Diagnstico Bioqumico

Citogentica: breve descripcin de las principales tcnicas

utilizadas para realizar un estudio cromosmico
Dra. Pilar Corral
Dpto. de Biologa Molecular
IACA Laboratorios
citogenetica@iaca.com.ar

diversas tcnicas de bandeo cromosmico y en diferentes

tejidos, siendo el bandeo G en linfocitos de sangre perifrica la
tcnica y muestra de eleccin (Figura 1).
Esta metodologa de bajo costo, permite mediante el
anlisis detallado de todos los cromosomas, detectar la
presencia de anomalas numricas y estructurales.

El laboratorio de citogentica juega un papel

fundamental para la gentica clnica. Con los avances
cientficos y tecnolgicos desarrollados a partir de los aos
70, no slo hemos podido identificar los cromosomas, sino
que hemos podido establecer que las anomalas
cromosmicas contribuyen significativamente en la
enfermedad gentica, resultando en retardo mental, retraso
en el crecimiento, malformaciones, abortos espontneos e
infertilidad. Por tal motivo, es importante que el mdico
conozca cuales son los medios o herramientas que se
disponene en la actualidad, su utilidad, indicaciones para
estudio y significado de las mismas.

Las anomalas numricas (aneuploidas) implican la

prdida y/o ganancia de uno o varios cromosomas completos
y puede incluir tanto a autosomas como a cromosomas
sexuales.

Introduccin

Las anomalas estructurales implican cambios en la

estructura de uno o varios cromosomas, las ms comunes
son: deleciones, inversiones, translocaciones.
Figura 1. Cariotipo femenino con bandeo G de resolucin
estndar
Human female
G-bands

Hoy en da, el anlisis cromosmico puede realizarse

con tcnicas de:
1. Citogentica convencional: Cariotipo de resolucin
estndar y cariotipo de alta resolucin (AR).
2. Citogentica molecular: Hibridacin in situ fluorescente
(FISH), hibridacin in situ fluorescente multicolor (M-FISH o
SKY) y la hibridacin genmica comparada (CGH).
Estas ltimas metodologas representan una
autntica revolucin en el rea del la gentica, dado que han
permitido mejorar la sensibilidad y la especificidad de los
hallazgos citogenticos.
Cundo es necesario realizar un cariotipo?
Tcnicas de citogentica convenciona
El cariotipo de un individuo puede realizarse por

Las indicaciones para realizar un cariotipo quedan reflejadas

en la tabla siguiente:
Contina en pag. 16

14

Bioanlisis

Tabla I. Indicaciones para realizar un cariotipo

- Infertilidad inexplicable
- Diagnstico prenatal (lquido amnitico y biopsia de corion)

1. Perodo prenatal:
7. En todas las edades:
- Edad mayor de 35 aos
- Ansiedad materna
- Triple screening alterado
- Oligoamnios - polihidraminos
- Retraso de crecimiento intrauterino (CIR)
- Arteria umbilical nica
- Sospecha ecogrfica de cromosomopata
- Antecedentes de comosomopata balanceada en un progenitor

- Procesos malignos (cariotipo constitucional y tumoral)

- Control de transplantes de mdula sea
Puesto que en las mejores condiciones tcnicas, la
resolucin del cariotipo de resolucin estndar no supera las
550 bandas, se deber realizar un cariotipo de alta resolucin
o tcnicas de citogentica molecular en aquellos casos donde
la alteracin estructural sospechada sea menor a 10
megabases.

2. Perodo neonatal:
- Malformaciones mayores aisladas
- Presencia de 3 o ms defectos congnitos menores
- Recin nacido con rasgos dismrficos
- Recin nacido con genitales ambiguos
- Parto con producto muerto de causa inexplicable
- Muerte neonatal de causa inexplicada
3. Perodo de lactancia:
- Nios con dificultades para el aprendizaje
- Nios con rasgos dismrficos
- Nios con retraso psicomotor
4. Perodos preescolar-escolar:
- Trastornos del crecimiento
- Retraso psicomotor
- Rasgos dismrficos
5. Perodo de adolescencia:
- Ginecomastia
- Falta de desarrollo puberal
- Amenorrea primaria o secundaria
- Retraso mental
- Rasgos dismrficos
6. Perodo del adulto:
- Padres de nios con anomalas cromosmicas estructurales
- Abortos de repeticin

16

Bioanlisis

En qu consiste un cariotipo de alta resolucin y cmo

se obtiene?
El cariotipo de alta resolucin (AR) consiste en el
anlisis de los cromosomas en profase y prometafase,
incrementando as el nmero de bandas visibles al
microscopio.
En nuestro laboratorio, las clulas en profase y
prometafase se obtienen a partir de un cultivo de linfocitos
sincronizado mediante el agregado de los reactivos 5'-fluoro2'-desoxiuridina (FrdU) y 5'-bromo- 2'-desoxiuridina (BrdU).
Los cromosomas en profase y prometafase pueden
alcanzar una resolucin superior a las 800 bandas (Figura 2).
Figura 2. Cariotipo masculino con bandeo G de alta
resolucin

De esta manera, al producirse una elongacin de los

cromosomas es posible la deteccin de alteraciones
estructurales ms pequeas como microdeleciones,
duplicaciones y sutiles translocaciones.
Encontramos un ejemplo de su aplicacin en los
sndromes de delecin y en algunos sndromes de
microdelecin (ver Tabla II). Tambin se utiliza para la
confirmacin de resultados obtenidos en un cariotipo de
resolucin estndar, y para definir en forma precisa los puntos
de ruptura de los cromosomas involucrados en alteraciones
estructurales.
Tabla II. Sndromes de delecin / microdelecin
Sndrome

Wolf-Hirschhorn
Cri du Chat
Langer-Giedion
Wiliams*
WARG*
Prader Willi/Angelman*
Miller- Dieker*
Smith Magenis*
DiGeorge*
Rubinstein-Taybi*
Kallman*

Regin cromosmica
delecionada
4p16.3
5p15.2
8q24.11-q24.13
7q11.23
11p13
15q11.2
17p13.3
17p11.2
22q11.2
16p13.3
Xp22.3

Es importante aclarar que:

- Ciertas deleciones muy pequeas pueden escapar a esta
tcnica y dar resultado falsos negativos.
- Cualquier delecin que se sospeche citogenticamente
debe ser confirmada por FISH u otra tcnica de citogentica
molecular.
- Slo algunas microdeleciones son citogenticamente
visibles. Actualmente, la manera de identificar estos
sndromes es por medio de FISH, utilizando sondas
especficas para las regiones delecionadas.
Por otro lado, el American College of Medical Genetics
(ACMG) recomienda que el AR debe reservarse para casos

donde un sndrome de microdelecin/microduplicacin

especfico es considerado, en el cual su diagnstico
generalmente requiere de cromosomas con una resolucin
superior a 650 bandas. Adems, debido a la gran dificultad y
cantidad de trabajo que requiere el anlisis de cromosomas
de alta resolucin, en la rutina el AR de 850 bandas slo debe
ser indicado para mapear regiones cromosmicas
especficas.

1401 CARIOTIPO DE ALTA

RESOLUCIN

de mxima esterilidad.
Remitir muestra a temperatura ambiente, dentro de
las 24 horas de realizada la
extraccin.
Enviar planilla de
datos del paciente.

Bibliografa
Es importante recordar que la realizacin de cualquier
prueba gentica debe ir acompaada de un acto de
asesoramiento gentico.
Cmo solicitar estos estudios?
Cdigo Estudio solicitado

Tipo de muestra y
requerimiento
5.0 ml de sangre
1961 BANDEO G (CARIOTIPO
RESOLUCIN ESTNDAR) perifrica con heparina
sdica.
Trabajar en condiciones

1. Shaffer L, et al. American College of Medical Genetics guideline on

the cytogenetic evaluation of the individual with developmental delay
or mental retardation. November/December 2005;7(9):650-654.
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http://www.med.com/ Medicine Online
http://www.geneclinics.org/index,html Geneclinic