Trabajo Prctico N 8

TRABAJO PRCTICO N 8
RECEPTORES Y CURVAS DOSIS RESPUESTA
Objetivos
Que el estudiante al finalizar su clase logre:
a. Comprender la importancia farmacolgica de las diversas familias de receptores, sus
estructuras, los mecanismos de transduccin de seales y los segundos mensajeros.
b. Comprender los mecanismos de desensibilizacin de receptores y su implicancia teraputica.
c. Comprender y ejercitar los conceptos de AGONISTAS Y ANTAGONISTAS.
d. Identificar los elementos necesarios para la construccin de una Curva Dosis-Respuesta.
e. Extraer informacin e interpretar el significado de los parmetros de una curva Dosis Respuesta.
f. Caracterizar y comparar los distintos tipos de AGONISTAS Y ANTAGONISTAS de acuerdo a
las caractersticas de la Curva Dosis-Respuesta.
II. Temario
El alumno deber estudiar previamente los siguientes conceptos:
Mecanismos de posactivacin de receptores acoplados a protenas G.
Mecanismos de sensibilizacin de receptores acoplados a protenas G.
Interaccin droga-receptor (teora de Clark). Actividad intrnseca y eficacia.
Agonistas: Afinidad y potencia. pD2. Tipos de agonistas: totales y parciales. Receptores de reserva.
Tipos de antagonismos: Antagonista competitivo y no competitivo. pA2.
Respuestas; respuesta gradual-respuesta cuantal.
Elementos de una Curva Dosis-respuesta (CDR): eficacia o poder, dosis efectiva 50(DE 50),
potencia.
III. Desarrollo de la clase
Se trabajar con el programa interactivo MICROLAB: DRUG ASSAY: Isolated lleum para
explorar los conceptos de agonistas y antagonistas y para simular la construccin de una curva
dosis respuesta que permita ejercitar dichos conceptos.
Se discutir el trabajo de actualizacin:
Pierce, K.L; Premont, R.T; Lefkowitz. R.J. 2002. Seven-transmembrane receptors. Nature
revews 3: pp.639-650.
IV. Material bibliogrfico recomendado
Flrez, J. 1997. Farmacologa Humana 3 edicin. Ed. Panamericana S. A.
Goodman y Gilman. 2007. Las Bases Farmacolgicas de la teraputica. 11 edicin. Ed.
McGraw-Hill. Interamericana.
Malgor, L. A; Valsecia, M. E Farmacologa Mdica. Publicacin electrnica.
United States Pharmacopeia XXIII. Drug Information.1996.
Pierce, K.L; Premont, R.T; Lefkowitz. R.J. 2002. Seven-transmembrane receptors. Nature
revews 3: pp.639-650.
Clases teoricas.
Carpeta de lecturas complementaria de los trabajos prcticos.

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V. Introduccin
La farmacodinamia puede definirse como el estudio de los efectos bioqumicos y fisiolgicos de los
frmacos al interaccionar con sus sitios de accin moleculares especficos. Es importante recordar
que los frmacos no crean reacciones o funciones nuevas en el organismo, sino que, interactan con
componentes del mismo, estimulndolos o inhibindolos. El trmino receptor designara a aquel
componente del organismo sobre el cual actuar el frmaco modificando una funcin fisiolgica
existente.
El conocimiento de la interaccin de la droga con el receptor resulto de estudios aplicando
concentraciones conocidas de una droga a preparaciones de rganos o porciones aisladas de
rganos, y midiendo la respuesta biolgica producida (por ejemplo, contraccin o relajacin). Las
preparaciones de rgano aislado permiten un mayor grado de control sobre la concentracin de la
droga aplicada que las administraciones in vivo; adems, el estimulo es amplificado por los
mecanismos presentes en el rgano y se observa la respuesta primaria del agente, sin la
intervencin e mecanismos de homeostasis que la modifiquen. Los datos obtenidos se grafican
entonces como curvas dosis respuesta.

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VI. ACTIVIDADES
VI.1. Clase de problemas
1. Realice una CDR (curva dosis-respuesta) en un mismo par de ejes, los efectos de tres agonistas
diferentes.
2. A partir de los siguientes grficos de CDR indique el tipo de antagonismo en cuestin: Justifique
desde el punto de vista terico.

3.- La figura muestra la CDR del agonista I solo, y en presencia de concentraciones crecientes de
antagonista X.

Basndose en estos datos la droga X probablemente sea un:

a. Antagonista competitivo con un pA2 de aproximadamente 10.
b. Antagonista competitivo con un pa2 de aproximadamente 9.
c. Antagonista competitivo con un pA2 de aproximadamente de 8
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d. Antagonista competitivo con un pA2 de aproximadamente 6
e. No sea antagonista competitivo.
1. Las drogas X y Y son frmacos antihipertensivos probados en 200 varones y mujeres. El
criterio de respuesta tomado en cuenta fue una disminucin en la presin arterial diastlica de
10 mm Hg. Las CDR acumulativas para la poblacin de la prueba se muestran en el grafico.

Indique la respuesta correcta:

a. El efecto hipotensor de la droga X presenta una menor variabilidad poblacional que el de la
droga Y.
b. La droga X reduce la presin arterial por un mecanismo de accin distinto que la Y.
c. En cualquier paciente la droga Y reduce la presin arterial solo la mitad de lo que la reduce la
droga X.
d. La droga Y puede actuar como antagonista de la droga X.
e. La droga X presentara mayor ndice teraputico que la droga Y.
VI.2. Cuestionario de discusin del trabajo de actualizacin: Pierce, K.L; Premont, R.T;
Lefkowitz. R.J (2002) Seven-transmembrane receptors. Nature revews 3: pp.639-650.
1. Los receptores acoplados a protenas G presentan mecanismos alternativos de transduccin de
seal. A que otros mecanismos contenidos en el articulo se refiere?
2. Adems de los clsicos sistemas de las distintas protenas G , que otros sistemas efectores
presentan stas? Cual seria la importancia de las mismas?
3. Qu funciones presentara el complejo en la transduccin de la seal de receptores
acoplados a protenas G?
4. Qu comprende por la siguiente afirmacin? los receptores presentan distinto grado de
actividad constitutiva para acoplarse a la protena G, y se han encontrado en distintas patologas
mutantes de receptores con actividad constitutiva aumentada?
5. Cul es la importancia de la sensibilizacin de receptores por las proteinkinasas. Que entiende
por desensibilizacin heterloga? Que importancia le asigna a los fenmenos de
desensibilizacin observados por el receptor 2?
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6. Por qu la desensibilizacin de receptores mediada por las GRK produce una desensibilizacin
homologa del receptor?
7. Qu entiende por receptores hurfanos?

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VI. 3. APLICACIN DEL PROGRAMA MICROLAB.
RECEPTORES
Objetivos generales de la aplicacin del programa
Despus de finalizado el prctico los estudiantes estarn en condiciones de encontrar
independientemente los parmetros de agonistas y antagonistas y la interpretacin terica de los
mismos.
Objetivos especficos:
a. Que el estudiante pueda conocer como operar personalmente la computadora.
b. Conocer acerca del mecanismo de accin de neurotrasmisores y hormonas y la interaccin de
estas molculas con receptores moleculares y tambin aprender conceptos de agonistas y
antagonistas competitivos y no competitivos.
Para trabajar en el programa es necesario conocer previamente la teora que involucra cada
ejercicio:
Curvas dosis respuestas de tipo cuantitativo
Teora que vinculan la interaccin droga receptor con la respuesta.
APLICACIN DEL PROGRAMA MICROLAB: Drug ASSAY.
El Drug ASSAY programa ofrece las siguientes posibilidades:
La investigacin de la relacin dosis-efecto de diez agonistas sobre la contraccin de ileum de
conejo aislado In Vitro y el clculo de parmetros relacionados.
Calculo de parmetros relacionados
El examen de la interaccin de seis diferentes bloqueadores con los agonistas
La identificacin de una droga desconocida
CLASIFICACION E IDENTIFICACION DE LA ACTIVIDAD FARMACOLOGICA DE UNA
SUSTANCIA.
1. Relacin de la concentracin-efecto de agonistas.
Despus de trabajar en esta seccin el estudiante estar en condiciones de:
-

realizar una curva de efecto-concentracin, una curva de log. concentracin-efecto y una

curva de % log. concentracin-efecto.
- estimar el EC50. (concentraciones efectiva media)
- encontrar el mximo efecto y el calculo de Kd (constante de disociacin del frmaco)
- caracterizar un agonista con parmetros relevantes pD2 (medida de la afinidad de un
agonista por los receptores).
1.1 Introduccin:
En un organismo una hormona o un neurotrasmisor might (fuerte) causan un cambio observable, un
efecto. En el cambio de eventos nosotros entendemos que este es un punto certero, el receptor,
donde la actividad biolgica de la sustancia es la accin. Respecto a la afinidad de hormonas y
neurotrasmisores, es de suponer que drogas adems ejercen all accin a travs de receptores. En
este caso la accin es estrictamente sobre un tipo de receptor, entonces decimos que la droga es
especfica. Por lo contrario, cuando la droga ejerce su accin sobre lugares diferentes a los
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receptores, decimos que ejerce esta actividad inespecficamente. Muchas drogas actan sobre
receptores fisiolgicos y a menudo son particularmente selectivos porque los receptores
mencionados estn especializados para identificar o reconocer y reaccionar a molculas especiales
de sealizacin con gran selectividad. Las drogas que se ligan a receptores fisiolgicos y
remedan los efectos reguladores de los compuestos endgenos (hormonas, neurotrasmoisores, etc.)
que envan seales reciben el nombre de agonistas. Otros medicamentos se ligan a los receptores
sin efecto regulador, pero su unin bloquea la unin del agonista endgeno. Los compuestos en
cuestin aun pueden ejercer efectos favorables al inhibir la accin de un agonista (p. ej., al
establecer competencia por los sitios de unin del agonista) reciben el nombre de antagonistas.
La acetilcolina es un ejemplo de una sustancia que acta como un neurotrasmisor entre clulas
nerviosas, pero tambin como trasmisor entre clulas nerviosas y msculo estriado y clulas
musculares lisas. Drogas semejantes a la acetilcolina en su estructura molecular, el carbacol y
metacolina, usada en este programa, actan especficamente sobre receptores colinrgicos celulares,
pero no muy selectivamente.
El antagonista colinrgico, atropina, se enlaza con receptores colinrgicos (muscarnico) sobre
clulas musculares lisas, pero no con receptores colinrgicos (nicotnico) sobre clulas del
.msculo estriado. La atropina es mas selectiva comparada con la acetilcolina.
Clulas musculares lisas se pueden encontrar en la capa muscular de los intestinos, en las glndulas
salivales y en el iris de los ojos.
Si la atropina se usa para bloquear espasmo de gut entonces el efecto va hacer dry mouth y
alargamiento de la pupila del ojo.
Una razn para investigar el efecto de drogas sobre preparaciones de tejidos aislados in vitro es
que los efectos estudiados no estn contaminados por efectos indirectos causados por efectos de las
drogas en otras partes del cuerpo. Varias hormonas, neurotrasmisores y drogas, pueden ser
aplicadas a una cmara de rgano aislado, en la cual se monta una pieza de ileum de conejillo de
indias, conectados a un transductor e incubados por 90 minutos en solucin de Krebs Henseliet a
37C (+/- 0,5C) en presencia de 95% de oxigeno y 5% de Dixido de Carbono. Fig. 1.

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La contraccin causada por una droga presenta una amplitud (fuerte contraccin) corta despus de
la aplicacin de la droga en el bao y es seguida por un decaimiento de la concentraciones. (Fig.
2).Durante un minuto se registran las contracciones, despus se reemplaza la droga por una nueva
solucin fisiolgica lavado- el ileum se relaja nuevamente.

La droga causa un efecto, la contraccin, es llamado agonista. El mximo de la concentracin es

dependiente de la dosis aplicada al bao o mejor de la concentracin del agonista in la cmara de
rgano aislado. Esta relacin puede ser representada grficamente. La relacin concentracinefecto puede ser obtenida midiendo el efecto (la ms fuerte de la contraccin), por ejemplo se
puede graficar el mximo efecto en las ordenadas (Y axis) en relacin de la concentracin en las
abscisas (X axis) como se muestra en la Fig. 3. en estos grficos se puede hallar la EC50
(concentracin efectiva media), La EC50 es caracterstica para una agonista en relacin a un tipo de
receptor especfico.

Fig. 3 Curva concentracin-efecto

Fig. 4 Curva log. concentracin-efecto

VI.3.1 ACTIVIDADES. MICROLAB. RECEPTORES

ACTIVIDAD AGONISTA.
Ejercicio N 1.
- Despus de leer la introduccin, puedes clickear sobre introduccin en el programa DRUG
ASSAY. Videos mostraran tpicos de diseccin, y drogas de aplicacin.
- Clickear en experimento
- Seleccionar el agonista (se sugiere comenzar con acetilcolina
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- Colocar la concentracin de la solucin (ej. 1E-5 mol/l);
- Llenar la pipeta con 1-100 ul, (el bao tiene un volumen de 10 ml. Presionar sobre el botn
aplicar
- Despus de 10 a 20 minutos presionar sobre lavar
- Repetir la aplicacin tres veces y lavar entre tiempos.
- Aumentar la concertacin de 10, 20, 50, 100, 200, 400, etc. nmol/l (1 nanomol/l = 1E-9/l).
- Dibujar los datos sobre papel milimetrado relacionando la concentracin-efecto, realizar la curva,
ubicar la concentracin y sobre la ordenada la mxima concentracin o el porcentaje de la mxima
concentracin.
- Encontrar la EC50
- Dibujar los mismos datos en papel semilogaritmo y dibujar el log. concentracin-efecto (comparar
el valor de EC50)
- Finalmente se representa grficamente %efecto-log. Concentracin. Se halla los parmetros Kd
y pK2
El experimento se puede repetir con otros agonistas. Toma al menos otros dos agonistas (se sugiere:
furmethide and angiotensina ) . Otros estudiantes hacen esto con otras drogas, usted puede
comparar los resultados.

Reunir los datos en un cuadro:

Conc. Acetilcolina
(nmol/l)

Efecto, cm

Efecto %

Log Dosis

Representacin grafica.

1.1 Preguntas
a. Qu agonistas son semejantes? Cmo puedes decir esto desde la representacin log.
concentracin - %efecto?
b. Qu parmetros puede encontrar desde estas representaciones? Qu indican cada uno de ellos?
Qu droga presenta mayor afinidad por el receptor?
ACTIVIDAD DEL ANTAGONISTA COMPETITIVO
Despus de finalizada esta seccin el estudiante estar en condiciones de:
- establecer que un bloqueador es un antagonista competitivo,
- calcular el pA2 de un antagonista competitivo,
- estimar desde el pA2 la afinidad de antagonista con un cierto tipo de receptor.
Introduccin
Si ms de una droga muestra afinidad por el mismo receptor, cuando stas son administradas juntas
en la preparacin al mismo tiempo, luchan por el mismo sitio del receptor. Ellos muestran
competicin por el mismo sitio de unin. Una condicin es, entonces, que ellas se unan
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reversiblemente en el mismo sitio. Este efecto se predice a travs de la siguiente ecuacin: de dos
drogas A y B
mx. efecto (A)
mx. efecto (B)
Efecto (A+B) = ----------------------------------- + ---------------------------------------1+ {1+[B] / kd (B) }*}Kd (A) / [A]
1+ {1+ [A] / kd (A)}* kd (B) / [B]
En esta ecuacin Kd (A) y kd (B) son las constantes de disociacin respectivamente. En esta
seccin es de inters ver que pasa, si el mximo efecto de la droga B es muy pequeo igual a
cero, significara que la droga B no tiene actividad intrnseca. Esto no significa que B no tenga
afinidad por un receptor, la afinidad se puede deber a A. La droga se une a un receptor pero causa
un efecto por si mismo. La droga B ocupa sitios receptores, y en consecuencia la droga A anula su
efecto. La droga B esta comportndose como un antagonista.
La ecuacin puede ser simplificada, si max. Efecto (B) = 0:
max. efecto (A)
Efecto (A+B) = ----------------------------------1+ {1+[B] / kd (B) }*}Kd (A) / [A]
En el caso de la droga (A), la concentracin comienza a alargarse. El denominador va a estar cerca
de 1. El efecto obtenido es el mismo que el de la droga A La droga B se comporta como un
antagonista competitivo (ver Fig. 5)

Fig. 5 log Concentracin-efecto de acetilcolina sin y en presencia de atropina.

Observamos que:
La curva se desplaza hacia la derecha al aumentar la concentracin del antagonista competitivo y
depender del valor de KA
Las porciones lineales de las curvas sigmoideas son paralelas entre si.
La respuesta mxima obtenida es la misma.
Un antagonista competitivo tambin tiene afinidad por un receptor, pero no causan efecto por si
mismo, no producen respuesta, siendo inactivos de por si, impiden que los agonistas se fijen a los
receptores.
Existen parmetros de afinidad de un antagonista por un cierto tipo de receptor. Por ejemplo el
pA2. El pA2 es el logaritmo negativo de Kd de un antagonista.
pA2 = - log kd (B)
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(B) es el bloqueador antagonista.

Ejercicio 2.
- Seleccionar primero un agonista (se sugiere comenzar con acetilcolina)
- Realzar una curva conc-.efecto de acuerdo a la primera seccin
- Seleccionar un antagonista (se sugiere atropina en una concentracin de 1E-8 mol/l)
- Se coloca el antagonista en el bao en presencia del agonista.
- Se realiza una curva del agonista y del agonista ms el antagonista
- Repetir la experiencia usando dos concentraciones ms del mismo antagonista.
2.1 Preguntas
a. Qu parmetro(s) se puede(n) obtener del grafico?.
b. Cmo explicara en funcin del anlisis de este (os) parmetro(s) obtenido(s)?: el
antagonismo competitivo es una fenmeno superable.
c. Una droga que tiene afinidad pero no eficacia, puede producir efectos tiles o adversos?
ACTIVIDAD DEL ANTAGONISTA NO COMPETITIVO
Despus de finalizada el T. P el alumno estar en condiciones de:
- determinar si un bloqueador es un antagonista no-competitivo,
- calcular el pD2 de un antagonista no-competitivo.
Introduccin
Llamado tambin irreversible se produce cuando una antagonista establece un enlace muy fuerte
con lo receptores y no sale del sitio donde el agonista ejercera su accin, inactivando el receptor,
con lo que disminuye la poblacin total de receptores disponibles para el agonista.
En la representacin grafica:
- las curvas no son paralelas,
- al aumentar la concentracin el antagonista, el efecto mximo obtenido es cada vez menor.

Fig 6 Efecto de un antagonista no competitivo (papaverina) sobre el log. concentracin de

acetilcolina.-efecto
Papaverina es un alcaloide encontrado en el opio, es un ejemplo de antagonista no competitivo
especfico que puede bloquear el efecto de algunos agonistas sobre tejido muscular liso
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Ejercicio N 3.
-

seleccionar un agonista,
determinar el log. concentracin-efecto para este agonista,
seleccionar papaverina,
Elegir una concentracin para papaverina (se sugiere 1E-6 mol/l),
Representar grficamente el log. concentracin-efecto para el agonista en presencia de
papaverina,
Repetir el procedimiento tres veces con diferentes concentraciones de papaverina.

3.1 Preguntas
- Es posible determinar en la representacin grafica pA2 para papaverina? Explique.
VI.2 Gua de autoevaluacin
1. Indique qu material biolgico se utiliza para confeccionar una curva de tipo gradual
2. Enumere algunas de las aplicaciones de las curvas de tipo gradual (cuantitativas)
3. Qu entiende Ud. Por afinidad de una droga por el receptor? De que manera se puede
expresar?
4. Qu representa la constante eficacia?
5. Qu se entiende por agonista parcial
6. Qu tipo de interacciones de drogas a nivel de receptores pueden enumerarse?
7. Explique a travs de grficos, el antagonismo competitivo, indicando las condiciones que deben
reunir las drogas en cuanto a afinidad y eficacia.
VII. Glosario
Acetilcolina-Allopurinol-Asma bronquial-Asinttica-Atraccin dipolo-dipolo inducidoATPasa-Disulfiram- Fisostigmina- Heparina-Taquifilaxia-Xantonooxidasa-Mesenterio

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