NORMA TCNICA

COLOMBIANA

NTC
4519
2009-04-15

MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS PARA

CONSUMO HUMANO Y ANIMAL.
MTODO HORIZONTAL PARA EL RECUENTO DE
MICROORGANISMOS. TCNICA DE RECUENTO
DE COLONIAS A 30 C

E:

MICROBIOLOGY OF FOOD AND ANIMAL FEEDING

STUFFS. HORIZONTAL METHOD FOR THE ENUMERATION
OF MICROORGANISMS COLONY-COUNT TECHNIQUE AT
30 DEGREES C

CORRESPONDENCIA:

esta norma es modificada (MOD) con

respecto a su documento de
referencia, la norma ISO 4833:2003.

DESCRIPTORES:

microbiologa;
alimentos
para
consumo humano; alimentos para
animales; deteccin y numeracin de
enterobacterias; tcnica de NMP;
tcnica con pre-enriquecimiento.

I.C.S.: 67.240
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC)
Apartado 14237 Bogot, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproduccin

Primera actualizacin
Editada 2009-04-28

PRLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.
La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica
est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo
caracterizado por la participacin del pblico en general.
La NTC 4519 (Primera actualizacin) fue ratificada por el Consejo Directivo el 2009-04-15.
Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a
travs de su participacin en el Comit Tcnico 25 Microbiologa.
3M COLOMBIA
ALIMENTOS POLAR COLOMBIA S.A.
ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A.
ANNAR DIAGNSTICA IMPORT LTDA.
ARCHIVO DE BOGOT ALCALDA MAYOR
DE BOGOT
ASBIOQUIM LTDA.
BIANLISIS
BIOCONTROL LTDA.
BIOQUILAB LTDA.
BIOTRENDS LABORATORIOS LTDA.
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA.
CARULLA VIVERO S.A.
CONGELAGRO S.A.
CASA LUKER
CREPES & WAFFLES S.A.
CONGELAGRO S.A.
CORPOLAC
ECOKAPKA
ENZIPN DE COLOMBIA LTDA.
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS ZEN S.A.
INDUSTRIA PRODUCTORA DE ACEITES
RENOVABLES.
INSTITUTO DE GENTICA UNIVERSIDAD
NACIONAL DE COLOMBIA

IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.

KOYOMAD S.A.
LABCONTROL E.U.
LABFARVE

LABORATORIO
DE
FARMACOLOGA VEGETAL
LABORATORIOS ERMA S.A.
LABORATORIOS GRAM
LABORATORIOS MICROLAB LTDA.
LABORATORIO SFC LTDA.
MERCADEO DE ALIMENTOS DE COLOMBIA
S.A.
MICROBILOGOS ASOCIADOS
NULAB LTDA.
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
PURIFICACIN Y ANLISIS DE FLUIDOS
LTDA
QUALA S.A.
SECRETARA DISTRITAL DE SALUD DE
BOGOT
SUIZO S.A.
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
VECOL S.A.
VILASECA LTDA.
VITROFARMA S.A.

Adems de las anteriores las siguientes empresas aportaron durante la consulta publica:
ACEGRASAS S.A.
ACUAGYR S.A. E.S.P.
ALGARRA S.A.
AQUALAB
AREPAS DOA ALEJA
ASEBIOL
ASINAL
ASOCIACIN COLOMBIANA DE CIENCIA
Y TECNOLOGA COSMTICA -ACCYTECASOCIACIN
COLOMBIANA
DE
MICROBIOLOGA
BAVARIA S.A.
BECTON DICKINSON DE COLOMBIA LTDA.
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA.
CARULLA VIVERO S.A.
CERVECERA LEONA S.A.
COLOMBIANA S.A.
COMPAA NACIONAL DE CHOCOLATES
S.A.
CORPORACIN PARA EL AVANCE DE LA
MICROBIOLOGA Y LA MICROSCOPIA
MICROS

CORPOICA - CORPOLAB
DUPONT QUALICON
EMPRESA
DE
ACUEDUCTO
Y
ALCANTARILLADO DE BOGOT E.S.P.
FABRICA
DE
ESPECIAS
Y
CONDIMENTOS EL REY S.A.
FRUGAL S.A.
JOHNSON DIVERSEY
KLIK S.A
LABORATORIO A.B.B.A
LABORATORIO BIOCONTROL LTDA.
LABORATORIO DE GENTICA Y BIOLOGA
MOLECULAR
LA CAMPIA
MICROBIOLOGOS ASOCIADOS LTDA.
MULTIDIMENSIONALES S.A.
NESTL DE COLOMBIA S.A.
QUIK LTDA.
ROCHE DIAGNOSTICS
SERVICIOS DE LABORATIO CLNICO
LTDA.
UNIVERSIDAD MANUELA BELTRN

ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.
DIRECCIN DE NORMALIZACIN

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

CONTENIDO

Pgina
INTRODUCCIN......................................................................................................................1

1.

OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN ........................................................................1

2.

REFERENCIAS NORMATIVAS ...................................................................................2

3.

TRMINOS Y DEFINICIONES .....................................................................................2

4.

PRINCIPIO....................................................................................................................2

5.

MEDIOS DE CULTIVO Y DILUYENTES......................................................................2

5.1

DILUYENTES ...............................................................................................................3

5.2

AGAR PARA RECUENTO EN PLACA (PCA).............................................................3

5.3

MEDIO DE RECUBRIMIENTO ....................................................................................4

6.

APARATOS Y MATERIAL DE VIDRIO .......................................................................4

6.1

APARATO PARA ESTERILIZACIN EN SECO (HORNO) O

ESTERILIZACIN HMEDA (AUTOCLAVE) .............................................................5

6.2

ESTUFA DE INCUBACIN..........................................................................................5

6.3

CAJAS DE PETRI ........................................................................................................5

6.4

PIPETAS.......................................................................................................................5

6.5

BAO DE AGUA..........................................................................................................5

6.6

EQUIPO DE RECUENTO DE COLONIAS...................................................................5

6.7

PH-METRO...................................................................................................................5

6.8

TUBOS DE ENSAYO ...................................................................................................5

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

Pgina

7.

TOMA DE MUESTRAS ................................................................................................5

8.

PREPARACIN DE LA MUESTRA PARA ANLISIS ................................................5

9.

PROCEDIMIENTO........................................................................................................6

9.1

PORCIN PARA ANLISIS, SUSPENSIN INICIAL Y DILUCIONES ......................6

9.2

SIEMBRA E INCUBACIN ..........................................................................................6

9.3

RECUENTO DE COLONIAS........................................................................................6

10.

EXPRESIN DE LOS RESULTADOS.........................................................................7

10.1

MTODO DE CLCULO..............................................................................................7

10.2

PRECISIN ..................................................................................................................7

10.3

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS ANALTICOS .......................................7

10.4

LMITES DE CONFIANZA............................................................................................8

11.

INFORME DE ANLISIS..............................................................................................8

BIBLIOGRAFA......................................................................................................................10
ANEXOS
ANEXO A (Informativo)
UTILIZACIN DE LA DIFERENCIA CRTICA (DC) PARA LA INTERPRETACIN
DE LOS RESULTADOS...........................................................................................................9
ANEXO B (Informativo)
CUADRO DE DIFERENCIAS ENTRE LA NTC4519 (Primera actualizacin) y la
ISO 4833:2003 .......................................................................................................................12

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS

PARA CONSUMO HUMANO Y ANIMAL.
MTODO HORIZONTAL PARA EL RECUENTO DE
MICROORGANISMOS. TCNICA DE RECUENTO
DE COLONIAS A 30 C

INTRODUCCIN
Dada la gran variedad existente de productos alimenticios destinados al consumo humano y animal
este mtodo horizontal puede no ser directamente aplicable para ciertos productos. En estos casos,
se pueden emplear diferentes mtodos, especficos para estos productos, si est absolutamente
justificado por razones tcnicas. Sin embargo, se debera intentar aplicar este mtodo horizontal
siempre que sea posible.
Cuando se revise esta norma nacional, se tendr en cuenta toda la informacin disponible en ese
momento, sobre la aplicacin de este mtodo y las razones que han originado desviaciones para
productos concretos.
La armonizacin de los mtodos de anlisis no puede ser inmediata y, para ciertos grupos de
productos pueden existir ya normas internacionales que no se ajusten a este mtodo horizontal. Se
espera que cuando esas normas se revisen, se cambien para que se ajusten a esta norma
nacional y que solo se conserven las divergencias inevitables justificadas por razones tcnicas.
Esta norma es una adopcin modificada (MOD) por traduccin, respecto a su documento de
referencia, la norma ISO 4833:2003. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. Horizontal
Method for the Enumeration of Microorganisms Colony-Count Technique at 30 Degrees C

1.

OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN

Esta norma nacional especifica un mtodo horizontal para el recuento de microorganismos, contando
las colonias que crecen en un medio slido despus de la incubacin aerbica a 30 C. Esta norma
nacional es aplicable a los productos destinados al consumo humano o animal, aunque sujeta a las
limitaciones expuestas en la introduccin.
La aplicabilidad de esta norma nacional al examen de determinados alimentos fermentados y
alimentos para animales es limitada. Para el examen de determinados alimentos fermentados y
alimentos para animales, pueden ser ms apropiados otros medios y/u otras condiciones de
incubacin.

1 de 12

NORMA TCNICA COLOMBIANA

2.

NTC 4519 (Primera actualizacin)

REFERENCIAS NORMATIVAS

Las normas que a continuacin se relacionan contienen disposiciones vlidas para esta norma
nacional. En el momento de la publicacin estaban en vigor las ediciones indicadas. Toda
norma est sujeta a revisin por lo que las partes que basen sus acuerdos en esta norma
nacional deben estudiar la posibilidad de aplicar la edicin ms reciente de las normas
indicadas a continuacin. Los miembros de CEI y de ISO poseen el registro de las normas
internacionales en vigor en cada momento.
NTC 4491-1, Microbiologa de los alimentos para consumo humano y animal. Preparacin de
las muestras de ensayo, suspensin inicial y las diluciones decimales para examen
microbiolgico Parte 1: Reglas generales para la preparacin de la suspensin inicial y de
diluciones decimales
NTC 4092, Microbiologa de los alimentos para consumo humano y animal. Reglas generales
para los exmenes microbiolgicos
GTC 78, Microbiologa de alimentos y alimentos para animales. Gua para la preparacin y
produccin de medios de cultivo. Gua general para el aseguramiento de la calidad para la
preparacin de los medios de cultivo en el laboratorio.
ISO 8261, Leche y productos lcteos. Directrices generales para la preparacin de muestras
para anlisis, suspensiones iniciales y diluciones decimales para el examen microbiolgico.
ISO 4833-2, Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. Horizontal Method for the
Enumeration of Microorganisms. Surface Colony Count Technique at 30 C.

3.

TRMINO Y DEFINICIN

Para los propsitos de esta norma nacional, se aplica el siguiente trmino y definicin.
3.1 Microorganismo. Bacterias, levaduras y mohos que forman colonias contables, producidas
en las condiciones especificadas en esta norma nacional .

4.

PRINCIPIO

4.1
Se siembran en profundidad dos cajas empleando un medio de cultivo determinado y
una cantidad determinada de la muestra para anlisis, si el producto es lquido, o empleando
una cantidad determinada de una suspensin inicial en el caso de otros productos.
Se preparan otros pares de cajas en profundidad, bajo las mismas condiciones, empleando
diluciones decimales de la muestra para anlisis o de la suspensin inicial.
4.2

Las cajas se incuban aerbicamente a 30 1 C durante 72 h 3 h

4.3
El nmero de microorganismos por mililitro o por gramo de muestra se calcula a partir
del nmero de colonias obtenidas en cajas seleccionadas (vase el numeral 10).

5.

MEDIOS DE CULTIVO Y DILUYENTES

Para las prcticas habituales de laboratorio, vanse las normas NTC 4092 e ISO/TS 11133-1.
2

NORMA TCNICA COLOMBIANA

5.1

NTC 4519 (Primera actualizacin)

DILUYENTES

Vase la parte adecuada de la NTC 4491-1

5.2

AGAR PARA RECUENTO EN PLACA (PCA)

5.2.1

Composicin
Digerido enzimtico de casena

5,0 g

Extracto de levadura

2,5 g

Glucosa anhidra

1,0 g

1)

Agar

de 9 g a18 g

Agua

1 000 mI

Cuando se examinan productos lcteos, adase 1,0 g de leche en polvo desnatada por litro
de medio de cultivo. La leche en polvo desnatada debe estar libre de sustancias inhibidoras.
5.2.2

Preparacin

5.2.2.1 Preparacin a partir de medio completo deshidratado comercial. Sganse las instrucciones del
fabricante y adase, si es necesario, la leche en polvo desnatada (vase el numeral 5.2.1).
Se ajusta el pH, si fuera necesario, de manera que despus de la esterilizacin sea de 7,0 0,2
a 25 C.
5.2.2.2 Preparacin a partir de los componentes bsicos deshidratados. Se disuelven y
dispersan en el agua en el orden siguiente: el extracto de levadura, el digerido enzimtico de
casena, la glucosa y, si fuera necesario, la leche en polvo desnatada. Si se calienta el agua se
facilita la preparacin.
Se aade el agar y se calienta hasta ebullicin agitando frecuentemente, hasta que el agar se
disuelva completamente.
Se ajusta el pH, si fuera necesario, de manera que despus de la esterilizacin sea de 7,0 0,2
a 25 C.
5.2.2.3 Distribucin, esterilizacin y almacenamiento. Se reparte el medio en tubos de ensayo
(vase el numeral 6.8), en cantidades de 10 ml a 15 mI por tubo, o en matraces o frascos
(vase el numeral 6.8) de capacidad no superior a 500 mI.
Se esteriliza en autoclave a 121 C De durante 15 min.
Si el medio se va a usar inmediatamente, se enfra antes de su empleo a una temperatura
entre 44 C y 47 C en un bao de agua (vase el numeral 6.5). En caso contrario, se
almacena en oscuridad a una temperatura de 6 C 2 C por un perodo no mayor de 3 meses,
bajo condiciones que no permitan ningn cambio de su composicin ni de sus propiedades.
Antes de comenzar el examen microbiolgico, con el fin de evitar todo retraso en el momento
de verter el medio, antes de su empleo se funde completamente el medio y a continuacin se
enfra a una temperatura entre 44 C y 47 C en un bao de agua (vase el numeral 6.5).

1)

Dependiendo de la capacidad de gelificacin del agar.

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

Con el objeto de comprobar la temperatura del agar, se recomienda colocar un termmetro en

una porcin de una disolucin control de 15 g/l de agar en un recipiente separado idntico al
empleado para el medio o se pueden utilizar termmetros por contacto. La temperatura de la
disolucin control debera ser expuesta a las mismas condiciones de calentamiento y
enfriamiento que el propio medio.
5.2.3 Anlisis de rendimiento para la garanta de calidad del medio de cultivo. Para analizar el
rendimiento del medio, vase la GTC 78.
5.3

MEDIO DE RECUBRIMIENTO (si fuera necesario; vase el numeral 9.2.7)

5.3.1

Composicin

Agar1) de

12 g a 18 g

Agua

1 000 mI

5.3.2

Preparacin

Se aade el agar al agua y se calienta hasta ebullicin agitando frecuentemente, hasta que el
agar se disuelva completamente o se pone al vapor durante unos 30 min.
Se ajusta el pH, si fuera necesario, de manera que despus de la esterilizacin sea de 7,0 0,2
a 25 C.
5.3.3

Distribucin, esterilizacin y almacenamiento

Se reparte el medio en tubos de ensayo (vase el numeral 6.8), en cantidades de 4 mI por

tubo, o en matraces o frascos (vase el numeral 6.8) de capacidad adecuada.
Se esteriliza en autoclave a 121 C durante 15 min.
Si el medio se va a usar inmediatamente, se enfra antes de su empleo entre 44 C y 47 C en un
bao de agua (vase el numeral 6.5). En caso contrario, se almacena en oscuridad a una
temperatura de 6 C 2 C o segn las indicaciones dadas por el fabricante durante un mximo de
3 meses, bajo condiciones que no permitan ningn cambio de su composicin ni de sus
propiedades.
Antes de comenzar el examen microbiolgico, con el fin de evitar todo retraso en el momento
de verter el medio, antes de su empleo se funde completamente el medio y a continuacin se
enfra a una temperatura entre 44 C y 47 C en un bao de agua (vase el numeral 6.5).

6.

APARATOS Y MATERIAL DE VIDRIO

El material de un solo uso es una alternativa aceptable al material de vidrio reutilizable, si las
especificaciones son similares.
El equipamiento de laboratorio microbiolgico habitual y, en particular, lo siguiente:

1)

Dependiendo de la capacidad de gelificacin del agar.

NORMA TCNICA COLOMBIANA

6.1

NTC 4519 (Primera actualizacin)

EQUIPO PARA ESTERILIZACIN EN SECO (HORNO) O ESTERILIZACIN HMEDA

(AUTOCLAVE)

Vase la NTC 4092

6.2

ESTUFA DE INCUBACIN

Capaz de operar a 30 C 1 C.
6.3

CAJAS DE PETRI

De vidrio o plstico y de 90 mm a 100 mm de dimetro.

6.4

PIPETAS

De capacidad nominal de 1 mI.

6.5

BAO DE AGUA

Capaz de operar a una temperatura entre 44 C y 47 C.

6.6

EQUIPO DE RECUENTO DE COLONIAS

Por ejemplo, puede emplearse uno consistente en una base iluminada con un fondo negro,
equipado con una lente de aumento preferiblemente de unos 1,5x y un contador mecnico o
electrnico digital.
6.7

PH-METRO

Que tenga una precisin de calibracin de 0,1 unidades de pH a 25 C.

6.8

TUBOS DE ENSAYO

Matraces o frascos de capacidad adecuada y no superior a 500 mI.

7.

TOMA DE MUESTRAS

Es importante que el laboratorio reciba una muestra que sea verdaderamente representativa y
que no haya sufrido daos o cambios durante el transporte o el almacenamiento.
La toma de muestras no constituye una parte del mtodo especificado en esta norma nacional.
Para ello vase la norma internacional especfica referente al producto de que se trate. Si no
existe una norma internacional especfica, se recomienda que las partes interesadas adopten
un acuerdo sobre este punto.

8.

PREPARACIN DE LA MUESTRA PARA ANLISIS

La muestra para anlisis se prepara de acuerdo con la parte concerniente de la NTC 4491-1 y
la norma ISO 8261, y con la norma especfica referente al producto de que se trate. Si no existe
una norma internacional especifica, se recomienda que las partes interesadas adopten un
acuerdo sobre este punto.
5

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

9.

PROCEDIMIENTO

9.1

PORCIN PARA ANLISIS, SUSPENSIN INICIAL Y DILUCIONES

Vase la parte concerniente de la NTC 4491-1 y la norma nacional especfica referente al

producto de que se trate.
9.2

SIEMBRA E INCUBACIN

9.2.1 Se toman dos cajas de Petri estriles (vase el numeral 6.3). Mediante una pipeta estril
(vase el numeral 6.4), se transfieren a cada placa 1 mI de la muestra para anlisis si es
lquida, 1 ml de la suspensin inicial en el caso de otros productos (dilucin 10-1).
9.2.2 Se toman otras dos cajas de Petri estriles (vase el numeral 6.3). Mediante otra pipeta
estril (vase el numeral 6.4), se transfieren a cada placa 1 ml de la dilucin 10-1 (producto
lquido) o 1 mI de la dilucin 10-2 (otros productos).
9.2.3 Si es necesario, se repite el procedimiento con ms diluciones, empleando una nueva
pipeta para cada dilucin decimal.
9.2.4 Si es adecuado y posible, se seleccionan slo las secuencias de diluciones criticas (por
lo menos dos diluciones decimales consecutivas) para la siembra de las cajas de Petri que den
recuentos de colonias entre 30 colonias y 300 colonias por placa.
9.2.5 Se vierten aproximadamente de 10 ml a 15 ml de agar para recuento en placa (vase el
numeral 5.2) que se encuentre a una temperatura entre 44 C y 47 C en cada una de las cajas
de Petri. El tiempo transcurrido entre el final de la preparacin de la suspensin inicial (o de la
dilucin 10-1 si el producto es lquido) y el momento en el que el medio (vase el numeral 5.2)
se vierte en las cajas no debe superar los 15 min.
9.2.6 Se mezcla cuidadosamente el inculo con el medio mediante rotacin de las cajas de
Petri y se permite solidificar la mezcla dejando reposar las cajas de Petri en una superficie
horizontal lisa.
9.2.7 Despus de que se haya completado la solidificacin y, slo en el caso en el que se
sospeche que el producto que se est examinando contiene microorganismos cuyas colonias
sobrecrecern en la superficie del medio, se vierten unos 4 mI del medio de recubrimiento
(vase el numeral 5.3) que se encuentre entre 44 C y 47 C en la superficie del medio
inoculado. Se deja solidificar como se describi anteriormente.
9.2.8 Las cajas de Petri preparadas se invierten y se sitan en la incubadora (vase el numeral 6.2) a
30 C 1 C durante 72 h 3 h. No se deben apilar ms de seis cajas una encima de la otra. Es
conveniente que las pilas de cajas estn separadas una de otra y de las paredes y parte superior
de la incubadora.
9.3

RECUENTO DE COLONIAS

9.3.1 Despus del perodo de incubacin especificado (vase el numeral 9.2.8), se cuentan
las colonias de las cajas (vase el numeral 10.1), empleando el equipo de recuento de colonias
(vase el numeral 6.6). Se examinan las cajas de Petri bajo luz tenue. Seria importante que las
colonias en punta de alfiler sean incluidas en el recuento, pero es esencial que la persona que
realiza la lectura evite confundir las partculas no disueltas o precipitadas con colonias en punta
de alfiler. Se examinan con atencin los elementos dudosos, empleando una lupa cuando sea
necesario, con el objeto de diferenciar las colonias de partculas extraas.
6

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

Incluir la forma de hacer el recuento (que se referencia en la norma de coliformes)

NOTA

Si es necesario, se pueden adicionar reactivos que faciliten la visualizacin de las colonias.

9.3.2 Las colonias invasoras deben ser consideradas como una sola colonia. Si menos de un
cuarto de la placa est invadida por dichas colonias, se cuentan las colonias de la parte no
afectada de la placa y se calcula el nmero correspondiente a la placa entera. Si est invadido
ms de un cuarto de la placa, se desecha el recuento.

10.

EXPRESIN DE LOS RESULTADOS

10.1

MTODO DE CLCULO

Vase la NTC 4092

10.2

PRECISIN

10.2.1 Generalidades
Los datos de precisin han sido calculados para cajas que contienen entre 30 colonias a 300 colonias.
Los datos de precisin dependen de la flora en asociacin y de la matriz de la muestra. Los datos
presentados se derivan de estudios en colaboracin (vanse las referencias [1], [2] y [3]) Y son
vlidos para leche cruda y pasterizada. Pueden utilizarse como estimacin en el caso de recuentos
en otros productos. Vase la NTC 4092.
10.2.2 Repetibilidad
La diferencia absoluta entre dos resultados analticos individuales independientes, obtenidos
empleando el mismo mtodo sobre material analtico idntico, en el mismo laboratorio, por el
mismo analista y empleando el mismo equipo en un intervalo de tiempo corto, no debera ser
mayor que el lmite de repetibilidad, r= 0,25, en log10 microorganismos por mililitro
(correspondiente a 1,8 en la escala normal de microorganismos por mililitro).
NOTA Este lmite de repetibilidad proviene de estudios colaborativos realizados sobre leche cruda y pasteurizada
(vanse las referencias [1], [2] y [3]) y puede ser aplicado a dichos productos.

10.2.3 Reproducibilidad
La diferencia absoluta entre dos resultados analticos individuales, obtenidos empleando el
mismo mtodo sobre material analtico idntico, en diferentes laboratorios, por analistas
diferentes y empleando equipos diferentes, no debera ser mayor que el lmite de
reproducibilidad, R = 0,45, en log10 microorganismos por mililitro (correspondiente a 2,8 en la
escala normal de microorganismos por mililitro).
NOTA
Este lmite de reproducibiliIdad proviene de estudios colaborativos realizados sobre leche cruda y
pasteurizada (vanse las referencias [1], [2] Y [3]) Y puede ser aplicado a dichos productos.

10.3

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS ANALTICOS

En los siguientes ejemplos, se consideran los datos promedio de la precisin, un nivel de

probabilidad del 95 % y el anlisis de una muestra. Se debera tener en cuenta que, en la
prctica, se emplea a menudo el promedio de varias muestras. Las cifras se expresan en
microorganismos por mililitro.
7

NORMA TCNICA COLOMBIANA

a)

NTC 4519 (Primera actualizacin)

Condiciones de repetitibilidad
Primer resultado:

105 = 100 000

La diferencia entre el primer y segundo resultado no debera ser superior a 0,25 unidades
log10,
Segundo resultado: log 104,75 = 56 000
log 105,25 = 178 000
La diferencia entre el primer y segundo resultado es aceptable si el segundo resultado
no es inferior a 56 000 o no es superior a 178 000.
b)

Condiciones de reproducibilidad
Resultados obtenidos en el primer laboratorio (media de la determinacin
duplicada): 10 5 = 100 000
La diferencia entre el primer y segundo resultado obtenido en el segundo laboratorio no
debera ser superior a 0,45 unidades log10.
Segundo resultado: log 104,55 = 36 000,
log 105,45 = 280 000
La diferencia entre los resultados obtenidos en el primer y segundo laboratorio es
aceptable, si el segundo laboratorio obtiene un resultado que no es inferior a 36 000 y no es
superior a 280 000.

El Anexo A muestra los clculos y el empleo de las diferencias crticas (DC) para interpretar los
resultados.
10.4

LIMITES DE CONFIANZA

Vase la NTC 4092

11.

INFORME DE ANLISIS

El informe del anlisis debe especificar lo siguiente:

a)

toda la informacin necesaria para la identificacin completa de la muestra;

b)

el mtodo de toma de muestras empleado, si se conoce;

c)

el mtodo analtico utilizado, con referencia a esta norma;

d)

todos los detalles operativos no especificados en esta norma o considerados

opcionales, junto con los detalles de todo tipo de incidencias que pudieran haber
afectado a los resultados;

e)

los resultados obtenidos.

8

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

ANEXO A
(Informativo)

UTILIZACIN DE LA DIFERENCIA CRTICA (DC)

PARA LA INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS
En los siguientes ejemplos, se consideran los datos de precisin media, un nivel de
probabilidad del 95 % y el anlisis de una muestra. Se debera tener en cuenta que, en la
prctica, se emplea a menudo la media de varias muestras. Las cifras se expresan en
microorganismos por mililitro.
a)

Condiciones de reproducibilidad
Resultados obtenidos en el primer laboratorio (media de la determinacin duplicada): 105 =
100 000.
La diferencia entre este resultado y un resultado obtenido en un segundo laboratorio
(media de n determinaciones; n = 2 en este ejemplo) es aceptable si no excede la
diferencia crtica (DC), en unidades log10,
CD =

R 2 r 2 1
n

R2

r2
=
2

0,45

0,25 2
2

= 0,41

en donde
r

es el lmite de repetitibilidad;

es el lmite de reproducibilidad.

La diferencia entre los resultados obtenidos en el primer y segundo laboratorio es aceptable

si el segundo laboratorio obtiene un resultado que no es inferior a 104,59 = 39 000 o no es
superior a 105,41 = 257 000.
b)

Comparacin con un lmite (test unilateral)

Lmite: 105 = 100 000.
La diferencia entre el lmite y el resultado del laboratorio (media de n determinaciones; n
= 2 en este ejemplo) ha de compararse con el lmite de diferencia critica (LDC):
CDL = 0,84 2 x

R 2 r 2 1
n

= 0,84 2 x

R2

r2
2

= 0,24

Los resultados hasta 105,24 = 174 000 no indican una no conformidad con el lmite.

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

ANEXO B
(Informativo)

Cuadro de diferencias entre la NTC 4519 (Primera actualizacin) y la ISO 4833:2003

NTC 4519
(Primera actualizacin)
OBJETO:
Esta norma nacional especifica un
mtodo horizontal para el recuento
de microorganismos, contando las
colonias que crecen en un medio
slido despus de la incubacin
aerbica a 30 C.

ISO 4833:2003

Sustentacin Tcnica

OBJETO:
Esta norma da directrices
generales para el recuento de
microorganismos presentes en
productos destinados al consumo
humano o alimentacin animal,
contando las colonias que crecen
en un medio slido despus de la
incubacin aerbica a 35 C
2C.

El documento de referencia ISO 4833 de la

NTC 4519 fue actualizado en el ao 2003,
modificando la temperatura de 35 C a 30 C
para
la
tcnica,
cambio
sustentado
tcnicamente en la necesidad de que el
mtodo permitiera tener recuentos verdicos
teniendo en cuenta la posible contaminacin
ambiental del proceso o por mala limpieza en
el proceso adems porque se busca estudiar
microorganismos mesfilos y psicrfilos y una
parte de los termotolerantes; de esta manera
la temperatura de 30 C es utilizada para
determinar el deterioro del alimento y la calidad
del procesamiento de los alimentos. En Colombia
el Comit 25- realiz pruebas interlaboratorios
teniendo en cuenta como comparativo
condiciones de incubacin a 30 C, durante 48 h
a 72 h y a 35 C de incubacin durante 48 h
a 72 h. Al finalizar el tratamiento estadstico en el
pas se da validez al sustento tnico internacional
(ISO e Instituto Pasteur) para adoptar la
temperatura a 30 C. (Acta No.113 2008-07-15).
El tiempo de incubacin (72 h) se encuentra
estandarizado por la ISO, adicionalmente el
consenso del Comit define darle un rango de
3 h armonizando de esta forma con las
condiciones de tiempo de incubacin
estipuladas en los mtodos y documentos
normativos colombianos.

DEMAS PARTES DEL

DEMAS
PARTES
DEL
DOCUMENTO QUE REFIEREN A DOCUMENTO QUE REFIEREN
LA
TEMPERATURA
DE A LA TEMPERATURA DE
INCUBACIN
INCUBACIN

4.2
Las
cajas
se
incuban 4.2 Incubacin aerbica de las
aerbicamente a 30 1 C durante cajas a 35 C 2 C durante 48 h
72 h 3 h.

5.2.2.1 Se ajusta el pH, si fuera

necesario,
de
manera
que
despus de la esterilizacin sea
de 7,0 0,2 a 25 C.

MEDIO DE CULTIVO ... Se

ajusta el pH, si es necesario, de
tal modo que despus de la
esterilizacin sea de 7,0 C a
25 C.
5.2.2.3 ... Se reparte el medio en 5.2.2.3 ... Se reparte el medio
tubos de ensayo (vase el en tubos de ensayo (vase el
numeral 6.8), en cantidades de 10 numeral 6.8), en cantidades de
12 ml a 15 mI por tubo ...
ml a 15 mI por tubo ...

Las unidades de pH se establecen en un rango

de 0,2. Armonizando las unidades de acuerdo
con el documento de referencia ISO 4833.
Las metodologas implementadas en el pas
estipulan utilizar volmenes de medio de 10 ml
en tubos de ensayo, ya que 10 ml es ms
prctico para medir en material volumtrico
(pipetas etc).

9.2.5...Se vierten aproximadamente

12 ml a 15 mI por tubo
5.2.2.3 ... En caso contrario, se La temperatura estipulada para estas
almacena en oscuridad a una condiciones en la ISO 7218:2008 es de 2 C a
8 C, con el rango que se define en este
temperatura de 3 C 2 C
documento se cumple requisito.
5.3.3 ... 6 C 2 C
5.3.3 ... 3 C 2 C
6.5
BAO DE AGUA
6.5
BAO DE AGUA
El consenso colombiano define que las
condiciones de operacin de estos equipos se
Capaz de operar entre 44 C y 47 C O aparato similar, con capacidad encuentra entre estas temperaturas.
de operar 45C 0,5 C

9.2.5...Se vierten aproximadamente

10 ml a 15 mI por tubo
5.2.2.3 ... En caso contrario, se
almacena en oscuridad a una
temperatura de 6 C 2 C

Contina...

10

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

ANEXO B
(Informativo)
(Continuacin)

NTC 4519
(Primera actualizacin)
9.2.4 Si es adecuado y posible, se
seleccionan slo las secuencias
de diluciones criticas (por lo
menos dos diluciones decimales
consecutivas) para la siembra de
las cajas de Petri que den
recuentos de colonias entre 30
colonias y 300 colonias por placa.

ISO 4833:2003

Sustentacin Tcnica

9.2.4 Si es adecuado y posible,

se
seleccionan
slo
las
secuencias de diluciones criticas
(por lo menos dos diluciones
decimales consecutivas) para la
siembra de las cajas de Petri que
den recuentos de colonias entre
15 colonias y 300 colonias por
placa.

Las normas tcnicas colombianas que

relacionan estas especificaciones de recuento,
contemplan el recuento entre 30 colonias y
300 colonias

9.3.1 ...
NOTA
Si es necesario, se 9.3.1 ... No contempla la nota
pueden adicionar reactivos que aclaratoria
faciliten la visualizacin de las
colonias.

11

Es necesario aclarar que se pueden utilizar

este tipo de reactivos que son vlidos para la
aplicacin de la tcnica en el pas.

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4519 (Primera actualizacin)

BIBLIOGRAFA

[1]

PITON, C., GRAPPIN, R. A Model For Statistical Evaluation Of precision Parameters Of

Microbiological Methods: Application To Dry Rehydratable Film Methods And IDG
Reference Methods For Enumeration Of Total Aerobic Mesophilic Flora And Coliforms In
Raw Milk. J AOAC, 74, 1991, pp. 92-103.

[2]

SCOTTER, S., ALDRIDGE. M., BACK, J., WOOD, R. Validation of European Community
Methods for Microbiological and Chemical Analysis of Raw and Heat-Treated Milk. J.
Assoc. Publ. Analyst., 29, 1993, pp.I-32.

[3]

DAHMS. S., WEISS, H. Estimation of Precision Values for Microbiological Reference

Methods: Standardized Pour Plate Technique. Milchwiss., 53, 1998, pp.555-559.

12