Manual de Prácticas Quimica Clinica II

BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA
VICERRECTORA DE DOCENCIA
DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN SUPERIOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
LICENCIATURA EN QUMICO FARMACOBILOGO

AREA: ANLISIS CLNICOS
ASIGNATURA: LABORATORIO QUMICA CLNICA II
PROFESORA DEL CURSO:

MC. MARTHA ALICIA SALGADO JUREZ
CDIGO:
CRDITOS: 2
FECHA: agosto de 2014
NIVEL EDUCATIVO:
NOMBRE DEL PROGRAMA
EDUCATIVO:
MODALIDAD ACADMICA:
NOMBRE DE LA ASIGNATURA:
Licenciatura
Licenciatura en Qumico Farmacobilogo
Presencial
LABORATORIO QUMICA CLNICA II
1
UBICACIN:
CORRELACIN:
ASIGNATURAS
PRECEDENTES:
ASIGNATURAS
CONSECUENTES:
CONOCIMIENTOS
HABILIDADES Y
ACTITUDES
VALORES PREVIOS:
Nivel Formativo
QUIMICA CLINICA I
QUIMICA CLINICA III
INTERPRETACION DIAGNOSTICA POR
EL LABORATORIO
FUNDAMENTOS DE LA
ELECTROFORESIS CONCEPTO
ACIDO BASE VIAS METABOLICAS DE
LIPIDOS
PIPETEO,MANEJO DE
ESPECTROFOTOMETRO,TRABAJO
EN EQUIPO Y COLABORATIVO
RESPETO,
RESPONSABILIDAD,TOLERANCIA
HONRRADES PUNTUALIDAD.
CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE
CONCEPTO
HORAS POR
PERIODO
(PERIODO = 16
SEMANAS)
NMERO
DE
CRDITOS
32
HORAS TEORIA Y PRCTICA.
HORAS DE PRCTICA PROFESIONAL CRTICA
HORAS DE TRABAJO INDEPENDIENTE
TOTAL
(2 HP/Semana =
32)
0
0
32
0
0
M.C. HILDA ALICIA CARRASCO PERAL M.C.

GONZALO GARZON GARCIA M.C.JOSE
MANUEL RODRIGUEZ LUNA
AUTORES:
FECHA DE DISEO:
OCTUBRE 2009
FECHA DE LA LTIMA
ACTUALIZACIN:
REVISORES:
SINOPSIS DE LA REVISIN Y/O
ACTUALIZACIN
PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:

DISCIPLINA PROFESIONAL:
Q.F.B. QBP Y QC
NIVEL ACADMICO:
MAESTRIA Y/O DOCTORADO
EXPERIENCIA DOCENTE:
EXPERIENCIA
CINCO AOS
PROFESIONAL:
CINCO AOS
PRESENTACIN GENERAL DEL PROGRAMA DE LABORATORIO:

a) El programa de laboratorio de Qumica Clnica II se encarga del
desarrollo y ejecucin de los anlisis qumico biolgicos, para el diagnstico,
pronstico y profilaxis de las enfermedades.
b) Se requiere de los conocimientos previos de las materias de biologa,
histologa,
anatoma,
bioqumica,
qumica
analtica,
anlisis
instrumental,
fisiologa, inmunologa, estadstica.

c) Durante este curso se abordarn las pruebas para valorar el metabolismo
de protenas y lpidos, as como la enfermedad metablica y padecimientos
cardiacos.
OBJETIVO GENERAL:
El objetivo del curso es que el alumno desarrolle las habilidades analticas y
de interpretacin de las diferentes pruebas del laboratorio para valorar el
metabolismo de protenas, lpidos, enfermedad metabolica y funcionamiento
cardiaco.
EVALUACIN.La asistencia al laboratorio ser del 100%

Participacin en seminarios y prcticas
20 %
Reportes individuales
20 %
Reportes por equipo
20 %
Reporte de casos clnicos
20 %
Evaluacin final prctica
20 %
Total
100 %
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
Elaborada en forma conjunta por la Secretaria de Salud y de Medio Ambiente y
Recursos Naturales, la norma oficial mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
Proteccin Ambiental - Salud Ambiental - Residuos Peligrosos Biolgico Infecciosos Clasificacin y Especificaciones de Manejo, fue publicada en el
Diario Oficial de la Federacin el 17 de Febrero del 2003 y sustituye a la NOM087-ECOL-1995.
Los RPBI se consideran como residuos peligrosos y como tal se debe establecer
un plan integral para su manejo, almacenamiento, transporte, tratamiento y
disposicin final.
PRINCIPALES MODIFICACIONES EFECTUADAS EN LA NOM-087-SEMARNATSSA1-2002.
I.
Criterios para considerar un residuo como RPBI
II.
Nueva clasificacin de los RPBI
III.
Cantidad de sangre o fluido corporal en los RPBI
IV.
Niveles de los establecimientos generadores
V.
Periodo de almacenamiento temporal de los RPBI en los

establecimientos generadores.
VI.
Atribucin a la Secretaria de Salud, para la vigilancia de la

norma.
I.
Los lugares que ofrecen atencin mdica y los centros de

investigacin,
generadores
son
de
considerados
materiales
establecimientos
contaminados
biolgico-infecciosos.
Estos
Residuos
Biolgico-Infecciosos
Peligrosos
desechos
se
por
agentes
denominan
(RPBIs),
su
manejo y disposicin inadecuados, representa un riesgo para

la salud del personal que labora en estos sitios, as como para
6
la salud de la poblacin aledaa, ocasionando adems, el

deterioro
del
medio
ambiente.
Los
microorganismos
patgenos, virus, parsitos y priones (estructuras proteicas)

son ejemplos de agentes biolgicos-infecciosos. Para que un
microorganismo sea capaz de producir enfermedad, es decir,
que sea un Agente Biolgico-Infeccioso, debe ocurrir lo
siguiente: tener una concentracin suficiente (inculo), estar
en un ambiente propicio (supervivencia), en presencia de una
va de entrada en un hospedero susceptible.
II.
En la Nueva clasificacin, los RPBIs son:

1. La sangre y sus componentes nicamente en estado
lquido.
2. Los cultivos de agentes biolgico-infecciosos generados
en:
a. Los procedimientos de diagnstico e investigacin.
b. La produccin y el control de agentes biolgicoinfecciosos.
3. Los
utensilios
desechables
usados
para
contener,
transferir, inocular y mezclar cultivos de agentes biolgicoinfecciosos.

4. Los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven
durante las autopsias, las cirugas o algn otro tipo de
intervencin quirrgica que no estn conservados en
solucin de formol.
5. Las muestras biolgicas empleadas en los anlisis clnicos

(excepto las muestras de orina y de excremento), y
aquellas usadas en los anlisis patolgicos.
6. En los centros de investigacin, los cadveres y las partes
de los animales que fueron inoculados con agentes entero
patgenos.
7. Los residuos no anatmicos:
a. Los recipientes desechables que contengan sangre
lquida.
b. Los materiales desechables que contengan fluidos y
secreciones
corporales,
provenientes
de
los
pacientes de quienes se sospechen o exista un

diagnstico de una enfermedad infecto-contagiosa
como la tuberculosis.
c. Los materiales de curacin empapados de sangre
lquida o de cualquier otra secrecin o lquido
corporal.
d. Los materiales absorbentes utilizados en las jaulas
de los animales que hayan sido expuestos a agentes
entero patgenos.
8. Los materiales punzo cortantes desechables como las
hojas de bistur, las agujas de sutura y los estriles de
catter. El material de vidrio de laboratorio, que se haya
roto al momento de ser manipulado, se deber desinfectar
o esterilizar y ya no se considerar como RPBIs, por lo
que se podr disponer posteriormente como residuo
municipal.
8
La disposicin general para el desecho de RPBIs en el laboratorio

queda de la siguiente manera:
TIPO
DE ESTADO
RESIDUO
FISICO
ENVASADO
COLOR
Sangre
Recipientes
hermticos
Rojo
Lquidos
Cultivos
y
cepas
de
Slidos
agentes
infecciosos
Patolgicos
Slidos
Residuos
no
Slidos
anatmicos
Objetos
Slidos
punzocortantes
III.
Bolsas
de
Rojo
polietileno
Bolsas
de
Amarillo
polietileno
Bolsas
de
Rojo
polietileno
Recipientes
rgidos
Rojo
polipropileno
Para que un material de curacin se considere como RPBIs,

debe ser desechable y estar goteando, chorreando o
escurriendo sangre o cualquier lquido corporal contemplado
en la norma.
IV.
Niveles de los Establecimientos Generadores
NIVEL I
NIVEL II
NIVEL III
Establecimientos
de
atencin mdica hasta
con
5
camas
e
instituciones
de Unidades hospitalarias Unidades hospitalarias
investigacin
con de 6 hasta 60 camas.
de ms de 60 camas.
excepcin
de
los
sealados en el Nivel
III.
Centros de produccin
Laboratorios clnicos y Laboratorios clnicos y
e
investigacin
bancos de sangre que bancos de sangre que
experimental
en
realicen anlisis de 1 a realicen anlisis de 51
enfermedades
50 muestras al da.
a 200 muestras al da.
infecciosas.
9
Bioterios
que
se
dediquen
a
la
Unidades hospitalarias
investigacin
con
psiquitricas.
agentes
biolgicoinfecciosos.
Establecimientos que
Centros de toma de
generen de 25 a 100
muestras para anlisis
kilogramos al mes de
clnicos.
RPBIs.
V.
Laboratorios clnicos y
bancos de sangre que
realicen anlisis a ms
de 200 muestras al
da.
Establecimientos que
generen ms de 100
kilogramos al mes de
RPBIs
Perodo de almacenamiento temporal de los RPBIs en los

establecimientos generadores.
NIVEL I
30 das mximos
de almacenamiento
temporal.
No requiere de
rea especfica
para el
almacenamiento
temporal.
Se podrn ubicar
los contenedores
especficos para los
RPBIs* en el lugar
ms apropiado
dentro de sus
instalaciones, de
manera tal que no
obstruyan las vas
de acceso.
NIVEL II
NIVEL III
15 das mximos
7 das mximos de
de almacenamiento
almacenamiento
temporal.
temporal.
Si requiere de rea
especfica para el
almacenamiento
temporal.
Si requiere de rea
especfica para el
almacenamiento
temporal.
Deber cumplir con

Deber cumplir con
las
las especificaciones
especificaciones
establecidas en la
establecidas en la
NOM-087NOM-087SEMARNAT-SSA1SEMARNAT-SSA12002, para el rea
2002, para el rea
de almacenamiento
de almacenamiento
temporal.
temporal.
*Los contenedores pueden ser plsticos o metlicos, con sealamiento del

smbolo universal de RPBIs y no mezclarlos con la basura municipal.
VI.
Atribucin a la Secretaria de Salud. Corresponde a la Secretaria de

salud regular y vigilar el equipamiento, instalacin y funcionamiento de
los servicios mdicos que son los principales generadores de los RPBI
s, por ello participa complementariamente con la SEMARNAT en la
regulacin y vigilancia de la norma, para lo cual se estableci en el
10
cuerpo de la misma, la disposicin de crear las Bases de
Colaboracin que firmarn ambas dependencias y que sern

publicadas en el Diario Oficial de la Federacin, en las que se
especificarn los puntos de la norma que vigilarn cada una
de ellas.
11
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES DEL CURSO DE LABORATORIO
SEMANA
No.
PRCTIC
A
Presentacin y NOM 087-SEMARNAT
Seminario de introduccin al laboratorio de qumica

clnica
Determinacin de protenas totales sricas
13
Determinacin de albumina srica
13
Seminario y resolucin de casos clnicos de

proteinograma
17
Determinacin de a colesterol srico
20
Determinacin de triglicridos sricos
20
Determinacin de lpidos totales sricos
20
Determinacin de colesterol HDL, LDL y VLDL
27
10
10
Determinacin de glucosa, IMC, PC y TA
35
11
11
Determinacin de LDL-col y fibringeno
44
12
12
Determinacin de CK total srica
51
13
13
Determinacin de CK total srica y CK-MB srica
54
14
14
Seminario de troponinas y homocistena
15
15
Resolucin de casos clnicos
16
16
Evaluacin final
NOMBRE DE LA PRCTICA
PGINA
12
PRACTICA 3 y 4
DETERMINACION DE PROTEINAS SERICAS TOTALES Y
ALBUMINA
INTRODUCCION:
La mayora de protenas plasmticas se sintetizan en el hgado,
exceptuando a las inmunoglobulinas que se forman en las clulas plasmticas del
bazo, los ndulos linfticos y la mdula sea.
Las dos causas generales de alteraciones de la protena total srica son cambios
de volumen de agua plasmtica y cambios en la concentracin de una o varias
protenas sricas.
La hiperproteinemia puede ser debida a deshidratacin (aporte insuficiente de
agua, vmitos o diarreas severas, enfermedad de Addison, cetoacidosis diabtica)
o a un aumento en la concentracin de protenas especficas (inmunoglobulinas en
infecciones, mieloma mltiple).
La hipoproteinemia se puede producir a causa de una hemodilucin (sndromes de
retencin salina y la infusin intravenosa masiva), por un defecto en la sntesis
proteica (malnutricin severa, enfermedad heptica crnica, malabsorcin
intestinal) o por prdidas excesivas debidas a enfermedad renal crnica o
quemaduras severas.
OBJETIVO GENERAL:
El alumno realizara la determinacin de protenas totales por el mtodo de
Biuret, como prueba diagnstica en la alteracin de su sntesis y degradacin, as
como la perdida por va renal.
13
MATERIAL Y METODOS:
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA PROTEINAS
La protena presente en la muestra reacciona con los iones cobre (II) en medio alcalino, originando
un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra.
MUESTRAS
Suero y plasma heparinizado recogido mediante procedimientos estndar.
PROCEDIMIENTO
1. Pipetear en tubos de ensayo:
Blanco
Agua destilada
20 L
Patrn Protena
--------
Muestra
--------
Reactivo
1,0 mL
Patrn
Muestra
--------20 L
---------
-------1,0 mL
---------20 L
1,0 mL
2. Agitar bien y dejar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente.

3. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la Muestra frente al Blanco a 545 nm. El color es estable
durante al menos 2 horas.
CLCULOS
La concentracin de protena en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general:
A Muestra
___________ x C Patrn = C Muestra
A Patrn
VALORES DE REFERENCIA
60-78 g/L
14
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA ALBUMINA

La albmina presente en la muestra reacciona con el verde de bromocresol en medio cido,
originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra.
MUESTRAS
Suero o plasma (EDTA, heparina o citrato) recogido mediante procedimientos estndar.
PROCEDIMIENTO
Blanco
Patrn
Patrn Albmina --------
10 L
Muestra
--------
Muestra
--------
--------
10 L
Reactivo
1,0 Ml
1,0 mL
1,0 mL
2. Agitar bien y dejar los tubos durante 1 minuto a temperatura ambiente.

3. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la Muestra a 630 nm frente al Blanco. El color es estable
durante al menos 30 minutos.
CLCULOS
La concentracin de albmina en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general:
A Muestra
___________ x C Patrn = C Muestra
A Patrn
Recin nacidos, 2 a 4 dias
28-44 g/L
4 dias a 14 aos
38-54 g/L
15
Adultos
35-50 g/L
> 60 aos 34-48 g/L
BIBLIOGRAFA
1. Doumas BT, Watson WA and Biggs HG. Albumin standards and the measurement of serum
albumin with bromocresol green. Clin Chim Acta 1971: 31: 87-96.
2. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests, 2nd ed. Saunders Co, 1991.
3. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.
4. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press, 1997.
16
PRACTICA 5
ELECTROFORESIS DE PROTENAS
INTRODUCCION:
Se designa como electroforesis a la migracin de una micela coloidal a
travs de un medio de dispersin, cuando acta una fuerza electromotriz. Si se
usa una solucin buffer con un pH superior al punto isoelctrico de las protenas a
separar, puede obtenerse su fraccionamiento. El primitivo mtodo de electroforesis
libre de Tiselius mostr que la movilidad de las fracciones proteicas dependen del
tamao molecular y de la carga elctrica. As la albmina de menor tamao
molecular se mueve con ms rapidez siguiendo en orden de velocidad las
globulinas, las alfas, betas, el fibringeno (en plasma) y las globulinas.
La electroforesis
de zona, permiti la generalizacin de los mtodos
electroforticos y su aplicacin en el laboratorio de anlisis clnicos. En este tipo

de electroforesis se utiliza un medio estabilizado como soporte para el buffer.
Puede utilizarse como soporte el papel, el acetato de celulosa seco o gelatinizado,
el gel de agar, agarosa, almidn, gel de acrilamida, etc.
En la electroforesis de zona por lo comn se observan 5 fracciones, la ms
andica es la albmina, luego le siguen , siendo sta la ms catdica.
OBJETIVO:
Que el alumno aplique el mtodo electrofortico al estudio de las protenas
plasmticas.
MATERIAL Y MTODO
Reactivos.-
Equipo.-
Soln buffer pH 8.6
Cmara de Electroforesis
17
Ponceau-S
Fuente de Poder
Ac. Actico 5%
Aplicador
Metanol
Parrilla
Ac.actico glacial
Membranas de acetato de celulosa
MATERIAL POR SECCIN.
MATERIAL POR EQUIPO:
1 probeta de 100 ml
1 tubo Vacutainer rojo
3 cajas Petri
soporte, aguja y torniquete
20 tiras de papel filtro 4x10 cm
1 tubo 7X100
1 pip. Pasteur c/chuzo
TCNICA:
1) Se principia a remojar la membrana de acetato de celulosa en la soln buffer,
durante 15 60 min., deslizando el borde de la membrana debajo de la
superficie de la soln poco a poco y sin interrupcin hasta que quede sumergida
completamente.
2) Verter 70 ml de soln buffer en cada electrodo de la cmara, y colocar una tira
de papel filtro en cada borde de los electrodos ponindolas en contacto con la
soln buffer.
3) Colocar en los pozos de la base toma-muestras el suero, y alimentar el

aplicador descendindolo en los pozos 3 o 4 veces y eliminar esta primera
muestra. Volver a alimentar el aplicador y dejarlo preparado.
4) Quitar el exceso de buffer a la membrana de acetato de celulosa, con ayuda de
papel filtro, e inmediatamente aplicar la muestra manteniendo el aplicador
firmemente contra la membrana durante 10 seg.
18
5) Colocar la membrana en la cmara, fijndola con un portaobjetos a cada lado

del electrodo. Tapar la cmara y conectar a la fuente de poder 180 Voltios
durante 15 min.
6) Retirar la membrana de la cmara y proceder a colorearla con Ponceau-S
durante 10 min.
7) Llevar a la membrana a una serie de baos. Primeramente con ac. actico al

5% durante 5 min., para quitar el exceso de colorante.
8) Colocar en bao con metanol durante 5 min, para deshidratar la membrana.
9) Colocar en bao de soln aclaradora (metanol-ac. actico) durante 5 min.

10)Secar la membrana a temperatura ambiente o a 70 C por 2 min.
BIBLIOGRAFA:
1. Richterich R., Colombo J:P:, Qumica Clnica. Teora, Prctica e interpretacin,
Ed. Salvat. Barcelona.
19
PRACTICA 6, 7 y 8
DETERMINACION DE LIPIDOS TOTALES, COLESTEROL Y
TRIGLICERIDOS
INTRODUCCIN:
Los lpidos constituyen un grupo heterogneo de sustancias insolubles o
poco solubles en agua, s en solventes orgnicos como ter, cloroformo, benzal,
ter de petrleo, etc. En general los lpidos del organismo se distribuyen en: las
clulas en el citoplasma y material de reserva. En la sangre circulante estn
unidos a las protenas plasmticas por lo que constituyen las lipoprotenas. Estas
lipoprotenas tienen como funcin principal posibilitar el desplazamiento de los
lpidos exgenos y endgenos entre el hgado, el tejido graso y otros rganos de
la economa.
Las lipoprotenas se estudiaron separndolas por mtodos salinos,
precipitacin con antisueros especficos, electroforesis, ultracentrifugacin o
cromatografa. La clasificacin ms frecuente se basa en el procedimiento
electrofortico, y reciben diferentes nombres: Quilomicrones (QM) constitudos a
partir de TG exgenos en su mayor proporcin, y que transportan las grasas del
intestino hacia el corazn por medio de los vasos linfticos. Las preLP (VLDL) se
constituyen predominantemente a partir de TG endgenos. Las LP (LDL)
transportan la mayor parte del colesterol, y abastecen a todas las membranas
celulares de los tejidos perifricos. Las LP (HDL) en cuya composicin predominan
las protenas y los fosfolpidos, y transportan el colesterol al hgado en donde es
metabolizado y excretado, de donde se considera un factor de proteccin contra el
acmulo de colesterol.
Debido a lo anterior la cuantificacin de lpidos totales, colesterol total, CHDL, CLDL, triglicridos y una electroforesis
son de gran ayuda para la
identificacin de las diferentes dislipoproteinemias.
20
OBJETIVO:
Que el alumno efecte diversas determinaciones de lpidos que le ayuden a
identificar la presencia de dislipoproteinemia.
MATERIAL Y MTODOS
REACTIVOS:
EQUIPO:
Equipo para lpidos totales
Centrfuga
Equipo para triglicridos enzimticos
Espectrofotmetro
Equipo para colesterol enzimtico
Celdas de
espectrofotmetro Algodn y alcohol

Material por Seccin:
Material por Equipo:
3 pip. 10 ml
1 gradilla
2 pip. 5 ml
2 tubos de rosca grandes
1 pip. 2 ml
5 tubos 10X100 pyrex
7 pip. 1 ml
7 tubos de 10X100
7 pip. O.1 ml 1/100
2 tubos 16X150 pyrex

1 tubo Vacutainer rojo
soporte, aguja y torniquete
1 pip. Pasteur c/chuzo
FUNDAMENTO DEL METODO PARA LIPIDOS TOTALES:

Los lpidos insaturados reaccionan con el acido sulfrico formando un ion
carbonio que reacciona con el carbonilo de la fosfovainillina produciendo un
complejo de color rosa, que es estabilizado por resonancia. La intensidad del color
del complejo es proporcional a la concentracin de los lpidos en el suero.
MUESTRAS:
Suero, plasma (EDTA).
21
METODO:
1.- Marcar tres tubos de ensayo con las letras MMA (mezcla, muestra, acida), MPA
(mezcla, patrn acida) y B (blanco) y proceder como sigue:
B
MMA
MPA
Muestra
-----------
0.1 ml
-----------
Patron
-----------
---------
0.1 ml
Acido sulfrico conc. -----------
2.0 ml
2.0 ml
2.- Mezclar bien y poner en bao de agua hirviendo durante 10 minutos.

3.- Colocar 5 minutos en bao de agua fra. Proceder como sigue:
B
Muestra
Patron
MMA
-----------
0.1 ml
-----------
MPA
-----------
-----------
0.1 ml
Acido sulfrico conc.
0.1 ml
-----------
-----------
Reactivo de color
2.5 ml
2.5 ml
2.5 ml
4.- Mezclar bien con Vortex e incubar a 37 C durante 15 minutos. Determinar las
absorbancias de la muestra y del patrn a 540 nm igualando a cero con el blanco.
El color es estable por 15 minutos.
CALCULOS:
A Muestra
___________
C Patrn = C Muestra
A Patrn
LIMITES DE REFERENCIA:
En ayuno
400-1000 mg/dl
22
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA TRIGLICERIDOS

Los triglicridos presentes en la muestra originan, segn las reacciones acopladas
descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometra.
Triglicridos + H2O
Glicerol + ATP
Glicerol 3 P + O2
Glicerol + cidos grasos

Glicerol 3 P + ADP
Dihidroxiacetona P + H2O2
2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + 4 - Clorofenol Quinonaimina + 4 H 2O

MUESTRAS
Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar.
PROCEDIMIENTO
1. Atemperar el Reactivo a temperatura ambiente.
Blanco
Patrn
Muestra
Patrn Triglicridos
-----------
10 L
-----------
Muestra
-----------
-----------
10 L
Reactivo
1,0 mL
1,0 mL
1,0 mL
3. Agitar bien e incubar los tubos durante 15 minutos a temperatura ambiente (1625C) o durante 5 minutos a 37C.
4. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la Muestra a 500 nm frente al Blanco. El
color es estable durante al menos 2 horas.
23
CLCULOS
La concentracin de triglicridos en la muestra se calcula a partir de la siguiente
frmula:
A Muestra
___________
C Patrn = C Muestra
A Patrn
Hasta 150 mg/dL
Bajo
150-199 mg/dL
Dudoso
200-499 mg/dL
Alto
> 500 mg/dL
Muy alto
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA COLESTEROL TOTAL

Tanto el colesterol libre como el esterificado presentes en la muestra originan,
segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, un complejo coloreado
que se cuantifica por espectrofotometra.
Colesterol esterificado + H2O
Colesterol + O2 + H2O
Colesterol + cido graso

Colestenona + H2O2
2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + Fenol
Quinonaimina + 4 H 2O
MUESTRAS
El colesterol en suero o plasma es estable 7 das a 2-8C. Pueden utilizarse como
anticoagulantes la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro.
24
PROCEDIMIENTO
Blanco
Patrn
Muestra
Patrn Colesterol
-----------
10 l
-----------
Muestra
-----------
---------
Reactivo
1,0 mL
1,0 mL
10 L
1,0 mL
CLCULOS
La concentracin de colesterol en la muestra se calcula a partir de la siguiente
frmula:
A Muestra
___________
C Patrn = C Muestra
A Patrn
Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por el US
National Cholesterol Education Program y tambin aceptados en otros paises para
la evaluacin del riesgo de enfermedad de las arterias coronarias.
Hasta 200 mg/dL = 5,2 mmol/L
200-239 mg/dL = 5,2-6,21 mmol/L
> 240 mg/dL = > 6,24 mmol/L
Optimo
Moderado
Elevado
25
BIBLIOGRAFA
1. Allain CC, Poon LS, Chan CSG, Richmond W and Fu PC. Enzymatic
determination of total serum cholesterol. Clin Chem 1974; 20: 470-475.
2. Meiattini F, Prencipe L, Bardelli F, Giannini G and Tarli P. The 4hydroxybenzoate/4- aminophenazone chromogenic system used in the enzymic
determination of serum cholesterol. Clin Chem 1978; 24: 2161-2165.
3. National Cholesterol Educarion Program Expert Panel. Third report of the
National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection,
Evaluation, andTreatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III). NIH
Publication. Bethesda: National Heart, Lung, and Blood Institute; 2001.
4. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press,
1995.
26
PRCTICA 9
DETERMINACIN DE COLESTEROL HDL, LDL y
VLDL
INTRODUCCION:
Las HDL participan en la captacin del colesterol de los tejidos y en su
transporte hacia el hgado donde se elimina en forma de cidos biliares.
Existe una correlacin positiva entre concentraciones bajas de HDL-colesterol en
plasma y la incidencia de aterosclerosis, base del infarto de miocardio y
accidentes cerebrovasculares.
Existen diversos estados patolgicos o influencias ambientales asociados con
niveles reducidos de HDL: enfermedades hepatocelulares agudas o crnicas,
hiperalimentacin intravenosa, malnutricin severa, diabetes, anemia crnica,
alteraciones mieloproliferativas, enfermedad de Tangier, analfalipoproteinemia,
estrs agudo, algunos medicamentos y el tabaco.
Las LDL son las principales lipoproteinas que transportan colesterol heptico hacia
los tejidos.
Existe una correlacin positiva entre concentraciones elevadas de LDL-colesterol
en plasma y la incidencia de aterosclerosis, base del infarto de miocardio y
accidentes cerebrovasculares.
Existen diversos estados patolgicos o influencias ambientales asociados con
niveles elevados de LDL: nefrosis, diabetes, obesidad, algunos medicamentos y el
tabaco.
27
OBJETIVO:
El alumno ejecutar la tcnica para la determinacin de colesterol HDL,
LDL y VLDL sricos y evaluar si se encuentras dentro o fuera de los lmites
biolgicos de referencia para un probable diagnstico de dislipidemia.
MATERIAL Y REACTIVOS
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA COLESTEROL HDL
Las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL)
presentes en la muestra, precipitan en presencia de fosfotungstato y iones
magnesio. El sobrenadante contiene las lipoprotenas de elevada densidad (HDL),
cuyo colesterol se cuantifica espectrofotomtricamente mediante las reacciones
acopladas descritas a continuacin:
col. esterasa
col. oxidasa
Colestenona + H2O2
peroxidasa
Quinonaimina + 4 H2O
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA COLESTEROL LDL

Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) presentes en la muestra, precipitan en
presencia de polivinil sulfato. La concentracin de colesterol LDL se calcula por
diferencia entre los valores de colesterol en el suero y en el sobrenadante
28
obtenido tras la precipitacin. El colesterol se cuantifica espectrofotomtricamente

mediante las reacciones acopladas descritas a continuacin.
col. esterasa
col. oxidasa
Colestenona + H2O2
peroxidasa
Quinonaimina + 4 H2O
PREPARACIN DE LOS REACTIVOS

Tanto el Reactivo como el Patrn estn listos para su uso.
EQUIPO ADICIONAL
Centrfuga de sobremesa
Bao de agua a 37C (opcional)
Analizador, espectrofotmetro o fotmetro para lecturas a 500 20 nm
MUESTRAS
PROCEDIMIENTO
Precipitacin
1. Pipetear en un tubo de centrfuga:
Muestra
0,2 mL
Reactivo (A) (kit de Colesterol HDL)
0,5 Ml
2. Agitar bien y dejar durante 10 minutos a temperatura ambiente.

3. Centrifugar durante 10 minutos a un mnimo de 4.000 r.p.m.
29
4. Recoger con cuidado el sobrenadante.

Colorimetra
5. Atemperar el Reactivo (kit de Colesterol) a temperatura ambiente.
Agua destilada
Patrn Colesterol HDL (S)
Sobrenadante muestra
Reactivo (A) (kit de Colesterol)
Blanco
100 L
Patrn
Muestra
----------
---------------------
-------------------
------------
1,0 mL
1,0 mL
100 L
100 L
1,0 mL
color es estable durante al menos 30 minutos.
CLCULOS
La concentracin de colesterol HDL en la muestra se calcula a partir de la
siguiente frmula general:
A Muestra
---------------- x C Patrn = C Muestra
A Patrn
Si se utiliza para calibrar el Patrn de Colesterol HDL suministrado:
x 52,5 = mg/dL colesterol HDL
x 1,36 = mmol/L colesterol HDL
30
Las concentraciones de colesterol de HDL varan considerablemente con la edad y
el sexo. El siguiente valor discriminante ha sido recomendado para identificar
indivduos con elevado riesgo de enfermedad coronaria.
Elevado
> 60 mg/dL = > 1,56 mmol/L
Bajo
REACTIVOS ADICIONALES PARA COLESTEROL LDL

Este reactivo precipitante debe ser utilizado junto con el Reactivo de Colesterol
contenido en cualquiera de los kits de Colesterol
El Reactivo est listo para su uso.
EQUIPO ADICIONAL
Bao de agua a 37C
MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estndar.
El Colesterol LDL en suero es estable 24 horas das a 2-8C.
PROCEDIMIENTO
Precipitacin
Muestra
0,4 mL
31
Reactivo (A) (kit de Colesterol LDL)
0,2 Ml

Colorimetra
Agua destilada
Blanco
20 L
Patrn
Muestra
----------
---------------------
-------------------
------------
1,0 mL
1,0 mL
20 L
20 L
1,0 mL
32
CLCULOS
La concentracin de colesterol en el sobrenadante se calcula a partir de la
siguiente frmula
general:
A Muestra
A Patrn
Si se utiliza para calibrar el Patrn de Colesterol, incluido en el Kit de Colesterol:
x 200 x 1,5 = mg/dL colesterol en sobrenadante
x 5,18 x 1,5 = mmol/L colesterol en sobrenadante
La concentracin de colesterol LDL en la muestra se calcula:
colesterol LDL = colesterol total colesterol en sobrenadante
Optimo
100-129 mg/dL = 2,59-3,34 mmol/L
Casi ptimo
130-159 mg/dL = 3,37-4,12 mmol/L
Moderado
160-189 mg/dL = 4,14 -4,90-mmol/L
Elevado
> 190 mg/dL = 4,92 mmol/L
Muy elevado
33
BIBLIOGRAFA
1. Grove TH. Effect of reagent pH on determination of high-density lipoprotein
cholesterol by precipitation with sodium phosphotungstate-magnesium. Clin Chem
1979; 25: 560-564.
2. Burstein M, Scholnick HR and Morfin R. Rapid method for the isolation of
lipoproteins from human serum by precipitation with polyanions. Scand J Clin Lab
Invest 1980; 40: 583-595.
Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III). NIH
1995.
6. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed.
AACC Press, 1997.
34
PRACTICA 10
INDICADORES DE SINDROME METABOLICO
INTRODUCCION
Aunque la medida de la presin arterial es hoy dia una exploracin rutinaria,
siguen siendo los resultados de la misma los que permiten diagnosticar la
hipertensin, independientemente de otras exmenes o tests de laboratorio. Su
correcta determinacin reviste, por tanto, gran importancia ya que una
sobrestimacin de la misma puede inducir un diagnstico errneo en un enfermo
sano con la probable aplicacin de un tratamiento innecesario.
La medida de la presin arterial deber ser, por tanto, realizada con un equipo
adecuado que garantice su exactitud y reproducibilidad tanto individual como
interindividual.
OBJETIVO
El alumno realizar la determinacin de Marcadores para determinar enfermedad
metabolica o no
Tcnica
La tcnica utilizada para la determinacin de la presin arterial se basa en la
interrupcin del flujo de sangre de la arterial braquial mediante la aplicacin de una
presin uniforme con un manguito inflable. Cuando la presin aplicada es mayor
que la presin arterial, el vaso se colapsa y el flujo se detiene no auscultndose
ningn ruido.
35
Al ir diminuyendo la presin del manguito, el flujo en el vaso se restaura originando

unos ruidos caractersticos del flujo turbulento que progresivamente pasa a flujo
laminar y que permiten el clculo de las presiones arteriales diastlica y sistlica.
Los ruidos que permiten dichos clculos se conocen como fases de Korotkoff:
Fase I: Indica que la presin del vaso ha soprepasado la presin externa.

Es un sonido abrupto, alto y progresivamente intenso.
Fase II: El sonido es ms claro, intenso y prolongado.
Fase III: el sonido continua alto y claro aunque empieza a percibirse un

murmullo que indica su prxima desaparicin
Fase IV: hay un prdida brusca de la intensidad del sonido que se hace
marcadamente apagado con un murmullo continuo. En ocasiones es lo
ltimo que se escucha
Fase V: Desaparicin total del sonido al restablecerse el flujo laminar.
Para la correcta medida de la presin arterial se debern tomar las siguientes

precauciones:
el manguito inflable deber ser de las dimensiones adecuadas para rodear

el perimetro del brazo exactamente. Existen multitud de "tallas" de
manguitos de tal forma que puede elegirse el ms apropiado para cada
enfermo. Incluso existen manguitos de un solo uso para uso enfermos
infecciosos. El estetoscopio se colocar en la parte inferior
el manguito ser inflado rpidamente hasta que su presin sobrepase la

PAS estimada, lo que se puede comprobar por la desaparicin del pulso
radial.
Desde este nivel de presin se comienza a desinflar el manguito de forma

lenta y progresiva.
Cuando la presin arterial y la del manguito se igualan, en cada sstole la

presin es capaz de superar ligeramente la presin externa. Esto se
traduce en la aparicin del pulso y de un sonido intenso que accompaa
cada onda de pulso.
36
A medida que se desinfla el manguito van apareciendo las distintas fases

de Korotkoff hasta desaparecer en la fase V.
Factores que influyen

Para que las medidas de la presin arterial sean reproducibles por otro
observador, es necesario estandarizar el procedimiento, teniendo en cuenta los
factores que influyen:
Ambiente: el local donde se realice la medida deber ser lo ms tranquilo

posible, sin ruidos y con una temperatura e iluminacin agradables.
Paciente: el paciente deber permanecer en reposo durante 5 minutos

antes de efectuar la medida de la presin, sentado confortablemente en un
silln adecuado con el brazo a explorar relajado y apoyado, con la palma
hacia arriba. El brazo debe estar descrubierto.
Observador: los profesionales que realizan las medidas de la presin

arterial debern tener un entrenamiento similar. Debern estar familiarizado
con el sonido del estetoscopio y tener la capacidad de discriminar sonidos
correspondientes a las fases de Korotkoff. En particular, los ruidos de las
fases IV y V deben ser perfectamente discriminados.
Equipos
El equipo preciso para la medida de la presin arterial est constitudo por el
estetoscopio, el esfingomanmetro y el manguito.
Estetoscopio:
los sonidos arteriales son bien transmitidos y sern bien percibidos si se
coloca sobre la arteria humeral, en el pliegue del codo.
Esfigomanmetro:
puede ser de mercurio, aneroide u oscilomtrico:
37
de mercurio: consiste en un cubeta que contiene mercurio

conectada a un tubo vertical de cristal con un extermo abierto por
donde sube el mercurio al inflar el manguito. El tubo est calibrado
entre 0 y 300 mm . El sistema va conectado mediante un tubo de
goma al mecanismo de inflado que consiste en una pera y una
vlvula que regula el paso del aire hacia el sistema o hacia el
exterior. Deber estar en posicin vertical sobre una mesa horizontal
o mejor an colgado de una pared.
aneroide: se trata de un mecanismo a resorte que se moviliza a una

presin determinada y de forma proporcional a la misma,
desplazando una aguja en una esfera graduada en mm de Hg.
Aunque vienen calibrados de fbrica, son sensibles a la temperatura
y humedad y se deben recalibrar cada 6 meses
oscilomtrico: es un aparato electrnico basado en el anlisis de la

onda de pulso. Algunos equipos que llevan este tipo de
esfingomanmetro
pueden
ser
muy
sofisticados,
siendo
programables y permitiendo el inflado automtico del manguito.

Incluso algunos se han desarrollado como perifricos para conectar
a un PC. En los ms sencillos y baratos, el inflado es manual. La
fiabilidad de estos aparatos ha sido bien establecida, lo que los hace
ideales para la toma domiciliaria de la PA.
Manguito:
el maguito consta de una cmara de caucho infable situada en el interior de
una funda de tela que la engloba y que permite un abombamiento en su
parte interna. Las dimensiones del mismo son crticas, ya que un brazal
demasiado ancho dar valores anormalmente bajos de la PA, mientras que
uno demasiado estrecho dar valores ms altos.
Se han comercializado numeros tipos de manguitos para adultos y nios,
multiusuarios o para pacientes individuales. Las tallas ms usuales se
muestran en la tabla 2.1
38
DETERMINACION DE INDICE DE MASA DE CINTURA

El ndice cintura-cadera (IC-C) es una medida antropomtrica especfica para
medir los niveles de grasa intraabdominal, relaciona el permetro de la cintura
con el de la cadera (en centmetros) y dependiendo del resultado se estima si hay
cierto riesgo cardiovascular.
La OMS establece unos niveles normales de 0,8 en mujeres y 1 en hombres,
valores superiores indicaran obesidad abdominovisceral, lo cual se asocia a
un riesgo cardiovascular aumentado. Este parmetro es un buen indicativo para
ir vigilando tu salud cardiovascular de manera sencilla, si tus niveles se salen de
los valores normales ve tomndote en serio empezar con una vida saludable,
mejor prevenir que curar.
Adems esta medida es complementaria al ndice de Masa Corporal (IMC), ya que
el IMC no distingue si el sobrepeso se debe a retencin de lquidos, hipertrofia o
similar. De este modo el medir el IMC y el IC-C nos aproximar mejor a
conocer nuestra situacin respecto al peso y riesgo cardiovascular.
39
DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE

INTRODUCCION:
En el laboratorio clnico el metabolismo que el organismo lleva a cabo sobre
los carbohidratos consumidos y producidos en l, se refleja en la concentracin
que la glucosa alcanza a nivel srico. Por tal motivo sta determinacin es una de
las ms importantes a nivel del laboratorio clnico ya que permite definir el estado
basal de dicho proceso.
La glucosa es la principal fuente de energa del organismo. La insulina,
producida en las clulas de los islotes del pncreas, facilita la entrada de glucosa
en las clulas de los tejidos. Una deficiencia de insulina o una disminucin de su
actividad ocasiona un aumento de la glucosa en sangre.
Se encuentran concentraciones elevadas de glucosa en suero o plasma en
pacientes con diabetes mellitus (dependiente de insulina o no dependiente de
insulina) y con otras condiciones o sndromes. La hipoglucemia puede darse como
respuesta al ayuno, o bien puede ser debida a frmacos, venenos, errores
congnitos del metabolismo o gastrectoma previa.
El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un
nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio (1).
OBJETIVO:
El alumno ejecutar la tcnica para la determinacin de glucosa srica y
evaluar si se encuentras dentro o fuera de los lmites biolgicos de referencia.
MATERIAL Y REACTIVOS
FUNDAMENTO DEL MTODO
40
La glucosa presente en la muestra origina, segn las reacciones acopladas

descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometra.
Glucosa + O2 + H2O Glucnico + H2O2
2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + Fenol Quinonaimina + 4 H2O

Tanto el Reactivo como el Patrn estn listos para su uso.
EQUIPO ADICIONAL
Bao de agua a 37C
MUESTRAS
Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar. El suero o plasma
deben separarse de los elementos celulares lo antes posible para evitar la
glucolisis. La adicin de fluoruro sdico a la muestra de sangre previene la
glucolisis.
PROCEDIMIENTO
2. Pipetear en tubos de ensayo: (Nota 1)
Patrn (S)
Muestra
Reactivo (A)
Blanco
Patrn
10 L
1,0 mL
1,0 mL
Muestra
10 L
1,0 mL
3. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (1625C) o
durante 5 minutos a 37C.
41

CLCULOS
La concentracin de glucosa en la muestra se calcula a partir de la siguiente
frmula general:
A Muestra
A Patrn
Si se utiliza para calibrar el Patrn de Glucosa suministrado
x 100 = mg/dL glucosa
x 5,55 = mmol/L glucosa
Suero y plasma:
Neonato, prematuro 25-80 mg/dL = 1,39-4,44 mmol/L
Neonato, a trmino 30-90 mg/dL = 1,67-5,00 mmol/L
Nios, adultos 70-105 mg/dL = 3,89-5,83 mmol/L
BIBLIOGRAFA
1. Trinder P. Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an
alternative oxygen acceptor. Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-27.
3. National Diabetes Data Group: Classification and diagnosis of diabetes mellitus
and other categories of glucose intolerance. Diabetes 1979; 28:1039-1057.
1995.
AACC Press, 1997.
42
PRACTICA 11
DETERMINACION DE LDL-C Y FIBRINOGENO
REACTIVOS ADICIONALES PARA COLESTEROL LDL

Este reactivo precipitante debe ser utilizado junto con el Reactivo de Colesterol
contenido en cualquiera de los kits de Colesterol
El Reactivo est listo para su uso.
EQUIPO ADICIONAL
Bao de agua a 37C
MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estndar.
El Colesterol LDL en suero es estable 24 horas das a 2-8C.
PROCEDIMIENTO
Precipitacin
Muestra
0,4 mL
Reactivo (A) (kit de Colesterol LDL)
0,2 Ml

43

Colorimetra
Agua destilada
Blanco
20 L
Patrn
Muestra
----------
---------------------
-------------------
------------
1,0 mL
1,0 mL
20 L
20 L
1,0 mL
CLCULOS
La concentracin de colesterol en el sobrenadante se calcula a partir de la
siguiente frmula
general:
A Muestra
A Patrn
Si se utiliza para calibrar el Patrn de Colesterol, incluido en el Kit de Colesterol:
44
x 200 x 1,5 = mg/dL colesterol en sobrenadante

x 5,18 x 1,5 = mmol/L colesterol en sobrenadante
La concentracin de colesterol LDL en la muestra se calcula:
colesterol LDL = colesterol total colesterol en sobrenadante
Optimo
100-129 mg/dL = 2,59-3,34 mmol/L
Casi ptimo
130-159 mg/dL = 3,37-4,12 mmol/L
Moderado
160-189 mg/dL = 4,14 -4,90-mmol/L
Elevado
> 190 mg/dL = 4,92 mmol/L
Muy elevado
BIBLIOGRAFA
1. Grove TH. Effect of reagent pH on determination of high-density lipoprotein
cholesterol by precipitation with sodium phosphotungstate-magnesium. Clin Chem
1979; 25: 560-564.
2. Burstein M, Scholnick HR and Morfin R. Rapid method for the isolation of
lipoproteins from human serum by precipitation with polyanions. Scand J Clin Lab
Invest 1980; 40: 583-595.
Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III). NIH
45
1995.
AACC Press, 1997.
DETERMINACION DE FIBRINOGENO
INTRODUCCION
Para la conversin del valor en segundos a mg/dl de fibringeno sirve

la tabla adjunta al estuche. Los valores indicados en sta son vlidos
slo para el reactivo de fibringeno con el mismo nmero de control y
para los analizadores indicados.
La conversin (para la dilucin 1 + 9) es posible en el intervalo de 5
40 seg. El intervalo de precisin ptimo (825 seg) est marcado por
dos lneas negras. Si se requiere una determinacin ms exacta fuera
de este intervalo ptimo, se recomienda repetir el test con otra
dilucin.
Si el tiempo de coagulacin es inferior a 8 seg, se repite el test con
la dilucin de 1 + 19 y se multiplica el resultado obtenido por 2. Si el
tiempo de coagulacin es superior a 25 seg, se repite el test con una
dilucin de 1 + 4 1 + 1. Con una dilucin de 1 + 4, dividir el valor
obtenido por 2, con una de 1 + 1 dividir por 5.
Observaciones
Un inhibidor de la heparina, aadido al reactivo, permite la
determinacin tambin en pacientes bajo tratamiento con heparina.
46
OBJETIVO
El alumno realizar la determinacin de Marcadores para determinar enfermedad
metabolica o no
Extraccin de sangre venosa

La estasis venosa debe hallarse entre la presin sistlica y diastlica
y no debe durar ms de un minuto. La estasis repetida de la misma vena no es
posible antes de haber transcurrido 10 minutos.
Se recomienda emplear jeringas de un solo uso con solucin estril
de citrato sdico (0,11 mol/l). Hay que observar estrictamente las
proporciones de mezcla de citrato sdico y sangre de 1 + 9. La velocidad de la
extraccin se elige de manera que no se presente una depresin demasiado alta
en la jeringa.
Obtencin del plasma
Inmediatamente despus de la extraccin, mezclar bien la sangre y
trasladarla a un tubo de centrfuga, evitndose la formacin de espuma.
Centrifugar 15 min. a aprox. 2500 g. Efectuar la centrifugacin en el plazo de 2
horas despus de la extraccin de sangre. A continuacin, pipetear el
sobrenadante.
Estabilidad de la muestra
4 horas a 1525C (a partir del momento de la extraccin de sangre)
Dilucin de plasma
Diluir una parte de plasma citratado con nueve partes de la solucin
tampn, pH 7,35.
Mtodo de determinacin
Pipetear en un tubo de ensayo:
Muestra o plasma de control diluidos 0,2 ml
Incubar 1 min a 37C
Reactivo de Fibringeno (2025C) 0,2 ml
Con la adicin del reactivo de fibringeno, disparar el cronmetro y determinar el
comienzo de la coagulacin.
47
* La determinacin del fibringeno con el Fibrintimer requiere la adicin de caoln.

Disolver el contenido del frasco 1 con 1,8 ml de agua bidest. y aadir 0,2 ml de
una
suspensin de caoln (p. ej. del Reactivo PTT, Ref. 126 551 524 298).
Evaluacin
la tabla adjunta al estuche. Los valores indicados en sta son vlidos
slo para el reactivo de fibringeno con el mismo nmero de control
y para los analizadores indicados.
La conversin (para la dilucin 1 + 9) es posible en el intervalo de 5 40 seg. El
intervalo de precisin ptimo (825 seg) est marcado por
dos lneas negras. Si se requiere una determinacin ms exacta fuera
de este intervalo ptimo, se recomienda repetir el test con otra dilucin.
Si el tiempo de coagulacin es inferior a 8 seg, se repite el test con
la dilucin de 1 + 19 y se multiplica el resultado obtenido por 2. Si el
tiempo de coagulacin es superior a 25 seg, se repite el test con una
dilucin de 1 + 4 1 + 1. Con una dilucin de 1 + 4, dividir el valor obtenido por 2,
con una de 1 + 1 dividir por 5.
Observaciones
Un inhibidor de la heparina, aadido al reactivo, permite la determinacin tambin
en pacientes bajo tratamiento con heparina.
FUNDAMENTO DE LA TECNICA
Plasmas de control
Para el control de calidad se pueden emplear:
los plasmas de control contenidos en el estuche (normal, frasco 3,y patolgico,
frasco 4),
PreciClot I/II (normal, patolgico)
PreciClot I/II (normal)
48
PreciClot II/I (patolgico)

Preparacin de los plasmas de control normal y patolgico
Disolver el contenido de un frasco de plasma de control con exactamente 0,5 ml
de agua bidest. La solucin no se debe agitar y debe debe agitar y debe reposar
por lo menos 30 min antes del uso. El plasma de control se trata como plasma
citratado normal.
Estabilidad: 2 horas a 425C
Estabilidad: 1 mes a 20C.
Dilucin del plasma
Plasma de control normal: diluir 1 + 9 con solucin tampn.
Plasma de control patolgico: diluir 1 + 9 1 + 4 con solucin tampn.
Mtodo de determinacin
La determinacin se efecta segn el esquema de al lado. Evaluacin
la tabla adjunta al estuche. Con una dilucin de 1 + 4, dividir por 2 el valor indicado
en la tabla.
Valores tericos para los plasmas de control
Los valores exactos para los plasmas de control se toman de la hoja
adjunta a los estuches. Son vlidos slo para el nmero de control
correspondiente.
Valor normal
200400 mg/dl o resp. 2,04,0 g/l
Bibliografa
Clauss A. Acta haemat 1957;17:237.
Paar D. Blut 1971;23:1.
PRACTICA NMERO 12
DETERMINACIN DE CREATINA QUINASA
49
INTRODUCCIN:
La creatina quinasa (CK) desempea una importante funcin en el msculo
proporcionando ATP, cuando el msculo se contrae, a partir de ADP y utilizando
creatina fosfato como reservorio de fosforilacin.
La CK srica procede fundamentalmente del msculo y su concentracin
depende de una serie de variables fisiolgicas (sexo, edad, masa muscular,
actividad fsica y raza).
La concentracin srica de CK se encuentra notablemente elevada en
pacientes con algunas de las enfermedades del msculo esqueltico (distrofia
muscular, miositis, polimiositis, hipertermia maligna, trauma, rabdomiolisis aguda),
del sistema nervioso central (enfermedad cerebrovascular aguda, isquemia
cerebral, sndrome de Reye) y de el tiroides (hipotiroidismo). Se observan
concentraciones elevadas de CK al cabo de 3-6 horas de un infarto de miocardio
alcanzando valores mximos a las 24-36 horas. La concentracin vuelve a la
normalidad en 3-4 das debido a que la enzima es eliminada rpidamente del
plasma. El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado
de un nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio.
OBJETIVO:
El alumno realizar la determinacin de CK como un indicador enzimtico de
confirmacin de diagnostico de Infarto agudo al miocardio.
MATERIAL Y MTODOS:
La creatina quinasa (CK) cataliza la fosforilacin del ADP por el fosfato de
creatina, obtenindose creatina y ATP. La concentracin cataltica se determina,
empleando las reacciones acopladas de la hexoquinasa y glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa, a partir de la velocidad de formacin del NADPH, medido a 340
nm.
50
Fosfato de creatina + ADP

ATP + Glucosa
Glucosa - 6 - fosfato + NADP
Creatina + ATP
ADP + Glucosa - 6 - fosfato
Gluconato - 6 - fosfato + NADPH + H
MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estndar
PROCEDIMIENTO
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de
reaccin.
2. Pipetear en una cubeta:
Muestra 50 L
Reactivo de Trabajo 1,0 mL
3. Mezclar e insertar la cubeta en el fotmetro. Poner el cronmetro en marcha. 4.

A los 3 minutos, anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada
minuto durante3 minutos.
5. Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio (A/min).
CLCULOS
A/min x 3333 = U/L
25C
10-65 U/L
30C
15-105 U/L
37C
38-174 U/L
BIBLIOGRAFA
1. IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part
7: IFCC method for creatine kinase. JIFCC 1989; 1: 130-139.
51
2. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB
Saunders Co., 1999.
1997. 4. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th
ed. AACC Press,1997.
PRACTICA NUMERO 13
52
DETERMINACION DE CREATINA QUINASA TOTAL E ISOENZIMA

CK-MB
INTRODUCCIN:
La creatina kinasa esta compuesta de 2 cadenas polipeptdicas, denominadas
B (de cerebro) y M (de msculo), que dan origen a los tres isoenzimas dimricos:
MM (CK-1), MB (CK-2) y BB (CK-3).
Los porcentajes de la actividad de CK-MB srica respecto a la actividad CK
total suele ser inferior al 6%. Sin embargo, estos valores aumentan al 10 a 30%
despus de un infarto de miocardio dependiendo de la extensin de tejido
miocrdico afectado y de la localizacin del infarto. No obstante, pueden
encontrarse ndices bajos de CK-MB srica tras un infarto de un miocardio
previamente sano. Por consiguiente, el diagnstico de infarto de miocardio debe
basarse en la historia clnica y otros datos, junto con la magnitud de la elevacin
de CK-MB y su perfil en el tiempo.
OBJETIVO:
El alumno determinar la CK-total y CK-MB como indicadores enzimticos de la
confirmacin y seguimiento de un Infarto al miocardio.
MATERIAL Y METODOS.
La creatina quinasa (CK) cataliza la fosforilacin del ADP por el fosfato de
creatina, obtenindose creatina y ATP. La concentracin cataltica se determina,
empleando las reacciones acopladas de la hexoquinasa y glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa, a partir de la velocidad de formacin del NADPH, medido a 340
nm.
ATP + Glucosa
Creatina + ATP
53
Gluconato - 6 - fosfato + NADPH + H
MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estndar
PROCEDIMIENTO
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de
reaccin.
2. Pipetear en una cubeta:
Muestra 50 L
3. Mezclar e insertar la cubeta en el fotmetro. Poner el cronmetro en marcha. 4.

A los 3 minutos, anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada
minuto durante3 minutos.
5. Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio (A/min).
CLCULOS
A/min x 3333 = U/L
25C
10-65 U/L
30C
15-105 U/L
37C
38-174 U/L

Un anticuerpo especfico inhibe las dos subunidades M de la CK-MM
(CK-3) y la nica subunidad M de la CK-MB (CK-2), lo que permite la
medicin de la subunidad B de la de la CK- MB (asumiendo la ausencia
de CK-BB o CK-1)
54
. La concentracin cataltica de CK-B, que corresponde a la mitad de la

actividad CK-MB, se determina empleando las reacciones acopladas de la
hexoquinasa (HK) y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6P-DH), a partir
de la velocidad de formacin del NADPH, medido a 340 nm.
ATP + Glucosa
Creatina + ATP
Gluconato - 6 - fosfato + NADPH
+H
PROCEDIMIENTO
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a 37C.
2. Pipetear en un tubo de ensayo:
Muestra 40 L
3. Mezclar bien e incubar inmediatamente a 37C. Poner en marcha el

cronmetro.
4. Leer la absorbancia (A) a 340 nm exactamente a los 5 minutos (A 5)
y a los 10 minutos (A 10) de incubacin.
CLCULOS
La concentracin de CK-MB en la muestra se calcula a partir de la
siguiente frmula:
A 10 A 5 x 1651= U/L
Se han descrito valores discriminantes de alrededor de 25 U/L = 417
nkat/L para el infarto agudo de miocardio. No obstante, es preferible
55
emplear el lmite del ndice de CK-MB del 6% de la concentracin de CK

total valor discriminante.
BIBLIOGRAFA
1. IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part
7: IFCC method for creatine kinase. JIFCC 1989; 1: 130-139.
2. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB
Saunders Co., 1999.
1997. 4. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th
ed. AACC Press,1997.
56

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Determinacin de CK total srica

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Resolucin de casos clnicos

2. Agitar bien y dejar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente.

FUNDAMENTO DEL MTODO PARA ALBUMINA

Patrn Albmina --------

2. Agitar bien y dejar los tubos durante 1 minuto a temperatura ambiente.

de zona, permiti la generalizacin de los mtodos

electroforticos y su aplicacin en el laboratorio de anlisis clnicos. En este tipo

Soln buffer pH 8.6

MATERIAL POR EQUIPO:

1 tubo Vacutainer rojo

soporte, aguja y torniquete