LAS CEPAS ATCC

Herramienta indispensable en el Control

de Calidad Interno en Microbiologa.

MARIA ISABEL MONTOYA ROMERO

Especialista en Microbiologa Clnica
Directora Tcnica Coordinadora de Calidad

Instituto Colombiano de Medicina Tropical

TEMAS DE INTERES

Definicin y

Generalidades Cepas ATCC

Historia ATCC MicroBiologics

Clasificacin

Reconstitucin y Almacenamiento

Registro y control

Usos en el control de Calidad interno

Ventajas de ingresar a un programa de
licencia derivada.

Que son las Cepas Referencia

es un material
biolgico de referencia certificado.
La coleccin certifica que se suministra
una determinada cepa, que es un cultivo
puro, y que se han observado las
convenientes pruebas morfolgicas,
bioqumicas y moleculares
correspondientes.

Cepas Certificadas:

Adquisicin de las Cepas de Referencia






Obtencin directa a partir de una coleccin nacional e

internacional reconocida, con su respectivo Registro y
Certificado.
CEPAS NCTC: National Collection of type Cultures. Londres.
CNCM: Colection Nationale de Cultures of Microorganismes. Paris,
Francia.

ATCC: American Type Culture Collection. Rockville, EU

CCTM: Collection Nationale de Cultures de Microorganismes. Institut
Pasteur

NCYC: National Collection of Yeast Cultures. Norwik UK.

NCIBM: National Collections of industrial and Marine Bacteria.

CECT: Coleccin espaola de cultivos tipos.

Generalidades de la ATCC


La coleccin que almacena la ATCC se inici en

1925, sobre una coleccin de bacteriologa
iniciada en 1911. Es una organizacin en la que
participan actualmente 21 sociedades
cientficas.
En la actualidad mantiene colecciones de
Bacteriologa, Cultivos celulares, Plsmidos,
cidos nucleicos y Genotecas, Micologa y
Botnica, Protistologa y Virologa.

Quien es

El primer fabricante de productos Biologicos

(microorganismos liofilizados) para el control de calidad,
con licencia aprobada por ATCC

Patente de distribucin ATCC desde el ao 2004

35 Aos en el Mercado

- Laboratorio Comercial (1971)

- Fabricante de Medios de Cultivo Preparados (1975)
- Microorganismos para el Control de Calidad (1982)
- 100% Devocin a los Productos para el Control de
Calidad Microbiolgico (1996).

PRINCIPIO DEL SISTEMA DE LIOFILIZACIN




Gelatina: medio transporte

Leche descremada,acido ascrbico, dextrosa y
carbn activado: Agentes Crioprotectores
(preservan pared celular, evitan deshidratacin
por congelacin).
Carbn Vegetal: Neutraliza sustancias toxicas
generadas por la liofilizacin

El Certif icado es entregado

personalmente por LABCARE a
los Usuarios Finales de
MicroBioLogics para que el
laboratorio lo presente como
soporte mientras las Cepas estn
siendo utilizadas exclusiv amente
en los procedimientos del Control
de Calidad.

El Certif icado v alida la trazabilidad

y autenticidad de las
metodologas y controles hechos
por los Usuarios Finales clnicos e
industriales ante la ATCC y
organismos de v erif icacin.

Si el prov eedor de
microorganismos no puede
entregar un CERTIFICADO DE
CONFORMIDAD, estos
materiales no son autnticos

ATCC.

CLASIFICACION CEPAS ATCC



Cepas de
Referencia.

Cepas de Reserva.

Cepas de Trabajo.

CEPAS DE REFERENCIA


A fin de demostrar la trazabilidad : las cepas de

referencia deben obtenerse directamente de una
coleccin con la resea nacional o internacional de
cultivo de referencia reconocido.
"ISO 11133-1:2000", son: microorganismos definidos, por
lo menos a nivel de gnero y especie, catalogados ,
caracterizados y de origen conocido

CEPAS DE REFERENCIA


Son distribuidas y presentadas comercialmente

liofilizadas; los organismos de acreditacin son
los encargados de considerar vlida la fuente
de procedencia de la cepa a fin de que se
cumpla con el requisito de prevenir mutaciones,
deterioro o alteracin de las caractersticas
tpicas de las cepas.

El nmero de repiques a partir de la cepa de

referencia a de ser limitado, aceptndose hasta
cuatro pases como mximo a partir de la cepa o
semilla original de referencia.

PRESENTACION

KWIK-STIK

LYFO DISK
KWIK-STIK Plus

CEPAREO
Reconstitucion:



Las Cepas de referencia son almacenadas entre

2-8 C hasta su uso.
En la reconstitucin y siembra de la Cepas de
referencia, se utilizan medios de cultivo de
enriquecimiento, las condiciones de incubacin
y el procedimiento de almacenamiento varia
para cada tipo de microorganismo.
Boletin de informacion tecnica TIB.081
Recommended Growth Requirements

CEPAREO




www.microbiologics.com
Requerimientos:Hidratacion,Medios de
cultivo,Incubacion(atmosferas y Tiempo).
Las Cepas de referencia sern sometidas
a un control de calidad de pureza y
viabilidad, as se le dar registroCepas
ATCC\kwik.pdf. Cepas ATCC\lyfodisk.pdf

CEPAS DE RESERVA



Son cepas idnticas logradas mediante un nico

subcultivo de una cepa de referencia.
Son preparadas y conservadas en el laboratorio,
dentro del cual se destina un lugar para su
almacenaje, se trata de cepas potencialmente
peligrosas y cuya manipulacin queda
exclusivamente restringida al personal autorizado.
Cada Vial debe estar perfectamente identificado
con el nombre de la cepa, procedencia y fecha de
congelacin

CEPAS DE RESERVA



Las Cepas de Reserva una vez descongeladas

no deben volver a Congelarse.
Los mtodos para la preservacin y
mantenimiento de cepas de reserva son la
LIOFILIZACIN y la CONGELACIN A BAJAS
TEMPERATURAS.
Se da el uso de agentes Crioprotectores

CEPA DE TRABAJO






Se obtienen por subcultivo de las Cepas de

Reserva
Se subcultivan en medios slidos de
enriquecimiento apropiados para
C/microorganismo
Se debe Verificar la calidad, pureza y morfologa
tpica del subcultivo
Nunca subcultivarlas para sustituir a las cepas de
Reserva

Cepas de Referencia
Sub cultiv ada una sola v ez

No permitido

Cepa de Reserv a
(Liofilizacin, nitrgeno liquido, ultra congelacin rpida etc.)
Especificar tiempo y condiciones de Almacenamiento

Mantener en las condiciones especf icas

Descongelacin / Reconstitucin
Subcultiv ar una sola v ez
Cepa de Trabajo
Especificar tiempo y condiciones de almacenamiento

Maximo 8Pases
USO RUTINARIO

Cepa Ref erencia

4Pasajes

Pase de Reconstitucin
5Pasaje

6Pasaje

7Pasaje

8Pasaje

AlmacenamientoCepas
Reserv a en 6 Pasaje

Registro y Control de Cepas ATCC












Identificacin de la cepa.
Gnero y especie del
microorganismo
TIPO y N de coleccin.
N de lote.
Fecha de recepcin.
Fiche de reconstitucion.
Control de calidad de la
cepa de referencia
Conforme (SI/NO).
Fecha de caducidad de la
cepa.
Personal responsable.

Control de calidad
de pureza y viabilidad:




Se realiza a diferentes
niveles del proceso
cada vez que se realiza
un replique.
El objetivo: asegurarse
que las cepas conservan
su viabilidad y sus
caracteres bioqumicos.

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HOJA DE REGISTRO CEPAREO

UTILIDAD DE LOS CULTIVOS DE REFERENCIA

ATCC EN EL QC INTERNO
1.Evaluar la calidad de los medios de cultivo.
2.Asegurar la calidad de los resultados de ensayos
de laboratorio (coloraciones y desempeo de
reactivos)
3.Validar mtodos microbiolgicos.(Pruebas de
Sensibilidad)

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El Control de la Calidad en la preparacin y

evaluacin de los Medios de Cultivo

Una esencial y buena prctica de laboratorio, necesaria

para mantener el nivel y la ejecucin de cualquier
tcnica microbiolgica.
Es un proceso continuo que se extiende desde las
materias primas, a travs del productor hasta el
producto final utilizado en el laboratorio.
Por esta razn, se le confiere una gran importancia y
est considerado como uno de los puntos crticos de
control en el anlisis microbiolgico, del cual depende la
seguridad de los resultados que emiten los laboratorios
de ensayo.

EVALUACIN DE EFICIENCIA DE LOS

MEDIOS DE CULTIVO

Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso
rutinario, por eficiencia o calidad, mediante la inoculacin de
microorganismos cuyo comportamiento conocemos, tanto para
reacciones positivas como negativas.

Si los medios de cultivo son suministrados por empresas fabricantes
hay que solicitar Certificado de Calidad. Es de prioritario
cumplimiento evaluar el desempeo de:

Agar Chocolate
Agar Thayer Martn
Agar Sangre
Agares suplementados con Antibioticos
Agares Cromogenicos

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PROTOCOLO DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS

DE CULTIVO
1. ASPECTO FISICO: NIVEL, VOLUMEN, SUPERFICIE, COLOR, EMPAQUE
2. CONTROL DE ESTERILIDAD: 5% DE LA PRODUCCIN TOTAL Y SE
INCUBA DURANTE 72 HORAS (CUARENTENA).
- Se ACEPTA lotes negativ os.
- Se descarta todo el lote preparado si hay crecimiento Microbiano.
4. CONTROL DE PH
3. CALIDAD MICROBIOLOGICA: Mtodo ECOMETRICO
Prueba de PRODUCTIVIDAD y SELECTIVIDAD: Medios Slidos y
Lquidos.
CEPAS DE REFERENCIA ATCC
- Cada v ez que se prepare un Lote nuev o de un Medio de Cultiv o.
- Cada v ez que ingrese un Medio de Cultiv o Nuev o al Laboratorio.
- Cada v ez que un medio de cultiv o supere su f echa de caducidad

METODO ECOMETRICO
Es una tcnica simple que permite Recuperar, Comparar y
Cuantificar el crecimiento de microorganismos ATCC con
cargas de UFC definidas en diferentes medios de Cultivo
con el fin de evaluar su MANUFACTURA.
 TECNICA ECOMETRICA DE MOSSEL (RADIAL)
 MTODO ECOMETRICO MODIFICADO de MILES y MISRA

A. PRUEBA DE PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD PARA

MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS.
B. PRUEBA DE PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD PARA
MEDIOS DE CULTIVO LIQUIDOS.
LIQUIDOS .

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PRODUCTIVIDAD
 Determina el Rendimiento, Recuperacin y

crecimiento de microorganismos que

habitualmente se desarrollan en un medio de
cultivo.

SELECTIVIDAD
 Evala la supresin del crecimiento del

microorganismo, que se espera sea inhibido en el

medio.

PRUEBA DE PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD PARA

MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS
METODO CUANTITATIVO:

MODELO DE MILES Y MISRA.

Para medios muy exigentes o para comparar Medios

50uL

CEPA
REFERENCIA
EN BHI 1818- 24.
ANTES

50uL

50uL

450 uL s.s

-1

-2

-3

-4

-5

-6

1000000 a 10 U F C

Control positivo en una Agar Nutritivo: Agar chocolate

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METODO CUANTITATIVO: MILES Y MISRA

IR: RA ZON DE PRODUCTIVIDAD Y RA ZON DE SELECTIVIDAD
 Incubar : 37C x 18 Horas
 Contar el numero de colonias
presente en cada una de las
diluciones

10 uL
-6

-1

 Calcular IR
-2

-5

 RP: 70% a 80%

 RS: 0.1% a 0%

-4

-3

IR: N de colonias presentes x Factor dilucin

N de colonias Control x Factor dilucin

Interpretacin Metodo Ecometrico

PRODUCTIVIDAD
Crecimientos por encima de
la 5 dilucin.(100 UFC)
 SELECTIVIDAD
Inhibicion completa y/o
crecimiento unicamente en
la 1 dilucin.(1000.000 UFC)


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Control de calidad en determinacin de

sensibilidad a antimicrobianos

Obligatoriamente se debe probar cada lote nuevo de Mueller-Hinton
y cada lote de sensidiscos.
Realizar el control cada semana.

En caso de fallas en los halos de inhibicin se debe realizar diario
hasta encontrar la causa..Agar, T, McFarlan, Discos etc.

En caso de Galeras Automatizadas, el QC interno es de acuerdo a

la casa Comercial, pero no inferior a una vez cada mes.
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
Discos de Antimicrobianos
Tubos con Sln Salina estril o caldo nutritivo
Placas de MH, MH con sangre de cordero 5%, MH-chocolate,
Escala de McFarland

AGAR MUELLER HINTON

pH de 7.2- 7.4

21 22 ml

McFarland

0.5%

DO

625 nm

Absorbancia de 0.08 0.1

1.5 x 10 (8) UFC

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CONTROL DE CALIDAD
ANTIBIOGRAMA

Control de difusin de antibioticos

Cepas ATCC

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Valores Referencia: dimetro de las zonas de inhibicin en mm

segn la OMS

Test Discos

E.coli
ATCC
25922

S. aureus
ATCC
25923

Pseudomona
aeuriginosa
ATCC 27853

Enterococcus
feacalis
ATCC 29212

Ampicilina 10 ug

15-20 mm

24-35 mm

---

---

Tetraciclina 30 ug

18-25 mm

19-27 mm

---

---

Gentamicina 10 ug

19-26 mm

19-27 mm

16-21 mm

---

Imipenem 10 ug

26-32 mm

---

20-28 mm

---

Polimixina B 300 IU

12-16 mm

7 -13 mm

---

Sulfamethoxazole 1.25 ug
T rimehoprim 23.75 ug

24 - 32
mm

24 -32
mm

---

--16 -23 mm

OT ROS..\NORMAS
NCCLS M2 A7 Doc.doc

Control de Calidad en determinacin de

sensibilidad a Antimicrobianos
McFarland
0.5

Cepa
ATCC

S.S

Suspensin de Cepa
ATCC hasta 0.5
McFacland.
Agitado en VOrtex

Sembrado
homogneo con
torunda, por
estra con
rotacin por tres
veces

Colocar
sensidiscos con
dispensador o
pinzas flameadas
y fras. < 15.

Encubar por 18 horas a 35 + 2 C.

En estafilococos y estreptococos por 24 horas completas.
Leer con regla y establecer que estn dentro de los rangos de la tabla de
ref erencia para cada cepa analizada.

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Nota: Las normas LSCCI/NCCLS sugieren un

control de calidad diario y semanal. De no tener
las facilidades, se sugiere un control de calidad
mensual, debiendo incrementar la frecuencia del
mismo de acuerdo a las posibilidades del
laboratorio. Pero, se debe realizar por lo menos
un control de calidad quincenal para los
siguientes antibiticos: Oxacilina, imipenen,
meropenem y beta-lactamasa.

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Control de Calidad Interno de los

Reactivos Empleados

Las Cepas Utilizadas para control deben ser SIEMPRE cepas
Referencia

Los Controles deben efectuarse con Cultivos Frescos

En general se deben usar dos Tipos de Cepa para probar cada

Reactivo o Reaccin,idealmente para probar reacciones dbiles y

Fuertes y variaciones en el tiempo de los reactivos.

Las Coloraciones deben siempre controlarse con controles

Positivos y Negativos, Tanto las de rutina como las especiales

Las Tinciones especiales deben controlarse en cada Tanda o
serie de trabajo, las de Rutina una vez por semana y en cada lote
nuevo de colorantes.

Control de Calidad Interno de los

Reactivos Empleados
Frecuencia de Control Reactivos Discos y Tiras
CADA NUEVO LOTE O VIAL Y CADA DIA DE USO
Catalasa Oxidasa Coagulasa - Sondas de ADN
CADA NUEVO LOTE Y CADA SEMANA DE USO

Bacitracina - Optoquina - ONPG - Factores X-V-XV Betalactamasa - Indol - PYR - CAMP

CADA NUEVO LOTE Y CADA MES

Antisueros - Kits Comerciales de Identificacin Patron Mcfarland

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QUE ES EL PROGRAMA ATCC

DE DERIVADO LICENCIADO?

Es un programa amplio
de distribucin comercial
que asegura la
autenticidad de los
Materiales Biolgicos de
ATCC, que son
distribuidos por
compaas elegidas por
sus credenciales de
Sistemas de Calidad,
cuidadosas auditorias,
investigacin y
evaluacin continua de
los productos por parte
de ATCC.

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PROPOSITO DEL ATCC LICENSED

DERIVATIVE PROGRAM

Incrementar los requerimientos de Control de

Calidad de los laboratorios clnicos e
industriales.
Proporcionar los productos derivados de Cultivo
de Referencia a costos accesibles.
Crear, a travs de las compaas comerciales,
las tecnologas que permiten ahorrar tiempo
bajar los costos del Control de Calidad.
Beneficiar el Usuario Final con las validaciones
de los fabricantes autorizados el final de los
cultivos in-house.

TRAZABILIDAD SEGURA
El Programa asegura la trazabilidad de los
Materiales Biolgicos desde su origen en ATCC, a
travs de los procesos de manufactura de la
compaa, el almacenamiento fsico, el manejo y
envo del producto desde el fabricante, pasando
por los canales de distribucin hasta llegar al
Usuario Final.
Los acuerdos contractuales unen a todas las
partes de este proceso en una cadena de custodia
y cadena de responsabilidad adecundose a
nuestro mundo actual.

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QUE SIGNIFICA EL LDP PARA EL

LABORATORIO DEL USUARIO FINAL?

Acceso fcil y econmico a las fuentes de

Materiales Biolgicos de ATCC
Autenticidad y trazabilidad a los Cultivos de
Referencia de ATCC
Avance tecnolgico en productos de Materiales
Biolgicos para satisfacer las demandas del
Control de Calidad
Confianza en un Sistema Mundial de
proveedores legalmente autorizados y
licenciados de Microorganismos para Control de
Calidad

EN QUIENES PODEMOS CONFIAR?

En los proveedores comerciales de Materiales

Biolgicos cuyos nmeros de referencia ATCC
estn aprobados, autorizados y licenciados.
Cualquier compaa comercial, instituto o coleccin
de cultivos que no est licenciada o autorizada para
comercializar los Materiales Biolgicos de ATCC
est operando fuera de los Acuerdos de
Transferencia de Material (MTA) y del aseguramiento
de autenticidad de ATCC
Los Usuarios Finales no tienen ninguna garanta
acerca de la validez y exactitud de datos generados
al usar productos de proveedores no licenciados

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Slo es posible avanzar cuando se

mira lejos. Solo cabe progresar cuando
se piensa en grande.

Jos Ortega y Gasset

www.microbiologics.com

mimontoya@ces.edu.co
TEL: (4) 305 35 00 EXT 312

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