AGRADECIMIENTOS

A mis profesores y al Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrcolas.

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACYT), por otorgarme el apoyo econmico para concluir mis estudios de doctorado.

A la Fundacin Produce de Guerrero A. C. por la oportunidad de trabajar en el proyecto de zapote mamey y por el apoyo econmico recibido para llevar acabo esta investigacin.

A los integrantes de mi Comit Acadmico: Al Dr. Daniel Nieto ngel, Dr. Daniel Tliz Ortz, Dr. Antonio Mora Aguilera, Dra. Ma. Teresa Martnez Damin y Dr. Mateo Vargas Hernndez, por el apoyo y consejos que fueron decisivos para la conclusin del trabajo de investigacin.

Al Dr. Cristian Nava Daz y al M.C. Jorge Valdz Carrasco por el gran apoyo que me brindaron.

A todas las personas que contribuyeron directa o indirectamente en la realizacin de este trabajo; entre ellos, a los productores de mamey de Alpoyeca, Guerrero, Mxico.

DEDICATORIA

A mis padres, Oliva Jaimes Jaimes y Rafael Gmez Lpez por el apoyo incondicional que siempre me han dado.

A mis hermanos, Maribel Gmez Jaimes, Sandra Olivia Gmez Jaimes y Edgar Alan Gmez Jaimes, a quienes amo profundamente.

A Gabriel Gmez Lpez, quien ha sido un ejemplo a seguir.

A mi Abuelo Don Encarnacin Gmez Sols.

A la familia Gmez y Jaimes, quienes son parte importante en mi vida.

A mis amigos, que han estado con migo en las buenas y en las malas.

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Este trabajo forma parte del proyecto de investigacin de zapote mamey en la Caada de Huamuxtitln, Guerrero, Mxico, financiado por la Fundacin Produce de Guerrero, A. C. bajo la direccin del Dr. Antonio Mora Aguilera.

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CONTENIDO
Pgina INTRODUCCIN GENERAL...... Objetivos. Literatura citada................................................................................................ CAPTULO I. TEMPERATURAS DE REFRIGERACIN PARA EVALUAR LA CALIDAD E INCIDENCIA DE HONGOS DEL ZAPOTE MAMEY (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn EN 7 7 8 9 10 14 26 27 1 3 4

ALMACENAMIENTO Resumen. Abstract Introduccin............ Materiales y mtodos. Resultados y discusin.. Conclusiones.. Literatura citada...... CAPTULO II. TCNICAS DE COSECHA DEL SAPOTE MAMEY (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn) Y SU IMPACTO EN LA CALIDAD POSTCOSECHA Resumen..... Abstract. Introduccin. Materiales y mtodos. Resultados y discusin.......... Conclusiones... Literatura citada...

31 31 32 33 35 40 55 56

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CAPTULO III. Pestalotiopsis paeoniicola: UN HONGO ENDFITO DEL MAMEY (Pouteria sapota (Jacq) H. E. Moore and Stearn) DE IMPORTANCIA POSTCOSECHA EN MXICO Resumen.. Abstract. Introduccin. Materiales y mtodos. Resultados y discusin.. Conclusiones.. Literatura citada...... CONCLUSIONES GENERALES 64 64 65 66 68 73 85 86 92

NDICE DE CUADROS
CAPTULO 1. Pgina Cuadro 1. Cambios en algunas variables de calidad postcosecha en frutos de zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn, almacenados a temperatura ambiente 251 C. Efecto de las temperaturas y periodos de almacenamiento refrigerado en algunas variables de calidad postcosecha de frutos de zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn. Efecto de las temperaturas y periodos de almacenamiento refrigerado en algunas variables de calidad postcosecha de frutos de zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn.

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Cuadro 2.

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Cuadro 3.

22

CAPTULO 2.

Cuadro 1.

Efecto de tcnicas de cosecha del zapote mamey (Pouteria sapota) en algunos parmetros de calidad postcosecha. Efecto de tcnicas de cosecha del zapote mamey (Pouteria sapota) en algunos parmetros de calidad postcosecha.

45 50

Cuadro 2.

CAPTULO 3.

Cuadro 1.

Tejido de rganos reproductivos y vegetativos colectado en rboles de mamey (Pouteria sapota) durante 2006-2007 en Alpoyeca, Guerrero, para aislamiento de Pestalotiopsis. Aislamientos de hongos en pulpa de frutos de mamey (Pouteria sapota) con madurez fisiolgica. Alpoyeca, Guerrero. 2006. Frecuencia de Pestalotiopsis spp. en el interior de rganos reproductivos y vegetativos en rboles de mamey (Pouteria sapota). Alpoyeca, Guerrero. 2006-2007. Pudricin causada por Pestalotiopsis en frutos cosechados con dos tcnicas y combinadas con Carbendazim. Alpoyeca, Guerrero. 2007. Efecto de la inoculacin de Pestalotiopsis paeoniicola en hojas de mamey (Pouteria sapota) separadas o adheridas a su rama. Montecillo, Mxico. 2007.

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Cuadro 2.

74

Cuadro 3.

77

Cuadro 4.

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Cuadro 5.

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NDICE DE FIGURAS
CAPTULO 1. Pgina Figura 1. Cambios en firmeza y slidos solubles totales en frutos de mamey conservados a 25 1 C por 7 das. Comparacin de la firmeza de frutos de mamey refrigerados a 13 y 15 C por 13, 18 y 24 das y evaluados a los 0, 3 y 6 das despus del almacenamiento con frutos conservados a temperatura ambiente a 25 1 C por 7 das. 16

Figura 2.

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Figura 3.

Porcentaje de frutos con pudricin por Lasiodiplodia theobromae y Pestalotiopsis paeoniicola en frutos de zapote mamey almacenados a diferentes temperaturas durante 13, 18 y 24 das y evaluados a 0, 3 y 6 das despus del almacenamiento a 25 1 C. Lasiodiplodia theobromae: A, conidios inmaduros; B, conidios maduros. Estructuras de Pestalotiopsis paeoniicola: A, conidios y micelio; B, conidios maduros; C, seccin vertical de un acrvulo; D, conidiforos y conidios maduros e inmaduros.

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Figura 4.

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Figura 5.

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CAPTULO 2.

Figura 1.

(A) Cambios en firmeza y (B) pectinmetilesterasa (PME) en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das, cosechados con diferentes tcnicas: T1) frutos cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Las barras verticales indican el error estndar de la media. Cambios en color de la pulpa: (A) Brillo, (B) Chroma y (C) hue en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das, cosechados con diferentes tcnicas: T1) frutos cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Las barras verticales indican el error estndar de la media.

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Figura 2.

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Figura 3.

Comportamiento promedio de los tratamientos en acidez (%) y slidos solubles totales (Brix) en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das. Las barras verticales indican el error estndar de la media. Cambios en slidos solubles totales (Brix) en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das, cosechados con diferentes tcnicas: T1) frutos cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Las barras verticales indican el error estndar de la media. Prdida de peso (%) en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das, cosechados con diferentes tcnicas: T1) frutos cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Las barras verticales indican el error estndar de la media. Pudricin en frutos de mamey que fueron lanzados al suelo (golpeados) (G), golpeados y tratados con fungicida (GF), cosechados manualmente y empacados en cajas de cartn (empacados) (E) y empacados y tratados con fungicida (EF); conservados a 25 1 C por 10 das. Las barras verticales indican el error estndar de la media. Lasiodiplodia theobromae: A, conidios inmaduros; B, conidios maduros.

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Figura 4.

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Figura 5.

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Figura 6.

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Figura 7.

53

viii

Figura 8.

Estructuras de Pestalotiopsis paeoniicola: A, conidios y micelio; B, conidios maduros; C, seccin vertical de un acrvulo; D, conidiforos y conidios maduros e inmaduros.

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CAPTULO 3.

Figura 1.

Conidios maduros de Pestalotiopsis spp. con 2 y 3 apndices apicales. Estructuras reproductivas de Pestalotiopsis paeoniicola: (a) y (b), conidios maduros con 2 y 3 apndices apicales; (c), vista frontal de acrvulos; (d), vista lateral de un acrvulo; (e), conidiforos y conidios maduros e inmaduros; (f), vista frontal de acrvulos. Dendrograma de las especies de cinco esporas (quinqueloculatae) del gnero Pestalotiopsis y un aislamiento representativo de mamey (Pouteria sapota). Pudricin sobre hoja y frutos de mamey inducida por Pestalotiopsis paeoniicola: (a), presencia de micelio y acrvulos sobre la hoja; (b), presencia de micelio en la pulpa; (c), fruto sano.

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Figura 2.

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Figura 3.

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Figura 4.

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INTRODUCCIN GENERAL La familia sapotaceae incluye gneros que producen frutos con valor comercial, entre ellos destaca el genero Pouteria. El zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn) es originario del sur de Mxico (pennsula de Yucatn) y Centroamrica (Guatemala, Belice, Honduras y Nicaragua) (Azurdia, 2006). En Mxico se cultiv en 1,416 hectreas con una produccin de 13,440 toneladas en los Estados de Yucatn, Guerrero, Chiapas, Michoacn, Puebla, Veracruz y Oaxaca en el 2007 (SIAP). Los rboles de mamey se cultivan en Mxico principalmente en pequeos huertos comerciales o intercalado con otros cultivos como mango (Mangifera indica), pltano (Musa spp.), caf (Coffea arabica), zapote prieto (Dyospiros digina), aguacate (Persea americana), etc. (Azurdia, 2006; GIIIM, 2007). La comercializacin de esta fruta es limitada frecuentemente por problemas de calidad: maduracin, ablandamiento irregular, poco desarrollo del color y pudriciones internas inducidas por hongos y plagas insectiles de importancia cuarentenaria (Anastrepha spp.), por lo que su mercadeo es nacional (Daz et al., 2001; Villanueva et al., 2001).

Importante prdida de la calidad de la fruta se atribuye a los golpes que se producen por la manipulacin en cosecha y postcosecha; as como a la falta de instalaciones adecuadas para su almacenamiento (Balerdi et al., 2005; Proulx et al., 2005). Los daos en los frutos estimulan la sntesis de etileno y aceleran la respiracin, maduracin y senescencia, adems de facilitar la entrada de patgenos y causar oxidaciones (Gil, 2001; Kader, 2002). La temperatura es una de las principales herramientas para prolongar la vida til de los frutos, ya que mantiene su calidad y aumenta el tiempo de

conservacin (Gamage y Rahman, 2003). En Mxico, los frutos de mamey raramente son refrigerados y no se les da algn tratamiento postcosecha (Daz et al., 2000).

Los hongos que han sido reportados en frutos de mamey como causales de pudriciones son Lasiodiplodia spp. y Pestalotia spp. (Patel y Chauhan, 1993; Daz et al., 2001; Bautista et al., 2002; Yahia y Ariza, 2003; Ariza et al., 2005). Recientemente el Grupo Interdisciplinario e interinstitucional de Investigacin en Mamey (GIIIM) encontr a Pestalotiopsis spp asociado a la pudricin de frutos en Alpoyeca, Guerrero. Este hongo ha sido reportado como endfito en rboles tropicales, capaz de atacar hospedantes dbiles o deteriorados (Lodge et al., 1996; Agazzi et al., 2001; Burgess et al., 2006; Arnold, 2007; Wei et al., 2007). El trmino endfito es aplicado a los organismos que viven dentro de los tejidos de la planta en donde se desarrollan sin aparente infeccin o sntomas. Los hongos endfitos pueden estar presentes en parte o en todo el ciclo de vida del hospedante (Arnold, 2007; Arnold y Lutzoni, 2007).

Una de las principales zonas productoras de zapote mamey en el pas es La Caada de Huamuxtitln en el Estado de Guerrero, que incluye los municipios de Huamuxtitln y Alpoyeca. La Caada es una zona limitada por montaas y atravesada por el rio Tlapaneco, donde se cultivan aproximadamente 300 hectreas de mamey, como policultivo y monocultivo (GIIIM, 2007). La zona de estudio (Alpoyeca, Guerrero) se encuentra ubicada en los paralelos 17 32' y 17 40' LN y meridianos 98 01' y 98 31' LO; a 960 msnm (INEGI, 2005), posee un bajo nivel tecnolgico en la produccin de mamey y su rentabilidad es incipiente. Implementar nuevas alternativas de manejo postcosecha como mejorar las tcnicas de cosecha y la utilizacin de temperaturas 2

bajas de almacenamiento, con el propsito de disminuir las pudriciones en los frutos y prolongar su vida de anaquel sin deterioro de su calidad, lo que podra aumentar su rentabilidad. Por tal razn, se plantearon los siguientes objetivos:

Objetivos generales

1) Evaluar la calidad del zapote mamey (Pouteria sapota) en postcosecha.

2) Identificar los principales hongos asociados a la pudricin de fruto.

Objetivos particulares

1) Determinar las temperaturas ptimas de almacenamiento de los frutos de mamey y evaluar su repercusin en la calidad postcosecha y en la incidencia de enfermedades inducidas por hongos.

2) Definir el efecto de diferentes tcnicas de cosecha en la calidad postcosecha y en la incidencia de enfermedades fungosas del mamey.

3) Verificar la naturaleza endoftica de Pestalotiopsis spp. y su posible rol como patgeno.

LITERATURA CITADA Agazzi, A. R., S. A. Moricca, P. Capretti, I. Dellavalle, F. Mancini, and E. Turco. 2001. Endophytic fungi in Quercus cerris: isolation frequency in relation to phenological phase, tree health and the organ affected. Phytopathol. Mediterr 40: 165-171. Ariza F., R., A. Barrios A., E. Vzquez G., S. Navarro G., A. Michel A., y A. Otero G. 2005. Tecnologa de Postcosecha en Mango, Papaya y Sapote Mamey. INIFAP. Libro Tcnico No. 2. Mxico. 221 p. Arnold, A. E. 2007. Understanding the diversity of foliar fungal endophytes: progress, challenges, and frontiers. Fungal Biology Reviews 21: 51-66. Arnold, A. E, and F. Lutzoni. 2007. Diversity and host range of foliar fungal endophytes: Are tropical leaves biodiversity hotspots? Ecology 88: 541-549. Azurdia, C. 2006. Tres especies de zapote en Amrica Tropical. Southampton Centre for Underutilised Crops, Universidad de Southampton, Southampton, UK, 216 p. Lodge, D. J., P. J. Fisher, and B. C. Sutton. 1996. Endophytic fungi of Manilkara bidentata leaves in Puerto Rico. Mycologia 88: 733-738. Balerdi, C. F., J. H. Crane, I. Maguire. 2005. Mamey sapote in the Florida home landscape. Florida Cooperative Extension Service, Institute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. Available: htt://edis.ifas.ufl.edu/FC30. Bautista B., S., J. C. Daz P., and L. L. Barrera N. 2002. Postharvest fungal rots of sapote mamey Pouteria sapota (Jacq.) H.E. Moore & Stearn. Postharvest Biology and Technology 24:197-200. Burgess, I. T., A. P. Barber, S. Mohali, W. Beer, and J. M. Wingfield. 2006. Three new Lasiodiplodia spp. from the tropics, recognized based on DNA sequence comparisons and morphology. Mycologia 98: 423-435. 4

Daz P., J. C., S. Bautista, and R. Villanueva. 2000. Quality changes in sapote mamey fruit during ripening and storage. Postharvest Biology and Technology 18: 67-73. Daz P., J. C., A. Meja, S. Bautista, R. Zavaleta, R. Villanueva, and R. Lpez G. 2001. Response of sapote mamey [Pouteria sapota (Jacq.) H.E. Moore and Stearn] fruit to hot water treatments. Postharvest Biology and Technology 22:159-167. Faeth, S. H. 2002. Are endophytic fungi defensive plant mutualists?. Oikos, 98: 25-36. Gamage T., V., y S. Rahman M. 2003. Manipulacin postcosecha de los alimentos de origen vegetal, pp. 11-45. In: Manual de Conservacin de los Alimentos. Rahman M., S. (ed). Acribia. Zaragoza, Espaa. 863 p. Gil, S. G. F. 2001. Fruticultura: Madurez de la fruta y manejo postcosecha (Fruta de clima templado y subtropical y uva de vino). Universidad Catlica de Chile. 413 p. GIIIM. Grupo Interdisciplinario e Interinstitucional de Investigacin en Mamey. 2007. El cultivo del mamey (tecnologa para productores). Colegio de Postgraduados. Texcoco, Mxico. 71 p. INEGI. 2005. Anuario estadstico de Guerrero. Instituto Nacional de Estadstica Geografa e Informtica. Aguascalientes, Mxico. 725 p. Kader, A. A. 2002. Postharvest Biology and technology: An Overview, pp. 39-54. In: Postharvest technology of horticultural crops. Adel A. Kader (ed). Ed. University of California Agricultura and Natural Resources, Publication 3311. 535 p. Lodge, D. J., P. J. Fisher, and B. C. Sutton. 1996. Endophytic fungi of Manilkara bidentata leaves in Puerto Rico. Mycologia 88: 733-738. Patel, P. B., and H. L. Chauhan. 1993. Twig blight of sapota caused by Botryodiplodia theobromae Pat.: a new record. Indian Journal of Mycology and Plant Pathology 23: 219. 5

Proulx, E., M. Cecilia, N. Nunes, J. P. Emond, and J. K. Brecht. 2005. Quality attributes limiting papaya postharvest life at chilling and non-chilling temperatures. Proc. Fla. State Hort. Soc 118: 389-395. Schulz, B., and C. Boyle. 2005. The endophytic continuum. Mycological Research 109: 661-686. SIAP-SAGARPA. Servicio de Informacin Agroalimentaria y Pesquera. Produccin agrcola 2007. www. siap.gob.mx (consultado el 12 de septiembre de 2008). Villanueva A., R., S. Evangelista L., M. L. Arenas O., J. C. Daz P., and S. Bautista B. 2000. Biochemical and physics changes during development and postharvest of sapote mamey fruit (Pouteria sapota (Jacq.) H.E. Moore & Stearn). Revista Chapingo Serie Horticultura 6:63-72. Wei, J. G., T. Xu, L. D. Guo, A. R. Liu, Y. Zhang, and H. P. Pan. 2007. Endophytic Pestalotiopsis species with plants of Podocarpaceae, Theaceae and Taxaceae in southern China. Fungal Diversity 24: 55-74. Yahia, E. M., and R. Ariza. 2003. Postharvest hot air treatments effect on insect mortality and quality of sapote mamey fruit (Pouteria sapota). Acta Horticulturae 604:691-695.

CAPTULO I. TEMPERATURAS DE REFRIGERACIN PARA EVALUAR LA CALIDAD E INCIDENCIA DE HONGOS DEL ZAPOTE MAMEY (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn EN ALMACENAMIENTO

RESUMEN El bajo nivel tecnolgico en la produccin del zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn) en Mxico, hace necesario implementar nuevas alternativas de manejo postcosecha como las temperaturas bajas de almacenamiento, con el propsito de prolongar la vida de anaquel de los frutos y extender su calidad. El efecto de las temperaturas de almacenamiento en la calidad se evalu en frutos de zapote mamey cosechados en madurez fisiolgica. Los frutos se almacenaron a temperatura ambiente (251 C) durante 7 das (testigo) y a 10, 13 y 15 C por 13, 18 y 24 das. Despus del almacenamiento los frutos fueron evaluados a los 0, 3 y 6 das a 251 C. La mejor temperatura de refrigeracin en frutos de mamey fue 13 C, ya que la pulpa de los frutos mostr caractersticas en firmeza, color (valor de L* (brillo), ndice de saturacin (chroma) y ngulo de tono (hue), slidos solubles totales (Brix) y acidez, as como prdida de peso en fruto, similares a las obtenidas en los frutos testigo en madurez de consumo. Dez % de pudricin se present hasta los 18 das en los frutos almacenados a 13 C y entre 10 y 30 % a los 24 das. Los frutos a 15 C entraron en senescencia despus de los 13 das de almacenamiento y presentaron la mayor pudricin de frutos (50 %). Los frutos expuestos a 10 C no alcanzaron la madurez de consumo y no hubo cambios en firmeza, slidos solubles totales y color de la pulpa. En base a sus caractersticas morfolgicas y moleculares los hongos que indujeron pudriciones en frutos se identificaron como Pestalotiopsis paeoniicola y Lasiodiplodia theobromae.

Palabras clave: maduracin, almacenamiento, pudricin, calidad, hongos.

TEMPERATURES OF REFRIGERATION TO EVALUATE THE QUALITY AND INCIDENCE OF FUNGI OF SAPOTE MAMEY (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn IN STORAGE

ABSTRACT The low technology used for producction of zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn) in Mexico makes necessary to search for postharvest strategies such as low storage temperatures with the purpose of extending fruit life and quality. The effect of storage temperatures on zapote fruit quality (harvested at physiological maturity) was evaluated. Fruits were stored at room temperature (251 C) during 7 days (control) and at 10, 13 and 15 C for 13, 18 and 24 days. After storage, fruits were kept at room temperature and evaluated after 0, 3 and 6 days. Fruits stored at 13 C showed the best firmness, color (L* brightness, saturation index or chroma and tone angle or hue), higher solid soluble totals ( Brix.) and less acidity and weight loss compared with control fruits at maturity. Ten % fruit rot was detected on fruits stored for 18 days at 13 C, and increased to 10 to 30 % after 24 days storage. Fruits decayed after 13 days storage at 15 C, showing the highest percentage of fruit rot (50 %). Fruits stored at 10 C did not reach commercial maturity and firmness, Brix and color remained intact. Based on morphological and molecular characterization, the causal agents of fruit rot were identified as Pestalotiopsis paeoniicola and Lasiodiplodia theobromae.

Key words: Maturity, storage temperatures, fruit rot, quality, fungi

INTRODUCCIN El zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn) es un fruto con un comportamiento climatrico y tasa alta de respiracin. La fruta presenta prdidas importantes en postcosecha debido a la maduracin rpida y susceptibilidad a pudriciones internas inducidas por hongos (Daz et al., 2001; Ergun et al., 2005). Los hongos que han sido reportados en frutos de mamey como causales de pudriciones son Lasiodiplodia spp. y Pestalotia spp. (Patel y Chauhan, 1993; Daz-Prez et al., 2001; Bautista et al., 2002; Yahia y Ariza, 2003; Ariza-Flores et al., 2005). En Mxico, la fruta raramente es refrigerada y no recibe tratamientos postcosecha (Daz et al., 2000). La temperatura es una de las principales herramientas para prolongar la vida til de los frutos, ya que mantiene su calidad y aumenta el tiempo de conservacin (Gamage y Rahman, 2003). Bajas temperaturas de almacenamiento producen desrdenes fisiolgicos en tejidos, modifican la fase climatrica y afectan la madurez de los frutos (Thompson, 1998). Daz et al. (2000) y Alia et al. (2002) mencionaron que la exposicin de frutos de mamey a temperaturas menores a 10 C inducen severos daos por fro, lo que provoca oscurecimiento y lignificacin de la pulpa, maduracin desigual y adherencia de la pulpa a las semillas. La Caada de Huamuxtitlan, en la montaa baja del estado de Guerrero, es una importante zona productora de mamey con bajo nivel tecnolgico, por lo que su productividad y rentabilidad es incipiente. Implementar nuevas alternativas de manejo postcosecha como las temperaturas bajas de almacenamiento, con el propsito de prolongar la vida de anaquel de los frutos, sin deterioro de su calidad podra mejorar su rentabilidad. Alia et al. (2005a, 2005b) y Daz et al. (2000) probaron temperaturas contrastantes de refrigeracin en frutos de mamey a 10 y 15 C; sin embargo, los resultados sugieren la necesidad de evaluar 9

temperaturas intermedias para mejorar su eficacia y conocer el efecto que pudieran tener en la incidencia de enfermedades postcosecha. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar las temperaturas ptimas de almacenamiento de los frutos de mamey y evaluar su repercusin en la calidad postcosecha y en la incidencia de enfermedades inducidas por hongos, as como la identificacin morfolgica y molecular de los patgenos.

MATERIALES Y MTODOS Se colectaron frutos de mamey (Pouteria sapota) de rboles establecidos en la comunidad de Alpoyeca, Guerrero, Mxico, en mayo de 2006. La verificacin del momento de cosecha se realiz con base en la experiencia de los productores de la zona, quienes retiran una porcin de cscara de la base y pice del fruto para observar la coloracin naranja de la pulpa, como indicador de que el fruto est listo para cosecharse y alcanzar su madurez de consumo con calidad ptima. Los frutos se sometieron a cuatro temperaturas de almacenamiento: ambiente (25 1 C) testigo por un periodo de 7 das y 10, 13 y 15 C durante 13, 18 y 24 das de almacenamiento, con humedad relativa de 85 a 90 %. Los frutos se evaluaron a temperatura ambiente (25 1 C) a los 0, 3 y 6 das despus del almacenamiento (DDA) en cada temperatura y a 0, 3, 6 y 7 das de almacenamiento para el testigo.

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Variables de calidad

Firmeza de la pulpa Se estim con un penetrmetro Chatillon con puntal cnico de 11 mm de dimetro y 5 mm de altura, con capacidad de 0 a 12 kg. Se registraron las lecturas de cada fruto y los resultados se expresaron en kilogramos por centmetro cuadrado. Color de la pulpa Se midi a travs del valor de L* (brillo), ndice de saturacin (chroma) y ngulo de tono (hue) con un colormetro Hunter Lab, el cual indic los valores L*, a* y b*. Los cambios de color se determinaron a travs del clculo de la relacin b*/a*, para obtener el ngulo de tono (arc tan b*/a*) e ndice de saturacin [(a*2 + b*2)1/2] (McGuire, 1992). Slidos solubles totales (Brix) Se determinaron con la metodologa de la A.O.A.C. (1984) con un refractmetro digital marca ATAGO- Pelete PR-101 (0 a 45 %); el resultado se expres en unidades Brix. Acidez titulable Se midi por la tcnica de la A.O.A.C. (1984). Se licuaron 20 g de pulpa en 100 ml de agua destilada, posteriormente se titul con hidrxido de sodio al 0.1 N con pH final de 8.1 y se expres en porcentaje de cido mlico. Prdida de peso de los frutos Los frutos se pesaron en una balanza digital y el peso inicial se compar en cada fecha de evaluacin y se calcul el porcentaje de prdida de peso del fruto.

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Diseo del experimento En frutos almacenados a temperatura ambiente (caracterizacin del testigo) se uso un diseo completamente al azar, donde el tiempo de almacenamiento (0, 3, 6 y 7 das) fueron los tratamientos; se considero un fruto como unidad experimental con diez repeticiones. Para evaluar el efecto de la temperatura en frutos almacenados, se utilizo un diseo en cuadro latino; las unidades experimentales (un fruto) se ubicaron en bloques en funcin de los gradientes de variabilidad: tres tratamientos (10, 13 y 15 C), das de almacenamiento (13, 18 y 24) y DDA (0, 3 y 6) con diez repeticiones. Los tratamientos se sometieron a un anlisis de varianza (ANOVA) y distribucin de medias (Tukey P 0.05) en el programa estadstico SAS (SAS Institute, Inc., 1996).

Incidencia e identificacin de hongos en frutos

Pudricin de frutos (%) Los frutos empleados para evaluar el efecto de las temperaturas en las pudriciones, fueron los que se utilizaron en las variables de calidad. Los frutos testigo se evaluaron a los 6, 7 y 10 das de almacenamiento a temperatura ambiente (251 C). Se considero el nmero de frutos con pudriciones fungosas en la pulpa (ennegrecimiento y presencia de micelio) y se expres en porcentaje respecto al total de los frutos. Identificacin de hongos Se hizo a partir de fragmentos de pulpa con pudricin que se desinfestaron con hipoclorito de sodio al 1.5 % por tres minutos de inmersin, se lavaron en agua destilada estril durante un minuto y posteriormente fueron secados en papel estril. El material se sembr en cajas de petri de plstico con medio de cultivo de papa zanahoria 12

agar (PCA: 20 g de papa, 20 g de zanahoria, 18 g de agar, y 1000 ml de agua destilada). Las cajas se incubaron en luz negra continua con una lmpara de 40 W, a temperatura de 251 C durante el da. De los aislamientos purificados se realizaron cultivos monospricos en agar-agua (AA: 18 g de agar en 1000 ml de agua destilada), y se incrementaron en PCA. Las claves usadas para la identificacin de Pestalotiopsis fueron de Sutton (1980) para gnero y Wei et al (2005) para la especie. Para la identificacin de Lasiodiplodia se utilizaron las claves de Punithalingam (1976), Sutton (1980), y Burgess et al (2006). Imgenes para microscopia Flores de mamey inoculadas con una suspensin de 1 x 106 conidios/ml de Pestalotiopisis se fijaron en glutaraldehdo al 3 % en amortiguador de fosfatos Sorensens 0.1M pH 7.2 durante 24 horas. Los tejidos se deshidrataron en etanoles graduales (30, 40, 50, 60 y 70 %) por 1 hora en cada concentracin. Cortes longitudinales de los ptalos se hicieron en las muestras en etanol al 70 %. Posteriormente, se continu con la deshidratacin (80 90 y 100 %). Las muestras se secaron en una secadora de punto critico (Sandri-780A), se montaron sobre porta muestras con cinta adhesiva de cobre y se recubrieron con oro durante cuatro minutos en una ionizadora (Ion Sputter JFC-1100, Jeol, Fine Coat). Las muestras se observaron en un Microscopio Electrnico de Barrido (JEOL JSM 6390 ) a 15 Kv. Las imgenes de esporas de Lasiodiplodia se tomaron con un microscopio de luz (III CARL ZEISS) con cmara digital para microscopia (PAX cam 3).

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Caracterizacin molecular de aislamientos De cada cultivo monosprico de Pestalotiopsis y Lasiodiplodia se extrajo ADN con la tcnica de Ahrens y Seemller (1992). Las regiones internas ITS1 e ITS2 fueron amplificados por PCR con la combinacin de iniciadores ITS5

(GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG) / ITS4. (TCCTCCGCTTATTGATATGC) de acuerdo a los protocolos de Ahrens y Seemller (1992), con la siguiente modificacin: agua ultra pura estril (13.22 L), solucin amortiguadora TBE 1X (2.5 L), MgCl2 a 2.5 mM (2.08 L), dNTPs A 0.2 Mm (2 L), iniciadores ITS4 e ITS5 a 20 mol (2 L de cada uno), DNA polimerasa (Biogenica ) a 1 U (0.2 L) y muestra de ADN a 80 ng (1 L). El producto amplificado fue purificado con el kit Wizard (Promega ) y enviado para su secuenciacin a la facultad de Biologa Celular de la Universidad Autnoma de Mxico. Las secuencias se analizaron con el software Lasergene 2001, V5 (DNASTAR, Inc.) y se alinearon con la base de datos del Banco de Genes del Nacional Center for Biotechnology Information (NCBI), USA (www.ncbi.nlm.nih.gov/). Las secuencias con el valor ms alto de similaridad se consideraron para su comparacin con las obtenidas en este estudio. RESULTADOS Y DISCUSIN

Los frutos almacenados a temperatura ambiente alcanzaron su madurez de consumo 7 das despus de la cosecha. Los atributos de calidad como firmeza, color, slidos solubles totales, acidez y prdida de peso manifestaron cambios a travs de los das de almacenamiento (Tukey P0.05) (Cuadro 1). La firmeza de los frutos disminuy a medida que se increment el tiempo de almacenamiento de 9 kg.cm-2 en madurez

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fisiolgica a 0.3 kg.cm-2 en madurez de consumo, coincidiendo con (Daz et al., 2000 y 2003). En color hubo una disminucin en brillo, debido al oscurecimiento de la pulpa de los frutos; as como en ngulo de tono, ya que la pulpa adquiri una tonalidad ms roja en madurez de consumo, provocada por un incremento en el contenido de carotenoides, principalmente del caroteno (94 % del total de carotenoides) (Skrede, 1996; Daz et al., 2000). El ndice de saturacin no mostr variacin entre las evaluaciones. Los slidos solubles totales aumentaron de 10 Brix al inicio hasta 30 Brix en madurez de consumo. El porcentaje de cido mlico registr poca variacin, ya que el mamey es un fruto con baja acidez (Daz et al., 2000). El peso del fruto disminuy en 11.9 % por prdida de agua (Gamage y Rahman, 2003). El proceso de maduracin se asoci con el ablandamiento de la pulpa e incremento de slidos solubles (Figura 1), as como con prdida de peso y cambio en la coloracin de la pulpa de rosa plido o naranja a rosa oscuro o rojo. Estos resultados coinciden con Daz et al. (2000 y 2003).

CUADRO 1. Cambios en algunas variables de calidad postcosecha en frutos de zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn, almacenados a temperatura ambiente 251 C.
Variables Firmeza * Valor de L ndice de saturacin ngulo de tono Slidos solubles totales Acidez Prdida de peso
Valores

0 9.15 a 50.03 a 32.43 a 53.84 a 10.80 c 0.49 a 0.0 d

Das a temperatura ambiente 3 6 7 6.42 b 3.61 c 0.30 d 48.90 a 47.80 a 38.69 b 36.45 a 33.76 a 32.73 a 48.46 ab 45.85 ab 46.24 ab 19.48 b 25.28 ab 30.04 a 0.37 a 0.49 a 0.46 a 5.57 c 9.27 b 11.91 a

C.V (%) 33.59 8.05 13.96 11.47 22.37 31.67 11.29

con la misma letra dentro de cada hilera son iguales de acuerdo a la prueba de Tukey con P 0.05. Firmeza (kg . cm-2); Valor de L* (brillo); ndice de saturacin (chroma); ngulo de tono (hue); Slidos solubles totales (Brix); Acidez (% de cido mlico); Prdida de peso (%).

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10 9 Firmeza ( kg . cm-2 ) 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 3 6 7 Firmeza SST

35 30 25 Brix 20 15 10 5 0

Das despus de la cosecha Figura 1. Cambios en firmeza y slidos solubles totales en frutos de mamey conservados a 25 1 C por 7 das.

Efecto de las temperaturas bajas de almacenamiento

Firmeza de la pulpa Los frutos almacenados a 10 C presentaron mayor firmeza en todos los periodos de almacenamiento (13, 18 y 24 das); mientras que los expuestos a 13 y 15 C fueron estadsticamente iguales en casi todas las evaluaciones, excepto a los cero DDA en 13 y 24 das de refrigeracin (Cuadro 2). Los frutos refrigerados a 13 C y 15 C disminuyeron su firmeza en todas las evaluaciones (0, 3 y 6 DDA) en cada uno de los periodos de almacenamiento (Figura 2), dicho comportamiento fue similar a la firmeza obtenida en los frutos testigo. Sin embargo, los frutos a 15 C una vez que se transfirieron a temperatura ambiente mostraron una disminucin de la firmeza a partir 16

de los cero DDA y como consecuencia, presentaron una menor vida de anaquel. Por otra parte, los frutos almacenados a 10 C al no disminuir su firmeza, no alcanzaron la madurez de consumo en ninguno de los periodos de almacenamiento (13, 18 y 24 das), lo cual fue probablemente resultado de dao por fro. Resultados similares fueron observados en frutos de mamey sometidos a temperaturas de 10 C o menores (Daz et al., 2000 y 2003; Thompson, 2003).

Testigo 11 10 9 Firmeza ( kg . cm -2 ) 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 3 6 7

13 C

15 C

0 3 6 7

0 3 6 7

Das despus del almacenamiento Figura 2. Comparacin de la firmeza de frutos de mamey refrigerados a 13 y 15 C por 13, 18 y 24 das y evaluados a los 0, 3 y 6 das despus del almacenamiento con frutos conservados a temperatura ambiente a 25 1 C por 7 das.

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Color de la pulpa Los frutos almacenados a 10 C mostraron los valores mayores de brillo (valor de L*), debido a que los frutos no maduraron de manera normal. Por otra parte, los frutos almacenados a 13 y 15 C fueron estadsticamente iguales a los 13 das de almacenamiento en los cero DDA y a los 18 das de almacenamiento en 3 y 6 DDA, en el resto de los das los frutos a 15 C registraron un brillo menor (Cuadro 2). La disminucin del brillo en frutos refrigerados a 15 C pudo deberse al oscurecimiento de la pulpa, ya que stos estaban en estado senescente. Se observaron resultados similares en frutos de mamey almacenados a una temperatura de 15 C (Alia et al., 2005b). En el ndice de saturacin, tambin llamado chroma, se observ que, a 13 y 18 das de almacenamiento los frutos presentaron una pureza similar del color en los tratamientos de 10, 13 y 15 C; sin embargo, los frutos mantenidos a 10 C sufrieron los cambios menores a 24 das de almacenamiento (Cuadro 2). Alia et al. (2002), Indicaron que el ndice de saturacin de los frutos disminuye a medida que los frutos maduran, ya que la pulpa se opaca y obscurece. Los frutos expuestos a 15 C sufrieron los cambios mayores a los 24 das de almacenamiento, provocados por el avanzado estado de senescencia de los mismos. En ngulo de tono (hue), los frutos almacenados a 10, 13 y 15 C fueron estadsticamente iguales, aunque con una tendencia a disminuir hue en todos los tratamientos, debido a que la pulpa de los frutos adquiri una tonalidad ms roja (Cuadro 2). Este comportamiento tambin fue observado por Daz et al. (2000) y Alia et al. (2007). La disminucin del ngulo de tono se debe a la sntesis de carotenoides (colores amarillos y anaranjados) durante el proceso de maduracin de algunos frutos (Gamage y Rahman, 2003).

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Slidos solubles totales Los slidos solubles totales (Brix) aumentaron durante el almacenamiento y presentaron diferencias significativas entre tratamientos. Los frutos almacenados a 15 y 13 C mostraron mayor valor en el contenido de slidos solubles totales y a 10 C se present el menor valor; a excepcin de los 13 das de almacenamiento en 0 y 6 DDA y 18 das a los 3 DDA, donde los slidos solubles totales de los frutos a 10 C fueron similares a 13 y 15 C (Tukey P0.05) (Cuadro 3). Los frutos almacenados a 13 y 15 C, iniciaron con 11 Brix y terminaron en un intervalo de 29 a 33 en madurez de consumo, estos resultados fueron similares a los frutos almacenados a temperatura ambiente 251 C: De manera similar, Daz et al. (2000, 2001 y 2003), mencionan que el contenido de slidos solubles totales en la madurez de consumo de los frutos de mamey puede fluctuar de 27 a 36 Brix. Los frutos almacenados a 10 C no alcanzaron la madurez de consumo, lo cual influy en la concentracin de azcares.

Acidez La acidez evaluada en cido mlico, que se encuentra en mayor concentracin en frutos de mamey (Thompson, 2003), no fue afectada por el almacenamiento a 10, 13 y 15 C (Cuadro 3). Villanueva et al. (2000), Thompson, (2003) y Alia et al. (2007), mencionaron que el mamey es un fruto con bajo porcentaje de acidez y generalmente decrece durante el proceso de maduracin. El contenido inicial de cido mlico fue de 0.49 % y 0.25 % el mnimo. Valores similares de cido mlico fueron observados en frutos de mamey almacenados a 5, 10 y 15 C (Alia et al. 2001). El porcentaje menor de acidez se present en frutos expuestos a 10 C y el mayor se registr en evaluaciones

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realizadas a 24 das de almacenamiento en las tres temperaturas (10, 13 y 15 C) (Cuadro 3).

Prdida de peso de los frutos Se encontraron diferencias significativas entre tratamientos (Tukey P0.05) a travs de los periodos de almacenamiento. Los frutos almacenados a 15 C presentaron la mayor prdida de peso (23 %) con respecto a los dems tratamientos. En contraste, las prdida menor de peso la mostraron frutos refrigerados a 10 C (5 a 14 %) y 13 C (9 a 18 %), ambos tratamientos fueron estadsticamente diferentes en cada una de las evaluaciones, excepto a los cero DDA en 13 das de refrigeracin (Cuadro 3). Alia et al. (2007), mencionaron que frutos de mamey almacenados entre 10 y 15 C y 90 % de humedad relativa se disminuye la prdida de peso al reducir y mantener una transpiracin menor. El tratamiento de 13 C fue la mejor temperatura de almacenamiento en comparacin con 10 y 15 C, ya que los frutos maduraron de forma similar a los expuestos a temperatura ambiente (251 C); con buena apariencia visual y calidad comercial, misma que se prolong hasta los 24 das de refrigeracin y tres DDA. Resultados similares fueron reportados por Kader (2002) y Thompson (2003). Los frutos almacenados a 10 C mostraron la menor prdida de peso; sin embargo, los frutos presentaron maduracin desigual.

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CUADRO 2. Efecto de las temperaturas y periodos de almacenamiento refrigerado en algunas variables de calidad postcosecha de frutos de zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn.
Temperatura (C) 13 das de refrigerado 18 das de refrigerado 24 das de refrigerado

Das a 25 1 C despus del almacenamiento refrigerado 0 Firmeza 10 13 15 C.V (%) Valor de L 10 13 15 C.V (%) 10 13 15 C.V (%) ngulo de tono 10 13 15 C.V (%)
Valores *

9.86 a 9.69 a 4.88 b 34.82 48.1 a 47.3 a 45.5 a 12.64 29.2 a 30.6 a 32.7 a 14.67 50.9 a 50.2 a 54.3 a 15.85

9.42 a 6.13 b 3.38 b 41.31 48.1 a 46.3 ab 43.8 b 7.87 34.8 a 36.5 a 37.4 a 9.36 47.3 a 50.4 a 48.3 a 10.79

5.00 a 0.70 b 0.50 b 98.80 43.4 a 38.5 b 41.6 ab 8.81 35.2 a 35.5 a 35.2 a 13.53 49.0 a 41.6 a 50.2 a 12.79

10.86 a 3.39 b 1.12 b 52.40 48.6 a 44.0 ab 43.4 b 10.07 33.3 a 32.4 a 33.1 a 11.49 51.4 a 54.5 a 57.1 a 13.77

10.28 a 1.73 b 0.76 b 46.38 44.6 a 43.8 a 43.3 a 8.76 35.5 a 33.8 a 31.8 a 14.45 48.4 a 50.5 a 52.7 a 13.23

4.22 a 0.22 b 0.18 b 132.48 44.1 a 43.8 a 43.3 a 8.06 32.0 a 30.2 a 30.6 a 16.55 49.5 a 47.1 a 51.8 a 13.20

8.56 a 5.40 b 0.19 c 58.96 46.2 a 43.77ab 39.55 b 10.04 31.5 a 27.6 ab 27.1 b 12.42 51.2 a 51.8 a 51.2 a 10.95

6.80 a 0.84 b 0.23 b 87.25 48.6 a 42.8 b 35.3 c 8.47 43.6 a 42.8 b 35.3 c 12.83 51.0 a 50.3 a 50.1 a 12.7

5.23 a 0.19 b 0.14 b 109.30 44.3 a 41.2 ab 35.8 b 16.36 30.6 a 27.8 a 27.3 a 13.38 46.3 a 51.3 a 55.8 a 16.78

ndice de saturacin

con la misma letra dentro de cada columna son iguales de acuerdo a la prueba de Tukey con -2 * P 0.05; Firmeza (kg.cm ); Valor de L (brillo); ndice de saturacin (chroma); ngulo de tono (hue).

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CUADRO 3. Efecto de las temperaturas y periodos de almacenamiento refrigerado en algunas variables de calidad postcosecha de frutos de zapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn.
Temperatura (C) 13 das de refrigerado 18 das de refrigerado 24 das de refrigerado

Das a 25 1 C despus del almacenamiento refrigerado 0 Slidos solubles totales 10 13 15 C.V (%) Acidez 10 13 15 C.V (%) Prdida de peso 10 13 15 C.V (%)
Valores

19.8 a 23.9 a 22.5 a 18.15 0.44 a 0.49 a 0.43 a 20.33 5.1 a 9.1 a 10.8 a 16.98

20.2 b 28.3 a 28.3 a 11.26 0.41 a 0.43 a 0.42 a 24.83 7.5 c 7.6 b 13.2 a 15.00

27.9 a 29.8 a 30.4 a 11.17 0.27 a 0.30 a 0.36 a 26.51 9.7 c 12.5 b 15.6 a 16.26

21.4 b 26.3 a 30.9 a 16.17 0.35 a 0.31 a 0.38 a 30.76 7.07 b 12.2 a 13.5 a 13.83

27.4 a 28.4 a 29.2 a 8.34 0.25 b 0.28 ab 0.36 a 32.38 10.3 b 14.7 a 15.7 a 13.53

27.4 b 29.5 ab 31.2 a 11.53 0.36 ab 0.30 b 0.42 a 27.41 12.7 b 18.1 a 17.7 a 19.06

21.2 b 26.7 a 29.8 a 17.69 0.45 a 0.46 a 0.38 a 26.69 8.4 c 14.1 b 18.0 a 14.21

25.1 b 31.9 a 33.5 a 12.36 0.46 a 0.44 a 0.41 a 27.67 11.7 c 16.8 b 20.7 a 14.90

29.6 b 31.0 ab 32.9 a 9.17 0.46 a 0.44 a 0.44 a 25.66 13.7 c 18.4 b 23.0 a 13.59

con la misma letra dentro de cada columna son iguales de acuerdo a la prueba de Tukey con P 0.05; Slidos solubles totales (Brix); Acidez (% de cido mlico); Prdida de peso (%).

Incidencia e identificacin de hongos en frutos Los frutos de mamey almacenados a 10 C por 18 y 24 das mostraron 10 % de pudriciones en la ltima evaluacin (6 DDA). Los frutos refrigerados a 13 C presentaron 10 % de pudricin a los 18 das de almacenamiento y de 10 a 30 % a los 24 das; en ambos casos las pudriciones se presentaron a los 3 y 6 DDA. Los frutos a 15 C desarrollaron de 10 a 50 % de pudriciones en todos los periodos de almacenamiento (13, 18 y 24 das) en las evaluaciones a 0, 3 y 6 DDA (Figura 3). Por 22

otra parte, los frutos testigo presentaron 100 % de pudricin a los 10 das de almacenamiento. Las pudriciones en los frutos iniciaron con la presencia de micelio de color blanco cerca de la base del pednculo y posteriormente se extendi a todo el fruto, principalmente entre la pulpa y la cscara; a medida que los frutos maduraron y entraron en senescencia, la pulpa se torn de color negro y posteriormente se desarroll una pudricin total. De los aislamientos realizados se identific a Lasiodiplodia theobromae y Pestalotiopsis paeoniicola, cuyo hongo no ha sido reportado en frutos de mamey. L. theobromae (Figura 4), desarroll abundante micelio, septado, ramificado y de color gris oscuro a negro. Los conidios fueron inicialmente unicelulares hialinos, granulosos, subovoides a elipsoides oblongos con pared delgada y base truncada; al madurar desarrollaron una pared gruesa y septa a la mitad, color caf oscuro y frecuentemente estriados longitudinalmente, 20.5-26.8 x 12.4-15.0 m (media 24.4 x 14.1 m). Estas observaciones coincidieron con Punithalingam (1976), Sutton (1980), Burgess et al. (2006). P. paeoniicola present micelio superficial, septado y ramificado. Acrvulos con masas de esporas negras conspicuas y errumpentes de forma oval o irregular. Conidios con 5 clulas, fusiformes, alargados o ligeramente curveados en la mitad, 18.3-27.8 x 6.3-7.9m (media 24.9 x 7.15 m); 3 clulas intermedias, 13.5 - 19.1 m (media 17 m); 2 a 3 apndices apicales sin ramificaciones, 15.8 - 27.5 m (media 22.6 m) de largo; 1 apndice basal cntrico no ramificado, 3.41 - 6.26 m (media 5.0 m) de largo (Figura 5). Sutton (1980), Guang et al. (2005), Keith et al. (2006) y Liu et al. (2007) registraron medidas similares de los conidios. Lasiodiplodia spp. y Pestalotiopsis spp. pueden desarrollarse a temperaturas de 15 a 30C (Bautista et al., 2002; Sommer et al., 2002), y su temperatura ptima de desarrollo es de 25 a 30 C para Lasiodiplodia (Zhang y Swingle, 2005; Bautista et al., 2002) y de 23

22 a 28 C para Pestalotiopsis (Keith et al., 2006). Estos resultados explican el porqu los frutos almacenados 15 C manifestaron mayor pudricin que a 10 y 13 C. Las pudriciones de frutos almacenados a 13 C ocurrieron debido al estado avanzado de madurez de los frutos. Pestalotiopsis spp. y Lasiodiplodia spp. pueden ser patgenos oportunistas que atacan bajo condiciones de estrs o en rganos deteriorados de las plantas (Sommer et al., 2002; Keith et al., 2006 y Guang et al., 2007). Por otra parte, los frutos almacenados a 10 C presentaron la menor proporcin de pudriciones; sin embargo, la calidad de la pulpa no fue apta para el consumo.

Caracterizacin molecular Los hongos fueron depositados en el banco de genes (NCBI) para su homologacin; Pestalotiopsis spp. con nmero de acceso EU400221 present 99 % de similitud con P. paeoniicola y Lasiodiplodia spp. con nmero de acceso AY662402.1 tuvo 99 % de similitud con L. theobromae.
60 Pudricin de frutos (%) 50 40 30 20 10 0 0 3 13 das 6 0 3 18 das Das despus del almacenamiento Figura 3. Porcentaje de frutos con pudricin por Lasiodiplodia theobromae y Pestalotiopsis paeoniicola en frutos de zapote mamey almacenados a diferentes temperaturas durante 13, 18 y 24 das y evaluados a 0, 3 y 6 das despus del almacenamiento a 25 1 C. 6 0 3 24 das 6 10 C 13 C 15 C

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Figura 4. Lasiodiplodia theobromae: A, conidios inmaduros; B, conidios maduros.

Figura 5. Estructuras de Pestalotiopsis paeoniicola: A, conidios y micelio; B, conidios maduros; C, seccin vertical de un acrvulo; D, conidiforos y conidios maduros e inmaduros.

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CONCLUSIONES Los frutos almacenados a 15 C y 13 C, no se afectaron en su proceso de maduracin; sin embargo, despus de 13 das de almacenamiento los frutos a 15 C entraron en senescencia y presentaron la mayor pudricin de frutos. Por otra parte, los frutos almacenados a 13 C fue la mejor temperatura, ya que se retard la maduracin hasta los 24 das de refrigeracin y 3 DDA; la pulpa de los frutos mostr caractersticas en firmeza, color (valor de L* (brillo), ndice de saturacin (chroma) y ngulo de tono (hue), slidos solubles totales (Brix) y acidez, as como prdida de peso en fruto, similares a las obtenidas en los frutos testigo en madurez de consumo (7 das de almacenamiento); la pudricin de frutos se inici a los 18 das y el dao fue de solo 10 % hasta los 24 das de refrigeracin y 3 DDA. Los frutos expuestos a 10 C mostraron maduracin desigual despus de exponerse a temperatura ambiente y no hubo cambios deseables en firmeza, color y slidos solubles totales; esto provoc que los frutos no alcanzaran la calidad de consumo. Los frutos testigo a los 10 das de almacenamiento presentaron 100 % de pudricin. En base a sus caractersticas morfolgicas y moleculares, los hongos asociados a pudricin de fruto se identificaron como Pestalotiopsis paeoniicola y Lasiodiplodia theobromae.

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CAPTULO II. TCNICAS DE COSECHA DEL SAPOTE MAMEY (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn) Y SU IMPACTO EN LA CALIDAD POSTCOSECHA

RESUMEN En Mxico la mayora de los rboles de mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn) tienen una altura mayor a 10 m, por lo que al momento de la cosecha se producen daos mecnicos en los frutos que disminuyen su calidad. Cinco tcnicas de cosecha se evaluaron para medir su efecto en la calidad postcosecha de los frutos: T1) Frutos cosechados manualmente sin golpearse y empacados individualmente en cajas de cartn, T2) Frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a una persona que los captura con un costal de yute y empacados en caja de plstico, T3) Frutos lanzados desde 5 a 10 m a un colchn sobre el suelo y empacados en caja de plstico, T4) Frutos lanzados desde 4 m a suelo hmedo y empacados en caja de plstico, y T5) Frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (sistema de cosecha ms utilizado), donde los frutos son presionados y pisados con la finalidad de forzar el acomodo de estos en el costal. Los frutos se almacenaron a temperatura ambiente (251 C). La calidad de los frutos se evalu a 1, 3, 5, 7 y 9 das despus de la cosecha (DDC). El tratamiento T1 registr la mayor firmeza en madurez de consumo (7 y 9 DDC) y menor actividad de pectinmetilesterasa; as como la mejor coloracin de la pulpa, basada en mayores valores de L*, chroma y hue, y menor contenido de slidos solubles totales (Brix). No hubo diferencias en porcentaje de cido mlico y prdida de peso entre tratamientos. Las tcnicas de cosecha T2 y T3 fueron el segundo y tercer mejor tratamiento. En otro experimento, el efecto del Carbendazim en la pudricin de frutos fue evaluado en los tratamientos T1 y T5. La incidencia de pudriciones se evalu a 6, 8, 9 y 10 DDC. La pudricin de frutos con y sin Carbendazim fue del 20 % en 9 y 10 DDC en T1 y de 80 a 100 % a 8, 9 y 10 DDC en T5. En base a sus caractersticas morfolgicas y moleculares los hongos que indujeron pudriciones en frutos se identificaron como Pestalotiopsis paeoniicola y Lasiodiplodia theobromae.

Palabras clave: cosecha, calidad, pudricin, hongos, fungicida.

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HARVEST TECHNIQUES OF SAPOTE MAMEY (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn) AND THEIR IMPACT IN POSTHARVEST QUALITY

ABSTRACT In Mxico, most of sapote mamey (Pouteria sapota (Jacq.) H. E. Moore and Stearn) trees are taller than 10 m. Fruits are harvested by hand and dropped on the floor producing mechanical damage. Five harvest techniques were evaluated in terms of postharvest fruit quality: T1) Hand collected fruits, without dropping, and individually packed in carton boxes. T2) Hand collected fruits dropped from 5-10 m catched by a collector on the ground and packed in plastic boxes. T3) Hand collected fruits dropped on a matress from 5-10 m and packed in plastic boxes. T4) Hand collected fruits dropped from 4 m into bare soil and packed in plastic boxes and T5) Hand collected fruits as in T2 but packed in yute bags (conventional system), where the fruits are pressed and trodden to force their accommodation in the bags. Fruits were stored at room temperature (251 C). Fruit quality was evaluated at 1, 3, 5, 7 and 9 days after harvest (DAH). Fruits in T1 showed the highest firmness during consumtion maturity (7 and 9 DAH), low pectinmethylsterase activity, the best color based on L*, chroma, hue and low solid soluble totals (Brix). There were no significant differences among treatments for malic acid percent and weight loss. T2 and T3 were the second and third better treatment. In other experiment, the effect of Carbendazim on fruit rot was additionally evaluated on treatments T1 and T5. Fruit rot incidence was evaluated from 6, 8, 9 and 10 DAH. Fruit rot with and without Carbendazim was 20 % from 9 to 10 DAH in T1 and from 80 to 100 % from 8 to 10 DAH in T5. Based on morphological and molecular characterization, the causal agents of fruit rot were identified as Pestalotiopsis paeoniicola and Lasiodiplodia theobromae.

Key words: harvest, quality, fruit rot, fungi, fungicide.

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INTRODUCCIN El zapote mamey (Pouteria sapota) es un rbol frutal tropical originario de las regiones bajas hmedas y calientes de Centro Amrica y sur de Mxico, de donde se difundi al Caribe, Amrica del Sur, Hawai y Filipinas (Rodrguez y Gurdian, 1986). La aceptacin de esta fruta en Mxico es limitada frecuentemente por problemas de calidad, maduracin, ablandamiento irregular, poco desarrollo del color y pudriciones internas inducidas por hongos y plagas insectiles de importancia cuarentenaria (Anastrepha spp.), por lo que la comercializacin se realiza principalmente en el mercado nacional (Daz-Prez et al., 2001; Villanueva et al., 2001). Importante prdida de la calidad de la fruta se atribuye a los golpes que se producen por la manipulacin en cosecha y postcosecha (Balerdi et al., 2005; Proulx et al., 2005). Los daos en los frutos estimulan la sntesis de etileno y aceleran la respiracin, maduracin y senescencia, adems de facilitar la entrada de patgenos (agrietamiento de la corteza) y causar oxidaciones por ruptura celular (abrasiones). Los daos en la pulpa por compresin e impacto deterioran la fruta, disminuyen la vida de anaquel y su calidad en los canales de distribucin comercial (Gil, 2001; Kader, 2002). Las magulladuras constituyen el dao mecnico de postcosecha ms comn en la mayora de las frutas, que resulta del impacto y vibracin durante el embalaje, transporte y almacenamiento (Zeebroeck et al., 2006). En la zona de estudio (Alpoyeca, Guerrero) la gran mayora de los rboles son de porte alto, por lo que al momento de la cosecha obliga a los cosechadores a subirse a las ramas y de ah los frutos son lanzados al suelo para que una persona los capture con un costal de yute, o bien, estos se dejan caer directamente al suelo. Cuando los frutos de mamey llegan al mercado, frecuentemente presentan poca calidad; sin embargo, en el caso del mamey, debido a que la corteza presenta la 33

misma apariencia desde fruto joven y con madurez de corte, esta se manifiesta visualmente solo hasta el momento en que se abre el fruto y se visualizan daos internos por golpes y pudriciones. Los hongos Colletotrichum gloeosporioides, Pestalotia spp. y Lasiodiplodia spp. se han asociado como inductores de pudricin de fruto de mamey (Bautista-Baos et al., 2002; Mossler y Nesheim, 2002; Balerdi et al., 2005; Azurdia, 2006) . No se han encontrado reportes de tratamientos postcosecha con fungicidas para el control de enfermedades fungosas en frutos de mamey; por otra parte, se ha observado que el fungicida Carbendazim ha mostrado eficaz control contra hongos postcosecha como Colletotrichum spp., Botrytis sp., Alternaria spp.,

Lasiodiplodia spp. y Penicillium spp., en diversos cultivos (de los Santos y Romero, 2002; Khanzada et al., 2005; Greene y Pohanish, 2005; Medina et al., 2007). Debido a los daos mecnicos y pudriciones en los frutos, el mercado del mamey se ve afectado por la desconfianza e incertidumbre en los consumidores para adquirir esta fruta. DiazPerez et al. (2000), Bautista-Baos et al. (2002) y Alia-Tejacal et al. (2007) realizaron estudios de calidad postcosecha del mamey; pero, no se ha precisado an de qu manera es afectada por los sistemas de cosecha y empaque que comnmente se utilizan. El objetivo de este trabajo fue definir el efecto de diferentes tcnicas de cosecha en la calidad postcosecha del mamey y en la incidencia de enfermedades fungosas, para lo cual se evaluaron dos experimentos.

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MATERIALES Y MTODOS Experimento 1 (tcnicas de cosecha) Se colectaron 125 frutos de mamey en huertos comerciales de Alpoyeca, Guerrero, Mxico. El ndice de cosecha se realiz con base al sistema utilizado en la regin, el cual consisti en retirar una porcin de cscara de la base y pice del fruto para observar la coloracin rosa o naranja de la pulpa, como indicador de que el fruto ha alcanzado su madurez fisiolgica para ser cosechado. Se evaluaron cuatro tcnicas de corte y empaque de mamey utilizados en la comunidad, y se compararon con un sistema de cosecha y empaque no convencional. Se evaluaron cinco tratamientos experimentales: T1) cosecha no convencional: frutos cosechados manualmente sin golpearse y empacados individualmente en cajas de cartn, T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a una persona que los captura con un costal de yute ( siendo este mtodo el ms utilizado en los rboles grandes) y empacados a granel en una caja de plstico, T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico, T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo (cuyo sistema se utiliza en rboles de poca altura) y empacados a granel en una caja de plstico, y T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado), el cual es el nico sistema de empaque, en donde los frutos son presionados y pisados con la finalidad de forzar el acomodo de los frutos en el costal y que este alcance un peso aproximado de 90 kg. Los frutos se mantuvieron a temperatura ambiente 251 C y evaluaron a 1, 3, 5, 7 y 9 das despus de la cosecha (DDC).

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Variables evaluadas

Firmeza de la pulpa Se estim con un penetrmetro Chatillon con puntal cnico de 11 mm de dimetro y 5 mm de altura, con capacidad de 0 a 12 kg. Las lecturas de cada fruto se expresaron en Newtons (N). Pectinmetilesterasa (PME) La actividad de la enzima se midi por el mtodo de Ranganna (1979). Se homogeneizaron 10 g de pulpa con 40 mL de solucin de pectina ctrica (1 %); la mezcla se neutraliz (pH 7.5) con NaOH (0.2N) y se incub (30 C). La solucin se valor (pH 7.5) con NaOH (0.01N) cada 10 minutos durante media hora. La actividad de la PME se registr en miligramos de metoxilo desdoblados por gramo de muestra y en los slidos solubles totales o Brix (mg metoxilo 10 g-1). Color de la pulpa Se midi a travs del valor de L* (brillo), ndice de saturacin (chroma) y ngulo de tono (hue) con un colormetro Hunter Lab, el cual indic los valores L*, a* y b*. Los cambios de color se determinaron a travs del clculo de la relacin b */a*, para obtener el ngulo de tono (arc tan b*/a*) e ndice de saturacin [(a*2 + b*2)1/2] (McGuire, 1992). Acidez titulable Se obtuvo por medio de la tcnica de la A.O.A.C. (1984). Se licuaron 20 g de pulpa en 100 mL de agua destilada, posteriormente se titul con NaOH (0.1 N) con pH final de 8.1 para calcular el porcentaje de cido mlico.

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Slidos solubles totales (Brix) Se determinaron con un refractmetro digital ATAGO- Pelete PR-101 (0 a 45 %); el resultado se expres en Brix (A.O.A.C, 1984). Prdida de peso de los frutos Los frutos se pesaron en una balanza digital y el peso inicial se compar con el registrado en cada fecha de evaluacin y se calcul el porcentaje final de prdida. Diseo del experimento La unidad experimental estuvo compuesta por un fruto y 4 repeticiones (grupos de 5 frutos) por tratamiento y fecha de evaluacin. Se uso un diseo completamente al azar. Los tratamientos se sometieron a un anlisis de varianza (ANOVA) y distribucin de medias (Tukey P0.05) utilizando el programa estadstico SAS (SAS Institute, Inc., 1996).

Experimento 2 (tratamientos de manejo postcosecha) Se compararon dos tcnicas de cosecha combinadas con un tratamiento postcosecha con el fungicida sistmico Carbendazim (Bavistin). Los tratamientos fueron: 1) frutos cosechados manualmente sin golpearse y empacados individualmente en cajas de cartn (empacados) sin Carbendazim, 2) empacados ms tratamiento por inmersin con Carbendazim a 300 ppm por 10 minutos, 3) frutos lanzados sobre suelo hmedo a una altura de 4 metros (golpeados) y depositados en un costal de yute sin Carbendazim y 4) golpeados ms Carbendazim igual que el tratamiento 2. Los cinco frutos evaluados en cada tratamiento se mantuvieron a 251 C y evaluaron a 6, 8, 9 y

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10 das despus de la cosecha (DDC). Se registr la incidencia (%) de pudriciones fungosas de la pulpa (ennegrecimiento y presencia de micelio).

Identificacin de hongos Cuatro fragmentos de pulpa con pudricin por fruto se colectaron y desinfestaron con hipoclorito de sodio al 1.5 % por tres minutos de inmersin, se lavaron en agua destilada estril durante un minuto y posteriormente fueron secados en papel estril. Los fragmentos se sembraron en cajas Petri con medio de cultivo a base de papa zanahoria agar (PCA) (20 g de papa, 20 g de zanahoria, 18 g de agar y 1000 mL de agua destilada). Las cajas se incubaron en luz negra continua con una lmpara de 40 W, a temperatura de 251 C. De los aislamientos obtenidos y purificados en PCA se realizaron cultivos monospricos en agar-agua (18 g de agar en 1000 mL de agua destilada) e incrementaron en PCA. La identificacin de hongos se realiz con las claves de Guba (1961), Punithalingam (1976), Sutton (1980), Wei et al. (2005) y Burgess et al. (2006) para gneros y especies.

Caracterizacin molecular de aislamientos De cada cultivo monosprico de Pestalotiopsis y Lasiodiplodia se extrajo ADN con la tcnica de Ahrens y Seemller (1992), su calidad se verific por electroforesis en gel de agarosa al 1% (Agarose Ultra Pure, Invitrogen) y cuantific en un espectrofotmetro Perkin Elmer (Modelo Lambda Bio 10). Las regiones internas ITS1 e ITS2 entre los genes ribosomales (rADN) localizadas entre la subunidad pequea 18S-5.8S y la subunidad larga 5.8S-28S se amplificaron por PCR con la combinacin de los iniciadores ITS5 (GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG) y ITS4. 38

(TCCTCCGCTTATTGATATGC). La amplificacin y visualizacin de productos finales se realiz de acuerdo a los protocolos de Ahrens y Seemller (1992), con modificaciones en las reacciones de PCR cuyo volumen final fue de 25 L [ agua ultra pura estril (13.22 L), solucin amortiguadora TBE 1X (2.5 L), MgCl 2 a 2.5 mM (2.08 L), dNTPs a 0.2 Mm (2 L), iniciadores ITS4 e ITS5 a 20 mol (2 L de cada uno), DNA polimerasa (Biogenica ) a 1 U (0.2 L) y muestra de ADN a 80 ng (1 L)]. El producto amplificado fue purificado con el kit Wizard (Promega ) y enviada para su secuenciacin a la facultad de Biologa Celular de la Universidad Autnoma de Mxico. La secuenciacin se obtuvo a travs del secuenciador Genetic Analizer (modelo 3100 Applied Biosystem). Las secuencias se analizaron con el software Lasergene 2001, V5 (DNASTAR, Inc.) y se alinearon con la base de datos del Banco de Genes del Nacional Center for Biotechnology Information (NCBI), USA (www.ncbi.nlm.nih.gov/). Las secuencias con valor ms alto de similaridad se consideraron para su comparacin con las obtenidas en el estudio.

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RESULTADOS Y DISCUSIN Experimento 1 (tcnicas de cosecha)

Firmeza de la pulpa

Los frutos cosechados manualmente y empaque de cartn, capturados con costal y empaque de plstico, lanzados sobre un colchn y empaque plstico, lanzados a suelo hmedo y empaque de plstico, y capturados con costal y empacados en costal (encostalados) fueron estadsticamente diferentes solo en las evaluaciones realizadas a 7 y 9 das despus de la cosecha (P0.05) (Cuadro 1). Los frutos cosechados manualmente y depositados individualmente en empaque de cartn mostraron la mayor firmeza en todas las evaluaciones, seguido por los capturados con costal y empacados en caja de plstico (Figura 1). Los frutos cosechados manualmente presentaron la mejor firmeza debido a que no sufrieron golpes, magulladuras o friccin entre frutos; ya que al evitar golpes en los frutos durante la cosecha y utilizar empaques que eviten el rozamiento entre frutos se minimiza el deterioro y se alarga la vida postcosecha (Tung et al., 2001). Los frutos que sufrieron algn tipo de dao mecnico como los capturados en costal, lanzados sobre el colchn, lanzados al suelo y encostalados, presentaron la menor firmeza. Se ha reportado que los daos mecnicos en frutos de durazno, ciruela, nectarina (Prunus spp.) y pera (Pyrus pyrifolia) disminuyen significativamente su firmeza (Serrano et al., 2004; Amorim et al., 2007; Zhou et al., 2007). Los frutos proyectados sobre el suelo y encostalados maduraron a los 7 DDC y a los 9 entraron en senescencia, mientras que los frutos empacados en cajas de cartn a los 9 DDC estaban en madurez de consumo. Roos (2001) y Kader (2002) mencionaron que los 40

daos mecnicos disminuyen la firmeza de los frutos al acelerar la prdida de agua, estimular la produccin de CO2, etileno y afectar sus propiedades fsicas y qumicas como la textura, olor, color y el valor nutritivo. Esto disminuye la calidad apreciada por el consumidor (Kays, 1999; Zeebroeck et al., 2006)

Pectinmetilesterasa Los frutos cosechados manualmente y empacados en cajas de cartn presentaron la menor actividad de PME y fueron estadsticamente diferentes (P0.05) al resto de los tratamientos en los 7 y 9 DDC (Cuadro 1). En general, la actividad de la PME se increment a medida que los frutos maduraron (Figura 1). Los frutos cosechados manualmente mostraron la mejor textura en madurez de consumo, ya que la actividad de la PME fue menor al resto de los tratamientos. Thompson (2003) y An et al. (2005) mencionaron que la PME presenta mayor actividad durante la maduracin, al romper los enlaces metil ester de las pectinas, las cuales son polisacridos estructurales de la pared celular de los frutos, que juegan importante papel en la maduracin e influyen en la textura de los frutos, al favorecer la prdida de cohesin de las clulas. Por otra parte, los frutos que mostraron mayor actividad de la PME fueron los frutos encostalados, lanzados al suelo, capturados en costal y lanzados sobre un colchn respectivamente (Figura 1), este incremento enzimtico se vio reflejado en una textura de menor consistencia y pronta maduracin a partir de los 7 DDC. Ali et al (2004a) determinaron que a medida que disminuy la firmeza de frutos de carambola (Averrhoa carambola) se increment la actividad de la PME. Resultados similares fueron reportados en zapote negro (Diospyros digyna), mango (Mangifera indica) y guayaba (Psidium guajava ) por (Ali et al., 2004b; Arellano-Gmez et al., 2005). 41

44 42 40 38 36 34 32 30 28 26 24 22 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 17

(A)
T1 T2 T3
T4 T5

Firmeza (N)

Actividad de PME (mg de metoxilo 10 g -1)

16 15
14

(B)

13
12

11
10

9
8 1 3 5 7 9

Das despus de la cosecha

Figura 1. (A) Cambios en firmeza y (B) pectinmetilesterasa (PME) en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das, cosechados con diferentes tcnicas: T1) frutos cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Las barras verticales indican el error estndar de la media.

42

Color de la pulpa Los frutos de mamey cosechados manualmente y empacados encajas de cartn mostraron los valores mayores de brillantez (valor de L*), ndice de saturacin (chroma) y ngulo de tono (hue) en madurez de consumo (7 y 9 DDC) en comparacin con los frutos capturados en costal y lanzados sobre un colchn, lanzados al suelo y encostalados (P0.05) (Cuadro 1). Debido a que los frutos cosechados manualmente no sufrieron dao mecnico, la pulpa present ms brillo, mayor intensidad de color (chroma) y mejor tonalidad rojiza (hue) (Figura 2). Despus de los frutos cosechados manualmente, los capturados en costal y lanzados sobre un colchn mostraron mejor color que los tratamientos restantes, ya que los daos por golpes fueron menores. Tabil y Sokhansanj (2001) mencionaron que el efecto de los daos mecnicos se relacionan directamente con la intensidad del golpe de la fruta durante la cosecha, lo cual provoca oscurecimiento y decoloracin de la pulpa por oxidacin enzimtica de compuestos fenolicos inducidos por la accin de la enzima polifenol oxidasa. En los frutos lanzados al suelo y encostalados se disminuy el brillo, intensidad del color y ngulo de tono, debido al oscurecimiento de la pulpa., estos frutos maduraron ms rpido y a 9 DDC entraron en senescencia. Los golpes y abrasiones en los frutos producidas en la cosecha aceleran la senescencia como previamente fue sealada (Wills et al., 1998; Diaz-Prez et al., 2000).

43

65

(A)
60

Brillo (valor de L*)

55 50 45 40 35 30 40 38
36 34

T1 T2 T3 T4 T5

(B)

Chroma

32
30

28 26
24

22
53

(C)

48
Hue
43

38
33

28
1 3 5 7 9 Das despus de la cosecha
Figura 2. Cambios en color de la pulpa: (A) Brillo, (B) Chroma y (C) hue en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das, cosechados con diferentes tcnicas: T1) frutos cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Las barras verticales indican el error estndar de la media.

44

Cuadro 1. Efecto de tcnicas de cosecha del zapote mamey (Pouteria sapota) en algunos parmetros de calidad postcosecha.
Tratamientos

Das despus de la cosecha (DDC) a 251 C 3 5 7 9 37 a 32.01 a 38.29 a 39.7 a 39 a 16.048 11.24 a 12.40 a 12.32 a 13.90 a 12.09 a 32.761 56.23 a 54.36 a 54.90 a 55.93 a 57.88 a 9.426 32.08 b 36.75 a 33.72 ab 32.58 b 33.76 ab 5.789 51.06 a 46.57 a 48.10 a 51.78 a 52.78 a 9.092 5.16 a 5 a 2.84 a 0.76 a 4.27 a 84.01 11.49 a 11.19 a 11.15 a 10.33 a 13.27 a 38.604 41.89 ab 43.43 a 43.87 a 38.55 ab 36.12 b 9.202 37.48 a 31.14 a 33.58 a 34.87 a 31.99 a 11.091 41.49 a 39.30 a 36.40 a 36.35 a 37.36 a 10.575 2.25 a 1.53 b 0.39 c 0.47 c 0.31 c 37.436 11.79 c 12.31 bc 12.08 bc 13.73 ab 14.36 a 7.941 40.75 a 37.18 ab 40.94 a 33.95 b 33.95 b 8.014 35.59 a 34.59 a 33.11 ab 29.10 bc 26.70 c 8.310 39.70 a 38.69 a 35.43 a 37.99 a 36.22 a 9.767 1.13 a 0.34 b 0.37 b 0.3 b 0.32 b 11.604 11.03 b 12.52 ab 14.75 ab 14.96 a 15.79 a 14.866 43.83 a 38.87 ab 36.81 bc 34.20 bc 32.46 bc 8.921 35.09 a 34.63 a 31.68 ab 25.63 bc 23.11 c 14.545 37.30 a 34.89 ab 36.13 ab 32.32 ab 30.16 b 9.860

Firmeza T1-cosecha 41.53 a T2-cosecha 39.57 a T3-cosecha 38.06 a T4-cosecha 38 a T5-cosecha 37.8 a C.V (%) 8.126 PME T1-cosecha 8.70 a T2-cosecha 9.37 a T3-cosecha 9.91 a T4-cosecha 8.84 a T5-cosecha 9.44 a C.V. 20.327 Brillo (valor de L*) T1-cosecha 56.11 a T2-cosecha 55.91 a T3-cosecha 55.71 a T4-cosecha 55.97 a T5-cosecha 55.71 a C.V (%) 3.185 ndice de saturacin (chroma) T1-cosecha 34.35 a T2-cosecha 33.84 a T3-cosecha 33.68 a T4-cosecha 33.98 a T5-cosecha 32.02 a C.V (%) 22.030 ngulo de tono (hue) T1-cosecha 51.25 a T2-cosecha 51.35 a T3-cosecha 51.21 a T4-cosecha 50.87 a T5-cosecha 50.85 a C.V (%) 19.336
Valores

con la misma letra dentro de cada columna son iguales de acuerdo a la prueba de Tukey con P 0.05. Tcnicas de cosecha: T1) frutos cosechados manualmente sin golpearse y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Firmeza se expres en Newtons (N). Pectinmetilesterasa se registr en (mg de metoxilo 10 g-1).

45

Acidez y slidos solubles totales El cido mlico, que se encuentra en mayor concentracin en el mamey (Thompson, 2003), no se afect significativamente (P0.05) por los tratamientos de cosecha (Cuadro 2). Villanueva-Arce et al. (2000), Thompson (2003) y Alia-Tejacal et al. (2007) mencionaron que el mamey es un fruto con bajo contenido de acidez, por lo que presenta muy poca variacin durante el proceso de maduracin y generalmente decrece durante esta etapa. El porcentaje promedio de cido mlico de los tratamientos a 1 DDC fue de 0.42 % y 0.33 % a los 9 DDC (Figura 3).

Los slidos solubles totales (Brix) se incrementaron durante el proceso de maduracin y mostraron una correlacin negativa con la acidez (Figura 3); este balance entre azcar-cido es importante porque contribuye al sabor de la fruta (Kader, 2002 y Thompson 2003). Los frutos cosechados manualmente y empacados en cajas de cartn presentaron el menor (P0.05) contenido de slidos solubles en las dos ltimas evaluaciones (Cuadro 2). En madurez de consumo (7 y 9 DDC) los frutos cosechados manualmente fueron el mejor tratamiento al presentar menor contenido de slidos solubles totales (30 Brix) que el resto de los tratamientos, lo cual se atribuy a una maduracin ms lenta, debida a que sufrieron los menores daos mecnicos significativos (Figura 4). Tollner et al. (1993) y Tabil y Sokhansanj (2001), mencionaron que el estrs mecnico de frutos provocado por rozamientos, heridas, abrasiones o golpes estimulan la respiracin y produccin de etileno, procesos que inducen cambios que deterioran la fruta. Un ejemplo es el incremento de la concentracin de slidos solubles por la conversin de almidn a azcares (Wills et al., 1998; Gamage y Rahman, 2003). La fruta capturada en costal present menor concentracin de slidos 46

solubles totales que lanzada sobre un colchn, lanzada al suelo y empacada en costal (encostalada), debido a un menor dao en los frutos. Por otra parte, los frutos que se encostalaron incrementaron sus slidos solubles a partir del tercer da despus de la cosecha y los lanzados al suelo al quinto (Figura 4); esto se debi a los golpes recibidos por los frutos, que les provocaron una maduracin temprana y un deterioro rpido.

0.46

37

r= -0.8231
0.44 0.42 27 0.40 0.38 Acidez Brix 22 17 32

0.36
0.34 0.32 1 3 5 7 9 12 7

Das despus de la cosecha

Figura 3. Comportamiento promedio de los tratamientos en acidez (%) y slidos solubles totales (Brix) en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das. Las barras verticales indican el error estndar de la media.

SST (Brix)

Acidez (%)

47

T1 36
Slidos solubles totales (Brix)

T2 T3 T4

29

T5

22

15

8 1 3 5 7 9 Das despus de la cosecha

Figura 4. Cambios en slidos solubles totales (Brix) en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das, cosechados con diferentes tcnicas: T1) frutos cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Las barras verticales indican el error estndar de la media.

Prdida de peso de los frutos Se encontraron diferencias significativas en la prdida de peso entre tratamientos evaluados (P0.05) nicamente al tercer da despus del almacenamiento (Cuadro 2). En el resto de las evaluaciones los frutos cosechados manualmente y empaque de cartn, capturados con costal y empaque de plstico, lanzados sobre un colchn y empaque plstico, lanzados a suelo y empaque de plstico, y capturados con costal y empacados en costal (encostalados) mostraron prdidas de peso similares (Figura 5), 48

por lo que no se observ que los daos mecnicos en los frutos hayan influido de manera directa en la prdida de peso. Tabil y Sokhansanj (2001), reportaron que los frutos cosechados pierden agua por efecto de la transpiracin y que es el mayor componente de prdida de peso.

16 T1 14 12
Prdida de peso (%)

T2 T3 T4

10 8 6 4 2 0 1

T5

Das despus de la cosecha

Figura 5. Prdida de peso (%) en frutos de mamey (Pouteria sapota) conservados a 25 1 C por 9 das, cosechados con diferentes tcnicas: T1) frutos cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Las barras verticales indican el error estndar de la media.

49

Cuadro 2. Efecto de tcnicas de cosecha del zapote mamey (Pouteria sapota) en algunos parmetros de calidad postcosecha.
Tratamientos

Das despus de la cosecha (DDC) a 251 C 3 5 7 9 0.35 a 0.36 a 0.41 a 0.30 a 0.35 a 19.223 10.46 a 10.46 a 10.64 a 11.48 a 20.18 b 28.620 3.00 b 3.88 ab 3.34 ab 4.00 ab 4.10 a 14.646 0.33 a 0.36 a 0.39 a 0.29 a 0.32 a 22.205 30.90 a 32.34 a 31.78 a 33.28 a 33.20 a 4.550 7.60 a 7.68 a 8.06 a 8.20 a 9.04 a 13.095 0.30 a 0.33 a 0.33 a 0.36 a 0.38 a 17.805 30.78 b 32.64 ab 34.20 a 34.82 a 33.98 a 3.606 11.20 a 11.04 a 11.44 a 12.52 a 11.52 a 11.314 0.29 a 0.32 a 0.32 a 0.35 a 0.39 a 20.851 31.80 b 33.48 ab 34.68 ab 34.20 ab 35.18 a 4.572 12.16 a 12.16 a 12.46 a 13.66 a 12.62 a 10.716

Acidez T1-cosecha 0.420 a T2-cosecha 0.416 a T3-cosecha 0.432 a T4-cosecha 0.426 a T5-cosecha 0.420 a C.V (%) 15.352 SST T1-cosecha 8.98 a T2-cosecha 9.02 a T3-cosecha 8.96 a T4-cosecha 9.00 a T5-cosecha 8.72 a C.V (%) 22.736 Prdida de peso (%) T1-cosecha 0a T2-cosecha 0a T3-cosecha 0a T4-cosecha 0a T5-cosecha 0a C.V (%) 0
Valores

con la misma letra dentro de cada columna son iguales de acuerdo a la prueba de Tukey con P 0.05. Tcnicas de cosecha: T1) frutos cosechados manualmente sin golpearse y empacados individualmente en cajas de cartn; T2) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura, capturados con un costal y empacados a granel en una caja de plstico; T3) frutos lanzados desde 5 a 10 m de altura a un colchn sobre el suelo y empacados a granel en una caja de plstico; T4) frutos lanzados desde 4 m de altura a suelo hmedo y empacados a granel en una caja de plstico; T5) frutos cosechados de igual manera que el tratamiento T2 y empacados en un costal de yute (encostalado). Acidez titulable se expreso en porcentaje de cido mlico. Slidos solubles totales se midieron en Brix.

Experimento 2

Tratamientos de manejo postcosecha e identificacin de hongos Los frutos cosechados manualmente sin golpearse y empacados encajas de cartn (empacados) y tratados con o sin el fungicida Carbendazim presentaron menor 50

incidencia de frutos con pudricin; mientras que los frutos lanzados sobre suelo hmedo y depositados en una caja de plstico (golpeados) con y sin fungicida, resultaron con el mayor nmero de frutos podridos (Figura 6). Los frutos empacados y sin fungicida presentaron 20 % de frutos con pudricin a los 9 das despus de la cosecha; a los 10 DDC hubo tambin 20 % de incidencia en los frutos empacados y con fungicida. Todos los frutos golpeados, con y sin fungicida se pudrieron a los 8 DDC. Los daos en los frutos evaluados mostraron pudriciones en la parte interna del fruto y no presentaron sntomas externos. Las pudriciones en los frutos iniciaron con la presencia de micelio de color blanco cerca de la base del pednculo y posteriormente se extendi a todo el fruto, principalmente entre la pulpa y la cscara; a medida que los frutos maduraron la pulpa, aunque firme, se torn de color negro y posteriormente desarroll una pudricin suave total. Los hongos que han sido reportados en frutos de mamey como causales de pudriciones son Lasiodiplodia spp. y Pestalotia spp. (Daz-Prez et al., 2001; BautistaBaos et al., 2002; Yahia y Ariza, 2003; Ariza-Flores et al., 2005); por otra parte, Patel y Chauhan (1993) reportaron pudriciones en frutos de P. sapota inducidos por L. theobromae. En este experimento, de los aislamientos realizados se identific a L. theobromae y a Pestalotiopsis paeoniicola, esta ultima especie no ha sido reportada en frutos de mamey (Pouteria sapota). L. theobromae (Figura 7), desarroll abundante micelio, septado, ramificado y de color gris oscuro a negro. Los conidios fueron inicialmente unicelulares hialinos, granulosos, subovoides a elipsoides oblongos con pared delgada y base truncada; al madurar desarrollaron una pared gruesa y septa a la mitad, color caf oscuro y frecuentemente estriados longitudinalmente, y dimensiones de 20.5-26.8 x 12.4-15.0 m con una media de 24.4 x 14.1 m. Estas caractersticas coincidieron con L. theobromae (Punithalingam, 1976, Sutton 1980; Burgess et al. 51

2006). P. paeoniicola present micelio superficial, septado y ramificado. Acrvulos con masas de esporas negras conspicuas y errumpentes de forma oval o irregular. Conidios con 5 clulas, fusiformes, alargados o ligeramente curvados en la mitad, 23.1-27.2 x 5.1-7.9 m (media 24.9 x 7.15 m); 3 clulas intermedias, 13.5 - 19.1 m (media 17 m) de largo; 2 a 3 apndices apicales sin ramificaciones, 19.3 - 27.5 m (media 22.6 m) de largo; 1 apndice basal cntrico no ramificado, 3.41 7.5 m (media 5.0 m) de largo (Figura 8). Guba (1961), Sutton (1980), Wei et al. (2005), Keith et al. (2006) y Liu et al. (2007) registraron medidas similares de los conidios. El Carbendazim no tuvo efecto sobre la pudricin, ya que Lasiodiplodia y Pestalotiopsis son hongos endofticos, que se mantienen latentes y se manifiestan como oportunistas (Pavlic et al., 2004; Burgess et al., 2006), bajo condiciones de estrs o en rganos deteriorados o daados fsicamente (Keith et al., 2006; Guang et al., 2007). Debido a que los hongos ya estaban presentes en los frutos antes de que se aplicara el fungicida, este no tuvo ningn efecto sobre los patgenos a pesar de su actividad sistmica. La cosecha cuidadosa es importante; los frutos que no recibieron golpes durante la cosecha (empacados) mostraron el menor nmero de frutos con pudricin. Snowdon (1990) y Mercier (1997) mencionaron que cuando hay daos mecnicos en frutos, el proceso de maduracin se acelera, provoca un incremento en la respiracin, etileno y prdida de agua. Estos cambios van acompaados de un debilitamiento de la pared celular y

consecuentemente se disminuye la capacidad de producir sustancias anti fngicas (fitoalexinas); permitiendo as, el establecimiento y desarrollo de patgenos que deterioran los frutos.

52

Frutos con pudricin (%)

100 80 60 G GF E

40
20 0

EF

10

Das despus de la cosecha

Figura 6. Pudricin en frutos de mamey que fueron lanzados al suelo (golpeados) (G), golpeados y tratados con fungicida (GF), cosechados manualmente y empacados en cajas de cartn (empacados) (E) y empacados y tratados con fungicida (EF); conservados a 25 1 C por 10 das. Las barras verticales indican el error estndar de la media.

Figura 7. Lasiodiplodia theobromae: A, conidios inmaduros; B, conidios maduros.

53

Figura 8. Estructuras de Pestalotiopsis paeoniicola: A, conidios y micelio; B, conidios maduros; C, seccin vertical de un acrvulo; D, conidiforos y conidios maduros e inmaduros.

Caracterizacin molecular El ADN de los aislamientos de Lasiodiplodia spp. y Pestalotiopsis spp. fue amplificado por Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) y se utilizaron los iniciadores ITS5 e ITS4. Los hongos fueron depositados en el banco de genes (NCBI) para su homologacin; Pestalotiopsis spp. con nmero de acceso EU400221 present 99 % de homologacin con P. paeoniicola, y Lasiodiplodia spp. con nmero de acceso AY662402.1 tuvo 99 % de homologacin con L. theobromae.

54

CONCLUSIONES

Los frutos de mamey cosechados manualmente y empacados en cajas de cartn fueron el mejor tratamiento, ya que registraron mayor firmeza en madurez de consumo (7 y 9 DDC) y menor actividad de la PME. Tambin mostraron la mejor coloracin de la pulpa, basada en la mayor brillantez (valor de L*), intensidad de color (chroma) y ngulo de tono (hue). Por otra parte, el contenido de slidos solubles totales (Brix) fue ligeramente menor, debido a la maduracin ms lenta de los frutos. No hubo diferencias en porcentaje de cido mlico y prdida de peso entre tratamientos. Los frutos capturados con costal y lanzados a un colchn fueron el segundo y tercer mejor tratamiento. La mayor pudricin de frutos por Pestalotiopsis paeoniicola y Lasiodiplodia theobromae se present 8 das despus de la cosecha en los frutos impactados sobre el suelo, con y sin fungicida, debido a que los frutos maduraron y entraron en senescencia ms rpido que los frutos cosechados manualmente y empacados encajas de cartn. El Carbendazim no tuvo efecto en el control de las pudriciones inducidas por L. theobromae y P. paeoniicola, por la naturaleza endoftica de estas dos especies. P. paeoniicola, se reporta por primera vez como hongo postcosecha del mamey (Pouteria sapota).

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CAPTULO III. Pestalotiopsis paeoniicola: UN HONGO ENDFITO DEL MAMEY (Pouteria sapota (Jacq) H. E. Moore and Stearn) DE IMPORTANCIA POSTCOSECHA EN MXICO

RESUMEN Pestalotiopsis spp se encontr a asociado a la pudricin de frutos de mamey (Pouteria sapota) en huertos comerciales de Alpoyeca, Guerrero, Mxico. La pudricin se caracteriz por un reblandecimiento de la pulpa que adquiri un color caf oscuro a casi negro y se cubri de micelio blanco. La incidencia de hongos en frutos fue: Pestalotiopsis (71 %) Lasiodiplodia theobromae (17 %), Phoma spp. (8 %) y Alternaria spp. (4 %). Pestalotiopsis se aisl de tejidos internos de hojas, tallos, flores, yemas y frutos en diferentes etapas fenolgicas, lo que confirmo su naturaleza endfita en mamey. En base a sus caractersticas morfolgicas y moleculares la especie se identific como Pestalotiopsis paeoniicola. Dos tcnicas de cosecha se compararon: convencional (frutos golpeados durante la cosecha y empacados bruscamente en un costal de yute) y cuidadosa (frutos cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn). La pudricin fue mayor en frutos cosechados convencionalmente (80 y 100 %) a los 8, 9 y 10 das despus de cosecha (DDC); mientras que los frutos cosechados con cuidado presentaron 20 % de pudricin a los 9 y 10 DDC. La pudricin en hojas y frutos inoculados con P. paeoniicola fue similar a las hojas y frutos inoculados con agua destilada estril, lo cual se debi a la naturaleza endoftica del hongo.

Palabras clave: hongo, endfito, mamey, pudricin.

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Pestalotiopsis paeoniicola: AN ENDOPHYTIC FUNGUS OF MAMEY (Pouteria sapota (Jacq) H. E. Moore and Stearn) WITH POSTHARVEST IMPORTANCE IN MXICO

ABSTRACT Pestalotiopsis spp. was found associated with fruit rot in zapote mamey (Pouteria sapota) in commercial orchards at Alpoyeca Guerrero, Mxico. Fruit rot was characterized by pulp rotting that turned brown to black in color and with the presence of white mycelium. Incidence of fungi in fruits was: Pestalotiopsis (71 %), Lasiodiplodia theobromae (17 %), Phoma glomerata (8 %) and Alternaria alternata (4 %). Pestalotiopsis was isolated from internal tissue of leaves, stems, flowers, shoots and fruits at several stages of development that support the endophytic nature of this fungus in mamey. Based on morphological and molecular characterization, the causal agent of fruit rot was identified as Pestalotiopsis paeoniicola. Two harvest techniques were evaluated: 1) Conventional (damaged fruits during harvest and roughly packed in yute bags) and 2) Careful harvest (hand collected fruits without dropping and individually packed in carton boxes). Fruit rot was higher in conventional harvest (80-90%) from 8 to 10 days after harvest (DAH); whereas carful harvest resulted in only 20 % of fruit rot at 8 and 9 DAH. Rot in leaves and fruits inoculated with P. paeoniicola was similar (50 %) to those inoculated with sterile distilled water, because of the endophytic nature of the fungus.

Key words: fungi, endophytic, mamey, fruit rot.

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INTRODUCCIN La familia sapotaceae incluye gneros que producen frutos con valor comercial, entre ellos destaca el genero Pouteria. El zapote mamey (Pouteria sapota) es originario del sur de Mxico y Centroamrica (Guatemala, Belice, Honduras y Nicaragua) (Azurdia, 2006). En Mxico se cultiva principalmente en pequeos huertos comerciales o intercalado con otros cultivos como mango (Mangifera indica), pltano (Musa spp.) y caf (Coffea arabica). El alto contenido nutricional, sabor y apariencia de la pulpa hacen que esta fruta sea muy apreciada entre la poblacin mexicana. Algunos frutos son procesados para elaborar helados, mermeladas, perfumes y otros productos, aunque la mayora de la produccin se destina al consumo en fresco (Daz-Prez et al., 2001; Ariza-Flores et al., 2005). La vida postcosecha del mamey es limitada por enfermedades como la pudricin de la pulpa, frecuentemente asociada a hongos (Patel, 1993; Daz-Prez et al., 2001; Yahia y Ariza, 2003; Ariza-Flores et al., 2005). Esta enfermedad se caracteriza por un reblandecimiento de la pulpa que adquiere un color caf oscuro a casi negro. Posteriormente las lesiones se cubren de micelio de color blanco, reducen la vida postcosecha e inhabilita al fruto para su comercializacin (Bautista-Baos et al., 2002; Azurdia, 2006). Muchos de los hongos asociados a la pudricin de la pulpa (Pestalotiopsis spp., Lasiodiplodia sp., Colletotrichum sp., Altenaria spp., Xylaria sp. y Phoma sp.) han sido reportados como endfitos en rboles tropicales, capaces de atacar al hospedante cuando est dbil o deteriorado (Lodge et al., 1996; Agazzi et al., 2001; Burgess et al., 2006; Arnold, 2007; Wei et al., 2007). El trmino endfito es aplicado a los organismos que viven dentro de algn tejido de la planta en donde se desarrollan sin aparente infeccin o sntomas. Los hongos endfitos pueden estar presentes en parte o todo el ciclo de vida del hospedante (Faeth, 2002; 66

Schulz y Boyle, 2005; Arnold, 2007; Arnold y Lutzoni, 2007). La mayor parte de los endfitos se dispersan por esporas y han sido encontrados colonizando follaje, flores, frutos, tallos (principalmente xilema), races, semillas y corteza de casi todas las plantas conocidas. Pueden penetrar por heridas, aberturas naturales como estomas y lenticelas, insectos vectores y de manera directa a travs de la cutcula de las hojas (Frhlich et al., 2000 y Arnold et al., 2003; Arnold, 2005; Vega et al., 2006; Arnold y Lutzoni, 2007). Otros endfitos colonizan plantas herbceas sistmicamente y se diseminan en sus semillas. Algunas especies de hongos endfitos, pueden producir metabolitos (micotoxinas) que protegen a la planta contra el ataque de insectos, hongos patgenos o confirindole la habilidad de adaptarse al ambiente en condiciones de estrs abitico (Lodge et al., 1996; Faeth, 2002; Arnold et al., 2003). Pestalotipsis spp. es un hongo reportado como endfito de rboles tropicales (Liu et al., 2007; Jeewon et al., 2004), y como agente inductor de manchas y tizones foliares en plantas ornamentales, guayaba (Psidium guajava), mango (Mangifera indica) y arndano (Vaccinium corymbosum). En frutos, induce lesiones en el exocarpo de guayaba (Psidium guajava) y pudriciones en rambutn (Nephelium lappaceum), kiwi (Actinidia deliciosa) y caqui (Diospyros kaki) (Hopkins y McQuilken, 2000; Karakaya, 2001; Keith et al., 2006; Ko et al., 2007; Luan et al., 2008; Blanco et al., 2008; Keith, 2008). Pestalotiopsis spp. es un patgeno oportunista que ataca plantas que crecen bajo estrs o en tejido con algn dao fsico. Para la infeccin requiere de alta humedad y temperaturas de 22 a 30C. Recientemente el Grupo Interdisciplinario de Investigacin en Mamey (GIIIM) en estudios realizados en Alpoyeca, Guerrero, encontr a Pestalotiopsis spp. asociado a la pudricin de frutos. El objetivo del presente trabajo fue

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verificar la naturaleza endoftica de Pestalotiopsis spp. y su posible rol como patgeno postcosecha.

MATERIALES Y MTODOS

Aislamientos de frutos de mamey Dez frutos en madurez fisiolgica se cosecharon en cada uno de 16 rboles de mamey en huertos comerciales de Alpoyeca (17 40' 5.5'' LN y 98 31' 28'' LO), Guerrero, Mxico en 2006. Dos fragmentos de pulpa de la base de la parte interna de cada fruto fueron desinfestados con hipoclorito de sodio al 1.5 % por tres minutos de inmersin, se lavaron en agua destilada estril durante un minuto, se secaron en papel estril y sembraron en cajas Petri con PCA: 20 g de papa, 20 g de zanahoria, 18 g de agar, aforados a 1000 mL con agua destilada. Las cajas se incubaron en luz negra continua con una lmpara de 40 W, a temperatura de 251 C.

Aislamiento de endfitos Tres ramas vegetativas y reproductivas por rbol se colectaron de 12 rboles de mamey en huertos comerciales de Alpoyeca, en dos evaluaciones (2006 y 2007) (Cuadro 1). Cinco fragmentos por rbol de diversos rganos de ramas fueron desinfectados y cultivados en forma similar a como se hizo con los fragmentos de pulpa en PCA.

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Cuadro 1. Tejido de rganos reproductivos y vegetativos colectado en rboles de mamey (Pouteria sapota) durante 2006-2007 en Alpoyeca, Guerrero, para aislamiento de

Pestalotiopsis.
rganos Yema floral Secciones utilizadas para aislamiento fungoso + Corteza pice Base Base pice Ptalo Pistilo Estambres Ovario Fruto amarrado Rama floral Hoja Fruto (1-3 cm de largo) Receptculo Base pice Corteza Sistema vascular (xilema + floema) Lmina foliar Pednculo Base Media Pednculo Base Media Pednculo Base Media Pednculo Base Media

Cabezuela Flor

Fruto (3-6 cm de largo)

Fruto (6-10 cm de largo)

Fruto en madurez fisiolgica

Yema redonda de color verde, con primordios de spalos; Flor cerrada con spalos formados, estambres diferenciados y ptalos blancos en formacin.

Expresin de endfitos despus de dao mecnico en frutos En abril de 2007 se cosecharon 80 frutos de mamey en madurez fisiolgica de un rbol comercial en Alpoyeca. Grupos de 20 frutos fueron sometidos a dos tcnicas de

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cosecha en combinacin con un fungicida sistmico: 1 "Sin dao mecnico" (cosechados manualmente y empacados individualmente en cajas de cartn). 2. "Sin dao mecnico + fungicida" (cosechados manualmente, empacados individualmente y tratados por inmersin en Carbendazim a 300 ppm por 10 minutos. 3. Cosechados de manera tradicional (cosechados manualmente, "golpeados" en suelo hmedo desde una altura de 4 metros y empacados en costal) y 4. Cosechados de manera tradicional ms tratamiento qumico (cosechados manualmente, golpeados en suelo hmedo desde una altura de 4 metros, empacados en costal y tratados por inmersin en Carbendazim a 300 ppm por 10 minutos ("golpeados + fungicida"). Los frutos se incubaron por diez das a 251C. Grupos de cinco frutos fueron evaluados los 6, 8, 9 y 10 das despus de la cosecha (DDC), y se determin el nmero de frutos con pudricin en cada tratamiento. Se realiz un anlisis de varianza para variables categricas, utilizando el Modelo Lineal Generalizado PROC GENMOD (SAS, 1996). Dado que cada fruto fue considerado como podrido o no podrido, se utiliz como distribucin de la variable respuesta la funcin de distribucin binomial y como funcin de enlace el logit.

Identificacin morfolgica y molecular Cultivos monospricos de los hongos fueron identificados con las claves de Sutton (1980), Guba (1961) y Wei et al (2005). Tres cultivos monospricos representativos se utilizaron para la extraccin de ADN con la tcnica de Ahrens y Seemller (1992). La calidad del ADN se verific por electroforesis en gel de agarosa al 1% (Agarose Ultra Pure, Invitrogen) y su concentracin se determin en un espectrofotmetro (Lambda Bio 10, Perkin Elmer). Las regiones internas ITS1 e ITS2 entre los genes ribosomales (rADN) localizadas entre la subunidad pequea 18S-5.8S y la subunidad larga 5.8S70

28S fueron amplificadas por PCR con la combinacin de iniciadores ITS5 (GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG) / ITS4. (TCCTCCGCTTATTGATATGC). La

amplificacin se realiz de acuerdo a los protocolos de Ahrens y Seemller (1992) con las siguientes modificaciones: volumen final 25 L (13.22 L agua ultra pura estril, 2.5 L solucin amortiguadora TBE 1X, 2.08 L MgCl2 a 2.5 mM, 2 L dNTPs 0.2 Mm, 2 L de cada uno de los iniciadores ITS e ITS5 a 20 mol, 0.2 L DNA polimerasa (Biogenica) 1U y 1L muestra a 80 ng). El producto amplificado fue purificado con el kit Wizard (Promega) y enviado para su secuenciacin a la facultad de Biologa Celular de la Universidad Autnoma de Mxico. La secuencia se obtuvo a travs del secuenciador Genetic Analizer 3100 (Applied Biosystem). Las secuencias se enviaron para alineamiento utilizando la herramienta BLAST de la Base de Datos del Nacional Center for Biotechnology Information (NCBI www.ncbi.nlm.nih.gov/). Las secuencias alineadas se procesaron con el protocolo UPGMA (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean) en MEGA para obtener un dendrograma. Las secuencias de las especies morfolgicamente similares (Pestalotiopsis diospyri, P. versicolor y P. paeonicola) a la especie identificada y secuenciada se alinearon utilizando el programa ClustalX.

Potencial de endfitos como patgenos foliares Hojas de mamey de un huerto comercial de mamey en Alpoyeca, fueron colectadas en junio de 2007 y llevadas al laboratorio de Fitopatologa del Colegio de Postgraduados, Texcoco, Mxico. Las hojas se desinfectaron con hipoclorito de sodio al 1.5 % por 3 minutos y lavaron con agua destilada estril. Se inocularon 10 hojas individuales y 10 hojas adheridas a la rama para cada tratamiento. Una suspensin de 71

conidios (1 x 106 conidios/mL) se inocul por los siguientes mtodos: 1) Aspersin sobre haz y envs, 2) Infiltracin en el peciolo, 3) Infiltracin en la nervadura principal, 4) Testigo (infiltracin de agua destilada estril en la nervadura principal y peciolo), 5) Testigo (asperjadas sobre haz y envs con agua destilada estril). Cada hoja se coloc en un tubo de ensaye con partes de agua donde estaba inmerso el pecolo. Las ramas con grupos de 10 hojas se colocaron en un vaso de precipitado de 1L con partes de agua. Los tubos y los recipientes de vidrio se cubrieron con bolsas de polietileno durante 24 horas, y posteriormente se les hicieron pequeos orificios. Las hojas se incubaron por 25 das bajo a 251 C. La incidencia de la pudricin en hojas se evalu a los 5, 10, 15 y 20 das despus de la inoculacin. Se realiz un anlisis de varianza para variables categricas, utilizando el Modelo Lineal Generalizado usando PROC GENMOD (SAS, 1996). Dado que cada hoja fue considerada como podrida o no podrida, se utiliz como distribucin de la variable respuesta la funcin de distribucin binomial y como funcin de enlace el logit.

Potencial de endfitos como patgenos de frutos Grupos de 10 frutos se inocularon en 2006 y 2007 en un huerto comercial de Apoyeca, en cuatro formas (tratamientos): 1) Puncin del pednculo y sobre la herida un disco de agar con micelio, 2) Infiltracin al sistema vascular del pednculo de una suspensin de 1 x 106 de conidios/mL, 3) Aspersin al pednculo de una suspensin de 1 x 106 de conidios/mL, 4) Infiltracin de agua destilada estril al sistema vascular del pednculo en frutos testigo. Las condiciones ambientales en el huerto fueron monitoreadas mediante una estacin meteorolgica Vantage Pro con consola inalmbrica (Davis, Modelo 6310, California, USA), y Software (Waterlink 5.4, Davis ). 72

Los frutos inoculados fueron cosechados al alcanzar la madurez de corte (aproximadamente 15 das despus de la inoculacin) y transportados a laboratorio para aislamientos de hongos con el procedimiento antes descrito. Se cuantific el porcentaje de frutos con sntomas de pudricin despus de la inoculacin. Los valores porcentuales fueron transformados con la raz cuadrada del arcoseno antes del anlisis estadstico en SAS (SAS, 1996). Las medias fueron comparadas utilizando la prueba de tukey. RESULTADOS Y DISCUSIN

Aislamientos de frutos de mamey Pestalotiopsis (Figura 1) se encontr en ms del 70 % de 320 aislamientos realizados (Cuadro 2). Otros hongos encontrados en menor proporcin fueron Lasiodiplodia theobromae (16.3 %), Phoma glomerata (8.2 %) y Alternaria alternata (4.2 %). Los hongos Phoma y Alternaria fueron identificados a especie por Juan Pereyda y Alfonso Vsquez (datos no publicados). El porcentaje alto de incidencia de Pestalotiopsis sugiere que este organismo vive como endfito en los rboles de mamey; al igual que otros hongos como Phomopsis sp., Colletotrichum sp., Fusarium sp., Phoma sp., Xylaria sp., Lasiodiplodia theobromae, Dothiorella sp., y Penicillium spp., que tambin se encuentran en frutos tropicales de manera endfita (Lupo et al., 2001; Cannon y Simmons, 2002; Farr et al., 2002; Arnold y Herre, 2003; Pavlic et al., 2004; Camatti-Sartori et al., 2005; Morales-Rondn y Rodrguez-Gonzlez, 2006; Vega y Posada, 2006). Por otra parte, se ha reportado que Alternaria spp. puede vivir como epfito en rboles tropicales, capaz de introducirse en la planta a travs de rganos deteriorados o en senescencia (Kumar et al., 2008). 73

Cuadro 2. Aislamientos de hongos en pulpa de frutos de mamey (Pouteria sapota) con madurez fisiolgica.

Alpoyeca, Guerrero. 2006.

Cultivar Pestalotiopsis spp. Porcentaje de hongos aislados Lasiodiplodia Phoma theobromae. glomerata 20 20 20 20 20 20 20 10 10 10 20 20 20 30 16.3 10 10 20 30 20 10 17 14 8.2 Alternaria alternata 10 10 33 14 4.2

ALP-CP-1 ALP-CP-2 ALP-CP-3 ALP-CP-4 ALP-CP-5 ALP-CP-6 ALP-CP-7 ALP-CP-8 ALP-CP-9 ALP-CP-10 ALP-CP-11 ALP-CP-12 ALP-CP-13 ALP-CP-14 ALP-CP-15 ALP-CP-16 Media

80 80 80 70 80 80 70 70 60 70 70 70 70 70 50 72 71.3

Figura 1. Conidios maduros de Pestalotiopsis spp. con 2 y 3 apndices apicales.

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Aislamientos de Pestalotiopsis de tejido vegetativo y reproductivo del mamey Pestalotiopsis fue aislado 420 veces del interior de hojas, tallos, flores y frutos de mamey. La frecuencia en cada uno de los rganos fue: yema floral (67-100%), cabezuela (17-67%), flor (0-33%), hoja (40%), fruto amarado (25-83%), rama floral (6783%), frutos de 1-10cm (75-100%), y frutos en madurez fisiolgica (58-76) (Cuadro 3). La desinfestacin del interior del rgano estudiado fueron dos aspectos clave que permitieron eliminar los organismos que se encuentran en la superficie de los tejidos como contaminantes y de esta manera asegurar el aislamiento de endfitos.

Pestalotiopsis spp. fue encontrado en la parte interna de yemas, cabezuelas, flor, hoja, fruto amarrado y rama floral sin inducir sntomas de enfermedad en mamey. Estas caractersticas coincidieron con las descritas por Jonson et al. (1992) y Arnold (2005) para los hongos endfitos.

El genero Pestalotiopsis ha sido reportado como hongo endfito muchas plantas principalmente rboles tropicales (Farr et al., 1995; Hopkins y McQuilken, 2000; Metz et al., 2000; Cannon y Simmons, 2002; Jeewon et al., 2003; Jeewon et al., 2004; Rubini et al., 2005; Sati y Belwal, 2005; Wei et al., 2005; Tejesvi et al., 2007; Liu et al., 2007; Wei et al., 2007). La presencia de micelio en rganos reproductivos de la planta, su alta frecuencia en el pednculo del fruto y la deteccin de esporas de Pestalotiopsis en el aire (Mora, et al., 2008 datos no publicados) son evidencia de que este hongo se disemina de manera horizontal y vertical en los huertos de mamey, causando infecciones que permanecen latentes en las diferentes etapas fenolgicas de los frutos.

75

Kumar et al. (2008), sugirieron que la interaccin entre un hongo endfito y una planta hospedera se caracteriza por un equilibrio entre la virulencia del hongo y las defensas de la planta. La naturaleza endfita de Pestalotiopsis es evidente en los frutos en desarrollo, ya que se encontr en todos los aislamientos realizados. Esto explica la alta incidencia (75-83 %) de su presencia en el interior de los frutos en desarrollo, aunque no cause ningn dao evidente; pero es importante pues su manifestacin se incrementa en frutos daados en el proceso de cosecha, como se analizara ms adelante.

76

Cuadro 3. Frecuencia de Pestalotiopsis spp. en el interior de rganos reproductivos y vegetativos en rboles de mamey (Pouteria sapota). Alpoyeca, Guerrero. 2006-2007.
Frecuencia (%) de Pestalotiopsis spp. rganos Tejidos 1 Evaluacin 2 Evaluacin

+ Corteza Yema floral Base pice Cabezuela

83 75 67 8 0 0 33 17 83 25

100 75 67 42 17 8 0 0 33 17 40 75 25 67 83 100 83 75 100 75 75 100 83 75 76 60 58

Base pice Ptalo Pistilo

Flor

Estambres Receptculo Ovario

Hoja Fruto amarrado

Lmina foliar Base pice Corteza Sistema vascular Pednculo Base Media Pednculo Base Media Pednculo Base Media Pednculo Base Media

Rama floral

Fruto (1-3 cm)

Fruto (3-6 cm)

Fruto (6-10 cm)

Madurez fisiolgica

Yema redonda de color verde, con primordios de spalos; ptalos blancos en formacin.

Flor cerrada con spalos formados, estambres diferenciados y

77

Expresin de Pestalotiopsis despus de dao mecnico en frutos La pudricin de frutos se present 8 das despus de la aplicacin de tratamientos de inoculacin. Los frutos no presentaron sntomas externos. Pero si micelio blanco sobre el pednculo del fruto. A medida que los frutos maduraron y senescieron se cubrieron internamente con micelio blanco, la pulpa se reblandeci y torn de color obscuro a casi negra (Figura 4). El hongo aislado a partir de estos sntomas fue identificado como Pestalotiopsis paeoniicola (Guba, 1961; Sutton 1980; Wei et al.,

2005; Keith et al., 2006; Liu et al., 2007). El dao mecnico increment significativamente el nmero de frutos (15/20) con pudricin. Por el contrario, sin dao mecnico las pudriciones en frutos se redujeron significativamente (1/20). La aplicacin de Carbendazim no redujo significativamente el nmero de frutos podridos (Cuadro 4). Este experimento demostr la presencia de P. paeoniicola como un hongo endfito de mamey capaz de colonizar todos los tejidos de este rbol tropical, incluyendo los frutos; y que el dao mecnico durante la cosecha, promueve mayor severidad de P. paeoniicola para inducir la pudricin de frutos, coincidiendo con resultados previos para este patgeno considerado oportunista (Hopkins and McQuilken, 2000; Sun et al., 2002; Wei et al., 2007; Snowdon, 1990; Mercier 1997); ya que Pestalotiopsis spp. ataca frutos bajo condiciones de estrs, maduros o en rganos deteriorados o daados fsicamente (Keith et al., 2006; Keith, 2008 ; Wei et al., 2007).

78

Cuadro 4. Pudricin causada por Pestalotiopsis en frutos cosechados con dos tcnicas y combinadas con Carbendazim. Alpoyeca, Guerrero. 2007.
Nmero de frutos con pudricin Tratamientos 6 Frutos golpeados Frutos golpeados + fungicida Sin dao mecnico Sin dao mecnico + fungicida Probabilidad
Probabilidad

Das despus de la cosecha a 251 C 8

5 4 0 0 <0.0001

9
5 5 1 0 <0.0001

10
5 5 0 1 <0.0001

0 0 0 0 1.000

de un valor mayor que 2 en la prueba de anlisis categrico para muestras individuales a los 6, 8, 9 y 10 das despus de la cosecha.

Identificacin morfolgica y molecular El hongo produjo micelio superficial, septado, ramificado, algodonoso, de color blanco que adquiri tonalidades rosadas con el tiempo. Las colonias crecieron un promedio de 0.9 cm/da. Los cuerpos fructferos aparecieron entre los 4 y 6 das, en forma de acrvulos ovales a irregulares, errumpentes, solitarios de 130 a 240 micrmetros. Conidiforos septados, hialinos, ramificados, cilndricos, formados de las clulas superiores del pseudoparnquima que componen la base del acrvulo. Conidios con 5 clulas, fusiformes, alargados o ligeramente curvados, 23.1-27.2 x 5.1-6.74m. Las tres clulas intermedias de color caf (las dos superiores de color caf saturado, la clula inferior un poco ms plida). Clula apical hialina, conoide, 3.2-5.2 x 2.5-3.3 m, con dos o tres apndices

79

ramificados de 19.3-27.5 m de largo. Clula basal hialina, obtusa, 3.8-5.8 x 2.9-4.1 m, con un apndice de 5.4-7.5 m de largo (Figura 2). La amplificacin del ADN con los iniciadores ITS5 e ITS4 produjo un fragmento de 546 pb. La secuencia de este fragmento fue depositada en el National Center for Biotechnology Information con el nmero de acceso EU400221. La prueba BLAST encontr que la secuencia EU400221 posee un 99 % de homologacin con diferentes especies de Pestalotiopsis entre las que se incluyen P. clavispora, P. paeonicola y P.virgulata. El anlisis filogentico de la secuencia EU400221 y especies morfolgicamente similares arroj resultados similares, siendo la secuencia de la regin ITS un carcter no definitivo en la identificacin (Figura 3) y slo permiten hacer una aproximacin a nivel de gnero, debido a la gran similitud gentica entre las especies de Pestalotiopsis. Sin embargo, las caractersticas morfolgicas presentes en los ejemplares colectados de mamey permiten la identificacin del hongo endfito de mamey como Pestalotiopsis paeoniicola (Tsukamoto & Hino) (Guba, 1961; Sutton 1980; Wei et al., 2005; Keith et al., 2006; Liu et al., 2007).

80

Figura 2. Estructuras reproductivas de Pestalotiopsis paeoniicola: (a) y (b), conidios maduros con 2 y 3 apndices apicales; (c), vista frontal de acrvulos; (d), vista lateral de un acrvulo; (e), conidiforos y conidios maduros e inmaduros; (f), vista frontal de acrvulos.

81

Figura 3. Dendrograma de las especies de cinco esporas (quinqueloculatae) del gnero Pestalotiopsis y un aislamiento representativo de mamey (Pouteria sapota).

Potencial de P. paeoniicola como patgeno en follaje Las hojas inoculadas manifestaron sntomas de P. paeoniicola despus de 15 das de incubacin en al menos uno de los tratamientos. Sin embargo, a los 20 das despus de la inoculacin todas las hojas individuales y hojas adheridas a la rama mostraron sntomas necrticos severos en todos los tratamientos incluyendo al testigo (Cuadro 5). Los sntomas se caracterizaron por una necrosis oscura progresiva de la lmina foliar. La necrosis se cubri del micelio blanco del hongo y finalmente se observ la presencia de acrvulos con masas de esporas de color negro (Figura 4). Se ha reportado que la mayora de los hongos endfitos que estn presentes en hojas son diseminados a partir de esporas que estn en el aire y tejido senescente (Arnold and Herre, 2003; Strobel and Daisy, 2003). La presencia de estos hongos esta relacionada con la abundancia de inoculo. Las esporas pueden germinar de manera epiftica y el hongo penetra a la hoja a travs de heridas, estomas o clulas epidermales de la cutcula y desarrollarse intercelularmente (Arnold, 2005; Arnold y Lutzoni, 2007). La desinfestacin externa por lavado de las hojas elimin otros hongos en la superficie, pues el nico hongo aislado

82

de hojas fue Pestalotiopsis. La presencia del hongo en el testigo confirm su naturaleza endoftica, lo cual dificulta la demostracin de su patogenicidad. Para esto, tal vez ser necesario obtener plantas libres del hongo mediante tratamientos con temperatura, radiacin o fungicidas.

Cuadro 5. Efecto de la inoculacin de Pestalotiopsis paeoniicola en hojas de mamey (Pouteria sapota) separadas o adheridas a su rama. Montecillo, Mxico. 2007.
Nmero de hojas con pudricin por fecha de evaluacin (das) Tratamientos 5 1. Aspersin de conidios sobre haz y envs. 2. Infiltracin de conidios en el peciolo. 3. Infiltracin de conidios en la nervadura principal. 4. Testigo (Infiltracin de agua destilada estril en la nervadura principal y peciolo). 5. Testigo (hojas asperjadas sobre haz y envs con agua destilada estril). Probabilidad
Probabilidad

Hojas individuales 10 0 0 0 0 0 0 15 1 2 0 20 10 10 10 5 0 0 0

Hojas adheridas a la rama 10 0 0 0 15 0 2 2 20 10 10 10

10

10

10

10

1.000

1.000

<0.0001

1.000

1.000

1.000

<0.0001

1.000

de un valor mayor que 2 en la prueba de anlisis categrico para muestras individuales a los 5, 10, 15 y 20 das para hojas individuales y adheridas a la rama.

83

.
Figura 4. Pudricin sobre hoja y frutos de mamey inducida por Pestalotiopsis paeoniicola: (a), presencia de micelio y acrvulos sobre la hoja; (b), presencia de micelio en la pulpa; (c), fruto sano.

Potencial de P. paeoniicola como patgeno en frutos Se cuantific una temperatura promedio de 25 C durante el experimento. La pudricin de frutos se presento 23 das despus de la inoculacin, durante la madurez y senescencia del fruto. Los frutos no presentaron sntomas externos, pero si micelio blanco sobre el pednculo del fruto. A medida que los frutos maduraron y senescieron se cubrieron completamente con micelio blanco del hongo y despus la pulpa se reblandeci y torn de color obscuro a casi negra. El hongo aislado de estos tejidos fue identificado como Pestalotiopsis paeoniicola (Guba, 1961; Sutton 1980; Wei et al.,

2005; Keith et al., 2006; Liu et al., 2007). Estos resultados muestran que P. paeoniicola es un hongo endfito de mamey en la zona de Alpoyeca, Guerrero, al encontrarse en el 58-100 % de los frutos en sus diferentes etapas fenolgicas y en el 40-50% de los frutos inoculados y no inoculados con el hongo. Las formas de inoculacin probadas (puncin, infiltracin, aspersin) no difirieron de las plantas testigo (no inoculadas con el hongo). 84

CONCLUSIONES Pestalotiopsis paeoniicola se encontr con mayor frecuencia (71 %) en frutos de mamey, comparado con otros hongos como Lasiodiplodia theobromae (16 %), Phoma glomerata (8 %) y Alternaria alternata (2 %). Tambin se aisl de hojas, tallos, flores, yemas y frutos de mamey en diferentes etapas fenolgicas y se confirm a P. paeoniicola como endfito del mamey, ya que la inoculacin de frutos y otros rganos con el hongo no produjo diferencias en la incidencia de pudricin respecto a los frutos y rganos inoculados con agua destilada estril, lo cual demostr la naturaleza endoftica de P. paeonicola en mamey. La cosecha manual y cuidadosa disminuy la frecuencia de pudriciones (20 %) e increment la vida postcosecha hasta los diez das. La inmersin de frutos cosechados en Carbendazim no redujo la pudricin respecto a los no tratados con fungicida.

85

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91

CONCLUSIONES GENERALES

1. los frutos almacenados a 13 C retardaron su maduracin hasta los 24 das de refrigeracin y 3 DDA. La pulpa de los frutos mostr mejores caractersticas en firmeza, color (valor de L* (brillo), ndice de saturacin (chroma) y ngulo de tono (hue), slidos solubles totales (Brix) y acidez, as como prdida de peso en fruto, en comparacin a las obtenidas en los frutos testigo en madurez de consumo; la pudricin de frutos se inici a los 18 das y el dao fue de 10 % hasta los 24 das de refrigeracin y 3 DDA.

2. los frutos a 15 C entraron en senescencia a los 13 das de almacenamiento y presentaron la mayor pudricin de frutos.

3. Los frutos expuestos a 10 C mostraron maduracin desigual despus de exponerse a temperatura ambiente y no hubo cambios deseables en firmeza, color y slidos solubles totales; esto provoc que los frutos no alcanzaran la calidad de consumo.

4. Los frutos testigo a los 10 das de almacenamiento presentaron 100 % de pudricin.

92

5. Los frutos de mamey cosechados con cuidado, manualmente y empacados en cajas de cartn fueron el mejor tratamiento, ya que registraron mayor firmeza en madurez de consumo (7 y 9 DDC) y menor actividad de la PME. Tambin mostraron la mejor coloracin de la pulpa, basada en la mayor brillantez (valor de L*), intensidad de color (chroma) y ngulo de tono (hue). Por otra parte, el contenido de slidos solubles totales (Brix) fue ligeramente menor, debido a la maduracin ms lenta de los frutos. No hubo diferencias en porcentaje de cido mlico y prdida de peso entre tratamientos.

6. Los frutos impactados sobre el suelo, con y sin fungicida, iniciaron con 80 % de pudricin a los 8 das despus de la cosecha (DDC) y 100 % a 9 y 10 DDC, debido a que los frutos maduraron y entraron en senescencia ms rpido.

7. Los frutos cosechados manualmente y empacados encajas de cartn, con y sin fungicida, presentaron 20 % de pudricin en 9 y 10 DDC.

8. Los hongos asociados a pudriciones en frutos almacenados a diferentes temperaturas y en frutos cosechados con diferentes tcnicas de cosecha, fueron identificados morfolgica y molecularmente como Lasiodiplodia theobromae y Pestalotiopsis paeoniicola.

9. El Carbendazim no tuvo efecto en el control de las pudriciones en fruto inducidas por L. theobromae y P. paeoniicola por la naturaleza endoftica de estas dos especies. 93

10. Pestalotiopsis paeoniicola se encontr con mayor frecuencia (71 %) en frutos de mamey, comparado con otros hongos como Lasiodiplodia theobromae (16 %), Phoma glomerata (8 %) y Alternaria alternata (2 %). Tambin se aisl de hojas, tallos, flores, yemas y frutos de mamey en diferentes etapas fenolgicas, lo que confirmo que P. paeoniicola es un hongo endfito de mamey.

11. Las evidencias encontradas sugieren que este hongo P. paeoniicola, vive en simbiosis con la planta y se manifest en hojas o frutos que sufrieron algn tipo de estrs o que entraron en senescencia.

12. La inoculacin del hongo en frutos y otros rganos, no produjo ninguna diferencia en pudricin respecto a los frutos y rganos inoculados con agua destilada estril, lo cual demostr la naturaleza endoftica de P. paeonicola en mamey.

94