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Ntp-Iso 11133 Chile
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27
NCh3162.c2008
Prembulo
El Instituto Nacional de Normalizacin, INN, es el organismo que tiene a su cargo el estudio y
preparacin de las normas tcnicas a nivel nacional. Es miembro de la INTERNATIONAL
ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION (ISO) y de la COMISION PANAMERICANA DE
NORMAS TECNICAS (COPANT), representando a Chile ante esos organismos.
Este proyecto de norma se estudi a travs del Comit Tcnico Microbiologa de los
alimentos, para proporcionar la terminologa general relativa al aseguramiento de la calidad
para la preparacin de los medios de cultivo, y especificar los requisitos mnimos de
aplicacin en los anlisis microbiolgicos de productos destinados al consumo humano o
animal.
Este proyecto de norma es una traduccin modificada de la versin en ingls de la
Especificacin Tcnica Internacional ISO/TS 11133-1:2000 Microbiology of food and animal
feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 1: General
guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory.
Para los propsitos de este proyecto de norma, se han realizado los cambios editoriales
que se indican y justifican en Anexo E.
La Nota Explicativa incluida en un recuadro en clusula 2 Referencias normativas y en
Anexo Bibliografa, es un cambio editorial que se incluye con el propsito de informar la
correspondencia con norma chilena de la norma internacional citada en este proyecto de
norma.
NCh3162
En este proyecto de norma se han realizado modificaciones con respecto a la
especificacin tcnica internacional debido a la necesidad de armonizar este proyecto de
norma con otra norma chilena sobre el tema. Estas desviaciones tcnicas se han
incorporado al texto del proyecto de norma, y estn marcadas con una barra simple en los
mrgenes (I).
En Anexo E se incluye una lista completa de las desviaciones tcnicas, junto con su
justificacin.
Este proyecto de norma NCh3162 ha sido preparado por la Divisin de Normas del
Instituto Nacional de Normalizacin.
Los Anexos A, B, C, D y E no forman parte del proyecto de norma, se insertan slo a
ttulo informativo.
II
NCh3162
Contenido
Pgina
Prembulo
Introduccin
Referencias normativas
Trminos y definiciones
3.1
Generalidades
3.2
3.3
3.4
4.1
Documentacin
4.2
Almacenamiento
4.3
4.4
12
4.5
13
13
5.1
13
5.2
14
III
NCh3162
Contenido
Pgina
Anexos
Anexo A (informativo) Denominacin de los componentes de los medios de
cultivo en las normas de anlisis microbiolgico de los alimentos para consumo
humano y animal
16
A.1
Generalidades
16
A.2
Peptonas
16
A.3
Extractos
16
A.4
Agar
17
A.5
Otros
17
18
B.1
Generalidades
18
B.2
18
B.3
18
B.4
Cultivos de trabajo
18
20
21
22
IV
NCh3162
Contenido
Pgina
Figuras
Figura B.1
19
Tablas
Tabla E.1 Desviaciones tcnicas
22
22
NCh3162.c2008
0 Introduccin
En el laboratorio de microbiologa muchos anlisis y procedimientos dependen de que el
medio de cultivo sea constante y proporcione resultados reproducibles. Los medios de
cultivo se emplean en todas las tcnicas de cultivo tradicionales y tambin en muchas
tcnicas alternativas. Numerosas frmulas de medios de cultivo deshidratados estn
disponibles comercialmente y muchas ms, destinadas a crecimientos especficos, se
encuentran descritas en la literatura. Adicionalmente, en los laboratorios que realizan
exmenes microbiolgicos de productos alimenticios, los principales objetivos son el
mantenimiento, revivificacin, crecimiento, deteccin y/o recuento de una amplia variedad
de microorganismos. Los requisitos que han de reunir los medios son especficos tanto
para la muestra como para los organismos que se van a detectar. Los medios de cultivo
han de cumplir unos criterios mnimos de rendimiento que constituyen por ello una
condicin previa a todo anlisis microbiolgico fiable. Conviene realizar un nmero de
anlisis suficiente para demostrar:
i)
NCh3162
2 Referencias normativas
Los documentos referenciados siguientes son indispensables para la aplicacin de esta
norma. Para referencias con fecha, slo se aplica la edicin citada. Para referencias sin
fecha se aplica la ltima edicin del documento referenciado (incluyendo cualquier
enmienda).
NCh9000.Of2001
ISO 9000:2000
EN 1659:1996
EN 12322:1999
Norma nacional
NCh9000.Of.2001
Grado de correspondencia
Idntica
NCh3162
3 Trminos y definiciones
Para los propsitos de esta norma, se aplican los trminos y definiciones siguientes:
3.1 Generalidades
Esta clusula establece las definiciones generales referentes al aseguramiento de la
calidad y proporciona diferentes tipos de terminologa relacionada con los medios de
cultivo y los cultivos de control. Las normas citadas entre corchetes indican que el texto
dado es idntico a la fuente citada.
[EN 1659]
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3.3.2 Medios de cultivo clasificados segn su composicin
3.3.2.1 medio de cultivo de composicin qumica definida: medio de cultivo formado
nicamente por constituyentes qumicamente definidos (es decir, de estructura molecular
y el grado de pureza conocidos)
[EN 1659]
3.3.2.2 medio de cultivo de composicin qumica incompleta: medio de cultivo formado
total o parcialmente por materias primas naturales, procesado o de otra manera, cuya
composicin qumica no est definida de forma completa
NOTA - Para los diversos componentes no definidos qumicamente empleados en los medios de cultivo, el
ISO/TC 34/SC 9 ha establecido una lista armonizada de denominaciones, ver Anexo A.
2)
[EN 1659]
3.3.3.2 medio de cultivo slido y medio de cultivo semislido: medio de cultivo lquido
que contiene materiales solidificantes (por ejemplo, agar-agar, gelatina, etc.) en diferentes
concentraciones
NOTAS
1)
Debido a la utilizacin mundialmente extendida de los medios de cultivo solidificados con agar-agar, se
utiliza el trmino abreviado agar de forma sinnima para medios de cultivo slidos y por lo tanto formando
parte de otros trminos (por ejemplo, agar para recuento en placa).
2)
Los medios de cultivo slidos vertidos en placas de Petri se llaman comnmente placas. Los medios de
cultivo slidos vertidos en tubos que se mantienen en posiciones inclinadas mientras se solidifican se
denominan a menudo agares inclinados.
[EN 1659]
3.3.4 Medios de cultivo clasificados por el uso al que se destinan
3.3.4.1 medio de transporte: medio de cultivo diseado para conservar y mantener la
viabilidad de los microorganismos durante el perodo de tiempo entre el momento del
muestreo y el procesamiento de la muestra en el laboratorio
NOTA - Los medios de transporte contienen normalmente sustancias que no permiten la multiplicacin de los
microorganismos pero que aseguran su conservacin (por ejemplo, medio de transporte de Stuart o de Amies).
[EN 1659]
NCh3162
3.3.4.2 medio de conservacin: medio de cultivo diseado para conservar y mantener la
viabilidad de los microorganismos durante un perodo de tiempo prolongado, para
protegerlos contra las influencias adversas que pueden ocurrir durante su almacenamiento
a largo plazo y para permitir su recuperacin despus de este perodo (por ejemplo, medio
de huevo de Dorset)
[EN 1659]
3.3.4.3 medio de revivificacin: medio de cultivo que permite a los microorganismos
lesionados y daados, reparar y recuperar su capacidad de crecimiento normal, sin
promover necesariamente su multiplicacin
[EN 1659]
3.3.4.4 medio de enriquecimiento: medio de cultivo generalmente lquido, que debido a su
composicin, proporciona unas condiciones particularmente favorables para la
multiplicacin de los microorganismos
[EN 1659]
3.3.4.4.1 medio de enriquecimiento selectivo: medio de enriquecimiento que favorece la
multiplicacin de microorganismos especficos mientras que inhibe parcial o totalmente el
crecimiento de otros microorganismos (por ejemplo, medio de Rappaport-Vassiliadis)
3.3.4.4.2 medio de enriquecimiento no selectivo: medio de enriquecimiento que favorece
el crecimiento de la mayora de los microorganismos (por ejemplo, caldo nutritivo)
3.3.4.5 medio de aislamiento: medio de cultivo slido o semislido que favorece el
crecimiento de microorganismos
3.3.4.5.1 medio de aislamiento selectivo: medio de aislamiento que favorece el
crecimiento de microorganismos especficos, a la vez que inhibe otros microorganismos
(por ejemplo, agar PALCAM, agar MacConkey)
[EN 1659]
3.3.4.5.2 medio de aislamiento no selectivo: medio de aislamiento que no est diseado
para la inhibicin selectiva de microorganismo (por ejemplo, agar nutritivo)
[EN 1659]
3.3.4.6 medio diferencial: medio de cultivo que permite el estudio de una o ms
caractersticas fisiolgicas/bioqumicas de los microorganismo para su identificacin
(por ejemplo, medio de urea, agar de Kligler)
NOTA - Los medios diferenciales que se pueden utilizar como medios de aislamiento se denominan medios de
aislamiento/diferencial [por ejemplo, agar xilosa lisina desoxicolato (XLD)].
[EN 1659]
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3.3.4.7 medio de identificacin: medio de cultivo diseado para producir una reaccin de
identificacin especfica que no precisa ningn anlisis posterior de confirmacin
NOTA - Los medios de identificacin que se pueden emplear como medio de aislamiento se denominan medios
de aislamiento/identificacin.
[EN 1659]
3.3.4.8 medios para usos mltiples: ciertos medios de cultivo se pueden asignar a varias
categoras, por ejemplo, el agar-sangre es un medio de revivificacin segn 3.3.4.3, un
medio de aislamiento segn 3.3.4.5, y un medio diferencial segn 3.3.4.6, utilizado para
la deteccin de hemlisis
3.3.5 Medios de cultivo clasificados segn el mtodo de preparacin
3.3.5.1 medio listo para su empleo: medio de cultivo que se suministra en recipientes bajo
la forma de producto listo para su empleo (por ejemplo, placas de Petri, tubos u otros
recipientes)
3.3.5.2 medio de cultivo preparado a partir de frmulas comerciales deshidratadas: medio
de cultivo desecado que no est listo para su uso inmediato (por ejemplo, productos en
polvo, granulados o liofilizados). La rehidratacin producir uno de los dos tipos de medios
siguientes:
-
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nmero de lote;
ficha tcnica;
fecha de recepcin;
fecha de caducidad;
4.2 Almacenamiento
4.2.1 Generalidades
En todos los casos se seguirn las instrucciones del fabricante, cuando existan, en lo
referente a condiciones de almacenamiento, fecha de caducidad y uso.
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4.2.2 Gestin y control de la calidad de medios deshidratados y suplementos
Los medios se adquieren generalmente de fabricantes comerciales. Se suministran en
forma de polvo deshidratado o en grnulos en recipientes sellados, y los suplementos de
las diferentes sustancias selectivas o de diagnstico se suministran bajo forma liofilizada o
lquida. Sin embargo, es conveniente planificar la recepcin para asegurar una rotacin
regular de los productos almacenados (es decir, primero que entra primero que sale). Para
mantener un inventario eficaz se deberan efectuar verificaciones suplementarias que
comprenden:
-
La calidad del medio puede depender del ambiente del almacenamiento, especialmente
despus de abrir un nuevo recipiente. La prdida de la calidad de los medios deshidratados
se manifiesta por un cambio en las caractersticas de flujo del polvo, homogeneidad,
apelmazamiento, cambios de color, etc. Se debera desechar todo medio deshidratado que
haya absorbido humedad o muestre signos manifiestos de cambio en la apariencia fsica.
4.2.3 Medios comerciales listos para su empleo
Seguir las instrucciones del fabricante en lo referente a las condiciones de almacenamiento,
fecha de caducidad y uso.
4.2.4 Medios preparados a partir de frmulas deshidratadas disponibles comercialmente y
a partir de componentes individuales bsicos
El tiempo de conservacin de estos tipos de medios es variable. Por ello es difcil
establecer lmites de tiempo generales para el almacenamiento de los medios preparados.
Las normas internacionales o nacionales especficas pueden estipular las condiciones
especficas y el tiempo de conservacin.
Los medios de cultivo esterilizados dispensados en placas, tubos o frascos y los reactivos
que no vayan a ser utilizados inmediatamente deben ser protegidos de la luz y de la
desecacin.
A menos que se haya establecido una fecha de caducidad validada o est especificado en
la norma en cuestin, los medios parcialmente completos estriles, es decir los medios a
los cuales los componentes finales se aaden inmediatamente antes de su uso, se deben
mantener en refrigerador como mximo tres meses y un mes como mximo a temperatura
ambiente, en condiciones que eviten toda modificacin de su composicin. Sin embargo,
se recomienda que los medios a los que se les ha aadido suplementos selectivos lbiles
sean usados en el mismo da de su preparacin. No es conveniente que los medios slidos
que contengan reactivos qumicos y/o sustancias lbiles se almacenen en masa para
refundirlos posteriormente.
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Hay que observar cualquier cambio de color, signo de evaporacin/deshidratacin o
crecimiento microbiano. Los lotes de medios que presenten tales cambios, no deberan ser
usados.
Se recomienda que antes de usar o antes de un calentamiento adicional, la temperatura de
los medios de cultivo se equilibre con la temperatura ambiente.
Para que el agua destilada se pueda considerar de buena calidad, debe tener una
resistividad de al menos 300 000 cm.
ADVERTENCIA: El agua procesada a travs de un intercambiador de iones (desionizada) puede tener un alto
contenido en microorganismos; es por ello recomendable no utilizar este tipo de agua sin haber verificado
antes que el contenido de microorganismos en el agua es bajo. Es conveniente consultar al fabricante sobre la
mejor manera de minimizar la contaminacin microbiana. El agua desionizada muy contaminada que haya sido
esterilizada por filtracin, puede todava contener sustancias inhibidoras para el crecimiento de algunos
microorganismos.
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4.3.3 Pesada y rehidratacin
Se pesa cuidadosamente la cantidad apropiada de medio deshidratado (teniendo cuidado
de no inhalar polvo, especialmente con medios que contengan sustancias txicas) y se
aade progresivamente la cantidad necesaria de agua evitando que se formen grumos.
4.3.4 Disolucin y dispersin
Los medios deshidratados necesitan para su disolucin una dispersin rpida mediante
una agitacin inmediata y repetida, seguida por calentamiento si es necesario. Para la
disolucin de los medios que contengan agar, es conveniente dejarlos a remojo durante
varios minutos antes de calentarlos con agitacin para disolverlos. Para los medios
preparados a partir de sus componentes individuales, cada componente se debera aadir
separadamente y dejarlo disolver antes de completar el volumen final.
4.3.5 Medida y ajuste de pH
Se mide el pH utilizando un pHmetro y se ajusta si es necesario, es decir para los medios
preparados a partir de sus componentes individuales en el laboratorio se ajusta de tal
forma que despus de la esterilizacin y enfriamiento a 25C el medio est al pH
requerido 0,2 unidades de pH, salvo que se indique otra cosa. El ajuste se realiza
normalmente empleando una disolucin de hidrxido sdico (NaOH) de aproximadamente
40 g/L (alrededor de 1 mol/L) o de cido clorhdrico (HCl) de aproximadamente 36,5 g/L
(alrededor de 1 mol/L).
NOTA - Los medios de cultivo comerciales pueden mostrar cambios significativos de pH antes y despus de
ser sometidos al autoclave. Sin embargo, siempre que se use agua destilada o desionizada de buena calidad, el
ajuste del pH antes de introducir en el autoclave no debera ser necesario.
4.3.6 Dispensacin
Se dispensa el medio en recipientes adecuados que tengan un volumen de 1, 2 a 3 veces
el del medio.
4.3.7 Esterilizacin
4.3.7.1 Generalidades
La esterilizacin de los medios de cultivo y de los reactivos se puede realizar empleando
esterilizacin mediante calor hmedo (ver 4.3.7.2) o esterilizacin mediante filtracin
(ver 4.3.7.3).
Ciertos medios no necesitan esterilizacin por autoclave sino que se pueden utilizar
despus de haber sido llevados a ebullicin. Por ejemplo, medios para Enterobacteriaceae
que contienen verde brillante son particularmente sensibles al calor y a la luz y deberan
ser enfriados rpidamente despus de la ebullicin y protegidos de la luz intensa.
Igualmente algunos reactivos se pueden usar sin esterilizacin (referirse a la norma
apropiada o a las instrucciones del fabricante).
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4.3.7.2 Esterilizacin mediante calor hmedo
La esterilizacin mediante calor hmedo se realiza en autoclave o en un aparato
preparador de medios. Generalmente la esterilizacin por autoclave se efecta
durante 15 min a 121C. Para volmenes mayores que 1 000 ml, es necesario adaptar el
ciclo de esterilizacin. En todos los casos, se seguirn las instrucciones dadas en las
normas o las instrucciones de los fabricantes. Es conveniente controlar el funcionamiento
del autoclave mediante perfiles de temperatura empleando termopares y papel reactivo
bajo condiciones de cargas tpicas para asegurar que las temperaturas deseadas se
puedan alcanzar.
NOTA - Se puede producir un sobrecalentamiento cuando se someten al autoclave grandes cantidades de
medio (> 1 000 ml).
4.3.7.4 Monitoreo
Despus de la esterilizacin por autoclave, ebullicin o filtracin, todos los medios se
deberan monitorear, en particular en lo referente al pH, color, esterilidad y consistencia.
4.3.8 Preparacin de los suplementos
Los suplementos comerciales que contengan agentes txicos, particularmente antibiticos,
deben ser manipulados con cuidado, evitando la dispersin del polvo que podra dar lugar a
alergias o a otras reacciones en el personal del laboratorio. Se tomarn las precauciones
necesarias y se seguirn las instrucciones del fabricante durante la preparacin de las
disoluciones. No se sobrepasar la fecha lmite de conservacin, que es generalmente el
mismo da para las disoluciones de trabajo de antibiticos. Bajo ciertas circunstancias, las
disoluciones de antibiticos pueden ser almacenadas congeladas en alcuotas apropiadas,
pero no se deberan volver a congelar despus de ser descongeladas. La prdida potencial
de actividad debido a la congelacin se debera discutir con el fabricante o ser determinada
por el usuario.
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4.4 Preparacin para el uso
4.4.1 Fusin de los medios de cultivo con agar
Se funde un medio de cultivo situndolo en un bao de agua hirviendo o por cualquier
otro procedimiento que d resultados idnticos (por ejemplo, en autoclave a vapor
fluente). Los medios que han sido previamente esterilizados en autoclave deberan ser
recalentados durante un tiempo mnimo para mantener la calidad de los medios. Hay que
evitar un calentamiento excesivo y retirarlo cuando est fundido. Se enfra el medio
fundido a 47C 2C en un bao de agua controlado termostticamente hasta el
momento de su empleo. El tiempo necesario para alcanzar los 47C depende del tipo de
medio, del volumen y del nmero de recipientes que haya en el bao de agua. Los medios
de cultivo refundidos se deberan usar lo ms pronto posible, y se recomienda no
conservarlos ms de 4 h.
4.4.2 Desgasificacin de los medios de cultivo
Si es necesario, justo antes de su uso, calentar el medio de cultivo en agua hirviendo o
bajo vapor fluente durante 15 min, con tapones flojos; despus del calentamiento, se
aprietan los tapones y se enfra rpidamente hasta la temperatura de utilizacin.
4.4.3 Adicin de suplementos
Los suplementos termolbiles se deberan aadir al medio despus de que ste haya sido
enfriado a 47C 2C. Los suplementos estriles se deben estabilizar a temperatura
ambiente antes de aadirlos al medio de agar. Los lquidos fros pueden hacer que el agar
se solidifique o que se formen copos transparentes. Se mezclan con precaucin y
completamente todos los suplementos con el medio y despus se transfiere a los
recipientes finales lo ms rpidamente posible.
4.4.4 Preparacin y almacenamiento de los medios en placas de Petri
Se vierte el medio de cultivo de agar fundido en placas de Petri de manera que se obtenga
un espesor de al menos 2 mm (por ejemplo, para placas de 90 mm de dimetro, se
necesitan normalmente 15 ml de agar). Se deja el agar solidificar y enfriar situando las
placas de Petri, con las tapas en su lugar, en una superficie fresca y horizontal.
NOTA - Durante la incubacin se produce una prdida de humedad del medio de agar. Una prdida mayor
que 15% del contenido en agua puede en algunas circunstancias afectar adversamente al crecimiento de
microorganismos. Los factores que influyen en la prdida de agua son la composicin del medio, la cantidad de
medio en las placas, el tipo de estufa de incubacin (es decir, con ventilacin o de otro tipo), humedad de la
atmsfera en la estufa de incubacin, la posicin y el nmero de placas en la estufa de incubacin y la
temperatura de incubacin.
12
NCh3162
El medio solidificado se emplea inmediatamente o se conserva en condiciones que eviten
toda modificacin de su composicin, es decir en oscuridad y/o en refrigerador entre 4C
y 12C en bolsas selladas, durante un tiempo mximo de una semana o lo indicado por el
fabricante o la norma especfica. Se etiquetan las placas en la base con la fecha de
preparacin y/o la fecha de caducidad y la identificacin del medio. Alternativamente se
pueden utilizar sistemas de cdigos que renan estos requisitos.
El tiempo de conservacin de las placas se incrementar si se almacenan en bolsas de
plstico selladas. Para evitar que se produzca condensacin, las placas se debern enfriar
antes de introducirse en las bolsas. No se deben secar las superficies de las placas de
agar antes de almacenarlas en el refrigerador.
En general, para la siembra en superficie de un medio de cultivo slido, se secan las
placas, preferiblemente con las tapas retiradas y con la superficie del agar mirando hacia
abajo, en una estufa regulada entre 25C y 50C o en una cabina de flujo laminar, hasta la
desaparicin de las gotas de la superficie del medio. No se deben secar demasiado. Las
placas comerciales listas para su empleo se deberan almacenar y utilizar segn las
instrucciones del fabricante.
4.4.5 Incubacin
Apilar las placas en nmero no mayor a seis unidades y dejar espacio para que circule el
aire, de tal forma que el medio de cultivo se equilibre con la temperatura de incubacin lo
ms rpidamente posible. En el caso de medios lquidos, el tiempo para alcanzar la
temperatura de incubacin depende de varios factores, por ejemplo, el volumen, la carga,
el recipiente, el tipo de estufa. Si se utilizan jarras de anaerobios puede ser necesario
apilar ms de seis placas.
y mediante observacin:
-
color;
13
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-
cepas positivas que crecen dbilmente (es decir de una naturaleza ms sensible);
NOTA - El grupo de trabajo sobre medios de cultivo (WPCM) del International Committee for Food Microbiolgoy
and Hygiene ha recomendado una coleccin validada de cepas de control para la evaluacin de los medios
(ver Anexo D, [1]).
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NCh3162
5.2.4 Medios preparados a partir de formulaciones deshidratadas disponibles comercialmente
Para los propsitos de esta norma, las exigencias mnimas son unas pruebas cualitativas
para cada lote del medio preparado, pero cuando se van a realizar exmenes cuantitativos
de muestras, las pruebas cuantitativas de cada lote darn una mayor seguridad de la
calidad de los medios. Para aquellos medios que no contienen indicadores o agentes
selectivos, es suficiente el uso de una sola cepa de control positiva. Para aquellos medios
que contienen indicadores o agentes selectivos, se deben utilizar cepas que demuestren la
funcin del (de los) indicador(es) y la selectividad. Para los medios complejos, es decir con
suplementos adicionados, cada lote se debera verificar con cepas con las caractersticas
indicadas en 5.2.2. Lo mismo se aplica al caso de los medios listos para su uso a los
cuales se han adicionado suplementos preparados en el laboratorio.
5.2.5 Medios preparados a partir de componentes bsicos individuales
Se recomienda que adems de las pruebas cualitativas descritas en 5.2.4 se realicen
algunas pruebas cuantitativas utilizando tcnicas como la de Miles & Misra modificada
(ver Anexo D, [1]) o siembra en espiral, para evaluar as la calidad de los componentes de
base, la productividad del medio y los procedimientos internos de elaboracin en el
laboratorio.
NOTA - Estas son directrices mnimas, pero en la prctica los alimentos pueden contener microorganismos
lesionados. Se debera tener en cuenta la capacidad del medio respecto a la recuperacin de las clulas
lesionadas. Para informacin sobre las tcnicas de conservacin, mantenimiento y sobre las colecciones de
cultivos de referencia, ver Anexo B.
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Anexo A
(Informativo)
A.2 Peptonas
-
A.3 Extractos
-
extracto de carne;
extracto de cerebro-corazn;
extracto de levadura;
sales biliares;
sales biliares N 3.
1)
2)
16
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A.4 Agar
-
agar bacteriolgico.
A.5 Otros
-
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Anexo B
(Informativo)
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NOTA - No se deberan realizar subcultivos a partir de cultivos de trabajo. Sin embargo, los cultivos de trabajo
se puede utilizar ms de una vez, siempre que sean manipulados y conservados adecuadamente, es decir
evitando las contaminaciones cruzadas y/o su deterioro, y nunca durante ms de una semana.
Cepa de referencia
Cepa de reserva
de referencia
Cultivo de trabajo
Figura B.1
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NCh3162
Anexo C
(Informativo)
Razones posibles
Sobrecalentamiento del medio durante su preparacin
pH bajo que produce una hidrlisis cida
Pesada incorrecta del agar utilizado
Agar no disuelto totalmente
Mala mezcla de los ingredientes
pH incorrecto
Color anormal
Formacin de precipitados
Dbil selectividad
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NCh3162
Anexo D
(Informativo)
Bibliografa
[1]
[2]
Norma nacional
NCh9001.Of.2001
Grado de correspondencia
Idntica
21
NCh3162
Anexo E
(Informativo)
Desviaciones tcnicas
Justificacin
3.2.1
3.2.2
Norma anulada
22
Cambios editoriales
Justificacin