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2004
REVISIN BIBLIOGRAFICA
PERSPECTIVAS ACTUALES DE LA PROTENA UNICELULAR (SCP)
EN LA AGRICULTURA Y LA INDUSTRIA1
Alejandro Chacn Villalobos2
RESUMEN
ABSTRACT
INTRODUCCIN
94
AGRONOMA MESOAMERICANA
Iniciada la segunda guerra mundial, y por las mismas razones, se reactiva el inters en la biomasa microbiana como fuente de alimentacin. Solo en los Estados
Unidos se produjeron 15.000 toneladas anuales de SCP,
la cual fue incorporada en la dieta de civiles y militares
en forma de sopas y salchichas. Para esta poca se ensaya con levaduras Candida arborea y Candida utilis
(Israelidis 2003).
La biomasa puede ofrecer una gran alternativa para remplazar algunas de las fuentes tradicionales de
protena (soya, harina de pescado, suero descremado de
leche) en piensos para el consumo animal (Suharto y
Cuadro 1.
Derivados posibles a partir del aprovechamiento industrial de los principales componentes de la biomasa bacteriana.
Componente
Proceso
Derivados
Protena
Digestin, purificacin
y degradacin
1. Enzimas
2. Protena nutricional
3. Protena Funcional
1. Biotransformacin
2. Alimentos.
3. Geles, espesantes,
emulsificantes.
Carbohidratos
Qumicos y enzimticos
1. Sacridos
2. Conversiones
1. Substratos de
fermentacin
2. Emulsificantes
Lpidos
Extracciones
Hidrlisis
1. Glicridos
2. Grasas
3. Fosfolpidos
4. Carotenoides
1. Alimentos, cosmticos
2. Alimentos, qumica.
3. Alimentos
4. Alimentos
Qumicos y enzimticos
1. Nucletidos
2. ADN
3. ARN
1. Savorizantes,
gelificantes
2. Precursores sntesis de
drogas
cidos nucleicos
95
Usos
96
AGRONOMA MESOAMERICANA
3. Presencia en la SCP de sustancias txicas o carcinognicas que fuesen adsorbidas previamente en los
sustratos utilizados como fuente de carbono (Crueger y
Crueger 1989), importante para asegurar la seguridad y
hasta la pureza del medio de cultivo (University of Indiana 2003).
4. El alto contenido de cidos nucleicos (4-6% en
algas; 10-16% en bacteria; 6-10% en levadura y 2,5-6%
en hongos), podra eventualmente representar un riesgo
para la salud de algunos monogstricos (Crueger y
Crueger 1989, Israelidis 2003, FAO 2003, Berquist y
Jurgenson 2003).
5. El alto contenido de cidos nucleicos (4-6% en
algas; 10-16% en bacteria; 6-10% en levadura y 2,5-6%
en hongos), puede ser un riesgo para la salud de los animales monogstricos y para el hombre (Crueger y
Crueger 1989, Israelidis 2003, FAO 2003, Berquist y
Jurgensor 2003).
6. La digestin lenta nula de la pared celular en
el tracto digestivo del ser humano y otros animales, especialmente en cuanto a las algas (Israelidis 2003), puede ser causa de indigestin y reacciones alrgicas
(Crueger y Crueger 1989, University of Indiana 2003).
7. A pesar de la alta productividad, en un proceso de produccin de SCP efectuado en un medio de fermentacin lquido, la protena se obtiene en concentraciones muy diluidas (menos del 5% de slidos), por lo
que se requiere de procesos de concentracin (Berquist
y Jurgenson 2003)
Es importante sopesar otros aspectos para la seleccin del microorganismo adecuado (Rojas 1995), tales
como su estabilidad gentica, la capacidad de crecer en
un proceso continuo, la especificidad al substrato que
se le ofrece, su demanda de nutrientes, la facilidad con
que la biomasa obtenida puede separarse del medio de
cultivo, y la calidad final deseada en el producto. El
Cuadro 2 lista muchos de los organismos de inters en
la obtencin se biomasa.
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Petroqumicos (n-alcanos):
En un principio los substratos principales fueron de
naturaleza fsil, es decir hidrocarburos siendo este campo el de mayores inversiones en investigacin y desarrollo (Biocity 2003). El principal problema de los hidrocarburos como sustrato es su naturaleza no renovable, a
lo cual se suma un costo econmico aveces mayor.
Muchos de los hidrocarburos que se destinan a la
produccin de SCP son alcanos de cadena carbonada de
12 a 20 tomos de carbono fcilmente utilizables como
sustituto de carbohidratos como fuente nutricional de la
biomasa (Biocity 2003). Productos derivados de la actividad petrolera son tambin metabolizables, emplendose incluso la parafina como substrato (Butolo et al. 2003).
Azcares
Hidrocarburos
Gneros
Spirulina, Scenedesmus, Chlorella.
Actynomucor, Aspergullus, Bacillus,
Brevibacterium, Cellulosomas, Chaetomium,
dactylomyces, Gliociadium, Myrothecium,
Penicillum, Pleurotus, Phanerochaete,
Polyporus, Pseudomonas, Rhizoctonia,
Ruminococcus, Sporotrichum, Thermococcus,
Trichoderma, Endomycopsis.
Aureobasidium, Candida, Fusarium,
Geotrichum, Pachysolen, Paecilomyces,
Pichia, Rhodotorula, Torula, Torulopsis,
Saccharomyces, Kluyveromyces fragilis,
Scytadilium, Endomycopsis
Methylomonas, Methanomonas, Hydrogenomonas
Metano:
Los estudios con metano para su uso como sustrato para la SCP inician en los aos 70 en Inglaterra por
iniciativa de la compaa Shell.
El metano es un sustrato barato y abundante, el
cual de hecho existe en exceso en muchas partes del
mundo, donde es fcil de conseguir con muy alto grado
de pureza (Crueger y Crueger 1989). Quizs, su mayor
ventaja es que no presenta los cuestionamientos de toxicidad que se argumentan en contra de los n-alcanos
(Israelidis 2003). Dada su estructura qumica (CH4), el
metano presenta la forma carbonlica ms reducida, lo
cual permite a las clulas microbianas obtener el mayor
rendimiento por volumen de gas consumido.
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AGRONOMA MESOAMERICANA
Desechos industriales
La Produccin de SCP alcanza sus niveles ms rentables en este apartado (Keil 1995), puesto que los desechos industriales son las materias primas ms baratas
y diversas, especialmente si los mismos se aprovechan
en el lugar mismo donde son producidos, con lo cual se
elimina en gran parte el costo de transporte.
La lista de posibles residuos involucra tcnicamente cualquier fuente de carbono, y los autores enumeran
las ms diversas imaginativas fuentes de las que se
mencionan las ms representativas tales como:
1. Aguas residuales de las industrias de la celulosa, del caf, almidn, procesamiento de alimentos y del
papel (aguas sulfticas) empleando Candida utilis, C.
tropicalis, Chaetomium cellulolyticum y Paecilomyces
varioti (Crueger y Crueger 1989).
La protena obtenida a partir del metanol se conoce genricamente como Pruteen (Israelidis 2003).
Metanol:
Actualmente la produccin de Pruteen no es econmicamente rentable debido a las condiciones de mercado (Crueger y Crueger 1989, Israelidis 2003)
Etanol:
En comparacin con el metano y el metanol, el etanol cae en un tercer lugar dado su costo comparativamente ms elevado. Generalmente el proceso fermentativo se hace por medio de levaduras grado alimenticio
"torula". La SCP obtenida por este medio se denomina pues genricamente como "Torutein" (Israelidis
2003) y suele caracterizarse por su bajo contenido de
2.
99
Hongos
filamentosos
Algas
Protena
Grasa
Cenizas
cidos nucleicos
Aminocidos
Humedad
30-50 %
2-8 %
9-14 %
7-10 %
13,0
40-63 %
7-20 %
8-10 %
3-8 %
6%
Levaduras Bacterias
45-56 %
2-6 %
5-9,5 %
6-12 %
54%
4,5 %
50-83 %
1,5-3 %
3-7 %
8-16 %
65%
2,8 %
100
AGRONOMA MESOAMERICANA
Lisina
Treonina
Methionina
Cisteina
Triptofano
Isoleucina
Leucina
Valina
Fenilalanina
Histidina
Arginina
1
Ganado carne
Pollos
Pavos
Cerdos
Terneras (os)
Peces
Cantidad de
Cantidad de
% de la proteSPC (kg/t) fuente de protena na total contriremplazada
buida por SCP
Fuente
kg/t
100
80
50
100
50
250
Soya
Soya
Pescado
Soya
Leche en polvo
Pescado
182
145
62
182
114
308
36
38
18
50
17
44
Hongos
Algas Levaduras Bacterias FAO1
filamentosos
3,9
1,25
3,2
5,5
3,9
2,8
4,6
4,6
1,4
0,4
1,4
6,0
8,0
6,5
5,0
7,7
4,8
1,7
1,0
4,6
7,0
5,3
4,1
2,7
2,4
7,6
5,4
2,0
5,3
7,3
7,1
4,6
7,8
6,4
4,20
2,80
2,20
4,20
4,80
4,20
2,80
Hongos
Algas Levaduras Bacterias
filamentosos
Digestibilidad (D)
54-72
32-88
70-78
35-60
65-84
64-82
71-90
47-64
67-84
sobre la ingesta de otros alimentos, o sobre valores hemticos (Annimo, 2003). La biomasa microbiana contiene tambin toda una serie de compuestos nutricionales tales como vitaminas, enzimas, carotenos,
tocoferoles y dems. Algunas de las vitaminas ms importantes presentes en algunos microorganismos empleados como fuente de SCP se citan a modo de ilustracin en el Cuadro 7.
En la SCP, las vitaminas presentes son primordialmente del complejo B. La vitamina B12 se encuentra
primordialmente en bacterias, mientras que la vitamina
A se encuentra generalmente en algas.
101
Una forma de controlar el contenido de cidos nucleicos es no manejando tasas de crecimiento demasiado aceleradas. Otra forma es tratando la SCP de modo
que el contenido de AN baje por debajo de 2% tal y como recomienda la FAO. Con este fin se aplican diferentes tratamientos que se describen ms adelante en
esta revisin.
Cuadro 7. Contenido aproximado de vitaminas en mg/100g (base seca) de algunos microorganismos empleados como fuente de SCP.
Vitamina
Tiamina
Riboflavina
Niacina
Piridoxina
Acido pantotnico
cido flico
Inositol
Colina
Vitamina B12
Biotina
cido p-aminobenzoico
Morchella Candida
S. Methylomonas
hortensis
utilis cereviciae methanica
0,52
1,31
12,4
2,62
12,6
1,09
1,78
4,61
0
0,015
0,53
4,50
41,73
3,34
3,72
2,15
0
0,23
5-36
3,6-4,2
80-100
2,5-10
10
1,5-8,0
0
0,5-1,8
1,81
4,82
15,9
14,3
2,42
968
0,95
-
1,7
0,9-1,0
102
AGRONOMA MESOAMERICANA
El proceso bioqumico anterior como es lgico requiere de una fuente de carbono a fermentar, la cual
puede ser cualquiera de los substratos descritos en secciones anteriores de este documento. Algunas de estas
fuentes suelen ser pobres en nitrgeno y minerales, por
lo cual es necesaria una suplementracin con sales de
amonio otras fuentes de nitrgeno (Raimbault 1998).
Como productos de la fermentacin se obtiene la biomasa, y se libera energa y gases como el CO2.
Los microorganismos deben adems ser inoculados en un medio particularmente favorable tanto en
condiciones de competencia (medio previamente "esterilizado"), como en condiciones nutricionales. Por ello
es requerido un pretratamiento inicial que no altere indeseablemente al substrato y que garantice que el mismo favorezca el desarrollo de la SCP. Este pretratamiento generalmente implica (Crueger y Crueger 1989,
Durn 1989, Rojas 1995, Raimbault 1998, Pollard et al.
2001):
1. Reduccin del tamao y homogeneizado mecnico de modo que sea ms accesible al microorganismo
y ms fcil de manipular en la fermentacin.
2. Eliminado de agentes inhibidores del crecimiento microbiano tales como toxinas y trazas de residuos
qumicos. As mismo debe garantizarse la inexistencia
de substancias que puedan causar efectos txicos en la
SCP obtenida posteriormente.
3. En algunos casos, cuando el microorganismo a
emplear necesita metabolizar formas orgnicas ms
simples, debe hidrolisarse enzimtica o qumicamente
al substrato empleando cidos, lcalis enzimas como
amilasas diastasas.
4. Suplementacin del medio con nutrientes como
fsforo y sales nitrogenadas que sirvan de fuente mineral a la SCP.
5. Ajuste del pH y de la humedad del substrato de
modo que favorezcan el crecimiento de los microorganismos involucrados. Generalmente se requiere regular
constantemente las condiciones de pH empleando un
buffers (Chicas 2003). El ajuste del pH se mantiene a
lo largo del proceso fermentativo y no solo durante el
pretratamiento del substrato. En la mayora de los casos el pH suele ser cido y ronda valores de 4 5 a lo
largo del proceso.
6. Tratamiento trmico del substrato para eliminar
la flora bacteriana patgena y/o competitiva de la matriz. El tratamiento puede ser de pasteurizado en matrices destinadas a fermentacin en substrato lquido o es-
terilizacin en substratos slidos. En general los parmetros del proceso trmico rondan los 122-123 C por
un tiempo de 30-45 minutos (Pollard et al. 2001).
1971) que se agregar al volumen de suero en un porcentaje de 7 %. El volumen de suero ya con el cido
tricloroactico puede verterse en la marmita (fermentador), y calentarse con agitacin hasta hervirlo, por unos
20 minutos para clarificar, y para matar bacterias que
puedan causar competencia (Annimo 2002). El suero
as tratado se enfra, ojal con choque trmico y se pasa a travs de una manta previamente esterilizada de
manera que se filtre el precipitado de protena.
Antes de inocular se diluye el suero en una proporcin de 1 en 10 con agua (Hernndez et al. 1979, Durn 1989). El mismo ser suplido despus de la dilucin con sales para garantizar la nutricin de la
levadura (Crueger y Crueger 1989). Las sales podran
ser de sulfato de amonio 0,4% p/v y 0,1% p/v de sulfato cido de potasio. Otras sales de magnesio (0,232
g/l), calcio (0,011 g/l), hierro (0,007 g/l), zinc (0,002
g/l) y manganeso (0,002 g/l) podran experimentarse
tambin (Hernndez et al. 1979).
Con el fin de regular el pH inicial ptimo al 4,5 caracterstico del medio acidificado (Garca et al. 1994,
Okos et al. 1994), puede emplearse hidrxido de sodio
para disminuir el pH que inicialmente esta por encima
de 4,5.
Del suero ya acondicionado pueden tomarse 100
ml en un baln esmerilado de un medio litro, el cual
puede inocularse con Kluyveromyces fragilis por medio
de un asa que se frotara en la placa previamente preparada de agar y luego se introducira en este volumen de
suero. Luego este baln puede ponerse en un rotavapor
y calentarlo con rotacin lenta o moderada (quizs unos
300 rpm) a la temperatura ideal para la levadura de unos
72 C, y mantener este estado controlado por unas 72
horas. As se estara preparando el cultivo madre. En
principio podran emplearse 100 ml de cultivo madre
por cada kilogramo de suero a procesar (Hernndez et
al. 1979). Habr que definir la frecuencia de procesamiento en planta para definir as la cantidad de inoculo
madre a preparar, y hacer pruebas para calibrar la cantidad de inculo necesario.
El cultivo madre as preparado, se agregar en la
marmita o fermentador con el resto del suero ya suplementado. Este fermentador ser en forma de tanque de
acero inoxidable agitado (capaz de desarrollar unos 800
rpm), de por lo menos 300 kg de capacidad y que ser
llenado hasta _ de su capacidad (Hernndez et al. 1979),
con tapa y con chaqueta para circular fluidos reguladores de temperatura. Este tanque sera un fermentador denominado reactor mezclado homogneamente o quimiostato, en el cual se puede alcanzar un estado
estacionario de equilibrio que se controla ajustado la
concentracin del sustrato (Crueger y Crueger 1989).
103
Se calibra el termostato de modo que la temperatura pueda ajustarse a 30 C (Hernndez et al. 1979), y se tapa el
fermentador. Es importante poner una manguera que
alimente y purgu aire dentro del fermentador. Es recomendable unos 4,8 l/min de aire (Hernndez et al. 1979).
El proceso llega al estado de equilibrio en 16-24
horas y puede empezarse a drenar el contenido del reactor a medida que se inyecta ms cultivo madre, suero y
nutrientes hasta alcanzar un estado estacionario.
El lquido fermentado (medio exhausto) se puede
separar de la SCP que contiene empleando decantacin
y centrifugacin. Es factible aplicar despus algn lavado que permita eliminar residuos adheridos a la pasta de biomasa obtenida. Posteriormente puede hacerse
un secado, quizs empleando un secador de tambor rotatorio, los cuales son muy adecuados para el procesamiento de suspensiones o pastas de slidos (Geankoplis
1993). La pasta seca puede pulverizarse para obtener la
protena en polvo, que puede emplearse ahora como
sustituto proteico en frmulas de alimento para animales como seran las cabras (Durn 1989). El proceso
propuesto puede llegar a generar porcentajes de rendimiento del 30 %.
Si se desea emplear como alimento humano cabe
estudiar la posibilidad de reducir el contenido de AN
por alguno de los mtodos ya descritos.
Como mecanismos de control y para evaluar la eficiencia del proceso, pueden emplearse algunos de los
siguientes (Hernndez et al. 1979, Durn 1989, Crueger
y Crueger 1989):
1. Para determinar el progreso de la fermentacin podra tomarse muestras por medio de una sonda
en diferentes periodos de tiempo y determinar a partir
de esta muestra por refractometra el contenido de lactosa remanente, o bien emplear algn mtodo espectrofotomtrico con un spectronic 20.
2. El contenido de protena unicelular en la pasta
puede evaluarse por el mtodo de Kjendahl.
3. Se requiere un preciso monitoreo de tiempos,
flujos de aire, revoluciones de agitacin y temperaturas
en todo momento.
4. Implementar un anlisis proximal de los sueros antes de iniciar el proceso de modo tal que se pueda estandarizar la calidad del mismo.
5. Emplear un cultivo fresco con cierta frecuencia para garantizar que no proliferen otros microorganismos que violenten la parametrizacin del proceso.
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AGRONOMA MESOAMERICANA
6. Evaluar el PER de la protena obtenida en trminos del peso ganado por el animal por unidad de peso de protena en la ingesta.
LITERATURA CITADA
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