AISLAMIENTO DE LEVADURAS

Se llama levadura a cualquier hongo unicelular. Son importantes por su

proceso de fermentación, mediante el cual descompone diversos cuerpos
orgánicos, principalmente los azucares, produciendo distintas sustancias. Los
hongos producen enzimas capas de descomponer diversos sustratos.

Las condiciones en las que se desarrolla la levadura tales como T°, pH,
disponibilidad de oxígenos permiten diferenciarlas y aislarlas.

Mediante esta práctica se pretender aislar levaduras utilizando diferentes

medios (diferentes fuentes de carbono).

Equipos a usar y definiciones:

 Autoclave: es un equipo que permite la esterilización en un amplio

espectro a partir del control y relación directamente proporcional entre la
T° y la presión. A mayor presión te genera un ambiente de T°
generando condiciones entre 115-135°C.
 Incubadora: permite controlar la T° que requiere determinado tipo de
microrganismo (bacterias, hongos, etc.) para poder crecer y
desarrollarse, este equipo lo usamos para darle el medio adecuado de
crecimiento a nuestras levaduras.
 Cámara de flujo laminar: permite realizar un manejo de todo el material
experimental con la plena garantía de una total asepsia y eliminación de
agentes contaminantes, gracias a este equipo pudimos realizar la
siembra adecuada en las respectivas cajas de Petri a las condiciones
de T° y humedad adecuadas para no interferir con el crecimiento de los
hongos.
 Gentamicina: es un antibiótico de amplio espectro, efectivo tópicamente
contra bacterias gramnegativas y grampositivas, con excelente actividad
contra la mayoría de las pseudomonas. Este antibiótico se aplicó
después de todo el proceso de esterilización puesto que el calor
ocasiona su destrucción al desnaturalizarse las proteínas.

No fue necesario preparar los medios de cultivo, pues ya estaban listos y

completamente esterilizados.

Resultados:

Se pretendía obtener cepas de la Saccharomyces cerevisiae, levadura

proveniente de la caña de azúcar, por lo que se realizaron las diluciones con
“guarapo” que estuvo ferméntadose 15 días bajo tierra y 15 días en una
cámara de dióxido de carbono.

Entonces, se realizó la siembre en las cajas de Petri de las últimas cuatro

diluciones (10-5, 10-6, 10-7, 10-8), se dejaron en incubación durante 42 horas y se
procede a realizar la observación en el microscopio.
No se observó crecimiento en ninguna de las cajas de petri.

Análisis

Se realizó una siembra en las cuatro cajas de petri, en una primera ocasión, el
miércoles 20 de marzo, para una posterior observación el viernes 22 del mismo
mes sin hallarse ningún crecimiento por lo que se creyó que esto se debía a un
error al momento de la siembra, entonces se realizó de nuevo el procedimiento
el miércoles 3 de abril, después de haber dejado el guarapo en la cámara de
dióxido de carbono y se realizó la observación el viernes 5 de abril, de nuevo
no se obtuvo crecimiento.

Este crecimiento nulo se le atribuye a que el guarapo estuvo en el proceso de

fermentación durante un mes, además se especula que la materia de estudio
no es una fuente verídica, pues se cree que fue adicionada agua u otros
elementos externos para su rendimiento, entonces cuando fue sembrado solo
había presencia de etanol, factor que produce estrés crítico y tiene una
tendencia a detener la fermentación, además que no existe la fuente de
alimentación de las levaduras: la glucosa.

El alto contenido de etanol tiene una tendencia a detener la fermentación. Se

conoce que los niveles de alcohol provocan un estrés en los requerimientos de
la levadura (metabolismo y crecimiento). Esto nos muestra que cuando la
levadura está en la fase reproductiva esta produce alcohol 30 veces más rápido
que cuando no se está reproduciendo. Existen tres fases en el crecimiento de
las levaduras, la fase llamada “fase de adaptación”, durante la cual la levadura
se adapta al medio fermentador. Durante este periodo es poco o casi no hay
crecimiento de la levadura y consecutivamente poco o casi nula la producción
de alcohol. Este periodo puede durar de 4 a 12 horas. La segunda fase es la
fase de “crecimiento exponencial”. Esta es la fase más importante donde casi
todo el alcohol es producido. Aquí es limitado el tiempo en el cual la levadura
se queda en esta fase; y este es el factor limitante de la cantidad de alcohol
producido durante la fermentación. La tercera fase es la de muerte, en donde la
levadura se encuentra en decaimiento metabólico y entra en fase de muerte.

La extrema toxicidad que ejercen los solventes orgánicos en los

microorganismos causa un serio problema, tal es el caso del etanol, que tras su
acumulación en el medio de fermentación, causa efectos adversos en el
crecimiento del microorganismo y en su propia biosíntesis.

Se esperaba obtener las cepas de la Saccharomyces cerevisiae, una especie

de levadura utilizada por excelencia para la obtención de etanol a nivel
industrial debido a que es un microorganismo de fácil manipulación y
recuperación, no es exigente en cuanto a su cultivo, no presenta alto costo,
tolera altas concentraciones de etanol, en la fermentación produce bajos
niveles de subproductos, es osmotolerante, capaz de utilizar altas
concentraciones de azúcares, presenta alta viabilidad celular para el reciclado y
características de floculación y sedimentación para el proceso posterior.

Observación microscópica de la Saccharomyces cerevisiae

Clasificación taxonómica de Saccharomyces cerevisiae.

Reino Hongo
División Amastogomycota
Clase Ascomycetes
Subclase Hemiascomycetidae
Orden Endomycetales
Familia Sacchaomycetaceae
Subfamilia Saccharomycetaidae
Género Saccharomyces
especie Cerevisiae

Las levaduras, son organismos eucarióticos unicelulares, por lo tanto sus

estructuras se encuentran formadas por pared celular, núcleo diferenciado y
organelos como ribosomas y mitocondrias; la formación de una cápsula de
polisacáridos, la ausencia o presencia de vacuolas y el desarrollo de las
mitocondrias dependen de las condiciones fisioquímicas y de la edad del
cultivo.

Características de las levaduras

CARACTERÍSTICAS LEVADURAS
Dimensiones (micras) 4–8
Tiempo de duplicación (horas) 1–3
Ph (rango óptimo) 4,5 – 5,5
Nitrógeno (%) 7,5 – 8,5
Proteína (%) 35 – 45
Ácidos nucleicos (%) 6 – 12
Carbohidratos (%) 30 - 45

Saccharonmyces cerevisiae es una levadura cuya colonia es de color crema o

blanco, apariencia húmeda y brillante, de bordes irregulares. La temperatura
óptima de crecimiento es de 25 30°C puede producir ascosporas cuando hay
requerimientos nutricionales adecuados.

Sus dimensiones son: 2.5 – 1 micras de ancho y 4.5 – 21 micras de largo.

Microsópicamente se observan redondas y ovoides, elipsoides, a veces
cilíndricas y filamentosas. Ferment glucosa, galactosa, sacarosa y maltosa y no
fermenta latosa. Asimila galactosa, sacarosa, maltosa y rafinosa. La aireación
óptima es de 0.6 – 0.9 vvm.

El nombre de Sacchromyces significa azúcar de hongos. Producen una

fermentación vigorosa y es conocida como la levdura de la cerveza, sirve como
fuente de enzimas (invertasa), como extracto de levadura autolisado para
sustituir los sabores naturales del extracto de carne, hace fermentar la masa
del pan, interviene en la fabricación del vino y como fuente de proteína,
vacunas, ácidos grasos y aceites.

Sacchromyces pertenece al género de las levaduras de la familia

saccharomycetaceae; las células son esferoides, elipsoidales o cilíndricas: la
reproducción vegetativa ocurre por mecanismos multilaterales: los
pseudomicelios pueden ser formados por algunas especies, pero presenta
ausencia de hifas verdaderas. En presencia del 0 2, las cepas pueden metbolizar
oxidativamente sustratos como glicerol, etanol y lactato.

Conclusiones:

 Los resultados finales de la práctica de aislamiento de levaduras no

fueron los esperados debido a que no se presentó crecimiento de la
cepa aislada, esto se pudo haber debido al tiempo excesivo de
fermentación del guarapo (un mes).

 Se resalta la importancia que tienen las tienen las diferentes condiciones

ambientales de aislamiento (temperatura, pH, sustrato, tipo de cepa)
puesto que en esto radica el éxito del cultivo.

 Conocer el procedimiento de manejo y cultivo de las levaduras

(Saccharomyces cerevisiae) es importante debido a que estos
microorganismos tienen gran uso en la industria de fabricación de
cerveza, vino, sake, pan y alcoholes industriales, además de otras áreas
de importancia para nuestra desempeño profesional.
Bibliografía:

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE LEVADURASNATIVAS DE Dasylirion

spp CON EL EQUIPO AUTOMATIZADO MICROSCAN AUTOSCAN 4. Melissa
Martínez, Heliodoro de la Garza, Cristóbal Noé Aguilar, Jesús Rodríguez-
Martínez. Disponible en Internet: http://www.smbb.com.mx/congresos
%20smbb/morelia07/TRABAJOS/Area_VI/CARTELES/CVI-18.pdf (Revisado el
6 de abril de 2013)

MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. Disponible en Internet:

http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/tema02.pdf (Revisado el 6 de abril
de 2013)

EVALUACIÓN DE MELAZA DE CAÑA COMO SUSTRATO PARA LA

PRODUCCIÓN DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE. Erika Esperanza
Fajardo, Sandra Constanza Sarmiento. Disponible en Internet:
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis26.pdf (Revisado el 6 de
abril de 2013)

LEVADURA SACCHAROMYCES CEREVISIAE. Heber Escorcia, Jesús García,

Edgar Hernández, Ashley Martínez del Castillo. Disponible en Internet:
http://www.slideshare.net/Nadarifa/trabajo-de-investigacion1-11006571
(Revisado el 6 de abril de 2013)