos térmicos y filtros. pero si es demasiado alta puede inhibir el crecimiento bacteriano. manteniendo una velocidad de transferencia de oxígeno constante. Si esto no se consigue. así como la potencia consumida por unidad de volumen.Esterilización continua. Por ello. 4.5 atm sobre la atmosférica). Estas cantidades son entre 0. se aplica un proceso gradual. Consiste en la inyección de vapor a la camisa del fermentador o los serpentines internos. estando éstas en los rangos: • Temperaturas para mesófilos (de 20 a 45 oC) y para sicrófilos (de 5 a 20 oC). de 5 a 10% para hongos y actinomicetos y de 1 a 500000 esporas por litro de cultivo..Esterilización discontinua.Escalado Es el proceso de conversión de un proceso productivo de pequeña escala a escala industrial. 2. 1. Éstas son. • Agitación en función del tamaño del fermentador. Preservación del inóculo por medio de prácticas de conservación que permitan que las cepas mantengan su capacidad biosintética. debido a que la fluidodinámica del sistema. 3. Producción. que consiste en obtener la cantidad suficiente de células para poder usar como inóculo en la fase de producción.. Del aire de fermentación Se usan filtros profundos de lana de vidrio o de cartucho de fibra.2 a 0. Requiere grandes periodos de tiempo. Consiste en la obtención de altas temperaturas (140 oC) durante 120 s por inyección de vapor (intentando evitar su dilución) o cambiadores de calor (evitando la formación de depósitos de sales insolubles). Proceso fermentativo 1. se producen menores concentraciones de producto y unos mayores tiempos de retardo de los esperados. Crecimiento del inóculo.

ya que se puede aplicar a más casos y condiciones que la filtración. se usa la ósmosis inversa para partículas de 10-4 a 10-3 µm o tamaño molecular inferior a 1000. esto es. bolas. 20 .. 4. así. si no es así. 2. además. Baja filtrabilidad. • Purificación. • Acondicionamiento. lo que dificulta la predicción de propiedades. Permite facilitar la posterior purificación. En ellas. para comercializar o conservar el producto. generalmente.1 µm o tamaño molecular superior a 1000. los procesos de filtración constaran.. las suspensiones se proyectan sobre un material filtrante. en muchas ocasiones. No se efectúa de un modo muy estricto.. Tendencia a formar emulsiones.. Baja estabilidad térmica y química. Consiste en molinos de cuchillo. permiten efectuar separaciones líquido-líquido en función de la densidad. La gran ventaja de este tipo de centrífugas es que. Separación de las células Filtración Se pueden usar dos tipos de filtros: de placa y malla (para volúmenes pequeños) o continuos de tambor rotatorio a vacío (para volúmenes grandes). 3. de las siguientes etapas: • Separación y rotura de células para el caso de que el producto se genere de forma intracelular. Estas características de los fluidos biológicos son: 1. por lo que sólo consigue elevar en parte la concentración del producto. Rotura celular El proceso a seguir es: 1. no es necesario. Se diluyen las muestras en tampón.RECUPERACIÓN DE PRODUCTOS FINALES Al finalizar la fermentación. lo que impulsa la filtración a través de la membrana. Los tipos de centrífuga más usados son: De filtro de criba. que separan las partículas en función de su gravedad específica. pobre sedimentación y alta retención de agua. Técnicas mecánicas (molienda). y microfiltración para tamaños de partícula de entre 0. También hay que tener en cuenta el diámetro de las partículas.2 y 10 µm.. Así. lo que complica la purificación del compuesto final. selectivos y de un determinado tamaño de poro. el producto de interés se encuentra en el caldo de fermentación junto con numerosos compuestos que. Se usan sobre todo en panadería y producción de proteína unicelular (SCP).. donde se obtienen ya altas concentraciones de producto. Alta viscosidad y comportamiento no newtoniano del fluido. presentan propiedades similares a éste. Las características de los filtros utilizados son: • Resistentes. desecación. la ultrafiltración para partículas de entre 10-3 a 0. Como las células son las más pesadas. De cámara y disco. • Aislamiento del producto. 2. Centrifugación Es más versátil. • Con posibilidades de esterilización. Se efectúa entonces la rotura: a. • Que permitan una alta velocidad de flujo. se depositan en la parte inferior.

• De inmunoadsorción. las proteínas por alteración del pH más allá del punto isoeléctrico y en ocasiones por temperatura. • De isoelectroenfoque. que aunque son caras. son procesos de separación muy complejos y costosos. Purificación Se utilizan principalmente técnicas cromatográficas. Aislamiento preliminar Se aplican tres métodos principalmente: 1.. 2. antibióticos. autolisis (la célula sintetiza enzimas que degradan las cubiertas. b. no corrosivos y no alteren el producto. 21 . detergentes. Permite separar el producto en función de su solubilidad en diferentes líquidos inmiscibles. son altamente rentables. Consiste en hacer pasar el caldo de fermentación por resinas de intercambio iónico. Precipitación. En el proceso no debe haber pérdida de actividad. los polisacáridos pueden precipitar por adición de alcohol. • De afinidad (adsorción selectiva). lo que le permite una altísima selectividad. que al no disociarse se fija a la fase estacionaria de la columna cromatográfica. Dichos disolventes han de ser económicos. El caso más extendido es el uso de calor húmedo. lo que obliga a un tratamiento posterior. Así. Recuperación de productos de ADN recombinante Los productos obtenidos por este tipo de técnicas muestran características que dificultan su recuperación. Técnicas químicas: choque osmótico (plasmólisis de la célula al sumergirla en una solución muy salina). Así. 3. c.. En el caso de que se requiera la presencia de células en el producto. Aun así. Los tipos de cromatografía usados son: • De exclusión molecular. de baja volatilidad y viscosidad. pero dado el alto valor de los productos. Adsorción. desecación violenta. de modo que se provoca la precipitación de compuestos.Técnicas físicas: ultrasonidos (rompen la estructura celular). aunque en industria se prefieren los molinos de bolas y los homogeneizadores de alta presión. Consiste en la adición de alguna sustancia en alta concentración o modificar las condiciones. Extracción. se usa la liofilización. los microorganismos y condiciones de la fermentación deberían ser tales que se minimice la complejidad del proceso. debido a que los mecanismos para obtenerlos son construidos de forma artificial. Las características fisiológicas de cada organismo determinan el método más adecuado para su lisis (las bacterias Gram-. solventes. Enzimas: lisozimas. ácidos. Secado Es el punto final de la purificación en la mayoría de los casos. que consiste en modificación del pH hasta alcanzar el punto isoeléctrico de la proteína. por ejemplo.. no han sufrido todas las transformaciones o tratamientos a los que serían sometidos en una célula normal. lo que les provoca la muerte) o bacteriófagos (provocan la lisis celular al infectar la célula). d. las levaduras y las células en fase estacionaria son más resistentes). homogeneizadores de alta presión o procesos cíclicos de congelación-descongelación. son muy eficientes e inertes para los compuestos. aunque puede provocar alteraciones sobre el producto. Se usa para metabolitos hidrofílicos (con capacidad para ionizarse). que usa el carácter antigénico de los productos y una matriz de anticuerpos específicos. para posteriormente desprender la humedad por una corriente de gas.

22 . el coste del proceso de purificación suele ascender al 20% del total.Rendimiento Las pérdidas producidas en la purificación del producto dependen del número de etapas de la purificación y la sensibilidad del producto frente a este tratamiento. Aun así.

Por ello.PRODUCCIÓN DE ALCOHOLES Dado que los residuos agrícolas son buenos sustratos para producir etanol (excepto el destinado a la alimentación). como melazas. Leuconostoc. la síntesis se produce por acción de la enzima alcohol-deshidrogenasa sobre el acetaldehído obtenido por reacción del piruvato. Teóricamente. Celulosa: son difícilmente hidrolizables.25-0. pero el crecimiento de las levaduras productoras necesita del oxígeno. Se usan cantidades limitantes de glucosa (< 1g/l). También se han desarrollado procesos en continuo (en desarrollo). Las condiciones de operación en este proceso son: 30-35 oC pH = 4. Se puede prolongar hasta 72 horas. la síntesis de etanol requiere de medios anaerobios... Canadá. Clostridium thermosaccharalyticum o Trichoderma reesei. Debido a las condiciones anaeróbicas. Para evitarlo. que puede elevar la temperatura hasta los 40 oC. En estas condiciones.. Procesos de producción de etanol Preparación del sustrato • • • • Si se usa Saccharomyces cerevisiae y se proporciona un sustrato almidonado. Específicamente. hay que adicionar amilasas o hidrolizar dicho almidón (este microorganismo no puede hacerlo). Como consecuencia del proceso. pueden reducir el tiempo de fermentación hasta lo 2 o 3 días. Se usan cultivos mixtos sobre el sustrato sólido de la levadura en cuestión con Clostridium thermocellum. lo que vuelve a aumentar el crecimiento celular... son adecuados. se puede producir contaminación con bacterias lácticas. Se reduce la oxigenación. con una efectividad del 91-95%.). Síntesis. lo que produce la reducción del crecimiento celular y el inicio de la producción durante 24-36 h. el proceso de producción continuo dura unas 18 horas. Brasil. Condiciones de microaerofilia (0. El etanol puede inhibir el crecimiento celular cuando se alcanzan concentraciones del 5%.. Si se usan sueros lácticos. Desarrollo celular: se somete el cultivo a fuerte oxigenación durante 12-24 horas. 2. es necesario efectuar primero el crecimiento de las células en un medio aerobio para luego introducirlas en otro anaerobio y así comenzar la producción. 3.5 l/g de células). que sintetiza dextrano (un polisacárido). lo que aumenta la viscosidad y genera gradientes en el seno del caldo de fermentación.5 g de alcohol por gramo de glucosa. pero se usan más para otros procesos. o incluso el proceso de síntesis (cuando la concentración es del 10%).5 3% de inóculo 600m3 Aumentos de temperatura y cantidad de inóculo. el rendimiento de la reacción es elevado: 0. A nivel industrial.UU. Otros materiales azucarados. los países con grandes superficies cultivadas son los principales productores de etanol por vía microbiológica (EE. Se detiene la síntesis por aumento de la oxigenación. Fermentación Se dan principalmente procesos discontinuos en tres fases: 1.. en particular. se libera calor. 23 . Kluyveromyces fragilis o Zymomonas mobilis. capaces de efectuar dicha degradación. ya que es incapaz de degradar la lactosa. se puede efectuar destilación a vacío o limitar los nutrientes. se sintetiza por levaduras y bacterias: Saccharomyces cerevisiae. Se usan entonces cepas modificadas de Torula cremoris y Candida pseudotropoçicalis. siendo las condiciones en este caso: Se produce un mayor control de la temperatura y el pH. no se puede usar Saccharomyces. jugos azucarados. Bioquímicamente.

ya que matan las células y detienen el proceso. Entonces. han de extraerse las células por sedimentación (generalmente) o centrifugación y se elimina el CO2 tras etapas de lavado. al estudiar la producción de butadieno para obtener caucho sintético. usando CO2. la producción se efectúa con C. caracterizadas por ser: • Bacterias anaerobias estrictas. dependiendo de la especie usada: C. Butylicum en fermentadores de 12 · 90 m3. Se pueden producir contaminaciones por bacterias lácticas. fue Weizmann poco antes de la 1ª G.M. y se produce en tres fases: 1. que además de proporcionar agitación. en especial Lactobacillus (lo que supone una disminución del rendimiento) o por bacteriófagos. • Generan esporas. por lo que se obtienen ambos compuestos conjuntamente. se destila el caldo en columnas de rectificación. lo que causa una drástica bajada del pH hasta 5. Las especies usadas son todas del género Clostridium. que son más complicadas de tratar. 2. Primero.Purificación El alcohol se obtiene por destilación. Producción de acetona/butanol Aunque descubierta por Pasteur. Conversión de dichos ácidos en acetona y butanol (18 horas). Los microorganismos usados para la síntesis de butanol generan también acetona. se usa esta acetona de origen microbiano en la producción de TNT. con lo que sube el pH. 24 . butyricum Butírico + acético En la actualidad. generando condiciones de anaerobiosis.2. acetobutylicum Butanol + acetona C. 3. aunque tras la 2ª GM se prefiere la síntesis química. quien estableció el proceso de producción microbiano. Formación de ácidos acético y butírico (18 h). El proceso es de 36 horas de duración. Durante la guerra. butylicum Butanol + isopropanol C. Finalización del crecimiento y estabilización del pH (5. Se extraen los productos por destilación fraccionada. Sintetizan butanol y otro compuesto (convertible en etanol). desplaza al oxígeno.8): otras 18 horas.

Su sabor agradable y elevada solubilidad hacen que tenga diversidad de usos: • Alimentación: como acidulante. Si no se dan las concentraciones adecuadas. Los procesos de fermentación se llevan a cabo con cepas modificadas genéticamente para aumentar la producción y disminución de compuestos colaterales.. como acidulantes. aromatizante. la morfología del hongo no será la óptima y la producción se verá afectada. está en desarrollo la producción Ácido tartárico a partir de Aspergillus o la bacteria Alcaligenes. aunque está poco implantado. la muerte de los organismos de dichas aguas. Minerales en las concentraciones adecuadas. • Química. 25 . Ácidos acético y Son los segundos en importancia. Actualmente. como los ácidos oxálico y glucónico. • Detergentes. debido a sus propiedades antioxidantes. helados. Así también. La mayoría de los obtenidos microbiológicamente proceden del ciclo de Krebs. se prefiere el ácido cítrico (aunque más caro). por tanto. Las condiciones de este sustrato son: o Limitación del fosfato. ya que es más fácil obtener y glucónico de los microorganismos las enzimas que catalizan su formación que el producto en sí. • Candida lipolytica con parafina como sustrato. pueden producirse por vía microbiológica. o Ausencia de cationes metálicos. se usan almidón de patata o hidrolizados de almidón (ambos requieren hidrólisis enzimática). como antiespumante y en la industria textil. • Metalurgia. Las especies usadas son: • Aspergillus niger usando como sustrato sacarosa o melazas. sólo unos pocos de estos ácidos son más rentables producidos por vía microbiológica que por vía química. fumárico Ácidos itacónico Se prefiere la síntesis química. etc. los ríos y lagos se acaban convirtiendo en pantanos. requiriendo unas condiciones diferentes para la fase de crecimiento y la de producción. como sustituto de los polifosfatos. zumos. antioxidante y saborizante para productos dulces. como integrante de diferentes preparados. ya que éstos pueden limitar la producción al superar los niveles traza. La abundancia de N y/o P favorece un altísimo desarrollo de las algas. Ácidos málico y Son de escasa demanda e importancia. Ácido cítrico Es el más importante. hidrolizados de almidón. saborizantes o ingredientes químicos. Para ello. lo que causa una disminución enorme de oxígeno en el agua y. son muchísimos los microorganismos capaces de sintetizarlos. Así también.. aunque sólo unos pocos en cantidades adecuadas para la aplicación industrial. en teoría. sobre todo hierro. • Farmacia: como preservante de la sangre. ya que se obtiene únicamente por vía microbiológica. melazas o sacarosa. jarabe de caña de azúcar. síntesis química o extracción de productos naturales. Al producirse la descomposición anaerobia de toda esa materia orgánica. • Cosmética.PRODUCCIÓN DE ÁCIDOS ORGÁNICOS Son ampliamente usados en alimentación.. ya que sólo se obtiene por vía microbiológica y además es el más utilizado. Se obtiene en la fermentación del vino. Por ello. sueros lácteos. Medio nutricional • • La fuente de carbono ha de tener una concentración de azúcares del 15-25%. más sencilla y económica. ya que muchos metales se extraen más fácilmente como citratos. Los más importantes son: Ácido cítrico El más importante. Esto es importante porque los polifosfatos son causantes de la eutrofización de las aguas dulces. por lo que. como caramelos. Esto se consigue por adición de ferrocianatos (con lo que los cationes precipitan como complejos) o usando resinas de intercambio iónico. Se pueden obtener tanto microbiológica como láctico químicamente.

Se opera en discontinuo o semicontinuo con alimentación fraccionada. • Se inoculan las bandejas con esporas (2-5 ·107 esporas / m2) • Se procede a incubación a 30 oC con pH entre 4 y 5. • El citrato se purifica mediante resinas de intercambio iónico. precipita citrato cálcico. Como sustrato sólido: • Trigo u otro cereal • Se dispone en capas delgadas (3-5 cm) donde se colocan las esporas • Se mantiene a pH entre 4 y 5 y 28 oC durante 90 horas. del japonés). Es sintetizado por dos géneros de bacterias: Acetobacter aceti Acetobacter Son cepas superoxidantes. complementadas con H2KPO4. se efectúa un lavado previo a la precipitación o filtración para retirar dicho micelio. pero requieren más mano de obra. Ácido acético Es el principal componente del vinagre. • Al adicionar ahora calcio. 26 . Dos factores importantes a tener en cuenta son: • La relación Fe/Cu ha de ser más controlada que en procesos koji para que el micelio adopte la forma adecuada. Son más sencillos. sin una oxidación oxydans mayor. y la de producción entre 8 y 14 días. pH de 5) a la idiofase (de producción. agitados o de columna de aire. Como el ácido cítrico estará atrapado en el micelio (debido a la alta densidad de éste). Se usan fermentadores pequeños (menos de 250 m3). • Se mantiene la etapa de crecimiento durante 30 horas. Procesos sumergidos o en profundidad. lo que hace que se pierdan los componentes volátiles interferentes. • Los niveles adecuados de oxígeno son menores (0. lo que hace que precipite oxalato cálcico. pH inferior a 3). construidos en materiales capaces de resistir pH’s ácidos sin liberar cationes metálicos (por lo general. pero permite una mayor mecanización. Como sustrato líquido: • Se usan sacarosa o melazas. pasteureanus Acetobacter peroxidans Gluconovçbacter Finalizan el proceso con la obtención del ácido acético. Purificación Se efectúa en pasos: • Se retira el micelio del hongo. Es más complejo. lo que permite obtener el ácido cítrico. ya que éste inhibe la producción por encima del 10% de concentración. • Es necesario aportar suficiente oxígeno como para desplazar al CO2 producido. Procesos de producción Procesos en superficie (o koji. capaces de oxidar el producto hasta CO2 y agua. • Se procede a la extracción del ácido cítrico mediante 5 volúmenes de agua caliente.• • Los requerimientos de pH varían de la fase de crecimiento (trofofase. se construyen en acero inoxidable).2-1 vvm). • Extracción del ácido cítrico a pH neutro con temperaturas entre 70 y 90 oC. • Adición de cationes calcio a pH 3. Debido a las diferentes condiciones para idiofase y trofofase es difícil establecer un proceso de producción en continuo. MgSO4 y ZnSO4.

malta o sidra de baja calidad). necesitan suplementos: o fosfato amónico o sulfato magnésico o citrato y pantotenato cálcicos o hidrolizado de cereal Es de reducido coste y ocupamiento del espacio. Se usan procesos continuos. sobre todo bulgaricus de la producción de quesos. Las especies utilizadas preferentemente son: Lactobacillus Usa residuos líquidos de la industria papelera (licor de cocción del sulfito) como pentosus sustrato. su producción es poco satisfactoria. Método alemán Basado en procesos tradicionales. Se usa principalmente en alimentación (acidulante y saborizante. se distingue entre homofermentadores (sólo producen ácido láctico. ya que el proceso se detiene si el nivel de oxígeno es inferior al 5%. Se obtiene por síntesis química (preferentemente. además. dada su riqueza en este compuesto) a partir de ácido fumárico.5. Lactobacillus Usa sueros o suero desproteinizado procedentes de la industria láctea. otras sustancias). Requiere unos fuertes niveles de oxigenación. Las células se eliminan por filtración. además de hallarse de forma natural en productos lácteos) y en farmacia. son menos interesantes que para el ácido cítrico. Son los más costosos. o bien alcohol técnico.Producción Método Orleans Es el más tradicional. por lo que son preferibles) y heterofermentadores (producen. se añade ferrocianuro potásico. ya que es más barata) o enzimática (tradicionalmente. Sobre dichas capas de virutas se gotea el sustrato El sustrato usado es: • Un líquido de alto contenido alcohólico (vino. lo que constituye su principal problema. Aporta un buen rendimiento (14%).5 y 6. Ácido málico Se usa en alimentación como acidulante. Generadores por goteo o reactor Frigs Se usan capas de virutas de haya sobre las que se adhieren las bacterias (en cierto modo. Presenta la ventaja de que con un coste mínimo obtiene una elevada eficacia. Ácido láctico Fue el primer ácido obtenido por fermentación. Según las características metabólicas de los microorganismos productores. es precursor de los sistemas de células inmovilizadas). Brevibacterium ammoniagenes Brevibacterium flavum 27 . La síntesis microbiológica usa: Aspergillus Con glucosa. a partir de extractos de zumo de manzana. y su producción es baja. lo que permite sustraer los subproductos responsables de colorear el ácido acético. manteniendo altas temperaturas (45-50 oC) y pH entre 5. Procesos sumergidos En este caso. discontinuos y con células inmovilizadas. • Hidrolizados de patatas o cereales. que dado que son deficitarios en otros nutrientes. sales y carbonato cálcico. Posteriormente.

Paralelamente. acidulante y saborizante. 28 . suavizante. como colorante (fija el color de la carne). se usa en bebidas deshidratadas y revestimientos de golosinas (evita la entrada de agua a alimentos). Se obtiene a partir del hongo Rhyzopus oryzae usando como sustratos derivados de soja o arroz. emulsificante.Ácido fumárico Debido a su baja higroscopicidad (tendencia a captar agua). su baja solubilidad limita otras aplicaciones (lo que se evita por adición de compuestos que aumentan su solubilidad).

la vía microbiana presenta la ventaja de ser más fácil de mejorar y optimizar. Estos productos también podrían obtenerse de los vegetales. y posterior adición de HCl (preferentemente) o etanol. Se produce la inosina usando auxotrofos de Bacillus subtilis. El hecho de usar auxotrofos que sólo sintetizan inosina es para evitar la regulación por producto final. que se cultivan hasta el final de la fase logarítmica de crecimiento (principio de la fase estacionaria). sobre todo en Japón. Se produce entonces la hidrólisis enzimática. La inosina producida se somete a pH básico (aprox. El resto del proceso es similar. Entonces se deshidrata el producto. Este proceso es de un alto rendimiento (se obtienen 30-35 g/L). con lo que nos quedamos con AMP y GMP. se usan con preferencia. sin embargo. el IMP (inosin-mono-fosfato) y el GMP (guanosin-mono-fosfato). con lo que se adsorben sobre éste. con lo que tenemos los nucleótidos sueltos en disolución. con lo que se obtiene el IMP. Se favorece la excreción del AICAR (intracelular) al caldo fermentativo: • Adición de una fuente de purina. Fermentación del GMP. lo que permite que se siga sintetizando AICAR hasta que la célula lo va expulsando por exceso. Hidrólisis enzimática del ARN. ya que entonces detienen la biosíntesis estructural. Su importancia es creciente. Hidrólisis química del ARN. El ARN se obtiene igual que en la hidrólisis enzimática.PRODUCCIÓN DE NUCLEÓTIDOS. Se extrae el ARN usando agua caliente de pH alto (con lo que el ARN pasa a la disolución). con lo que se obtiene IMP. y el AMP se desamina por cultivo con Aspergillus oryzae. Así. no todos presentan esta cualidad. Se degrada el ARN hasta obtener los nucleótidos mediante Ca(OH)2 y 130 oC durante 3-4 horas. 29 . Sin embargo. aunque los productos microbianos son más caros. Se usan levaduras con alto contenido en ARN. Síntesis indirecta: Se obtiene AICAR (5-amino-4-imidazol carboxamida ribosa) con cepas auxotrofas para la purina y mutadas en determinadas actividades enzimáticas (lo que facilita la acumulación sin inhibición). lo que provoca la precipitación de este ARN. con la salvedad de que es preciso efectuar una fosforilación posterior. Por ello. sino sólo los derivados de la purina (las pirimidínicas no tienen esta propiedad). como potenciadores del sabor (nucleótidos y aminoácidos) y para aumentar la calidad nutricional. Adicionamos carbón activo. Nucleótidos Por sí mismos no confieren sabor. Se produce la fosforilación. Por elución selectiva con una solución de metanol-amonio. Fermentación del IMP. Se separan los nucleótidos por cromatografía de intercambio iónico. los esfuerzos se centran en incrementar la competitividad de las fermentaciones por mejora de procesos de fermentación y purificación. en concreto. eliminamos los nucleótidos pirimidínicos. AMINOÁCIDOS Y VITAMINAS Su principal uso se da en alimentación. Es la más utilizada. El GMP es producto. Las cepas usadas son principalmente Candida utilis o Saccharomyces cerevisiae. 11). debido a la tendencia a sustituir los aditivos químicos por otros naturales. pero incrementan los sabores presentes (lo que se conoce como efecto umami). con una producción similar. con lo que precipita y cristaliza. Brevibacterium ammoniagenes y Microbacterium que tienen bloqueada la síntesis de nucleótidos.

2. 3.) y en algunos productos cosméticos y farmacéuticos. un dipéptido usado como edulcorante sin proporcionar aporte calórico. que evita un rápido agotamiento de los nutrientes. Aminoácidos Se usan sobre todo en alimentación (potenciadores de sabor. asparagina y tirosina. leucina. Se usa sobre todo como antioxidante en zumos. metionina y lisina. aunque poco rentable. Síntesis directa Es el menos usado. Glutamato Se usa mucho como potenciador de sabor para la comida china. Se facilita la excreción de ácido glutámico por adición de biotina al medio. El proceso se realiza en discontinuo. se acumula ácido α-cetoglutárico. hidrolizados de almidón o n-parafinas) y mejorar la producción. • Biotransformación enzimática. Debido a su similitud estructural. Vitaminas Hay muchos microorganismos capaces de sintetizar todas las vitaminas necesarias para los humanos. En el caso del Corynebacterium. Forman el aspartamo. Se obtienen: • A partir de hidrolizados de proteínas. Se obtiene guanosina. Se usan como suplementos en derivados de cereales o en complejos nutricionales. 30 . por lo que evita la esporulación).. • Por síntesis química. antioxidantes.• Adición de un inhibidor ante la esporulación (como ácido butírico o reducción del oxígeno. lista para el consumo tras fosforilarla. con lo que se puede extraer el ác. que requiere de separación enzimática posterior. • Fermentación microbiana con mutantes de Corynebacterium. Con una duración de 30-35 horas se obtienen del orden de 100 g/L. precursor del glutamato. cistina. 4. ya que endulzan pero no dan aporte calórico (sobre todo para zumos). Brevibacterium y Esclerychia coli. complemento nutricional. edulcorantes. pero sólo B2 y B12 son de síntesis microbiana rentable frente a la síntesis química. Se usan mutantes de Bacillus subtilis en los que se ha aumentado el número de copias del gen que codifica la enzima del paso limitante de la ruta de producción de guanosina (con lo que aumenta el número de enzimas del proceso y la producción aumenta). Se usa Corynebacterium glutamicum (el más usado) y Brevibacterium flavum.8. la única vía para obtener cisteína. como consecuencia. El proceso de producción es: 1. ya que se obtienen mezclas racémicas y sólo una de las formas es la activa. Todos se pueden obtener por vía microbiana. usando glucosa y sacarosa como fuentes de carbono. Otros aminoácidos Aspartato Alanina Cisteína Fenilalanina combinado con aspartato Triptófano combinado con histidina Metionina Lisina Treonina Triptófano Otros Se usan como potenciadores del sabor y edulcorantes. destacando glutamato.. lo que supone que muchos de los productos que de él se derivan siguen rutas alternativas y.. se transforma fácilmente en ácido glutámico. para permitirles degradar sustratos baratos (como glucosa. glutámico y purificar. es incapaz de completar el ciclo de Krebs. Se usa como antioxidante de la leche en polvo. a 38 oC y pH de 7.

Síntesis microbiana. Es la más tradicional. El sorbitol es transformado en sorbosa por acción del Acetobacter suboxydans. La sorbosa es modificada químicamente hasta obtener ácido ascórbico. está sujeto a patentes. b. 3. Con otros microorganismos (Candida flareri. Químicamente. En la actualidad.5 g/L de Bacillus). 2. 3. Saccharomyces cerevisiae o Bacillus subtilis). con lo que los procesos se hacen muy específicos. pero son menos rentables que los procesos químicos. verduras. En ella se sintetiza la cobalamina siempre que se aplique el adecuado tratamiento térmico en presencia de cianuro. y la producción es muy variable (de 21 g/L de Candida a 4. En ella se sintetizan los precursores de la vitamina. 31 . La glucosa se convierte químicamente en sorbitol. por lo que son indispensables para muchos procesos. Segunda fase: aeróbica. b. Se obtiene el mayor rendimiento. a. de las que la activa es la cianocobalamina. Se emplea en suplementación de derivados de cereales y productos dietéticos. Cobalamina (B12) Sólo se obtiene por vía microbiana. Bacillus megaterium. Primera fase: anaeróbica. 2. Sin embargo. Con Ashbya gossypii (hongo). presenta una estructura central fija. 2. Se encuentra en lácteos. pero los sustituyentes constituyen varias formas. hígado y suplementos nutricionales. usando aceite de soja o maíz complementados con glicina y purinas (estimulan la producción). Riboflavina (B2) Interviene en reacciones metabólicas redox y del metabolismo energético. Hay tres vías de síntesis: 1. que se transforma químicamente en riboflavina. 1. con rendimientos de 6-7 g/L. ya que la síntesis química es muy compleja y poco rentable. se están ensayando procesos en los que obtener intermediarios a partir de desechos contaminantes como sustrato. Síntesis química completa. La síntesis más usada es: 1. en experimentación. 3. Pseudomonas denitrificans. por lo que no es rentable. Hay microorganismos capaces de sintetizar la vitamina completamente (el alga Chlorella pyrenoidosa y la levadura Candida norvegensis). a.El organismo las utiliza principalmente como coenzimas en la mayoría de los casos. Propionibacterium. usando Bacillus subtilis como productor de ribosa. se adaptan a una fuente de carbono concreta. Ácido ascórbico (C) Se utiliza como suplemento en bebidas y como antioxidante de productos envasados. Síntesis mixta (el más usado).

lácteos. cacahuete. Pueden tener distintos orígenes. 32 . solución de fosfato (que a la vez acúta como suplemento de fósforo). S y Ca. pero es preferible el microbiano. por lo tanto. Producción comercial Selección de cepas Los métodos de selección utilizados deben permitir diferenciar las especies capaces de producir una enzima basándose en determinados medios de cultivo.. Para el control del pH. ya que su producción es mayor y más económica. que necesitan altas temperaturas para crecer (70-90 oC). • Presentan una mayor especificidad y con mayores rendimientos frente a estereoisomería.PRODUCCIÓN DE ENZIMAS El interés por los procesos enzimáticos se debe a varios factores: • No necesitan condiciones especiales de temperatura y presión (los valores ambientales). es preferible buscar microorganismos de calidad GRAS. Liasas Rompen enlaces en procesos no redox ni hidrolíticos. papel. dispuestos en bandejas. Procesos de producción Sobre sustrato sólido (procesos Koji) No son muy apropiados. hidrolizados de levadura o geletina complementados con P. El grupo microbiano más usado al respecto son los microorganismos termófilos o termorresistentes. salvo para procesos con hongos. aireación y humedad es difícil. dando información sobre las características de la enzima (condiciones óptimas de funcionamiento: temperatura.. Procesos en biorreactores Son más fáciles de automatizar al tratarse de medios líquidos y. investigación biotecnológica (enzimas de restricción. Hay que tener en cuenta la mejora y adecuación de las características del proceso de producción al microorganismo. cereales. dada su inocuidad para el organismo humano y el medioambiente. pH. se adiciona algún tamponador..). Isomerasas Interconvierten isómeros. ya que no generan ni compuestos colaterales ni residuos de riesgo. pulpa de caña de azúcar o bagazo (medios sólidos o semisólidos porosos y sin agua libre). Los principales usos de las enzimas son: detergentes. por lo que sus enzimas son de gran interés. será más fácil el controlar las variables ambientales. Se usan sustratos de bajo coste. • Son de bajon impacto ambiental. es necesario recurrir a manipulación genética para favorecer los inductores de la producción (se prefiere intentar que la modificación consiga obtener la enzima sin necesidad de presencia de inductores) e inhibir la producción de otras enzimas y procesos. clonación. Por ello. H o electrones. cáscara de arroz. hidrolizados de almidón o lactosa. Se usa como sustrato salvado. por lo general. además de que son muy propensos a las contaminaciones. junto con soja. ya que el control de temperatura. Dentro de este grupo.. textil. como melazas. sobre todo si la enzima producida no es de origen microbiano. paja de trigo. ya que pueden ejercer su función a estas temperaturas. que son las autorizadas legalmente para utilizarse en alimentación y medicina. Se clasifican en: Oxidorreductasas Efectúan procesos redox y transferencias de O. Hidrolasas Hidrolizan moléculas.) y sus niveles de producción. y con menos problemas de purificación. Transferasas Transfieren grupos químicos. etc.. ausencia de compuestos colaterales.. procesado del almidón. Ligasas Forman enlaces mediante el gasto de ATP. • Requieren menos energía (tecnologías sencillas y ahorro al no necesitar altas temperaturas ni presiones). • Permiten el trabajo en sistemas no acuosos.

Este uso de las enzimas comenzó en los 50. Industria papelera. se estudian procesos usando Esclerichia coli o Kluyveromyces lactis. Se obtiene a partir de Aspergillus niger y Rhizopus. que hidroliza el almidón totalmente hasta glucosa. Las enzimas más utilizadas son: • Subtilisina (una proteasa). edulcorantes y helados. Se obtiene de Aspergillus niger y Penicillium. por lo que minimizan el impacto ambiental. Se obtiene principalmente de hongos y Bacillus. Se usan celulasas. Se obtiene de Bacillus y Streptomyces. Rhizomucor pusilis. posteriormente. uno de los principales componentes de la materia vegetal. que al degradar ácidos grasos generan compuestos que otorgan sabor a los lácteos. Aspergillus niger y Aspergillus oryzae. Se obtiene de Aspergillus niger y Penicillium. se obtenía a partir del rumen de los rumiantes. lo que permite reducir el impacto ambiental de esta actividad (se generan residuos muy contaminantes) y mejoran la textura y aspecto del papel. cervezas y zumos por acción del oxígeno. Celulasas y glicosidasas. • • • β-glucanasas. por lo que se usa para la fabricación de siropes y en las industrias cervecera y panadera. Se usan para degradar los principales componentes de la madera. Se usan proteasas principalmente. Se obtiene de Kluyveromyces marxianus. Aspergillus niger y Aspergillus oryzae. Se trata de pectinasas. Elaboración de zumos. Degradan la materia sólida presente en el caldo de fermentación del vino (pellejos. • Glucoamilasa. hemicelulasas. Procesado del almidón Los hidrolizados de almidón se utilizan en alimentación como edulcorantes y en clínica.. Producción de quesos. 33 . procedente de Bacillus subtilis y Bacillus licheniformis. clarificando y licuando el zumo. que hidroliza la sacarosa en fructosa y glucosa. La enzima utilizada es la renina o quimosina. pectinasas y lipasas. debido a su mayor facilidad para la manipulación genética. Se utilizan también distintas lipasas. Se obtiene de Saccharomyces cerevisiae. que degrada la lactosa en glucosa y galactosa. • Lipasas. que conduce a la formación de la cuajada y. • Amilasas. obteniéndose principalmente de hongos (Rhizomucor miehei.). a diferencia de los fosfatos.. Produce la proteolisis parcial de la leche.Aplicaciones Detergentes. Glucosa oxidasas evitan daños sobre vinos. al queso. restos de pulpa. • Glucosa isomerasa. aunque actualmente las utilizadas son más resistentes a la temperatura y el pH. y se usa para producción de siropes y chocolates. Los microorganismos permiten obtener enzimas de las mismas características que las animales. • Invertasa. por lo que se usa en la fabricación de alimentos para personas no tolerantes a la lactosa. con uan producción bastante baja. maltosa y maltotriosa. Anteriormente. Otras ventajas son la disminución de los costes energéticos (al requerir temperaturas menores) y su carácter biodegradable. que convierte la glucosa en fructosa. Actualmente. Los tipos de enzimas más utilizados son: • α-amilasa. paa aumentar la eficacia del detergente para atacar manchas con componentes proteicos. sobre todo. que actúan sobre la pectina. Aspergillus nidulans o Aspergillus niger). que degrada el almidón en glucosa. Eliminan los β-glucanos aparecidos en la fermentación de vinos procedentes de uva infectada por Botrytis cinerea. por lo que se usa para producir edulcorantes bajos en calorías y jarabes de alto contenido en fructosa (HFCS). respectivamente. Elaboración de vinos. • β-galactosidasa. mejorando el color y el sabor..

Proteasas y lipasas se usan para el procesado de pieles: lavado. Celulasas se usan para dar el aspecto de lavado a la piedra de vaqueros. al obtener productos estereoquímicamente puros. evitando la separación de mezclas quirales y compuestos colaterales.Industria textil • • • Amilasas y celulasas se usan en el tratamiento de tejidos vegetales. desengrasado y pelado. pelado. y aumentando la pureza. Se usan para la síntesis de compuestos quirales puros. Síntesis orgánica. 34 . También son muy útiles para la obtención de productos farmacéuticos. para retirar el almidón.

para evitar el deterioro de los alimentos. • Control de tumores. Las principales especies productoras son bacterias (Bacillus). se están sustituyendo por bacteriocinas de origen microbiano. obtenidas directamente de la fermentación microbiana. caracterizadas por el aumento de la actividad por medio de la incorporación de grupos químicos al anillo central. Naturales. lo que los dota de actividad frente a bacterias gram+ por inhibición de la síntesis de la pared celular. los valores más usuales son un volumen de 40 a 200 m3 con una oxigenación de 0. hasta llegar a los 8000 que se conocen hoy día. se le llama quimioterápico. disminuyen los rendimientos en la fase de producción. la mayoría se obtiene por modificación química de productos microbianos. ya que hidrolizan el anillo. para selección de poblaciones. En condiciones ácidas no son efectivos. crean menos resistencias. Sólo 123 se obtienen actualmente por vía microbiana. debido a que los microorganismos demandan una gran cantidad de oxígeno en la fase de crecimiento. Los volúmenes de los biorreactores son pequeños. pueden aparecer mutaciones que otorguen a los microorganismos resistencia frente a la acción de los antibióticos. • Alimentación. debido a la capacidad de algunos antibióticos de controlar el crecimiento de las células tumorales. por lo que se impone una legislación restrictiva. Por ello. más tarde. que son menos agresivas y. El proceso de síntesis más destacado es el de las penicilinas G y V. Sin embargo. 3. Los usos más típicos de los antibióticos son: • Control de actividades infecciosas: o En plantas. pero continúa siendo rentable por la ausencia de compuestos efectivos frente a ciertas especies patógenas. Las características del proceso (discontinuo) son: 1. Se obtienen añadiendo precursores del grupo a incorporar al antibiótico en el caldo de fermentación. En función de su origen. Debido a las características reproductivas de los microorganismos. Sus principales características son: • Presentan una baja toxicidad para el organismo. por lo que los efectos secundarios son inexistentes o muy leves. o En animales. por lo que son resistentes a este tipo de antibióticos. pero diferenciados por la cadena lateral (ácido fenilacético para G y ácido fenoxiacético para V). • La búsqueda de nuevos antibióticos es cada vez más difícil y costosa. Ciertas especies son capaces de sintetizar β-lactamasas. pero no es de origen microbiano.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS Un antibiótico es una sustancia producida por microorganismos. y derivada de su metabolismo secundario. obtenidos por vía biosintética. fecha en que Alexander Fleming descubrió la penicilina por contaminación de un cultivo de Streptococcus con Penicillium. 2. obtenidos por modificación química del producto microbiano. Semisintéticos. Antibióticos β-lactámicos Se caracterizan por contener un anillo de ácido β-lactámico. 2. aparecen resistencias. que ha ido ampliando el número de antibióticos conocidos. Recuperación del Penicillium chrysogenum esporulado y liofilizado. 3. hongos (Aspergillus y Penicillium) y actinomicetos (Streptomyces). por tanto.M. Esta etapa es importante. Biosintéticas. Si el producto tiene el mismo efecto. • Investigación bioquímica. se propuso investigarlos.5-1 vvm. fue Florey quien. 2. se produjo un importante desarrollo. Sin embargo. Se descubrieron accidentalmente hacia los años 20. realizada en dos etapas: 35 . se clasifican en: 1. que se extiende rápidamente. • Presentan dos problemas acusados: 1. Durante la 2ª G. la estructura activa principal de la molécula. Penicilinas Se obtienen de cepas de Penicillium y Aspergillus. ya que de ella depende el compactamiento o no del micelio: si el micelio es compacto. esto puede hacer más acusada la aparición de resistencias. capaz de inhibir el crecimiento de otros microorganismos en concentraciones relativamente bajas. Fermentación. no se suele usar porque es más factible y económico el uso de agroquímicos y fitosanitarios.

• La fermentación se produce a 24-28 oC y pH 7. además de NaCl. debido al alto requerimiento de oxígeno necesario (aunque es una especie anaerobia facultativa. con una fase de crecimiento de 90 horas con alta aireación. Se usa glucosa complementada con almidón o dextrinas y harina de soja.5-3.por inhibición de la síntesis proteica. por lo que su uso está restringido a casos concretos. sulfato amónico y carbonato cálcico. Se aporta un gran volumen de oxígeno durante unas 40 horas. respectivamente. aunque se obtienen también de Paecilomyces. Sus características son: • Son activos frente a gram. lactosa y líquidos de maceración del maíz (o. • Desarrollan resistencias rápidamente.por inhibición de la síntesis de la pared celular. Destaca el ácido clavulánico. • Son específicamente activos frente a gram. harina de soja. Destaca la bacitracina. Zn o Mn. Se usan recipientes de 1 L con sólo 200 mL de medio líquido (peptonas). ii. Antibióticos carbohidratados Los más destacados son los aminoglucosídicos (oligosacáridos unidos a aminosacáridos). 28-30 oC y pH neutro durante 4-7 días. . lo que permite aumentar la eficiencia o recuperar una actividad perdida por aparición de resistencias). sintetizados mayoritariamente por Bacillus y Streptomyces. capaz de crecer anaerobiamente). El sustrato es principalmente: i. 2. 1. manteniendo su actividad o reforzándola. en su defecto. Se efectúa en reactores de 3000 L. Extracción del producto con acetato de amilo o acetato de butilo. Durante 120-160 horas. y pueden causar daños en riñón y oído. Se aplica durante 6 horas. este compuesto confiere resistencia a la degradación. Streptomyces (el más usado actualmente) y Nocardia. Segunda prefermentación.5-1 vvm oxígeno. • Son tóxicos. El proceso de producción es: • El sustrato es glucosa y sacarosa. En la actualidad. • Son tóxicos.. según el antibiótico. pero se usa como sustrato sacarosa. líquidos de maceración del maíz. su amplio espectro de aplicación.4 y ácido fenilacético (G) o fenoxicético (V). usado con la amoxicilina. extracto de carne (complemento) y acetato amónico. en fermentadores de 90 m3 durante 30 horas. Co. Antibióticos peptídicos Destacan los lineales y cíclicos. o sea. Prefermentación. Su principal característica es. Se caracterizan por: • Son muy comunes: estreptomicina. Fermentación con el mismo sustrato anterior (con el doble de glucosa). producida por Bacillus licheniformis en procesos de superficie antiguamente. a 0 oC y pH de 2. 0. pH 6. 3. extracto de levadura o suero). Recuperación de las esporas. Producción. Se pasa a reactores de 800 L con una fuerte agitación (proporciona oxigenación) con el mismo medio de cultivo. seguida de otra de producción de 90-160 horas. Cefalosporinas Se descubrieron primero en Cephalosporium acremonium. aunque ahora se sigue un proceso más complejo. 36 . Nuevos productos Se obtienen por adición de compuestos que confieren protección al anillo frente a las enzimas. a. Aunque no es un antibiótico en sí. además de su similitud con las penicilinas. Fase de crecimiento. 5. Fermentadores de 150 m3. 4. El proceso de producción es: 1.4. se usan derivados semisintéticos de 2ª y 3ª generación (una o dos modificaciones químicas. glucosa o melazas y harina de soja.. Cultivo de mantenimiento a 37 oC durante 18-24 horas. 2. b. Se obtiene de Streptomyces clavuligerus.

• En biología molecular. aceites o almidón. aunque se puede emplear extracto de levadura.por inhibición de la síntesis proteica. se separa por adición de ácido sulfúrico hasta pH 2-2. Antibióticos aromáticos Cloranfenicol Es muy activo y eficaz. lo que les da su carácter hidrofóbico y básico. Por lo general. por lo que se separa por columnas de intercambio iónico. • Por lo general. • En medios de cultivo para hongos. Se obtiene de Penicillium patulum por procesos aeróbicos. Sus usos más destacados son: • Tratamiento de las salmonelosis. Son activos frente a gram+ y gram.5. harina de soja. pH neutro y 1 vvm. El proceso se efectúa durante 7-9 días. El producto es extracelular. El sustrato es rico en glucosa. Antibióticos macrolídicos Contienen un anillo lactónico. El proceso de producción es: • El sustrato es glucosa. pero puede causar lesiones en la médula ósea. Actúan inhibiendo la síntesis de proteínas. debido a que detiene el proceso de traducción (síntesis de proteínas). Son eficaces frente a gram+ y son poco tóxicos. Destaca la eritromicina. con excepción de la eritromicina (33 oC). La producción se efectúa en fermentadores agitados de 150 m3 con glucosa o almidón y alta oxigenación (1vvm) durante las primeras 12 horas. 37 . Es importante limitar el fosfato en el medio. a 25 oC. ya que actúa como inhibidor. Tetraciclinas El primero descubierto fue la tetraciclina. • El proceso es aerobio y sumergido.3. sulfato amónico. evitando el crecimiento de las bacterias. aureofaciens. Griseofulvina Es uno de los pocos antibióticos efectivos contra hongos. se efectúan a pH básico durante 3-7 días a temperaturas de 25-28 oC. descubierta de Streptomyces viridofaciens. pero son poco demandados porque se prefieren las penicilinas de tercera generación. con nitrato de sodio y cloruro potásico. Tiene un amplio espectro de aplicación. se obtienen por procesos biosintéticos. aunque actualmente se usa más S. ya que detiene la traducción. cloruro sódico y carbonato cálcico. usando Streptomyces erithreus. Si está adherido a las células. pero no la replicación del DNA. por lo que su uso está restringido.

Para evitarlo. presenta ciertas dificultades importantes: • No se pueden obtener grandes cantidades de producto. • En las vacunas muertas. Se pueden obtener mejores resultados que con las tradicionales. Consisten en células muertas o proteínas tóxicas (toxoides) desactivadas. La enfermedad no sea causada por la actividad de las células. Métodos de producción Sistemas tradicionales Consisten en la obtención de la vacuna mediante el cultivo del patógeno. Esto se debe a que las proteínas obtenidas presentan plegamientos inadecuados. lo que origina una modificación de la estructura original. 3. Presentan un importante inconveniente: el acceso del patógeno al organismo puede desencadenar la enfermedad si. de una o varias subunidades). Son células con la capacidad patógena atenuada. Vacunas muertas. debido a que no es necesario manipular organismos patógenos vivos. Vacunas de subunidades (técnicas de ADN recombinante) En muchos casos. debido a que es más barata su aplicación en masa para prevenir que la de los quimioterápicos para curar. obteniendo dichas subunidades de las proteínas. 2. • Las proteínas obtenidas no son suficientemente activas.pueden provocar reacciones. de efectos más leves. debidas a: a. b. ya que sólo se requiere de ellos su material genético. Vacunas vivas.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE VACUNAS Fueron descubiertas por Jenner hacia el siglo XIX por estudios de incidencias de la viruela en personas afectadas de vacuna. una enfermedad similar pero que afectaba a las vacas. las endotoxinas de las bacterias gram. obtenidas bien por conservación durante largo tiempo o por cultivo en medios no apropiados. Posibilidad de que no todas las células estén muertas. sería posible provocar la respuesta inmune sin necesidad de inocular el microorganismo entero. pudiendo incluso erradicarla. proteínas. sino una parte de su estructura (por lo general. lo que ocasiona la enfermedad. 38 . debido al rápido y constante crecimiento del hibridoma. por efectos colaterales de otras sustancias. Permite obtener vacunas para patógenos que no se pueden cultivar en laboratorio. Evita riesgos para el personal de producción. El principal inconveniente es la posibilidad de aparición de reacciones (más leves que en vacunas vivas). Este método presenta ventajas: 1. 1. como por ejemplo los lipopolisacáridos de las bacterias gram-. • En las vacunas vivas existe el riesgo de la reversión (recuperación de la capacidad patógena). debido a que el sistema inmunitario del hospedador sea demasiado sensible o el microorganismo esté poco atenuado. debido a la baja traducción del material genético patógeno. 2. Esto supuso la aparición de una idea intuitiva de inmunización frente a la viruela por padecer dicha enfermedad. no en laboratorio. la capacidad para provocar la respuesta inmune no es la célula completa. El fundamento de estas vacunas es que. donde la contaminación es muy difícil de controlar) o el hospedador presenta inmunodepresión (sistema inmune débil). Sin embargo. y además permiten controlar la enfermedad de una forma mucho más eficaz. Los principales problemas de estos sistemas son: • No todos los patógenos se pueden cultivar en laboratorio. recupera su capacidad patógena. sino por alguna sustancia de su estructura. La utilización de las vacunas presenta ciertas ventajas frente a los quimioterápicos. lo que facilita que su estructura se acerque a la real). se recurre al uso de hibridomas. Esto supone una alta concentración de proteína activa (ya que se genera en el interior de una célula viva. Ésta también puede producirse si se introducen otras especies patógenas (sobre todo en vacunas víricas. por alguna razón. que consisten en un híbrido entre una célula tumoral y otra de un tipo determinado.

se puede construir. ya que la unión entre ambas estructuras está más favorecida. lo que permitiría generar la respuesta inmune sin necesidad de usar el antígeno completo. es difícil que los epítopes adquieran la estructura necesaria sin interaccionar con otras estructuras (con las que interacciona al ser sintetizado por una célula). • Es difícil producirlos en grandes cantidades. Éstos son sustancias portadoras del antígeno (en general. por lo que no constituyen una vacuna efectiva.• En ocasiones. Aumento de la concentración de antígenos. denominada epítope. corta y débil. varios problemas: • La identificación del epítope es compleja. se usan hibridomas de linfocitos B. como secuencia de aminoácidos. dada la alta especificidad que se requiere para su identificación. y por otro lado. mediante el uso de adyuvantes. Presenta. se usan estructuras del propio patógeno. que permiten situar la proteína en una zona específica de la célula. un adyuvante es una sustancia que favorece la acción de otro compuesto). Éstas. al ser una secuencia pequeña. generan una escasa respuesta inmune. En muchos casos. ii. sin embargo. con la evidente ventaja de la reducción de los efectos secundarios por la inoculación de la vacuna. que reconocen el antígeno e inician la síntesis de anticuerpos monoclonales. Para ello. Esto favorece la multiplicación del antígeno. Vacunas peptídicas Por lo general. es muy sensible frente a las mutaciones. Tembién se puede aportar el antígeno usando un virus o bacteria atenuados. Por un lado. sino por una pequeña secuencia peptídica. Tembién se recurren a perfiles de hidrofobicidad. el sistema inmune reconoce a los patógenos no por una estructura completa. 39 . Sin embargo. generando una mayor respuesta inmune. vuelve a presentar el inconveniente del trabajo con patógenos vivos. Para paliar este efecto: i.

pero se obtenían bajas eficacias. pero ciertas enfermedades pueden disminuir la producción de dichas proteínas. • Hay indicios de asociación con la enfermedad de Creutzfeld-Jakob (encefalopatía espongiforme).. el caso más grave. producida en la glándula pituitaria y usada en casos de enanismo por déficit hormonal y en enfermedades relacionadas con el envejecimiento. en 1981. y su abuso un aumento (problemas de “dopping” en deportistas). creándose un círculo vicioso. Su carencia origina la diabetes. pero daban problemas de abastecimiento (baja producción) y de pureza (por lo que solían producir efectos secundarios). pero sometidos a patentes farmacéuticas. Fue el primer producto obtenido por métodos de ADN recomibnante aprobado para su empleo terapéutico. se usaban proteínas obtenidas de origen animal. Somatropina Es la hormona del crecimiento. de diferente gravedad según el órgano afectado. genera el aumento de la producción de mucosidad. Las proteínas obtenidas. Usando recombinación genética sobre Escherichia Coli (por transformación con un plásmido que contiene el ADN de la hormona). Tras la síntesis. Eritropoietina (EPO) Es una hormona glicoproteica producida en el riñón que interviene en la producción de eritrocitos. se posibilitó la producción microbiológica de proteínas humanas (ya que los microorganismos no las producen naturalmente.) anemias e infecciones renales que afecten a su producción.. Insulina Es una hormona polipeptídica producida por el páncreas. al basarse en genes humanos. se obtuvo de animales. proveniente de información genética humana). lo que disparaba el precio. y se usa para tratar enfermedades que causen inmunodepresión (cáncer. generando enfermedades. taponando las vías respiratorias y favoreciendo las infecciones. 40 . se usaba isulina de origen animal (ovejas y cerdos). disminuyendo la viscosidad de la mucosidad. Los preparados comerciales son muy específicos y eficaces (pulmozina de Genentech). Su carencia genera la caída del número de glóbulos rojos. provocada por priones y asociada al canibalismo (ingesta de cerebro humano. Con las técnicas de ADN recombinante. se combinan químicamente las subcadenas independientes. coli) y de forma separada. Tradicionalmente. El proceso de producción consiste en la producción de las subunidades proteicas que la componen por hospedadores diferentes (Saccharomyces cerevisiae. con la consiguiente liberación de su ADN. se tuvo que introducir en su genoma la maquinaria necesaria para ello. En los pulmones. se obtiene una somatropina idéntica a la humana (sólo se diferencian en un aminoácido). el sistema inmune responde destruyendo las células. usada en el tratamiento de la fibrosis quística. DNAsa Es una enzima capaz de degradar el ADN. Anteriormente. relacionada con el metabolismo de la glucosa y la regulación de su cantidad en sangre. Posteriormente. Se obtiene mediante técnicsa de ADN recombinante. Inicialmente se obtenía de cadáveres humanos. La fibrosis quísteca es una enfermedad genética degenerativa. con la consiguiente transmisión del prión). E. carecen de efectos secundarios (es prácticamente idéntica a la proteína humana) y se puede obtener en altas cantidades. sida. con dos problemas principalmente: su producción era escasa (lo que las encarecía) y suelen provocar efectos secundarios. Actualmente se investiga su producción con otras especies (Bacillus subtilis y Pseudomonas aeruginosa). pero presentaba problemas: • Se requerían muchos cadáveres para tratar un solo paciente.. Éste aumenta la viscosidad y densidad de la mucosidad.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA TERAPÉUTICAS DE PROTEÍNAS Las proteínas terapéuticas son producidas de forma natural por el organismo humano. Ante ello. La DNAsa actúa hidrolizando el ADN liberado.

embolias. coli. trombosis y contusiones. 41 . como leucemia. Activador del tejido plasminógeno Es una proteína constituyente del complejo implicado en la dilución de coágulos sanguíneos. 2. usado en casos de hepatitis C y tumores. cáncer renal. mieloma múltiple o tumor genital. en concreto. Interleuquinas Son un grupo de citoquininas formado por 15 sustancias distintas. Se comercializa desde 1987. Sólo una está comercializada actualmente. Se obtienen también de Escherichia coli. Actualmente. existen tres tipos diferentes. En humanos. usados en procesos de esclerosis múltiple (el primero) y otros cánceres (el segundo). Colágeno Se usa en suturas quirúrgicas. como ataques cardiacos. Se obtiene de E. y se usa en el tratamiento de carcinomas renales. se obtiene de cadáveres y vacas.Interferón Es una proteína de la familia de las citoquininas que itnerviene en la regulación de la respuesta inmune. melanoma. activa el plasminógeno. aunque hay procesos en investigación de producción con levaduras (Pichia augusta y Pichia pastoris) que eviten los riesgos de contaminación por virus y priones. para tratar enfermedades con riesgo de bloqueo de vasos sanguíneos. Los interferones β y γ. El interferón α. que al transformarse en plasmina destruye la fibrina que mantiene unido el coágulo. usados en enfermedades que debilitan el sistema inmunitario: 1.

aroma.. Residuos de otras industrias (residuos agrícolas. Actualmente. • Capacidad para utilizar una amplia variedad de fuentes de carbono. • El producto es. que puede generar enfermedades por acumulación). que se transforman en ácido úrico. pero presentan problemas durante el proceso. así como ingrediente de piensos animales. • Posibilidad de alteración genética y selección de cepas de forma relativamente sencilla. • Estabilidad genética. sobre todo. pero son más sensibles frente al pH (prefieren pH neutro). • Su degradación exija poca oxigenación. se elige el más adecuado en función del precio de éstos. lo que se explica teniendo en cuenta que su origen no fue la obtención de la SCP. disminuye los riesgos de contaminación. pero pueden trabajar a pH ácido. 1.). regular la presencia de aflatoxinas. 2. Los problemas a subsanar de este tipo de productos son. sino el tratamiento de residuos contaminantes. En ciertos hongos (Aspergillus. sobre todo. • Tolerancia al pH y la temperatura. además del contenido en ácidos nucleicos: 1. se siguen los siguientes criterios: • Baratos • Alta producción de biomasa. • Estructura y composición del producto final: contenido proteico. Usa residuos de otras industrias como sustrato. y cada grupo microbiano presenta sus ventajas e inconvenientes: • Las bacterias son de crecimiento más rápido. • No es dependiente del clima ni la estación. color.. Alcoholes. lo que. perfil aminoacídico. generación de calor y formación de espuma. pero después fue más rentable usar residuos de otras industrias. en general. en países en vías de desarrollo y como complemento dietético. muy empleados al principio.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE SCP Se usa principalmente para la producción de piensos animales. • Se aplica desde los 70. A la hora de buscar nuevos sustratos. especies aeróbicas (los fermentadores son más baratos). cultivos iniciadores par alimentación (levaduras para panadería) y consumo humano (poco extendido en occidente). Es necesario eliminar las sustancias tóxicas y/o cancerígenas que pudieran generarse en el proceso. Sustratos Aunque son muchos los sustratos que pueden utilizarse. • Facilidad para la recuperación de las células. textura y (muy importante) nivel de ARN (la degradación de los ácidos nucleicos genera purinas. de alta calidad. se está recuperando. 2. con el fin de reducir los problemas ambientales que podrían causar. • Buenas características de requerimientos de oxígeno. • Las levaduras son de crecimiento más lento. El producto en sí es una torta compacta de células muertas completas. • Alto contenido proteico (30-80%). • Ocupación de suelo baja. además. Producción de proteína unicelular Las características más destacables del producto son: • Rápida velocidad de crecimiento y elevada productividad. Se prefieren. 42 .. de alto contenido proteico (de ahí el nombre). Las características de los microorganismos usados son: • Crecimiento a partir de sustratos de muy bajo coste. sabor. • Los hongos son los qua más fácil se recuperan del cultivo. sueros lácteos o la industria maderera).

38 oC y pH de 3. El primer proceso con hongos. . que que Candida no puede degradar. contenido en ARN. el Finlandés de residuos de papeleras y madereras.Se produce entre 0. 2. donde los unas pocas especies. Aplicación de tratamientos previos al sustrato para su adecuación. lo que también repercute en el precio. Es uno de los pocos procesos que operan en continuo. principalmente arqueas. partiendo . . aparición de gradientes térmicos y nutricionales. . En general. y complementarlo con La SCP obtenida se destina a consumo minerales. . disminución de los costes de purificación o acoplado de procesos secundarios pueden contribuir a la extensión de estos procesos. . incremento del valor nutricional del producto. influencia del CO2 o la presión hidráulica. El empleo de sustratos más económicos. las etapas de estos procesos son: 1. 43 . pero hay pocas plantas industriales. ambientales de los residuos de patata. metano proporcionan el sustrato.Los microorganismos metanógenos son sólo Importante en Noruega.Las condiciones de fermentación son: humano y animal Biorreactores de 22 m3.Parte de suero lácteo con Kluyveromyces lactis o K.Se debe ajustar el contenido en lactosa del sustrato a 34 g/l.El sustrato contiene gran cantidad de almidón. y se destina a la producción de piensos. seguidos de tratamientos para reducir el contenido en ácidos nucleicos (choque térmico y adición de RNAsa) y acondicionamiento (pasteurización.55 g por g de lactosa. Se efectúan procesos de filtración y purificación. utiliza Candida utilis (levadura). humano. Fácil eliminación de compuestos tóxicos.Desarrollado en Suecia. lo que obliga a la realización de un tratamiento de eliminación a 64 oC durante 30 minutos.45 y 0. disminuyendo el coste. Bel .Se efectúa en condiciones asépticas y con nutrientes de grado alimentario. y por medio de un proceso de escalado en diferentes etapas (hasta 8) se llega a los cultivos líquidos.• • No generen calor al degradarse. .5. Los liófilos se recuperan en medio sólido. Los procesos más comunes son: .Destinado a la producción de piensos. Aireación de 1700 m3/h. Procesos de producción Existe una gran cantidad de plantas piloto. Los biorreactores utilizados son pequeños. 3.Se emplea Fusarium venenatum por sus El primero aprobado para el consumo características de estructura y textura. Su producción se efectúa en discontinuo: 1. el único destino de este ICI .Se obtiene un producto con un 45 % de proteínas y el poder contaminante del sustrato se reduce un 90 %. Se utiliza para disminuir los efectos . lo que exige un Symba necesitan un alto consumo de oxígeno tratamiento previo con Saccharomyces fibuligera. mejora de la eficacia. . producto contiene un 59 % de proteínas. .El inconveniente del Fusarium es su alto producto. manteniendo las condiciones límite (óptimas) de crecimiento del organismo. deshidratación y empaquetado). El Con campos de gas del Mar del Norte más utilizado es Methylococcus capsulatus. debido a que surgen problemas de escalado por la diferencia de condiciones: requerimientos de oxígeno. lo que favorece la no necesidad de utilizar cambiadores de calor.El producto contiene un 70 % de proteínas. marxianus. Producción de levadura para panadería El iniciador en los productos de panadería es Saccharomyces cerevisiae. para degradarse.

así como sales minerales. lo que lleva a la producción de sabor y aroma. desecado y conservación en refrigeración. sales de amonio) y aminoácidos (que a su vez actúan como factores de crecimiento).El sustrato utilizado son principalmente melazas provenientes de industrias azucareras. 44 . 2. complementadas con compuestos nitrogenados (principalmente. • Alta generación de CO2. Se requiere un gran aporte de oxígeno. enfriado (2-4 oC). • Altos niveles de osmotolerancia. Se efectúa a pH ácido (4-4. 4. 3. lavado. Las características principales del producto son: • Elevado poder glicolítico (capacidad para procesar azúcares). • Perfil metabólico adecuado.5). Las células se purifican por centrifugación. 5. durante media hora tras finalizar el proceso para adecuar las características de la célula (proceso de maduración).

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