OPS/CEPMInforme Téenica/95 Original: espaiiol Distribucién: LIMITADA INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA AMBIENTAL Edwin Julio Palomino Cadenas Microbiélogo Profesor Asociado de la FCAM/UNASAM Organizacién Panamericana de la Salud . Oficina Sanitaria Panamericana . Oficina Regional de la Organizacién Mundial de la Salud Centro Panamericano de Ingenieria Sanitaria y Ciencias del Ambiente Los Pinos 259, Urb. Camacho La Molina, Lima, Peri Marzo 1995Presentacién El autor, Prof. Edwin Julio Palomino Cadenas es Profesor Asociado de la Facultad de Ciencias de! Ambiente de la Universidad Nacional de Ancash "Santiago Antinez de Mayolo", Huaraz, Pert El Informe Técnico "Introduccién a la Microbiologia Ambiental" es producto de su participacién en e! Programa de Educacién Continua con Tecnologias Apropiadas en ‘Agua y Saneamiento para Profesores Universitarios que, bajo convenio firmado con fa OPS/OMS-CEPIS, auspicia la RZ ‘Agencia de Cooperacién Técnica de Alemania (GTZ) a Prolongacién Arenales 801, Miraflores, Lima, Pent Lima, marzo de 1995INTRODUCCION EI presente documento se desarroll6 gracias al apoyo que recibiera la Facultad de Ciencias del Ambiente de la Universidad Nacional de Ancash “Santiago Antunez de Mayolo" (FCAM- UNASAM), del Centro Panamericano de Ingenierfa Sanitaria (CEPIS) dentro del marco del “Programa de Educacién Continua en Tecnologias Apropiadas en Agua y Saneamiento para Profesores Universitario: Este texto recoge los conceptos bisicos de microbiologia general e introduce temas de microbiologia ambiental, teniendo en cuenta los aspectos bioquimicos de las interacciones microbianas en el ambiente, Se espera que su lectura facilite cl aprendizaje del curso de microbiologia y que motive a los estudiantes a investigar con mayor profundidad esia interesante disciplina que cada dia cobra mayor importancia con ef desarrollo de biotecnologia y ta ingenieria genética En la primera parte se describen tas caracteristicas de los microorganismos y su clasificacién, luego se sefialan los factores y agentes que favorecen su crecimiento y las posibles formas de control de los microorganismos patégenos e indeseables. Se hace luego un resumen de los mecanismos de recombinacién genética como una herramienta reciente de la biologia molecular cen diversos campos de la ciencia y la tecnologia. En la segunda parte se presentan las teracciones entre poblaciones microbianas y mediante ejemplos ilustrativos se hace notar la importancia de los microorganismos como causantes de enfermedades y su utilidad en la conservacién del suelo y preservacién del equilibrio ecolégico en gerneral. Debo expresar mi agradecimiento a la Quimica Sra. Marfa Luisa Castro de Esparza y a las bidloges Sra. Carmen Vargas de Mayo y Sra. Margarita Aurazo por sus orientaciones y comentarios tecnicos. A la Licenciada Marta Miyashiro mi reconocimiento por su valioso apoyo en Ia edicidn final del presente texto y al Sr. Juan Joseli por su ayuda en la elaboracién de las figuras que en él se incluyen. Mi reconocimiento a las Sefioras Lupita Tello y Silvia Brescia por la configuracién de la carétula. El contenido de este documento representa una versi6n preliminar que luego seré ampliada con los temas de microbiotogia del agua, de! suelo y la importancia de los microorganismos en la transformacién de los residuos domésticos ¢ industriales. Este documento esté dirigido a los estudiantes y a profesionales que trabajan en el érea de ia ingenieria ambiental, ingenieria sanitaria e ingenieria agricola. A ellos se les agredeceré que enriquezcan este texto enviando sus sugerencias y comentarios a la Facultad de Ciencias del Ambiente de la Universidad Nacional de Ancash "Santiago Antinez de Mayolo", Huaraz-Pert.CONTENIDO. La microbiologfa como ciencia Grupos microbianos Crecimiento microbiano Control del crecimiento microbiano Genética microbiana ‘Adaptacién de los microorganismos en el ambiente Interacciones microbianas Microorganismos patégenos y toxigénicos Microorganismos de importancia agricola Referencia bibliogréficaLA MICROBIOLOGIA COMO CIENCIA 1a ciencia que se encarga del La microbiologia es una rama de la biologia. La biologia es estudio de la vida. El concepto de ser vivo tiene dos enfoques: ~ Clisico: De acuerdo con este enfoque, ser vivo es todo ente que se caracteriza porque nace, crece, se reproduce y muere. Es capaz de alimentarse (desarrolla funciones metabdlicas), interactuar con su entorno y sentir. - Molecular: Este enfoque conceptualiza como ser vivo a todo aquel que esté constituido por piomoléculas funcionales; siendo las mds importantes el Acido nucleico (contiene las caracterfsticas genéticas propias de cada individuo) y las protefnas (componente estructural y funcional; enzimas, reguladores, transportadores, etc.). Las funciones metabdlicas que pueda Gesarrollar un organismo vivo dependen de las condiciones ambientales en el que se encuentra. La microbiologfa se inicia oficialmente como ciencia con ta carta que enviara A. van Leeuwenhoek el 20 de mayo de 1684 a la Royal Society of London, en la que describe con detalles la existencia de seres tan miniisculos en diferentes muestras (agita, sarro, fermentos) 41.48.0980 visibles solamente al microscopio. El microscopio que us6 para sus observaciones fue construido por él mismo. Estos seres vivos tan pequefios !lamados por Leewenhoek "animélculos" son ahora conocidos como microorganismos. Los microorganismos se caracterizan por ser organismos vivos muy pequefios, generalmente no visibles a simple vista. Su tamafio promedio (didmetro) es menor a un milimetro. La ciencia encargada del estudio de estos seres es la MICROBIOLOGIA. La microbiologia, inicialmente muy genérica, ha experimentado a la fecha una gran diversificacién: microbiologia médica, ambiental, del agua, del suelo, industrial, entre otras. Surge como una alternativa para explicar los diferentes fendmenos relacionados con la existencia de los microorganismos: agente causal de enfermedades, reciclaje de los elementos biogeoquimicos, participacién activa en el agua y en el suelo, productor de diferentes metabolitos de interés industrial (bebidas alcohdlicas, antibiéticos, enzimas diversas). Existen diversos e importantes aportes de muchos destacados investigadores. Podemos sefialar algunos que consideramos ilustrativos. Louis Pasteur (1822-1895), quimico francés, demostré los errores de la generacién esponténea (1860-1862) ¢ inicié las investigaciones en inmunologia con la produccién de vacunas. Robert Koch (1843-1910), médico aleman que desarrollé las técnicas de cultivo puro en medio solido lo que posibilité el aislamiento e identificacién de los agentes ctioldgicos de diversas enfermedades. Martinius Beijerinck (1851-1931) quien describiera la fijacién simbidtica (1888) y no simbidtica (1901) del nitrégeno molecular, desarrollé los ‘medios de enriquecimiento. Sergei Winogradsky (1856-1953), investigador ruso que trabajé en2 el Instituto Pasteur, describi6 la oxidacién microbiane dei H,S y azufre (1887), la existencia de microorganismos quimioaut6trofos (1888), y la fijacién de N, por bacterias (1893). Kluyver (1888-1956), desarrolld trabajos que permitieron comprender mejor las. interacciones microbianas. Gause, describié la predacién de Paramecium caudatum por Didinium nasutum En la actualidad el interés es ain mayor, ya que estos mimiisculos seres pueden explicar diversos fendémenos bioldgicos (fisiologia, genética y la vida misma). Estos seres tan pequeiios, capaces de reproducirse incluso cada veinte minutos en espacios tan pequeftos como un tubo de ensayo, pueden ser manipulados genéticamente con aplicaciones multiples, que si bien es cierto en unos ‘casos es peligroso, en otros casos son completamente beneficiosos como en la produccién de insulina para el tratamiento de la diabetes y la produccién de bacterias con capacidad de degradacién de residuos hidrocarbonados que descontaminan cuerpos de agua y el suelo.GRUPOS MICROBIANOS La agrupacién de los microorganismos resulta més didéctica cuando se toma en cuenta el nivel de organizaci6n celular. 1, ACELULARES: Grupo constituidos solamente por virus. Atin cuando los fisislogos no los consideran seres vivos, en términos genéticos y ecoldgicos es perfectamente valido considerarlos como seres vivos por su capacidad de perpetuarse y por estar constituides por las dos biomoléculas fundamentates para la vida, dcido nucleico y proteinas, que son funcionales en los virus. 24 2.2, . CELULARES: Tenemos dos sub-grupos: Procariotas: Grupo constituido por bacterias. Se caracterizan por presentar su material nuclear disperso en el citoplasma por carecer de envoltura nuclear. No pose organelos. Genera energia a nivel de ta membrana celular. No es capaz de reproducirse por mitosis. Carece de la capacidad de reproduccién sexual, atin cuando puede recombinarse genéticamente, incluso con un eucariota Es el grupo que por excelencia recicla todos los elementos biogeoquimicos y el tnico grupo con capacidad de fijar nitrégeno molecular, elemento que adolece el suelo pese a que la atmdsfera contiene mas de 75% de nitrégeno molecular (forma no asimilable por las plantas), Eucariotas: Grupo heterogéneo de organismos: Hongos, Algas, Protozoarios. Todos ellos se caracterizan por presentar un nicleo verdadero (material nuclear dentro de una membrana nuclear) y organelos separados por unidades de membrana, La energia se genera en organelos especiales (plastidios en los fotosintéticos, y mitocondrias en los heterétrofos). Estos organismos se reproducen de manera sexual y asexual. ‘A continuacién se describen las caracterfsticas mds notorias de cada una de las categorias microbianas. No se intenta hacer una clasificacién estrictamente taxonémica sino més bien ta describir los grupos microbianos de importancia, considerando el rol que desempefian en el ambiente,1. VIRUS Son organismos acelulares muy pequeiios, visibles solamente con el microscopio electrénico. El didmetro de la mayoria de los virus es de 20 a 300 nm. Son ultrafiltrables (atraviesan con facilidad los filtros en los que las bacterias son retenidas). La estructura de un virus es muy sencilla, posee un solo tipo de dcido nucleico (écido desoxi ribonucleico, DNA; 0 dcido ribonucleico RNA) dentro de una cubierta protéica llamada cdpside, La capside est4 formada por unidades mas pequefias denominadas capsémeros. Otros virus adicionalmente presentan cubiertas de lipidos conjugados. La cépside presenta formas variables, las mas comunes son las poliédricas y helicoidales. Acido Nucleico = (DNA o RNA) Estructura de un virus poliédrico (corte transversal)2. BACTERIAS Las bacterias son microorganismos procariotas, metabélica y fisiolégicamente muy diversos, pues existen bacterias auttrofas 0 heterdirofas, aerobias © anacrobias, patégenas 0 necesarias para la salud, pardsitas 0 de vida libre, etc. Representan la forma de vida celular més sencilla, Son algo més grande que los virus pero mas pequefios que los microorganismos eucariotas (el largo de las bacterias varia entre 0,1 u a mas de 500 u). En su reproduccién la mitosis y meiosis, estin ausentes, lo hacen usualmente por fisién binaria, Aun cuando no se reproducen sexualmente, es muy frecuente la "recombinacién genética” que mas bien es una transferencia ireccional de material genético de una donante a otra receptora. uni En la siguiente figura mostramos la estructura de una bacteria. Nétese la ausencia de organelos. Estructura ideat de una bacteria bacilarCOMPOSICION APROXIMADA DE LA BACTERIA [ COMPONENTE PORCENTAJE (%) AGUA 70 PESO SECO: 30 - DNA - RNA - Protefna - Polisacérido + Lipidos - Fosfolipidos eaugsso TAMANO DE LAS BACTERIAS ORGANISMO DIAMETRO LONGITUD (mieras) (micras) 0,2 93-0,7 Pasteurella tularensis Brucella melitensis 0,3 Escherichia coli 0,9-0,7 3,0-1,0 Staphylococcus aureus 0,8-1,0 0,6-1,0 Streptococcus pyogenes - Forma de las bacterias: Es un criterio para su clasificacién. Hay bacterias esféricas (cocos), que se agrupan en pares (diplococos), racimo (estafilococos), cadena (estreptococos) 0 en paquetes (sarcina). Las hay de forma abastonada 0 cilindrica (bacilos) y onduladas (espirilos).. Los Aetinomycetos son de apariencia fiingica y han sido considerados como hongos por mucho tiempo.Pie pe ° 2” & a) 8 © © ® © ee oo ° Diplococos Estreptococos ’ 6 ae Woe a oop ee oo 90 i as 27 ao %e 85 Bacilos Espirilos Actinomycetos Formas y agrupaciones de las bacterias Tipos de metabolismo microbiano: Es otro criterio de clasificacién de las bacterias que bésicamente distingue dos grupos ~ Autétrofos, requieren de luz solar para realizar la fotosintesis, CO, y H,0 para almacenar la energia quimica producida durante el proceso, ademés de sales de nitrégeno, fésforo, y en menor proporcién sales de K, Ca, Na, Cl, Mg, S, etc. que normalmente se encuentran en los diferentes ambientes. ~ Heterétrofos necesitan de carbohidratos, ipidos 0 proteinas como fuente de energia y carbono. A partir de proteinas y lipidos pueden obtener sustancias elementales como el Fe, Mg. Otros necesitan ademés algunas sales adicionales de fosfato, sulfato y otros. Los més exigentes requieren de factores de crecimiento (vitaminas, aminodcidos).TIPO DE METABOLISMO PUENTE DE ENERGIA PUENTE DE CARBONO - Fotstrofas (fotolitétrofas) Luz co, ~ Quimioautstrofas (quimiolit6trofas) | Smee mogsoos CO, Luz - Fotohetorétrofas (foto organsirofas) OOF aici - Heterétrofas (quimio organétrofas) |“ Test Porat a esi peomate Otra herramienta valiosa en la clasificacién de bacterias son las diferentes técnicas de coloracién: Coloracién Simple, Gram, Zieh! Nelsen. - La coloracién simple consiste en la incorporacidn de azul de metileno, u otro colorante, a la muestra aproximadaimente por un minuto; luego se descarta el colorante, se enjuaga y se seca. La observacién al microscopio permite distinguir y diferenciar las diversas formas microbianas. - La coloracién Gram es una coloracién diferencial. La muestra se colorea inicialmente con cristal violeta, luego se afade una solucién yodada como mordiente; seguidamente se afiade el alcohol-cetona como decolorante (un grupo de bacterias sufre decoloracién y otro grupo no); finaimente se affade la safranina como colorante de contraste. Este tltimo es incorporado solamente por aquellas que suftieron decoloracién con el alcohol-cetona. Las bacterias Gram positivas son aquellas que quedan coloreadas de azul por resistir 1a decoloracidn (la raz6n es Ja presencia de dcido teicoico y la ausencia de Iipidos en su pared celular); las Gram negativas fen cambio quedan coloreadas de rojo que es el colorante de contraste por no resistir la decoloracién (la pared celular de estas bacterias es rica en lipopolisacéridos, el Acido teicoico esta ausente), ~ Lacoloracién de Ziehl Nelsen es también una coloracién diferencial. Un grupo de bacterias son diffcilmente coloreables, pero una vez coloreadas retienen tan fuertemente el colorante que la accién de los decolorantes es précticamente nula. La técnica consiste en someter la preparacién a la tincién con fucsina fenicada con calentamientos y enfriamientos que garanticen la entrada del colorante al interior de la célula. Luego se decolora con alcohol-dcido; finalmente se afiade un colorante de contraste como el azul de metileno. Las bacterias alcohol- Acido resistentes quedan coloreadas de fucsia, mientras que las alcohol-dcido sensibles toman Ja coloracién azul. Son alcohol-écido resistentes las del género Mycobacterium. Para la ubicacién taxonémica precisa se hacen pruebas metabslicas (comportamiento bioquimico, fisiolégico) y pruebas genéticas. En el Manual de Bergey se encuentra una descripcién taxondmica de las bacterias.9 ‘A continuacién se describen los grupos bacterianos de mayor importancia. Deberd tenerse en cuenta que las bacterias Gram positivas toman la coloracién azul al ser sometidas a la coloracisn de Gram, en tanto que las Gram negativas toman la coloracién roja. Por otro lado, los cocos son de forma esférica, mientras que los bacilos son abastonados 0 cilindricos. 2.1 COCOS GRAM POSITIVOS: - FAMILIA MICROCOCACEAE: Se caracterizan por ser aerobios a anaerobios facultativos, no forman esporas, son catalasa positivos. Pueden crecer en ambientes con concentraciones de NaCl de 5%. Los hay individuales, en pares 0 formando racimos. Los Saphylococcus y Micrococcus son los microorganismos més representativos, Se les encuentra mayormente en la piel de los animales y cuerpos de agua. - FAMILIA STREPTOCOCACEAE: Se caracterizan por ser anaerobios facultatives, no forman esporas y son catalasa negativos. Generalmente se encuentran formando cadenas. EI género representativo es Sireprococcus. Se les encuentra normalmente en la piel de los animales y cuerpos de agua 2.2 BACILOS GRAM POSITIVOS + FAMILIA BACILLACEAE: Son formadoras de esporas. Su ambiente natural es tipicamente el suelo; también los encontramos en cuerpos de agua. Se distinguen dos géneros: Bacillus (bacterias aerobias oxidasa y catalasa positivas); Closrridium (bacterias anaerobias oxidasa y catalasa negativas). El Bacillus muestra una fuerte actividad amilolitica y el Clostridium actividad celulolitica y proteolitica. La actividad celulolitica explica su presencia en el rumen de animales rumiantes. + FAMILIA LACTOBACILLACEAE: No forman esporas. Son anaerobios facultativos a anaerobios. Metabélica y genéticamente estén mas relacionadas con la familia Streptococaceae. Su ambiente natural son los productos lécteos y el sistema digestivo de ‘mamiferos en etapa de lactancia 2.3, COCOS GRAM NEGATIVOS: - FAMILIA VEILLONELIACEAE: Se encuentran en ambientes anaerobios, pues el oxigeno les es t6xico. El género representativo es Veillonella. - FAMILIA NEISSERIACEAE: Son aerobios_ a anaerobios facultativos 0 microaerofilicos. Se les encuentra en el suelo, agua y en la mucosa de los animales. Pueden estar en pares 0 formando paquetes. El género representativo es Neisseria.10 2.4 BACILOS GRAM NEGATIVOS: - BACTERIAS AUTOTROFAS: Son aquellas que pueden elaborar su propio alimento. Son frecuentes en cuerpos de agua. Se distinguen dos sub grupos, las fotdtrofas y las quimiolitétrofas. Las fotdtrofas que ulilizan la luz como fuente de energia. Dentro de este grupo tenemos a las bacterias agrupadas en las familias Rhodospirillaceae (bacterias purptireas no sulfurosas), Chromatiaceae (bacterias purpireas del azufre), Chlorobiaceae (bacterias verdes que participan en el ciclo del azufre). Las bacterias verdes y pirpuras del azufre uusan compuestos azufrados reducidos como el sulfuro de hidrdgeno o tiosulfato como donador de electrones y son anaerobios obligados. Las Cyanobacterias son por excelencia autétrofas, pues no solamente son capaces de realizar la fotosintesis, sino que hay miembros como Nostoc y Synochococcus que fijan nitrdgeno molecular. Las quimiolitétrofas obtienen su energia de las reacciones quimicas. En este grupo tenemos a los miembros de la familia Nitrobacteriaceae, que obtienen su energia de la oxidacién de amonio a nitrito. Otras bacterias, como los Thiobacillus, son capaces de obtener su energia de la oxidacién de azufre 0 compuestos azufrados. Un grupo transitorio entre las autdtrofas y las heterdtrofas son las fotoorganétrofas que utilizan ‘un compuesto organico sencillo como el acetato para la fotoasimilacién directa y como fuente de poder reductor en la fijacién del CO,. Por otro lado, muchas bacterias fotdtrofas, son también capaces de realizar metabolismo heterétrofo cuando crecen en la oscuridad. Otras bacterias son predominantemente heterstrofas y estén clasificados en diferentes familias. Este grupo es el que estd distribuido mas ampliamente. 2.5 FAMILIA PSEUDOMONADACEAE: Son bacilos Gram negativos no formadores de esporas. Son tipicamente oxidativos. No fermentan azticares. La gran mayoria son proteoliticos y lipoliticos. Se encuentran en ambientes con materia orgénica. Se les reconoce con cierta facilidad por ser bacilos Gram negativos oxidasa y catalasa positivos no fermentadores de azticares. 2.6 HALOBACTERIACEAE: Son bacterias que requieren la presencia de sales para su crecimiento y son capaces de crecer incluso en concentraciones superiores a 12% de NaCl. Se les encuentra mayormente en ambientes marinos y estuarios. 2.7: ENTEROBACTERIACEAE: Son bacilos anaerobios facultativos, fermentan azticares (por Jo menos la glucosa) y son oxidasa negativos. No forman esporas. Su ambiente natural es el intestino de los animales y por tanto también las encontraremos en los cuerpos de agua; sin embargo, otras enterobacterias pueden encontrarse en el suelo y agua, aun cuando no hayan entrado en contacto con residuos animales. La bacteria que se utiliza como indicador de contaminacién fecal en los andlisis de agua y alimentos es E. coli. Los génerosrepresentativos son Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Salmonelta, Shigelta 2.8 VIBRIONACEAE: Son bacterias anaerobias facultativas, no formadoras de esporas. Fermentan azticares y son oxidasa positivas. Incluye 3 géneros: Aeromonas, Plesiomonas y Vibrio. En este tiltimo género esté el Vibrio cholerae O:1, que causa la enfermedad conocida como cOlera. Esta bacteria ha desencadenado serias pandemias, en las que también el pueblo peruano ha sido afectado con pérdidas humanas. Esta bacteria produce una toxina que desencadena un cuadro diarreico agudo a las pocas horas de haber sido ingerida. 2.9 BACTERIAS FIJADORAS DE NITROGENO MOLECULAR: Este es un grupo heterogéneo que incluye a algunos miembros ya descritos. Sin embargo, destacan por su importancia tres géneros bacterianos agrupados en tres familias diferentes: Rhizobium Azotobacter, Azospirillum. Son bacterias que no forman esporas, son fermentativos y aerobios. No debe olvidarse que las Cyanobacterias también son excelentes tijadores de N, Las del género Rhizobium fijan Ny en asociacién simbidtica con leguminosas, Forma inicialmente un nédulo en e! que se multiplica y produce la Leg-hemoglobina que mantiene activa la nitrogenasa (enzima responsable de la fijacién del nitrdgeno) al dosificar el oxfgeno a las concentraciones ménimas necesarias Las del género Azorobacter, fijan nitrégeno molecular libremente en el suelo, atin cuando se observa mayor actividad en la rizésfera. Actividad similar desempefian las del género Azospirilum; sin embargo ésta muestra su actividad en la rizdsfera de cultivo de plantas gramineas. Otras familias de bacterias importantes son las Myxobacteriales, Cytophagales y Sphaerorillus; esta Ultima es de forma filamentosa conocida como "hongo de desagie” que acumula metates ‘oxidados en su interior; Mycobacteriaceae, que incluye a Mycobacterium tuberculosis, causante precisamente de la tuberculosis; y las Mycoplasmas y Ricketsias, pardsitos causantes de enfermedades en animales. 3. HONGOS Son organismos no fotosintéticos (carecen de clorofila) formadores de esporas (estructuras de resistencia a las condiciones estresantes del ambiente como la sequedad, acidez, radiacién solar). La pared celular est4 compuesta por quitina y eventualmente también por celulosa. La parte vegetativa del hongo normalmente es inmévil. Son heterdtrofos, en su gran mayoria descomponedores y saprofiticos, otros tienen la capacidad de producir sustancias quimicas de interés para la industria de bebidas alcohdlicas, antibisticos12 y enzimas. Los hongos presentan una gran diversidad de formas y tamafios. Generalmente se encuentran formando agregados o colonias que permiten su visualizacién macroscépica. La descripcién clésica incluye a los lamados: ~ Mohos que vienen a ser las formas filamentosas; crecen por clongacin y fragmentacién de sus hifas. Son organismos multicelulares y filamentosos. - Levaduras, hongos unicelulares que se reproducen mediante la formacién de gemas 0 brotes que luego se separan de la célula madre. - Hongos sombrerito, hongos en estado de fructiticacién que emergen del suelo formando las estructuras clasicas del "sombrerito” de colores que van del blanco al mas colorido rojo oe, | Oye Mohos Levaduras “Hongos sombrerito" strstr de fructifcacién de hongor Formas fiingicas Taxonémicamente, se reconocen cuatro grupos de hongos: 3.1. PHYCOMYCETOS: Presenta su micelio no septado con miltiples nticleos dentro de la hifa. Las esporas asexuales estén dentro de un saco, mientras que las esporas sexuales no se forman en estructuras especializadas. Ejm. Rhizopus, Saprolegnia, Phytophthora.3.2 33 13 Esporangiosporas Esporangi Apsfisis Sse Hifa no septada a a Rhizopus, Wifas y estructura de propagacién vegetativa ASCOMYCETOS: Junto con Ios Basidiomycetos y Deuteromycetos se les considera hongos superiores. Los tres grupos se caracterizan por presentar la hifa septada con presencia de un poro a través del cual una célula se comunica con la otra adyacente. La espora sexual se produce dentro de una estructura especializada Hamada asca (especie de saco). Pueden ser filamentosas o levaduriformes. La pared celular esta compuesto de guitina, Ejm. Sacharomyces BASIDIOMYCETOS: Las esporas sexuales se forman sobre una estructura especializada denominada basidia. Las hay filamentosas, levaduriformes. Una célula se encuentra ligada a la otra a través de una “hebilla", En este grupo se encuentran los "hongos sombrerito*. Estos titimos presentan celulosa en su pared celular.14 Ascosporas Basidiosporas © Esterigma ey DI} Asea Ss Ss Ascomycetos Basidiomycetos Esporas sexuales de hongos superiores 3.4. DEUTEROMYCETOS: Grupo transitorio de hongos en ei que no se conoce la forma de reproduccién sexual. Es un estado imperfecto de los Ascomycetos y Basidiomycetos Conidiéforo ——_| Hifa septada Hifas y esporas asexuales de un Deuteromyceto (Aspergillus)4, ALGAS Son organismos eucariotas fotosintéticos; todas poseen al menos un tipo de clorofila y xantofila como pigmentos fotosintéticos dentro de plastidios. Existe una gran diversidad de algas que van desde las unicelulares (aquellas que se incluyen en la microbiologia) a otras de organizacién més compleja con estructuras similares a las de las plantas superiores (las phaeophylas que presentan rizoide, cauloide, filoide, como equivalentes a rafz, tallo y hojas). ‘A excepcidn de las cuglenofitas, todas presentan pared celular, en su mayorfa compuesta por celulosa. Las diatomeas presentan silicatos en su pared celular. Son autdtrofos; las hay méviles ¢ inméviles. Su ambiente natural son los cuerpos de agua, en Ios que juntamente con las Cyanobaeterias, son responsables de més de! 50% de la produccién primaria en todo el planeta, Pueden tener vida libre, filamentosa, 0 formar colonias. Se reproducen por fisién (binaria o multiple) y también pueden reproducirse sexualmente. A continuacidn se presenta algunas formas de las algas. Chlorophyta Chlorophyta Euglenophyta | Chrysophyta(oisoes) Chlorella Ulothrix Euglena Navicula racién de algunas algas microscépicas16 Las algas se agrupan en siete categorias taxonémicas: 4.1 CHLOROPHYTA: Poseen las ciorofilas a y b, ademés los carotenos alfa y beta, Su material de reserva es el almidén. Estan distribuidas en cuerpos de agua continentales y marinos. Ejm. Chlorella, Ulothrix 4.2, EUGLENOPHYTA: Posen las clorofilas a y b y el beta caroteno. Su material de reserva es el paramilén, Carecen de pared celular. Se encuentran en cuerpos de agua continentales y marinos, sedimento y suelos hiimedos. Ejm. Euglena 4.3: CHRYSOPHYTA: Poseen las clorofilas a y c, ademas del beta caroteno. Su material de reserva son los aceites y la crisolaminarina. Pared celular compuesta de celulosa o quitina, Agrupa a las diatomeas. Se encuentran en cuerpos de agua continental y marino. Se les conoce comunmente como algas amaritlo verdosas, Ejm. Navilua 4.4 PHAEOPHYTA: Poseen las clorofilas a y c, ademds de los carotenos alfa y beta; son conocidas como algas marrones, Su material de reserva son la laminarina, manitol y aceite. Son exclusivamente marinas. Representan el estadio de transicién entre las algas y las plantas. Ejm, Fucus. 4.5. PYRROPHYTA: Poscen las clorofilas a y c y el beta caroteno. Su material de reserva son el almidén y el aceite. Se encuentran en cuerpos de agua continentales y marinos. Incluye a los Dinoflagelados. 4.6 CRYPTOPHYTA: Poseen las clorofilas a y c, los carotenos alfa y epsilon, los pigmentos ficocianina y ficoeritrina, Su material de reserva es el almidén, Estén distribuidas en cuerpos de agua continentales y marinos, 4.7 RHODOPHYTA: Poseen las clorofilas a y d, los carotenos alfa y beta, los pigmentos ficocianinia y ficoeritrina. Su material de reserva es el almidén. Estén presentes en aguas continentales y marinas 5. PROTOZOARIOS Son animales unicelulares. Se caracterizan por ser heterétrofos, es decir no son fotosintetizadores. Carecen de pared celular; presentan movimiento voluntario y se reproducen por fisién binaria o maltiple, La reproduccién sexual también esta presente en estos animales microscépicos. Se les agrupa en:17 5.1 Flagetados (Mastigoptiora): Pueden moverse gracias a la presencia de uno o mas flagelos, ‘Su reproduccién es por fisién binaria. Ejm. Trypanosoma, Leismania. 5.2. Amebas (Sarcodina, Rhizopoda): Aqucllos que se mueven por la emisién de pseudépodos 0 falsos pies, similar al movimiento de los leucocitos. Posen muchos planos para su divisién celular. Ejm. Ameba 5.3. Ciliados (Ciliophora): En la superficie de su cuerpo presentan cilios 0 pelitos que les permiten moverse. Se reproducen por fisién binaria normalmente transversal. Ejm Paramecium. 5.4 Sporozoa: No presentan estructura de locomocién, aun cuando pueden desplazarse por movimiento deslizante. Se reproducen por esporulacién. Ejm. Plasmodium vivax. Flagelado, Ameba Ciliado Esporozoarios (Trypanosoma) (cus cortinensis) (Paramecium) (Plasmodium) Representacién esquematica de los protozoarios18 CRECIMIENTO MICROBIANO, Se entiende por crecimiento microbiano al incremento en forma ordenada de los componentes moleculares ye! consecuente incremento del nimero de individuos. EI crecimiento de los microorganisms en los medios de cultivo sélido se evidencia por la formacién de colonias (conjunto de individuos originados a partir de un solo individuo), 0 por la formacién de turbidez, pelfcula o sedimento en los medios Iiquidos. Como todo ser vivo, los microorganismos necesitan de nutrientes y determinadas condiciones para poder crecer y desarrollar sus diversas funciones vitales. 1, NUTRIENTES: Los nutrientes son componentes quimicos que requiere un microorganismo para biosintetizar las biomoléculas esenciales, tanto las de importancia constitutiva (proteina, Acido nucleico, biomoléculas complejas), como las energéticas (carbohidratos). Entre las diversas biomoléculas que regiere sintetizar un microorganismo estén las enzimas (proteina especializada que cataliza una reaccién quimica) que son fundamentales para el sostenimiento de la vida misma porque garantizan la rapidez de las reacciones quimicas durante el metabolismo. El alimento que se le provee a un microorganismo comunmente recibe el nombre de medio de cultivo y debe contener to siguiente: - Fuente de energfa y carbono: La fuente de energia podré ser la luz para los fotosintéticos y el CO, como fuente de carbono. Para los heterdtrofos los diversos compuestos orgénicos (carbohidratos, lipidos, protefnas) les provee la fuente de energia y carbono. - Fuente de nitrégeno: Dependiendo de su metabolismo, requeriré nitrégeno inorgénico (sales de nitrato, amonio) u orgénico (aminoécido, proteinas). - Fuente de fésforo y azufre: También lo podrén tomar como sales (fosfatos, sulfatos) 0 de fuentes orgénicas (aminodcidos, protefnas). ~ Metales: Diversos metales como el sodio, potasio, calcio, magnesio, manganeso, hierro, zinc, cobre, cobalto y otros. - Factores de crecimiento: Los microorganismos més exigentes requieren de factores de crecimiento (vitaminas, aminodcidos).19 Los microorganismos autétrofos requieren de luz solar para realizar la fotosimtesis, CO, y HO para almacenar la energia qufmica producida durante el proceso, ademés de sales de nitrégeno, f6sforo, y en menor proporcidn sales de K, Ca, Na, Cl, Mg, S, etc. que normalmente se encuentran en los diferentes ambientes. Los microorganismos heterdtrofos necesitan de carbohidratos, lipidos © proteinas como fuente de energia y carbono. A partir de ellos pueden obtener sustancias elementales como el Fe, $ y Mg. Otros necesitan ademés algunas sales adicionales de fosfato, sulfato y otros, 2, FACTORES AMBIENTALES: a) Temperatura: Dependiendo de su procedencia requeriré una temperatura éptima determinada para su crecimiento. Existen tres grupos; psicrofilo (15 a 20 °C), mesdfilo (25 a 40 °C) o terméfilo (45 a 60 °C). b) Oxigeno: El microorganismos sera aerobio si requiere de oxigeno para su crecimiento; anaerobio si requiere de un ambiente carente de oxigeno pues este elemento le es t6xico; microaerofflico, si la atmésfera en la que tiene que crecer no excede el 5% de oxigeno; 0 anaerobio facultativo, si puede crecer indistintamente en presencia 0 ausencia de oxigeno. ©) pH: Un medio ligeramente neutro es el adecuado para la gran mayoria de los microorganismos. Sin embargo, existen microorganismos con capacidad de crecer en ambientes tan dcidos como los Thiobacillus chioxidans que crece en medios con pH de hasta 1,0 (ptimo 2,0 a 2,8), pues esta bacteria es capaz de producir dcido sulfrico, Otras en cambio pueden crecer en ambientes alcalinos como las Nirrosomonas que crecen en medios muy alcalinos con pH 10 (6plimo 8,0 a 8,8). 4) Salinidad-Conductividad: La conductividad del agua se relaciona con la concentracién de jones presentes a una temperatura dada, usualmente es de 20 a 25°C y se expresa en umho/cm. El efecto de ta salinidad depende de la temperatura. Las concentraciones elevadas de sales ademds de afectar 1a presién osmética, tienden a desnaturalizar las proteinas, rompiendo su estructura terciaria que es esencial para mantener la actividad enzimatica. Los microorganismos halofilicos obligados (aquellos que crecen en soluciones saturadas de sal) poseen enzimas especializadas que adoptan su configuracién activa s6lo cuando se encuentran en concentraciones salinas altas. Los ecosistemas que se caracterizan por presentar concentraciones altas de sal son la piel, océanos y ciertos tipos de suelo. ©) Humedad y actividad del agua: Los microorganismos requieren de agua para su crecimiento y Feproduccién. La disponibilidad de agua en el ambiente es muy variable; por ejemplo en suelos desérticos el agua es un factor que limita el crecimiento microbiano, mientras que en Tos lagos el agua no es un factor que limite la actividad microbiana. La actividad del agua (@,) es un indice de! agua disponible para el uso microbiano; por definicién la a, del agua destilada es 1,0. Muchos microorganismos requiere de valores de a, cercanos a 0,9 para su8) hy d 20 actividad metabslica. Algunos hongos filamentosos y liquenes son capaces de crecer a valores de a, incluso inferiores a 0,75. Potencial redox: Muchas reacciones enzimaticas son de Oxido-reduccién. La capacidad de tun organismo para realizar una reaccidn redox depende del estado de dxido-reduccién en el ambiente. El potencial redox esté fuertemente influenciado por la presencia o ausencia de oxigen molecular. Los ambientes en equilibrio con el oxigeno atmostérico tiene valores de E, +800 mV. A menor tensin de oxigeno, este valor disminuye. En cuerpos de agua naturales, la actividad heterotrdfica es acrobia donde el potencial redox esta entre 400 a 500 mV. En sedimentos ricos en materia organica el E, es menor de -450 mV; y en estos niveles cocurre la reduccién de sulfatos a H,$ y la reduccién de CO, con produccién de CH,. Los efectos del potencial redox sobre los microorganismos interactéan con el pH Presién: En el nivel del mar la presidn atmosférica es una atmésfera (] atm = 760 mm He). En los cuerpos de agua, por cada 10 m de profundidad se incrementa aproximadamente | atm més. Las Spirillum son bacterias capaces de crecer 15 veces més répido en presiones entre 300 a 600 atm que a I atm, Las presiones hidrostdticas elevadas parecen inhibir la sintesis de DNA, RNA y proteinas; el transporte a través de la membrana celular; y la actividad de ni de su estructura terciaria. muchas enzimas por la modificaci Radiaci6n: La entrada constante de la luz a los ambientes, permite la formacién de un espectro variado de longitudes de onda de los rayos UV, visibles, infra-rojos, rayos X gamma, etc. Estas radiaciones se hacen ionizantes cuando interactian con la materi produciendo iones inestables y radicales libres que pueden provocar destruccién, mutacin (© muerte de los microorganismos al incidir sobre ellos. La misma radiaci6n ultravioleta puede ser germicida a longitudes de onda de 260 nm que coincide con la maxima absorcién del DNA, lo que sugiere que el daiio del DNA es el principal mecanismo del efecto germicida. Movimiento: El movimiento del aire y del agua favorece la dispersién pasiva de los microorganismos. De manera similar el movimiento es importante en la introduccién y distribucién de los nutrientes en el medio para el crecimiento microbiano, ademds de la remocién de los productos metab6licos que ocasionalmente puedan ser t6xicos. La introduccién de materiales y el movimiento de estos dentro del ecosistema est4 controlado por diversos factores tales como la solubilidad, difusién, viscosidad, gravedad especifica, porosidad y las caracterfsticas del ecosistema. Espacio: En condiciones de laboratorio, un espacio determinado, como un caldo de cultivo, puede no ser un factor importante para el crecimiento inicial de los microorganismos; sin embargo cuando se incrementa la densidad poblacional, se reduce la disponibilidad de nutrientes y oxigeno y se incrementan los productos de desecho que puede limitar el crecimiento. En la naturaleza no es asi porque el microorganismo restringe su crecimiento a superficies 0 medios favorables. En ecosistemas terrestres, la textura del suelo se usa como un indice del 4rea disponible para los microorganismos.2 k) Magnetismo: En términos generales se ignora el efecto del magnetismo sobre los microorganismos. Sin embargo, algunas bacterias muestran una motilidad orientada por un campo geomagnético, este fendmeno es conocido como magnetotaxis. Se ha observado bacterias con este comportamiento en agua y sedimentos marinos; estas bacterias contienen aproximadamente 4% de hierro por peso seco. Aparte de estos factores que acabamos de sefialar, es convenienie citar las leyes de Liebig y Shelford, ya que permiten comprender mejor el comportamiento de los microorganismos en su ambiente natural. Leyes de Liebig y Shelford: La ley de Liebig (Ley del minimo) establece que la produccién total o biomasa de los organismos puede estar determinada por el nutriente que esta presente en bajas concentraciones con relacién a los requerimientos del organismo dado. La Ley de Shelford (Ley de Tolerancia) establece que la sobrevivencia y crecimiento de cada organismo precisa de ciertas condiciones especificas; para que un organismo pueda crecer 0 sobrevivir, estas condiciones deberdn mantenerse dentro de un rango de tolerancia (por ejemplo temperatura, pH, humedad). 3. CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO: El crecimiento microbiano podemos representarlo como una funcién del incremento celular, de masa 0 productos en funcién al tiempo. En esta curva podemos apreciar las siguientes fases: a) Fase de adaptacién: En esta fase los microorganismos sc adaptan a las nuevas condiciones ambientales y nutricionales. Elaboran toda la bateria de enzimas que han de requerir para desempefiar sus funciones metabsticas de acuerdo con los nutrientes presentes en el medio. Esta fase termina con una tendencia de aceleracién en su crecimiento. b) Fase de crecimiento logaritmico: En esta fase la velocidad de crecimiento es constante y tedricamente se admite que un microorganismo da origen a otro cada cierta unidad de tiempo. Al incremento de células por unidad de tiempo se le conoce como rasa especifica de crecimiento y es particular para cada especie microbiana. El crecimiento en esta fase se puede expresar asi: w= INN, -InNJ/t,-t, Donde u = tasa espectfica de crecimiento; N, = Nuimero de células en el tiempo t,; y Ny = Naimero de células en tiempo t,. ‘Ademés el tiempo de duplicacién (g = 4) puede expresarse mediante la siguiente ecuacién: = Inu22 ©) Fase estacionaria: En esta fase los microorganismos experimentan una desaceleracién en su crecimiento por la desaparecién de nutrientes, 1o cual se evidencia por una declinacién en la curva de crecimiento. En este periodo de desaceleracién se producen muchos metabolitos secundarios como los antibisticos, aicohol, etc., que generalmente son t6xicos. En la fase estacionaria tedricamente se admite que el incremento de nuevos individuos es igual al mimero de microorganismos que mueren (no hay incremento neto de células).. ) Fase de muerte: En esta fase la muerte de microorganismos es mayor que la formacién de nuevas células debido a la escasez de nutrientes y la aparicién de metabolitos téxicos, por Jo que la curva de crecimiento en esta fase sufre una dectinacién. Curva tipica de crecimiento microbiano: a) Fase de adaptacién b) Fase logaritmica ©) Fase estacionaria ¢) Fase de muerte23 CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO Se han descrito las condiciones que favorecen el crecimiento microbiano. En esta seccién se revisardn ciertas condiciones que no solamente inhiben et crecimiento microbiano, sino que también son letales. La existencia de estos factores adversos para los microorganismos permite controlar: (a) la transmisién de enfermedades infecciosas, (b) la proliferacién de microorganismos patégenos y (c) el deterioro de ciertos materiales. Los factores que controlan el crecimiento microbiano pueden tener dos efectos = Detener el crecimiento de los mictoorganismos, en cuyo caso el agente no mata al microorganismo, solamente detiene 0 disminuye significativamente su actividad metabolica Por ejemplo, al guardar alimentos en el refrigerador, hasta cierto punto se limita el crecimiento de los microorganismos aiin cuando no los estamos matando. - Efecto letal sobre el microorganismo, cuando cierto agente (rayos UV, calor, ete.) mata a un microorganismo. Se dice que un microorganismo esté muerto cuando ha perdido irreversiblemente la capacidad de reproducirse. Por ejemplo, cuando sometemos un material a 121°C por 15 minutos en el autoclave, garantizamos la eliminacién de toda forma de vida (en este caso se dice que el material esté esterilizado). La muerte microbiana se da por la accién de un agente fisico 0 quimico. Este agente provoca una reduccién logaritmica como se muestra en la siguiente figura; al graficar el logaritmo del miimero de células podemos observar una recta. Esta curva resulta importante, pues permite controlar la eficiencia del tratamiento antimicrobiano en un proceso determinado,24 Curva de mortalidad microbiana: Obsérvese el comportamiento lineal cuando se expresa el log ufc/ml en funcién al tiempo y la curva de decaimiento cuando se expresa aritméticamente las ufe/ml en funcidn al tiempo. FACTORES QUE INDUCEN MORTALIDAD MICROBIANA: 1, AGENTES QUIMICOS: La utilizacién de los agentes quimicos para controlar el crecimiento 0 la diseminacién de los microorganismos debe considerar ciertas condiciones en las que la sustancia quimica muestra su mejor efecto antimicrobiano, tales como el pH, carga orgénica, temperatura, exposicidn de los microbios al quimico, etc. Entre los agentes quimicos més frecuentes tenemos a los fenoles y compuestos fendlicos, alcoholes, halégenos, colorantes, Acidos y bases. Ejemplos: el alcohol-yodado usado en la medicina; el cloro y compuestos clorados en la desinfeccién del agua. Podemos indicar en este grupo a los antibidticos, cuyo uso se restringe para combatir el agente causante de una infecci6n; por ejemplo la tetraciclina contra la bacteria Vibrio cholerae. 2, AGENTES FISICOS: El calor htimedo usando el autoclavaje y pasteurizacién; el calor seco utilizado para esterilizar material quirdrgico. Las radiaciones ultravioleta, rayos X, gamma, catédicos, de uso frecuente para esterilizar ambientes que deben guardar niveles de asepsia tales como una sala de operaciones. Es un ejemplo interesante la técnica de pasteurizacién para eliminar microorganismos potencialmente patégenos de productos Iécteos.25 3. AGENTES BIOLOGICOS: En la naturaleza existe una permanente lucha por la supervivencia que genera una serie de interacciones poblacionales que van desde un ‘mutualismo hasta una fuerte competencia. Considerando este principio, es mas comprensible fa ausencia de gérmenes patdgenos en ambientes con una contaminacién controlada, Por ejemplo, se ha observado la desaparicién de coliformes fecales y Shigella, en la ‘compostificacién de los residuos orgdnicos pues la actividad de los microorganismos nativos desplaza y elimina 2 otros que son transitorios. También se ha observado este decaimiento de enteropat6genos en las lagunas de tratamiento de aguas residuales domésticas. Podemos citar otro ejemplo interesante, la aplicacién de humus de lombriz en cultivos desplaza significativamente a los fitopatégenos por competencia. Este hecho se observé en la comunidad de Anta (Ancash - Pert) con cultivos de papa, en la campatia agricola de 1993; las parcelas abonadas con humus de lombriz fueron mucho mas resistentes a la rancha en comparaci6n a las abonadas con fertilizantes sintéticos, Considerando el uso indiscriminado de los agroquimicos, es una buena alternativa considerar el control bioldgico de enfermedades de plantas, animales y del hombre manejando convenientemente los principios de control de poblaciones microbianas en los ambientes naturales, (vermis adit ineracons potas Sin embargo, debe considerarse que el control biolégico no es para tratar una planta o un animal individualmente, sino para controlar la proliferacién de los patégenos por competencia interpoblacional, evitando asi la proliferacién de epidemias.26 GENETICA MICROBIANA Los microorganismos muestran una marcada capacidad de adaptacidn frente a las condiciones cambiantes del ambiente. Adquieren nuevos caracteres de mayor competitividad por incorporacién de nuevos patrones genéticos que les da mas ventajas de sobrevivencia (capacidad para degradar sustancias txicas, mayor resistencia a antibiéticos, mayor capacidad de fectividad e invasividad, etc.). Estas nuevas caracteristicas son transmisibles por reproduccidn sexual 0 mediante procesos de recombinacién genética. Las bacterias no se reproducen sexualmente, sin embargo, son capaces de transferir material genético mediante recombinacién genética, en la que una bacteria donante transfiere un fragmento de DNA a otra bacteria receptora, Las formas clisicas de recombinacisn son por conjugacidn, transformacién y transduccién. 1. Conjugacién: La bacteria donante posee un pili o factor sexual que le permite juntarse con Ja bacteria receptora. A través de este pili transfiere una porcién de DNA con las nuevas caracteristicas, de tal suerte que el DNA no sufre delecién alguna. El fragmento de DNA transferido en la mayorfa de veces es un plésmido, otras veces puede ser un transposén 2, Transformacién: La bacteria receptora incorpora un fragmento de DNA procedente de la donante sin la necesidad de un contacto fisico entre las dos. Este fenémeno se observ6 por primera vez cuando las formas variantes rugosas de Streptococcus pneumoniae (no patégeno) incorporaban un fragmento de DNA de otra patégena, que les permitia recuperar su virulencia, con el crecimiento caracteristico liso de las colonias en los medios de cultivo. ‘Transduccién: Un virus con un fragmento de DNA de la bacteria donante al infectar a una nueva bacteria incorpora este material genético a la bacteria receptora que a su vez es hhuésped del virus. En el estado lisogénico la bacteria se reproduce manifestando las caracteristicas procedentes de la donante.CONJUGACION TRANSFORMACION TRANSDUCCION Dewar eepore Lisa seat egonss vies ieeoaane i ( cea ett lak? Ce / as Se di ® loconsacn de DNA. ns ne Iecoorcn eons ecenoe o\ (® . 8) |@ Las gos ha ecapead epee io cal Mecanismos de recombinacién genética en bacterias La genética microbiana ha permitido explicar diversos fenémenos bioldgicos dentro de los cuales destacan: ~ Fijaci6n de nitrégeno molecular por Rhizobium en asociacién simbiética con leguminosas, gracias a la presencia de los genes Nif en los plésmidos de esta bacteria ~ Resistencia multiple a antibisticos en cepas intrahospitalarias.28 = Streptococcus pneumoniae no virulento, se hace virulento al entrar el contacto con cepas muertas de variantes virulentas, por iransformacién, La comprensién de estos fensémenos ha permitido utilizar los procesos de recombinacién genética ‘con fines prcticos. Por ejemplo una cepa de Pseudomonas que puede incorporar fragmentos de DNA que le permita actividad degradadora de los hidrocarburos a velocidades mucho més ripidas de lo que ocurre en condiciones naturales. A la E. coli se le hace una serie de manipulaciones genéticas con el propdsito de producir sustancias de interés industrial, mucho més rapido y a costos bajos. Teéricamente es posible construir un microorganismo con diferentes actividades. Sin embargo, cesta manipulacidn debe ser cuidadosa, pues puede promoverse la generacién de microorganismos més perjudiciales que beneficiosos. Muchos trabajos de ingenieria genética todavia se manejan bajo condiciones de laboratorio. El avance de esta ciencia permitiré su aplicacién en el diagndstico més rapido de agentes etioldgicos causantes de enfermedades, deteccién de microorganismos no deseables en alimentos y ambientes, produccién de sustancias de interés industrial, médico y alimenticio y la degradacién de sustancias tdxicas.29 ADAPTACION DE LOS MICROORGANISMOS EN EL AMBIENTE La microbiologia ambiental estudia la presencia de los microorganismos en un ambiente determinado; la actividad que éstos desarrollan en interaccidn con los otros componentes bidticos y abidticos del ecosistema; y correlaciona la microflora existente con las caracteristicas de este ambiente, Los microorganismos pueden ser transitorios (aldctonos) y encontrarse ocasionalmente en los ambientes; se caracterizan por su mayor vulnerabilidad a los cambios ambientales. En cambio Jos que forman parte de la flora residente (autéctonos) se encuentran normalmente en el ambiente que los acoge, y aun cuando pueda disminuit su densidad poblacional por algun cambio drastico ten el medio ambiente, son capaces de recuperar su densidad normal una vez pasado el efecto. Los microorganismos son por excelencia cosmopolitas. Practicamente todos los ambientes estén poblados por microbios, excepto la roca ignea, fluidos internos de plantas y animales sanos. Por esta distribucidn tan amplia, practicamente no existe material en la naturaleza que no pueda ser degradado por los microorganismos (inclusive los plésticos pueden ser degradados por los microorganismos) : Por mucho tiempo se ha creido que la fertilidad del suelo se debe solamente a la presencia de nitrégeno, {6sforo, potasio (mas comiinmente conocido como NPK) y otros elementos. Sin embargo, el avance de la microbiologia del suelo ha puesto de manifiesto que el suelo no es un medio al que se incorporan semillas para luego cosecharlas como productos; sino més bien que el suelo es un sistema dindmico en el que los microorganismos desempefian un rol importante en el reciclaje de los elementos biogeoquimicos, ya sea fijéndolos de la atmésfera (N; a NH,), liberdndolos de tesiduos orgénicos 0 solubilizdndolos de las rocas. Por estas razones la importancia de los microorganismos como recicladores de nutrientes debe recibir especial atencién. La naturaleza selecciona a las especies més aptas. Sin embargo, actualmente es el ser humano quien introduce mayores condiciones de selectividad deteriora la diversidad biolégica. La diversidad biolégica del planeta tierra es producto de la adaptacién de los seres vivos a los ‘cambios que suftiera desde su aparicién, habiendo superado la competencia que se generara entre las especies para procurar su sustento (alimento, nicho). Muchas especies han desaparecido y ‘otras pocas lograron quedarse, pues el ser que no es capaz de adaptarse, perece. Los microorganismos son los seres con mayores ventajas de adaptacién por su organizacién sencilla, Estos pequetios seres pueden adaptarse a las nuevas condiciones bajo dos mecanismos: ~ Adaptacién genética: la presencia de los diversos factores ambientales provoca modificacién en la constitucién genética de los microorganismos y permite la continuidad de los nuevos30 rasgos genéticos que ofrezcan mayor competitividad. Estos caracteres se heredan de generacién en generacién. - Adaptacién fisiolégica: que ¢s cl cambio temporal del organismo mientras prevalece determinado factor ambiental. El organismo vuelve a su estado normal cuando este factor desaparece Bajo ciertas condiciones las adaptaciones fisiolégicas pueden transformarse en genéticas. Por ejemplo, se ha observado que la presencia continua de antibidticos induce la permanencia de los microorganismos que poseen el plésmido que media su resistencia, mientras que las que no poseen este plésmido perecen; inclusive este plésmido puede transformarse en transposdn y ser parte ocasional del gen6foro de la bacteria. La permanencia definitiva de estos nuevos caracteres, (Factores de mayor supervivencia) esté condicionada por la presidn continua del factor que induce su aparicién,3 INTERACCIONES MICROBIANAS 1, NEUTRALISMO: Sucede cuando dos poblaciones comparten un ambiente determinado sin ocasionarse daio ni beneficio. Se da entre poblaciones con diferentes patrones metabslicos, cuando las poblaciones han sido removidas de otros ambientes, cuando una o las dos estén en estado de reposo o cuando las condiciones ambientales no permiten el crecimiento activo de los microorganismos. 2. COMENSALISMO: Es Ia relacién unidireccional entre dos poblaciones, donde una se beneficia y la otra no es afectada. La poblacida favorecida normalmente toma como alimento los residuos metabélicos 0 metabolitos secundarios generados por la otra. También puede darse el comensalismo también cuando una de las poblaciones modifica el ambiente favorablemente para la otra (por la produccidn de alguna sustancia metabdlica, remocidn 0 neutralizacién de alguna sustancia toxica). Ejemplos: (a) Algunos hongos celuloliticos producen enzimas extracelulares que convierten la celulosa en compuestos ms sencillos como la glucosa que puede ser utilizada por otras poblaciones microbianas como las levaduras. {b) Un microorganismo anaerobio facultativo en una muestra de desagiie reduce la tensién de oxigeno, permitiendo la aparicién de microorganismos anaerobios. (©) Desulfovibrio puede utilizar sulfato y lactato para generar acetato e hidrdgeno para que Methanobacterium en su proceso de respiracién y fermentacién anaerdbica pueda reducir el didxido de carbono a metano. (@) Produccién de compuestos organicos por algunas bacterias marinas que pueden provocar la quelacién de los metales pesados en agua de mar.32 eee | secures CO) (core V La glucosa praducida por Aspergillus es utilizada por Sacharomyces en los procesos de fermenta 3. SINERGISMO (PROTOCOOPERACION): Es la interacci6n no obligatoria y mutuamente beneficiosa entre dos poblaciones, Una tercera poblacién puede reemplazar a una de las poblaciones que participa en la interaccidn. La degradacién de pesticidas agricolas se realizan gracias a las interacciones sinérgicas. Ejemplos: (a) Las cepas de Arthrobacter y Streptomyces juntas son capaces de degradar el insecticida organofosforado diazinén, utilizdndolo en su crecimiento como tinica fuente de carbon y energia, (b) Mientras que la Pseudomonas stutzeri es capaz de transformar el paratién a p-nitrofenol y dietiltiofosfato, la Pseudomonas aeruginosa mineraliza el p-nitrofenol. (©) Las bacterias Streptococcus faecalis y Escherichia coli por si solas son incapaces de transformar la arginina a putresina. Sin embargo en una primera fase Streptococcus faecalis transforma la arginina a ornitina y luego Escherichia coli transforma esta ornitina a putresina.Las bacterias S. faecalis y E. coli en protocooperacién transforman la arginina a putresina via ornitina. 4, MUTUALISMO (SIMBIOSIS): Es la relacién obligatoria para cumplir_una funcién metabélica comtin entre dos poblaciones que se benefician mutuamente. Sin embargo, cualquiera de los componentes podria vivir aisladamente pero sin desarrollar la misma actividad que cuando estén en asociacién. Esta relacién requiere de unin fisica. Ningtin miembro de la asociaci6n puede ser reemplazado por un tercero, La actividad metabélica y la tolerancia metabdlica de las poblaciones implicadas en la simbiosis son marcadamente diferentes que cuando estén solas. A continuacién describimos dos ejemplos. (a) En a produccidn de metano por la Methanobacrerium omelianskii, el organismo § utiliza elanol para transformarlo en acetato y provee electrones a la Methanobacterium omelianskii, esta iltima utiliza los electrones (que son t6xicos al organismo $) incorporan CO, para formar metano. (b) La relacién entre ciertas algas 0 cianobacterias (ficobionte) con una poblacién fuingica (micobionte) permite la formacién de Ifquenes. El ficobionte se encarga de la produecién de compuestos orgénicos por fotosintesis que es utilizado por ambos; mientras que el micobionte provee al ficabionte proteccién, solubiliza sales minerales y permite mayor capacidad de absorcién y retencién de humedad.34 La bacteria Mf. omelianskii es capaz de produci metano gracias al aporte de H, por el Organismo S EI H, es téxico para el Organismo S. 5. PARASITISMO: El pardsito se beneficia de su huésped provocéndole daiio. Generalmente el pardsito es mas pequefio que el huésped. Es una relacién relativamente prolongada que puede deberse a una dependencia fisica 0 metaddlica del pardsito por el huésped. Si la ubicacién del pardsito es dentro de la célula se le denomina endopardsito (ejm. virus), y si la ubicacién es fuera de la célula, ectopardsito (Ejm. hongos de la piel). Normalmente la relacién pardsito-huésped es especffica. Ejemplos. (a) Los virus que son endopardsitos obligados, ya sea de bacterias, hongos, algas y protozoarios. (b) La Myxobacreria puede causar lisis de poblaciones microbianas susceptibles y obtener su alimento por Ia lisis de la célula dafiada. (© El Agaricus (un hongo sombrerito utilizado en la alimentacién) es atacado por otro hongo conocido con el nombre Trichadenma que provoca dificultades en el cultivo comercial. COMPETENCIA: Es la relacidn negativa entre dos poblaciones afectadas con respecto a su sobrevivencia y crecimiento. La competencia se da cuando ambas poblaciones precisan la misma fuente de alimento, espacio 0 nulriente limitante. La competencia conduce a una reduccién de la tasa de crecimiento de ambas poblaciones. La competencia tiende a separar ecol6gicamente dos especies que estan estrechamente relacionadas; esto se conoce como el a35 principio de exclusién competitiva. Aun cuando exista competencia, no necesariamente implica la desaparicién de una de ellas. Existe més bien la posibilidad de nuevas adaptaciones © disiribuciones: Puede darse el caso de alternancia poblacional por el nicho, por la luz, estacional, et. La competencia puede darse por algtin factor limitante de crecimiento, como fuente de carbono, nitrégeno, fosfato, oxigeno y otros factores. Ejmemplo: cuando el protozoario Paramecium caudarum y Paramecium aurelia se cultivan por separado con una adecuada fuente de alimento bacteriano, ambas poblaciones son capaces de erecer y mantener constante el nivel poblacional. Sin embargo, cuando ambas poblaciones erecen juntas, el Paramecium aurelia ejerce una presién de competencia que elimina al Paramecium caudarum a los 16 dias, puesto que el alimento va tornandose escaso. En la competencia por el alimento el P. aurelia desplaza al P, caudatum en cultivo mixto36 . AMENSALISMO (ANTAGONISMO): Es la relacién entre dos poblaciones; una de ellas produce una sustancia que es inhibitoria para la otra. La primera puede 0 no ser beneficiada, Ejemplos. (a) La Thiobacillus thioxidans en relaves minetos produce Acido sulfiirico bajando el pH hasta | e impide el crecimiento de otros microorganismos en el habitat afectado, (b) La produccién de amonio por bacterias proteoliticas en la descomposicién de proteinas y aminodcidos, en concentraciones altas, inhibe la oxidacién de nitrito a nitrato por Nitrobacter. (©) La produccién de Acidos grasos de cadena corta por la poblacién heterotdfica anaerobia det rumen, probablemente inhibe el crecimiento de E. coli PREDACION: Ocurre cuando una poblacién predatoria procura su alimento al engullir y digerir a otto organismo (presa), Normalmente esta interacci6n es rapida y la presa es mas pequefia que el predator. Esta interaccién permite regular la densidad poblacional de las bacterias por la actividad de los protozoarios que se alimentan de ellas. Ejemplo: El Didinium nasutum, un rotifero de cuerpos de agua ingiere al Paramecium37 MICROORGANISMOS PATOGENOS Y TOXIGENICOS 1, PATOGENICIDAD La existencia de enfermedades infecciosas se asocia a la presencia de microorganismos. Afortunadamente de la diversidad de microorganismos existentes, slo unos pocos son los causantes de enfermedades. Los microorganismos causantes de enfermedades reciben el nombre de patégenos. Un microorganismo patégeno necesita tener ciertos factores que le permitan desencadenar la infeccién, a estos se les llama factores de virulencia. Entre estos factores se testacan la capacidad de adherencia, cotonizacién, invasividad, produccién de toxinas (Ejm. toxina teténica) y enzimas (hialuronidasa, lecitinasa, hemolisina). Estos factores permiten al microorganismo romper las barreras normales de defensa del huésped (piel, secreciones, anticuerpos) Las enfermedades en las que estén comprometidos los microorganismos pueden ser causadas directamente por el microorganismo como ocurre en la tifoidea; por el microorganismo y alguna toxina en conjunto, como el cdlera; o por la toxina, como es el caso del botulismo. Los microorganismos patégenos pueden ingresar al huésped por diferentes vias: - Por contacto: En forma directa, como por ejemplo por la emisién de goticulas con Micobacterium tuberculosis en el estornudo de un paciente enfermo que contamina a un individuo sano. Por via indirecta, a través del agua y alimentos contaminados por un individuo enfermo. = Por vectores: Muchos insectos al entrar en contacto con un enfermo 0 con material contaminado son portadores de gérmenes patégenos que luego inoculan a un individuo sano. Se comportan como vectores la mosca, los mosquitos, la pulga, etc. Como ejemplos podemos citar la enfermedad de Chagas o tripanosomiasis en la que un mosquito triatémido transmite el Trypanosoma cruzi al picar inicialmente a un enfermo y luego al nuevo huésped. - De un huésped animal al hombre: Las enfermedades transmitidas por animales reciben el nombre de zoonosis, El ejemplo tipico es la rabia. 2. ENFERMEDADES MAS COMUNES ‘A continuaci6n citamos algunas enfermedades mas comunes:ENFERMEDADES VIRAL 38 MICROORGANISMO - Virus de la gripe assori - Virus de la rabia - Virus de la hepatitis - Virus del SIDA - Enterovirus: Enterovirus Poliovirus, ~ Rotavirus - Reovirus - Virus de la rubeola = Virus det sarampién Virus de la varicela NIVEL DE ACCION Vias respiratorias Sistema nervioso Higado Sistema inmunitario Sistema digestivo Sistema dseo-muscular Diarreas Gastroenteritis Dermotrépico, sistémico Dermotrépico, sistémico Dermotrépico, sistémicoENFERMEDADES BACTERIANAS Y FUNGICAS 39 | microorGanismo ENFERMEDAD PARTE AFECTADA BACTERIAS Sirpiococnspreumoniae Netcbacte ston ompyetoce ys Escher ct me BEC Coundionboninan race adorns Treponema plan oncos eras. rico. Conidae ebicons Mierasporam Usttane (angen aeons ‘sie Crean Motiait Face Sten sigenivo Salem digo sium econ: eigenenEmamoeba hystolitica Leishmania sp. Plasmodium vivax Trypanosoma cruzi HELMINTOS NEMATODES: Ascaris lumbricoides Strongiloides stercoralis Necator americanus CESTODES: Taenia sp. | Hymenolepis nana PARASITOSIS MICROORGANISMO ENFERMEDAD Criptosporidium sp. Diarreas Giardia lamblia Diarreas Disenterfa amebiana Leishmaniasis (uta) Paludismo Chagas Parasitosis intestinal Parasitosis intestinal Parasitosis intestinal Parasitosis intestinal 404i 3. CONTROL DE LOS MICROORGANISMOS PATOGENOS El control de los microorganismos tiene por propésito reducir la contaminacién, prevenir la transmision de enfermedades infecciosas y evitar los brates epidémicos. Las condiciones sanitarias de una determinada poblacién depende de la capacidad que tiene para controlar la proliferacién y diseminacién de los microorganismos no deseables. Este control es especifico cuando se usa el medicamento para eliminar al agente infeccioso de una persona enferma; es generalizado cuando se pone en practica medidas de control de los microoganismismos en el hogar 0 en toda fa comunidad. Para poder controlar las enfermedades causadas por microorganismos, es necesario la implementaci6n y control de un programa coherente, realista y aplicable. Es necesario mantener las condiciones sanitarias minimas, llevar a cabo un programa de educacidn sanitaria, controlar vectores, eliminar reservorios que podrian convertirse en focos de diseminacién, manejar adecuadamente los alimentos y el agua, evitar el consumo de alimentos y agua de procedencia dudosa, controlar permanentemente el agua para bebida, disponer sanitariamente el desagiie, controlar la disposicién de basura y demas residuos domésticos e industriales, etc. Siempre es vélido recordar que "prevenir es mejor que curar" Entre las medidas sanitarias para controlar la transmisiGn de microorganismos patégenos por el agua y alimentos estan la potabilizacién del agua y la pasteurizacidn de alimentos, que garantizan tun producto libre de gérmenes patégenos para que la poblacién pueda consumirlo sin riesgos para su salud. El tratamiento y disposicidn adecuada de los residuos (sélidos y liquidos) hospitalarios y municipales con el propésito de evitar los focos infecciosos y posibles brotes epidémicos, son también otras medidas sanitarias que permiten una mejor calidad de vida.MICROORGANISMOS DE IMPORTANCIA AGRICOLA La importancia de los microorganismos es mayor por su utilidad que por las enfermedades que causa. Los microorganismos en el suelo desempefian diversas funciones. Los microorganismos son considerados por excelencia los recicladores de los elementos biogeoquimicos, pues son los inicos que tienen la capacidad de liberar los elementos minerales contenidos en las rocas 0 en Jos residuos de materia orgénica. Las principales funciones que desempefian los microorganismos son Fijacién de nitrégeno molecular: Las bacterias son los inicos organismos con capacidad de fijar bioldgicamente el N; (nitrégeno molecular). La fijacién puede ser por microorganismos de vida libre como la Azotobacter, Azospirillum y algunas cyanobacteria. Otras en cambio lo hacen por asociacién simbidtica con plantas superiores como es el caso de la Rhizobium que fija nitrégeno molecular en simbiosis con leguminosas y Frankia que lo hace por asociacién con el aliso. Micorrizas: Las micorrizas son una asociacién simbistica entre un hongo con la raiz de una planta. El hongo provee a la planta huésped de mayor humedad, proteccién contra fitopatégenos por la produccidn de metabolitos que inhiben el crecimiento de microorganismos invasores, solubitizar fosfatos y de mayor disponibilidad para la planta. En algunos casos esté relacionado con la produccién de ciertas fitohormonas que estimulan un mejor enraizamiento y crecimiento de la planta. 3. Formacién de humus: El humus constituye la materia orgénica del suelo. En la génesis del material hiimico se distingue un doble proceso en el que es predominante la degradacién microbiana de los polimeros orgénicos a constituyentes monoméricos como tos fenoles, quinonas, aminodcidos, azticares, y ta subsecuente polimerizacién de estos debido a reacciones quimicas esponténeas de autooxidacién y oxidaci6n catalizada por enzimas microbianas tales como las polifenoloxidasas. La fraccién aromética que sirve como estructura bésica para la formacién de! écido hiimico puede originarse por la degradacién microbiana de la lignina 0 puede ser sintetizado por la actividad de muchos microorganismos a partir de otras fuentes carbonadas. En todas estas actividades es relevante la accidn de los Actinomycetos y otros microorganismos, ademds de que sus productos metabélicos confieren su olor caracteristico al suelo. El humus ejerce una accién muy favorable a la estructura del suelo al permitir la formacién de agregados de tamafio, forma y consistencia deseable. El humus incrementa fuertemente Ja capacidad de retencién del agua. En términos simples el humus da cuerpo a los suclos arenosos, afloja a los suelos pesados y permite un buen desarrollo radicular de la planta al haber una buena circulacién del agua y del aire fomentando un excelente desarrotlo radicular de la planta.4B Los Actinomycetos son parte constitutiva de la microflora autéctona del suelo. Son responsables del proceso de humificacién. Confieren al suelo su olor caracteristico por la formacién de dcidos orgénicos. 4. Solubilizaci6n de fosfatos: Los fosfatos son solubilizados por diversos grupos microbianos de las formas insolubles presentes en el agua o suelo, o de las rocas. En muchos habitats, los fosfatos estén combinados con el calcio y permanecen insolubles y no asimilables por las plantas y muchos microorganismos. Un grupo de microorganismos heterotréficos son capaces de solubilizar fosfato, usualmente mediante la producctén de dcidos organicos. Algunos microorganismos quimiolitétrofos como Nirrosomonas y Thiobacillus movilizan fosfato inorgénico por la produccién de dcido nitrico y dcido sulftirico, respectivamente. La mineralizacién de fosfatos es catalizado por enzimas fosfatasas producidas por los microorganismos; algunas bacterias y hongos producen la fitasa que permite la formacion de Acido fitico que solubiliza fosfatos inorgénicos. Existen también microorganismos que en lugar de aportar beneficios en la agricultura, ocasionan pérdidas. Los microorganismos causantes de enfermedades de plantas reciben el nombre de fitopatégenos, y estos pueden ser hongos, bacterias o virus. Como ejemplo podemos citar la rancha de la papa causada por Piyrophiora; pudricién por Pseudomonas de cebolla, papa y otras plantas; y las tumoraciones en plantas por Agrobacterium REFERENCIA BIBLIOGRAFICA. ALBERTS, Bruce. 1989. Molecular biology of the cell. Second Edition. Garland Publishing, Inc, New York. 1218 p. ALEXANDER, M. 1978. Introduction to soil microbiology. John Wiley and Sons. New York. ALEXANDER, M. 1980. Advances in microbial ecology. Plenum Press. New York. ARONSON, A.; BECKMAN, W.; DUNN, P. 1986. Bacillus thuringiensis and related insect pathogens. Microbiol. Rev. Vol 50(1): 1-24 fundamentals and applications. Addison- ATLAS, R.; BARTHA, R. 1981. Microbial Ecolog Wesley Publishing Company, Massachusetts. BALBAS, P. 1989. Ingenierfa genética y biotecnologia. Organizacién de los Estados Americanos, Programa Regional de Desarrollo Cientifico y Tecnolégico, Washington, D.C BARRINGTON, E.J.W. 1983 Biologia ambiental. Ediciones Omega S.A., Barcelona.44 BRADSHAW, J. 1976. Microbiologia de laboratorio. Edit. El Manual Moderno, México, D.F BROCK, T. 1978. Biologia de los microorganismos. Edit. Omega, Barcelona, BUCHANAN, R.E.; BIGGONS, N.E. (Eds.) 1974. Bergey's manual of determinative bacteriology. 8va. edic. Williams and Wilkins, Baltimore. CISNEROS, F. 1980. Coltrol de las plagas agricolas. Edit. Grafica. Pacific Press S.A. Lima. DEBLIN, T. 1986. Textbook of biochemistry with clinical correlations. John Willey & Sons Inc. New York. 1116 p. GIRARD, H.; ROUGIEUX, R. 1964. Técnicas de microbiologia agricola. Editorial Acribia. Zaragoza. GORDON, J. K. 1981. Introduction to the nitrogen-fixing prokaryotes. The prokaryotes. A handbook on habitat, isolation and identification of bacteria. USA. 780-794 HOFTE, H.; WHITELEY, H. 1989. Insecticidal crystal proteins of Bacillus thuringiensis. Microbiol. Rev. Vol 53(2): 242-259. KRUIF, P. 1962. Los cazadores de microbios. Edit. Diana, México D.F. LEHNINGER, A. 1983. Bioquimica. Las bases moleculares de la estructura y funcién celular. ‘Segunda edicidn. Ediciones Omega $.A., Barcelona. LENNETTE, E. 1985. Manual of clinical microbiology. 4th. edit. American Society for Microbiology, Washington D.C. LEWIN, B, 1987. Genes. Third edition. John Wiley & Sons, New York. LIU, D.; MAGUIRE, R.J.; PACEPAVICIUS, G.; DUTKA, B.J. 1991. Biodegradation of recalcitrant chlorophenols by cometabolism. Environmental Toxicology and Water Quality, Vol 6(1): 85-95. LOPEZ, A. y QUINTERO, R. 1987. Tecnologia enzimética. Aplicaciones en alimentos y medicina. Universidad Nacional Auténoma de México, México, D.F. Mac FADDIN. 1985. Biochemical tests for indentification of medical bacteria. Second edition. William & Wilkins, USA. 527p. MARGALIUS, L. SCHWARTZ, K. 1985. Cinco reinos, Gufa ilustrativa de los phyla de la vida en la tierra. Editorial Labor S.A., Barcelona. 334 p.45 Mc KINNEY, Ross. 1962. Microbiology for sanitary engincers. Me Graw-Hill Book Company, New York. MOAT, A. 1979. Microbial phisiology. John Wiley & Sons [nc., New York. 600p. PELCZAR, M.; REID, R. 1978. Microbiologia. Ingramex S.A., México, D.F QUINTERO, R. 1990, Ingenieria bioquimica; teorfa y aplicaciones. Editorial Alhambra S.A... México, D.F. ROSZAK, D.B.; COLWELL, R.R. 1987. Survival strategies of bacteria in the natural environment. Microbiol. Rev., Vol 51(3): 365-379. SCHLEGEL, H. 1975. Microbiologia general. Editorial Omega. Barcelona. SMITH, J. 1988. Biotechnology. Second edition. Edward Arnold, London. 130p. STANIER, R. et al. 1984. El mundo de los microbios. Edit. Reverté Barcelona, Barcelona. VINCENT, J. M. 1970, A manual for the practical study of the root-nodule bacteria International Biological Programme Handbook. Vol 15. Blackwell Scientific Publications, ‘Oxford.