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G2070-95126 Understanding Your ChemStation
G2070-95126 Understanding Your ChemStation
Familiarizacin con
ChemStation
Familiarizacin con Agilent ChemStation
Agilent Technologies
Avisos
Agilent Technologies, Inc. 2004,
2005-2009
No se permite la reproduccin de parte
alguna de este manual bajo cualquier
forma ni por cualquier medio (incluyendo su
almacenamiento y recuperacin electrnicos y la traduccin a idiomas extranjeros) sin
el consentimiento previo por escrito de Agilent Technologies, Inc. segn lo estipulado
por las leyes de derechos de autor estadounidenses e internacionales.
Nmero de referencia
del manual:
G2070-95126
Edicin
07/09
Impreso en Alemania
Agilent Technologies
Hewlett-Packard-Strasse 8
76337 Waldbronn
Revisin de software
Esta gua es vlida para las revisiones
B.04.xx del software Agilent ChemStation,
donde xx hace referencia a revisiones
menores del software que no afectan a la
exactitud tcnica de esta gua.
Garanta
Avisos de seguridad
PRECAUCIN
Un aviso de PRECAUCIN indica
un peligro. Llama la atencin
sobre un procedimiento de operacin, una prctica o similar que,
si no se realizan correctamente o
no se ponen en prctica, pueden
provocar daos en el producto
o prdida de datos importantes.
No avance ms all de un aviso
de PRECAUCIN hasta que se
entiendan y se cumplan completamente las condiciones indicadas.
ADVERTENCIA
Un aviso de ADVERTENCIA
indica un peligro. Llama la atencin sobre un procedimiento de
operacin, una prctica o similar que, si no se realizan correctamente o no se ponen en
prctica, pueden provocar
daos personales o la muerte.
No avance ms all de un aviso
de ADVERTENCIA hasta que se
entiendan y se cumplan completamente las condiciones indicadas.
Slo para uso en investigacin.
En esta gua
En esta gua
2 Mtodos
En este captulo se describe el concepto de mtodos y su funcionamiento.
3 Adquisicin de datos
En este captulo se describen los conceptos de adquisicin de datos, ficheros
de datos y libro de registro, entre otros.
4 Integracin
En este captulo se describen los conceptos de integracin de los algoritmos de
integracin de ChemStation. Describe el algoritmo de integracin, la integracin y la integracin manual.
5 Cuantificacin
En este captulo se describe cmo ChemStation lleva a cabo la cuantificacin.
Proporciona detalles sobre los clculos de % de rea y % de altura, el clculo
por estndar externo o ESTD (External Standard), el clculo de % Norm, el clculo por estndar interno o ISTD (Internal Standard) y la cuantificacin de
picos no identificados.
6 Identificacin de picos
En este captulo se describen los conceptos de identificacin de picos.
En esta gua
7 Calibracin
En este captulo se describe la calibracin de ChemStation.
8 Automatizacin
En este captulo se describen los conceptos de automatizacin. Se explica
cmo utilizar secuencias en ChemStation, qu ocurre cuando se analiza una
secuencia y cmo personalizar secuencias.
Contenido
Contenido
Descripcin general 11
Hardware de ChemStation 14
Acerca del software de ChemStation 15
Instrument Control 33
Documentacin 34
Estructura de directorios de ChemStation 36
Panel de navegacin 40
2 Mtodos
43
Definicin de mtodo 45
Partes de un mtodo 46
Estado de los mtodos 49
Creacin de mtodos 51
Edicin de mtodos 52
Estructura de los directorios de mtodos 54
Qu sucede cuando se ejecuta un mtodo? 55
Resumen de la operacin del mtodo 60
3 Adquisicin de datos
63
64
71
Definicin de la integracin 73
Funcin de la integracin 74
Algoritmos de integracin de ChemStation
Introduccin 77
Definicin de trminos 82
75
Contenido
Principio de funcionamiento 84
Reconocimiento de picos 85
Asignacin de la lnea base 95
Medida del rea de pico 108
Eventos de integracin 111
Integracin manual 117
5 Cuantificacin
121
137
151
Contenido
8 Automatizacin
171
215
229
231
Contenido
247
275
271
276
1
Caractersticas de Agilent ChemStation
Descripcin general 11
Mdulos instrumentales adicionales 12
Mdulos de evaluacin de datos adicionales
Productos slo de evaluacin de datos 13
Hardware de ChemStation
12
14
34
36
Agilent Technologies
10
Descripcin general
ChemStations para los sistemas GC, LC, LC/MSD, CE, CE/MSD y A/D son sistemas de control instrumental, adquisicin de datos y evaluacin de datos
para
cromatgrafos de gases Agilent 7890A,
cromatgrafos de gases Agilent 6890N, 6890Plus y 6890A,
cromatgrafos de gases Agilent 6850,
cromatgrafo de gases 5890 Serie II,
mdulos y sistemas Agilent Serie 1100/1200 para LC,
LC/MSD Agilent Serie 1100,
LC/MSD Single Quad Agilent Serie 6100,
sistema de electroforesis capilar de Agilent 1600 (CE),
sistema de electroforesis capilar de Agilent 7100 (CE),
sistema CE/MS Agilent e
interfase analgico/digital de doble canal Agilent 35900E.
El software est diseado para equipos personales compatibles con IBM con
un sistema operativo Microsoft Windows XP Professional.
El software se vende como una ChemStation bsica de un solo instrumento
con cinco versiones. Todas las versiones incluyen adquisicin de datos, control
instrumental, anlisis de datos (integracin, cuantificacin e informes), automatizacin y personalizacin para un instrumento analtico. Un instrumento
est definido como de ejecucin en una sola base de tiempo, pero puede recopilar datos simultneamente de diferentes detectores. Las cinco versiones son:
ChemStation de un solo instrumento para sistemas de cromatografa de
gases (GC), referencia G2070BA
ChemStation de un solo instrumento para sistemas de cromatografa de
lquidos (LC), referencia G2170BA
ChemStation de un solo instrumento para sistemas de electroforesis capilar
(CE), referencia G1601BA
ChemStation de un solo instrumento para sistemas de cromatografa de lquidos/detector selectivo de masas (LC/MSD), referencia G2710BA, y
11
13
Hardware de ChemStation
14
Sistema operativo
ChemStation requiere el sistema operativo Microsoft Windows XP Professional SP3 o Windows Vista Business SP1.
Los grficos de control de ChemStation requieren Microsoft Excel.
Mtodos y secuencias
El mtodo analtico describe completamente cmo se realiza una separacin
determinada. Contiene todos los parmetros para el control instrumental y la
adquisicin y evaluacin de datos, incluida la integracin, cuantificacin e
informes. El sistema se puede configurar para que adquiera los datos de varias
muestras con diferentes mtodos. El fichero de control de este tipo de operacin se denomina secuencia, y contiene la informacin de cada muestra, referencias a los mtodos apropiados y especificaciones de recalibracin
automtica. Para obtener ms informacin sobre mtodos y secuencias, consulte Automatizacin en la pgina 27 y el sistema de ayuda en lnea.
15
Modelo de datos
El software ChemStation est diseado sobre un modelo de datos basado en
una estructura de memoria denominada registro. Los registros son estructuras multipropsito que pueden contener datos analticos y datos para informacin bidimensional (por ejemplo, tiempo/intensidad) e informacin
tridimensional (por ejemplo, tiempo/intensidad/longitud de onda).
ChemStation proporciona los comandos y funciones para construir, expandir,
extraer y editar registros, siempre que no se alteren los datos primarios. Para
obtener ms informacin, consulte la Gua de programacin de macros disponible como ayuda en lnea.
16
Caracteres restringidos
Parmetro de ChemStation
Character
Debe evitarse asimismo el uso de estos nombres seguidos de una extensin (p.
ej. Nul.txt).
N O TA
En los tests realizados para validar las convenciones de los nombres de ficheros se utilizan
equipos con sistema operativo en ingls, japons y chino. Agilent no puede garantizar el
soporte de sistemas operativos que no sean en ingls y sus caracteres especiales.
Fichero de datos/Subdirectorio/Ruta
Longitud
mx. de
entrada
Apndice
automtico
Ejemplo
38
.D
Demodad.d
15
.D
longname000001.d
40
.M
.S
. HYP
. UVL
. FRP
def_lc.m
def_lc.s
def_lc.hyp
demodad.uvl
areapct.frp
40
40
17
Fichero de datos/Subdirectorio/Ruta
Longitud
mx. de
entrada
40
Ruta de datos
Ruta de mtodo
Ruta de secuencia
Ruta de hipersecuencia
Ruta de libreras
Ruta de plantilla de informe
personalizado
100
Apndice
automtico
Ejemplo
test_date_time (crear
usando preferencias de
secuencias)
100
c:\chem32\1\data
c:\chem32\1\methods
c:\chem32\1\sequence
c:\chem32\1\hyper
c:\chem32\speclib
c:\chem32\repstyle
Todos los mensajes del sistema de informes de los libros de registro de ChemStation en formato ampliado y las cadenas de informacin se imprimen en
varias lneas. En determinados informes, por ejemplo el informe de secuencia,
los nombres de ficheros pueden aparecer truncados para que encaje toda la
informacin en la plantilla de informe.
18
Adquisicin de datos
En la pantalla se monitoriza y se actualiza constantemente el estado de los instrumentos, adems del tiempo de anlisis transcurrido, tanto cuando el software est en una ventana visible como cuando es un icono. Las transacciones
que se producen durante el anlisis, incluidos los errores y las condiciones del
instrumento al principio y al final del anlisis, se registran en el libro de registro del sistema y con cada fichero de datos se guarda un extracto del mismo.
19
20
21
22
23
24
25
Informes personalizados
ChemStation incluye una ventana de diseo de informes personalizados para
aquellos usuarios que desean definir el contenido exacto de sus informes. El
usuario define grficamente un diseo de informe que puede incluir informacin general sobre la muestra, informacin sobre seales, integracin y resultado analtico cuantitativo. Se pueden definir los elementos individuales,
como el texto, las tablas y los grficos, organizarlos en secciones informativas
y ajustar grficamente su posicin relativa y la orientacin de cada elemento
definido. Se pueden aadir, eliminar, reordenar y anidar las secciones individuales.
El usuario puede definir cabeceras y pies de pgina para que aparezcan en
cada pgina, marcas de hora del informe y numeracin de pgina con el formato page x of y. La informacin incluida en el informe puede ser cualquier
parmetro de ChemStation o definido por el usuario.
Una vez diseado el informe, se puede asociar a un mtodo por defecto para
que sea el formato de informe por defecto para ese tipo por defecto de anlisis.
Los informes personalizados se pueden enviar a la pantalla, a la impresora y a
un fichero. Los informes en pantalla contienen grficos.
Para obtener ms informacin sobre el diseo de informes, consulte el sistema
de ayuda en lnea.
26
Utilidades y compatibilidades
General
ChemStation puede importar y exportar ficheros de datos con el formato de
cromatografa andi (Analytical Data Interchange) de la Analytical Instrument
Association (AIA), revisin 1.0, copyright 1992. Se admite la importacin de
datos en el nivel de conformidad uno (informacin de muestra y datos de
seal) y la exportacin de datos en el nivel de conformidad dos (informacin
de muestras, datos de seal y resultados de integracin).
ChemStation incluye comandos y funciones para admitir la norma de intercambio dinmico de datos (DDE) de Microsoft Windows, tanto como cliente
DDE como servidor DDE. Se incluyen comandos para establecer y terminar las
conexiones, transferir informacin en ambas direcciones y ejecutar funciones
remotas.
Personalizacin
ChemStation se puede personalizar mediante un eficaz conjunto de comandos.
Estos comandos se pueden agrupar para ejecutar automticamente una funcin especfica; este grupo se denomina macro. Los usuarios que escriben
macros pueden definir sus propias variables, crear constructos condicionales
o de bucle, realizar E/S fsicas como el tratamiento de ficheros y la interaccin
de usuarios, anidar sus macros y programar e intercambiar datos con otras
aplicaciones de MS-DOS o Microsoft Windows.
Para obtener ms informacin sobre la personalizacin, consulte la Gua de
programacin de macros disponible como ayuda en lnea.
Automatizacin
ChemStation puede ejecutar secuencias multimtodo.
El grupo de parmetros de secuencia puede definirse para utilizar ficheros
generados automticamente o numerados secuencialmente, con un prefijo de
hasta quince caracteres. El usuario puede seleccionar si desea realizar anlisis
completos o reprocesar los datos nicamente de secuencias. Tambin puede
27
28
Proceso de desarrollo
El certificado de validacin entregado con cada paquete de software documenta las fases de desarrollo y pruebas del software realizados como parte del
proceso de desarrollo. El proceso de desarrollo est registrado segn la norma
de calidad ISO 9001. Est documentado, junto con los protocolos de revalidacin in situ, en el Cuaderno de validacin de Agilent ChemStation para LC.
29
30
31
32
Instrument Control
Trabajo en red
ChemStation dispone del software LanManager de Agilent y se ha probado su
compatibilidad con los productos de Microsoft Windows XP Professional y
Microsoft Windows Vista Business basados en la especificacin IEEE 802.3
CSMA/CD. Debera ser compatible con cualquier software de red compatible
con las normas de programacin de Microsoft Windows.
Estos productos permiten a ChemStation compartir dispositivos fsicos, por
ejemplo, plotters e impresoras con otros ordenadores del laboratorio, adems
de compartir informacin como ficheros de datos y mtodos.
Cliente/Servidor
El software ChemStation se puede instalar en un servidor de red apropiado y
descargarse en los PC cliente cuando sea necesario. La configuracin especfica de cada cliente garantiza un entorno apropiado para las diferentes tcnicas
y usuarios individuales, mientras que la instalacin centralizada del software
evita tener que gestionar muchas copias de la misma instalacin de ChemStation en un entorno de trabajo.
33
Documentacin
Instalacin y aprendizaje
Cada producto de software ChemStation se entrega con un manual de instalacin que incluye detalles sobre los pasos clave de los requisitos de software y
hardware del PC, la instalacin de la interfase instrumental, instalacin de
ChemStation y cualificacin de la instalacin. El manual de instalacin es
especfico de la configuracin adquirida y puede incluir solucin de problemas, registros del sistema y consejos sobre el mantenimiento del sistema.
34
Personalizacin
Los usuarios avanzados que desean personalizar el funcionamiento de ChemStation o que desean incorporar funciones adicionales, pueden hacerlo escribiendo macros.
El manual de referencia principal, Gua de programacin de macros, disponible como ayuda en lnea, contiene un amplio conjunto de ejemplos funcionales
adems de una descripcin completa de los tipos y estructuras de datos internos.
El fichero de ayuda de comandos, al que se accede directamente desde el
men Ayuda o el cuadro de dilogo Mostrar comando de ChemStation, es la
referencia funcional del programador. Contiene explicaciones sobre la sintaxis
y los parmetros, con macros de ejemplo que ilustran el uso de muchos de sus
comandos. Como estn en lnea, el usuario puede copiar los ejemplos y la sintaxis del comando directamente en sus propios ficheros fuente de macros.
35
36
8=:B('
G:EHINA:
8DG:
E>8IJG:H
AVc\jV\Z
]ZaeZcj
&%')
-%%
IddaWVgHjeedgi;^aZh
A8
<8
8:
BH
>FI
9G>K:GH
AVc\jV\Z
-%%
IddaWVgHjeedgi;^aZh
<8>
GVe^Y
&
I:BE
96I6
9:BD
B:I=D9H
9:BD
H:FJ:C8:
K:G>;N
heZXa^Wh
Figura 1
37
38
Subdirectorios de ChemStation
Directorio
Contents
Chem32
REPSTYLE
CORE
PICTURES
Language
helpenu
BACKUP
DRIVERS
DATA
Subdirectorios de ChemStation
Directorio
Contents
METHODS
SEQUENCE
VERIFY
TEMP
IQT
speclibs
39
Panel de navegacin
El panel de navegacin, que se encuentra en el lado izquierdo de todas las ventanas de ChemStation, est diseado para agilizar el acceso a los principales
elementos de ChemStation y tambin permite cambiar rpidamente de una
ventana a otra. El panel de navegacin contiene ChemStation Explorer, con
estructura de rbol, y un rea de botones configurables. Tambin dispone de
una funcin de ocultacin automtica para no comprometer el espacio de trabajo de ChemStation y funciones estndar como cambiar el tamao y reorganizar el rea de los botones de navegacin.
Botones de navegacin
Los botones de navegacin permiten cambiar la ventana de ChemStation
haciendo clic en el botn de navegacin especfico. La seccin botn de navegacin se puede minimizar, expandir y reorganizar.
ChemStation Explorer
El contenido del panel de navegacin depende de la ventana. En las ventanas
Mtodo y Control de anlisis, Anlisis de datos y Diseo del informe, ChemStation Explorer permite navegar a los diferentes elementos de ChemStation.
Por defecto, estos elementos de datos, mtodos y secuencias se basan en las
opciones del editor de configuracin. Las ubicaciones de estos elementos se
pueden expandir y se pueden especificar nuevos nodos para mtodos, secuencias y ubicacin de datos mediante la opcin Preferencias del men.
Tabla 4
40
Botones de navegacin
Anlisis de datos
Mtodos maestros
Botones de navegacin
Sintonizacin (LC/MS)
41
42
2
Mtodos
Definicin de mtodo
45
Partes de un mtodo 46
Informacin del mtodo 46
Control instrumental 46
Anlisis de datos 46
Lista de control del anlisis 47
Estado de los mtodos 49
Mtodos almacenados 49
Mtodo actual 50
Creacin de mtodos
51
Edicin de mtodos 52
Partes editables del mtodo
52
54
60
Agilent Technologies
43
Mtodos
Panel de navegacin
44
Mtodos
Definicin de mtodo
Definicin de mtodo
45
Mtodos
Partes de un mtodo
Partes de un mtodo
Control instrumental
Define los parmetros que controlan el instrumento o sus componentes. Con
un instrumento LC, los parmetros (composicin de la fase mvil, velocidad
de flujo, volumen de inyeccin, longitud de onda del detector, etc.) controlan
la bomba, el inyector y el detector. Con un instrumento GC, los parmetros
(temperatura del inyector, presin del inyector, ajuste del flujo de la columna
empaquetada, etc.) controlan el instrumento.
Anlisis de datos
Define los parmetros que controlan el procesamiento de los datos.
46
Mtodos
Partes de un mtodo
Detalles de la seal
Define las seales y sus propiedades usadas para evaluacin de datos.
Eventos de integracin
Define los eventos programados que tendrn lugar en momentos de retencin
o migracin especficos en un cromatograma o electroferograma. Estos eventos programados se pueden usar para cambiar la manera en que se integra una
seal.
Identificacin de picos
Define los parmetros del proceso de datos asociados a la identificacin de
picos en el cromatograma o electroferograma.
Cuantificacin de picos
Define los parmetros de proceso de datos que afectan a los clculos de cuantificacin que determinan la cantidad o concentracin del componente de la
muestra correspondiente a cada pico.
Calibracin y recalibracin
Define los parmetros de proceso de datos que afectan a la calibracin y la frecuencia con que sta se realiza.
Campos personalizados
Define las propiedades de campos personalizados relacionados de muestra o
compuestos disponibles para el mtodo. Estos campos permiten aadir informacin personalizada a una muestra o compuesto en una muestra.
Informe
Define el formato del informe que se imprime despus de un anlisis.
47
Mtodos
Partes de un mtodo
La lista de control del anlisis se usa para:
adquirir, guardar y procesar datos para crear un informe,
ejecutar slo una parte del mtodo,
adquirir y guardar datos sin analizarlos,
volver a analizar los ficheros de datos existentes,
utilizar sus propias macros para anlisis de datos, procesamiento previo y
posterior al anlisis, y
guardar el resultado del anlisis en un registro con fines de buenas prcticas de laboratorio.
48
Mtodos
Estado de los mtodos
Mtodos almacenados
Son mtodos almacenados en el disco del equipo. Los mtodos almacenados
tienen un nombre compuesto por hasta cuarenta caracteres alfanumricos
seguidos de la extensin .M. Los mtodos se guardan en tres ubicaciones posibles de ChemStation:
El mtodo maestro se guarda en un subdirectorio de mtodos, disponible en
el nodo Mtodos de ChemStation Explorer, y no est directamente asociado
a ningn contenedor de datos.
Cuando se ejecuta una secuencia (mediante la opcin Unique Folder Creation
ON (consulte Preferencias: ficha Secuencia en la pgina 175), se almacenan las copias de todos los mtodos maestros utilizados en el contenedor de
datos de secuencia junto con los ficheros de datos de secuencia. Estos mtodos estn directamente vinculados a la secuencia y tambin se usan
cuando se reprocesa la secuencia. Los cambios realizados en estos mtodos
no se propagan a los mtodos maestros. Los cambios se propagan al mtodo
del contenedor de secuencias, as como a los mtodos individuales (DA.M)
cuando se reprocesa la secuencia. Si, a continuacin, desea utilizar el mtodo del contenedor de secuencias actualizado para la adquisicin de datos,
debe realizar lo siguiente
copiar este mtodo del contenedor de datos de secuencias a una de las
rutas de mtodos definidas, o bien
utilizar la opcin save as para guardar el mtodo actualizado como mtodo maestro.
El mtodo nuevo o actualizado estar disponible en ChemStation Explorer, en la ventana de mtodos, como mtodo maestro.
Adems, con los ficheros de datos se guardan dos copias del mtodo utilizado para analizar una muestra: los mtodos individuales de ficheros de
datos ACQ.M y DA.M ACQ.M son el mtodo de adquisicin, DA.M es el mt-
49
Mtodos
Estado de los mtodos
odo de anlisis de datos. DA.M es el mtodo que se carga con los ficheros de
datos si est seleccionada la casilla de verificacin Load DA method from data
file en la ficha Signal Options del cuadro de dilogo Preferences. Los cambios
de este mtodo (por ejemplo, eventos de integraciones programados) son
especficos del fichero de datos asociado y no se propagan al mtodo de
secuencias ni al mtodo maestro.
La tabla de navegacin proporciona una posibilidad de actualizacin para
mtodos individuales y mtodos de secuencia a su secuencia o mtodo maestro correspondiente haciendo clic en el botn derecho del ratn en el elemento
de lnea del mtodo. Al ejecutar la Update Master Method o la Update Sequence
Method, se copian los parmetros del anlisis de datos del mtodo seleccionado al mtodo maestro o de secuencia correspondiente. La actualizacin
automtica se reflejar en el historial del mtodo objetivo.
Tabla 5
Mtodo cargado
Mtodo de secuencia
Mtodo maestro
---
Mtodo actual
Cuando se vuelve a llamar a un mtodo almacenado en el disco, se convierte
en el mtodo actual. Siempre hay un mtodo actual en la memoria. Cuando se
inicia ChemStation por primera vez, el mtodo por defecto proporcionado por
Agilent Technologies siempre se carga como parte del proceso de arranque.
Por ejemplo, podra ser uno de los siguientes:
DEF_LC.M para un instrumento LC
DEF_GC.M para un instrumento GC
DEF_CE.M para un instrumento CE
Se coloca en la memoria una copia del mtodo por defecto que se convierte en
el mtodo actual. En cualquier momento se puede cargar un mtodo diferente
que se convierte en el mtodo actual.
50
Mtodos
Creacin de mtodos
Creacin de mtodos
N O TA
Cuando cargue un mtodo para analizar una muestra, utilice siempre un mtodo maestro
de un nodo de mtodos de ChemStation Explorer. Evite utilizar mtodos de secuencias (de
un contenedor de datos de secuencias) o mtodos individuales asociados a ficheros de
datos (ACQ.M o DA.M).
N O TA
51
Mtodos
Edicin de mtodos
Edicin de mtodos
Para editar un mtodo se puede usar la opcin Editar el mtodo entero del
men Mtodo. Se le guiar por todos los cuadros de dilogo del mtodo y, al
final, podr guardarlo. Este proceso se muestra a continuacin:
BidYdZcY^hXd
8Vg\VgbidYd
:abidYdhZXVg\VZcbZbdg^VnhZXdck^ZgiZZcZabidYdVXijVa
HZaZXX^dcZ:Y^iVgZabidYdZciZgdZcZabZcBidYd
:Y^iVgbidYd
<jVgYVgbidYdPXdbdR
<jVgYVgXdccdbWgZcjZkd
<jVgYVgXdccdbWgZcjZkd
HZXgZVjcbidYdcjZkd
ZcZaY^hXd
HdWgZhXg^WZZabidYdVXijVa
Figura 2
Edicin de mtodo
52
Mtodos
Edicin de mtodos
N O TA
53
Mtodos
Estructura de los directorios de mtodos
54
HPCE1.MTH
ADC1.MTH
DAMETHOD.REG
LALS1.REG
AgilentSamplerDriver
1.RapidControl.xxx.x
ml
Mtodos
Qu sucede cuando se ejecuta un mtodo?
El cuadro de dilogo Lista de control del anlisis especifica las partes del mtodo que se van a ejecutar al iniciar un anlisis.
En Lista de control del anlisis hay ocho partes:
macro o comando de ejecucin previa,
adquisicin de datos,
anlisis de datos estndar,
mtodo de anlisis para una segunda seal (slo GC),
anlisis de datos personalizado,
guardar los datos GLP,
macro o comando post-anlisis, y
guardar una copia del mtodo con los datos (RUN.M).
Cuando se realiza un anlisis, se ejecutan las partes del mtodo especificadas
en el cuadro de dilogo Lista de control del anlisis.
N O TA
Tenga en cuenta que en el caso del modo "Desactivar creacin de carpeta nica" no se
generan ACQ.M y DA.M. Para obtener ms informacin, consulte Preferencias: ficha
Secuencia en la pgina 175.
55
Mtodos
Qu sucede cuando se ejecuta un mtodo?
:hiVYdYZ8]ZbHiVi^dc
>cnZXX^c
<jVgYVgGJC#BdeX^dcVa
<jVgYVg96#B
<jVgYVg68F#BedgYZ[ZXid
edgYZ[ZXid
:kVajVX^cYZYVidh
>cnZXX^cn[jcX^dcVb^ZcidYZa^chigjbZcid
9Vidheg^bVg^dh
[^X]ZgdXZggVYd
C^kZaZhYZZhiVYd
BVXgdedhiZg^dgVaVc{a^h^h
BVXgdegZk^VVaVc{a^h^h
EgZk^dVaVc{a^h^h
BidYdYZVc{a^h^h^c^X^VYdZcZabZcYZ8]ZbHiVi^dc
I^Zbed
Figura 3
56
Mtodos
Qu sucede cuando se ejecuta un mtodo?
Cuando se termina la adquisicin de datos, se guarda como ACQ.M una
copia del mtodo ejecutado para el fichero de datos de forma predeterminada.
Integracin
Los objetos del cromatograma o electroferograma de la seal se integran
segn se indica en el cuadro de dilogo Eventos de integracin.
Se determinan el inicio y el mximo del pico, el tiempo de retencin o
migracin y el final del pico.
Se definen lneas base debajo de cada pico para determinar la altura y el
rea final del pico.
Los resultados de integracin se incluyen en la lista Resultados de integracin.
57
Mtodos
Qu sucede cuando se ejecuta un mtodo?
Imprimir informe
Se genera un informe con la identidad y cantidad de los componentes detectados en el anlisis.
58
Mtodos
Qu sucede cuando se ejecuta un mtodo?
Estos datos se guardan slo si la funcin Save GLP Data est activada; para
activarla, seleccione la casilla de verificacin en Lista de control del anlisis.
Los datos GLP se pueden revisar, pero no editar, en el men Anlisis de datos
de ChemStation.
Guardar una copia del mtodo con los datos(Lista de control del
anlisis)
Se realiza despus de la adquisicin de los datos y slo si la opcin Adquisicin de datos est seleccionada en Lista de control del anlisis. Copia el mtodo actual al directorio de datos, denominado RUN.M
Guardar una copia del mtodo como DA.M con los datos
(ChemStation por defecto)
Segn los elementos marcados en la Run Time Checklist, se guarda como DA.M
una copia del mtodo actual ejecutado junto con el fichero de datos. Esto se
realiza con el anlisis del ltimo elemento marcado en la Run Time Checklist,
normalmente despus del Standard Data Analysis.
59
Mtodos
Resumen de la operacin del mtodo
60
Mtodos
Resumen de la operacin del mtodo
9 Se guarda una copia del mtodo con los datos (DA.M) - ChemStation por
defecto
61
62
Mtodos
Resumen de la operacin del mtodo
3
Adquisicin de datos
Definicin de la adquisicin de datos
Ficheros de datos
64
65
Monitores en lnea 67
Monitor de seales en lnea 67
Monitor de espectros en lnea 67
Libro de registro
68
Agilent Technologies
63
Adquisicin de datos
Definicin de la adquisicin de datos
Durante la adquisicin de datos, todas las seales adquiridas por el instrumento se convierten de seales analgicas a seales digitales en el detector. La
seal digital se transmite a ChemStation electrnicamente y se guarda en el
fichero de datos de la seal.
Los ficheros de datos disponibles (*.d) se pueden ver en ChemStation Explorer. Para que la navegacin sea rpida y sencilla, puede aadir ubicaciones
adicionales para ficheros de datos al rbol de seleccin de ChemStation Explorer utilizando la ficha Rutas del cuadro de dilogo Preferencias.
64
Adquisicin de datos
Ficheros de datos
Ficheros de datos
Ficheros de datos
Nombre
Description
*.CH
*.UV
Ficheros de datos espectrales UV. El nombre del fichero est compuesto por
el tipo de detector y el nmero de dispositivo (slo con detectores de
diodo-array y de fluorescencia).
REPORT.TXT,
REPORT.PDF
SAMPLE.MAC
LCDIAG.REG
ACQRES.REG
65
Adquisicin de datos
Ficheros de datos
Tabla 7
Ficheros de datos
Nombre
Description
GLPSAVE.REG
M_INTEV.REG
66
Adquisicin de datos
Monitores en lnea
Monitores en lnea
67
Adquisicin de datos
Libro de registro
Libro de registro
El libro de registro muestra los mensajes que genera el sistema analtico. Estos
mensajes pueden ser de error, del sistema o de eventos de un mdulo. El libro
de registro registra estos eventos aunque no se hayan mostrado. Para obtener
ms informacin acerca de un evento del libro de registro, haga doble clic en la
lnea correspondiente para mostrar un texto de ayuda descriptivo.
68
Adquisicin de datos
Informacin del estado
Estado de ChemStation
La ventana ChemStation Status muestra un resumen del estado del software
ChemStation.
Cuando se ejecuta un solo anlisis:
la primera lnea de la ventana ChemStation Status muestra el anlisis en
curso,
la segunda lnea de la ventana muestra el estado del mtodo actual, y
la tercera lnea muestra el nombre del fichero de datos primarios adems
del tiempo de anlisis en minutos (para los instrumentos GC, tambin se
muestran los ficheros de los inyectores delantero y posterior).
La ventana Instrument Status ofrece informacin sobre el estado de los mdulos instrumentales y detectores. Muestra el estado de cada componente y las
condiciones actuales cuando corresponda, por ejemplo, presin, gradiente y
flujo.
Barra de estado
La ventana Mtodo y Control de anlisis de la interfase grfica del usuario del
sistema ChemStation est compuesta por barras de herramientas y barras de
estado. La barra de estado contiene un campo de estado del sistema e informacin sobre el mtodo y la secuencia actualmente cargados. Si se modificaron
despus de cargarlos, aparecen marcados con una rueda dentada amarilla.
Para el mdulo Agilent Serie 1100/1200 para LC, el smbolo EMF amarillo
recuerda al usuario que se han excedido los lmites de utilizacin establecidos
para consumibles (por ejemplo, la lmpara).
69
Adquisicin de datos
Informacin del estado
Color
Status
gris
inactivo o desactivado
amarillo
no preparado
verde
listo
azul
en ejecucin
rojo
error
70
4
Integracin
Definicin de la integracin
Funcin de la integracin
73
74
75
Introduccin 77
Definicin de la lnea base inicial 78
Seguimiento de la lnea base 78
Asignacin de la lnea base 79
Identificacin de los puntos cardinales de un pico
Definicin de trminos 82
Puntos cardinales 82
Pico de disolvente 82
Hombro (frontal, trasero)
Pendiente 83
Principio de funcionamiento
80
83
84
Reconocimiento de picos 85
Anchura de pico 85
Filtros de reconocimiento de picos 86
Agrupamiento 88
El algoritmo de reconocimiento de picos
Clculos no gaussianos 92
Asignacin de la lnea base 95
Construccin de la lnea base por defecto
Inicio de la lnea base 96
Marcas de sealizacin 96
Final de la lnea base 96
Penetracin de la lnea base 97
89
95
Agilent Technologies
71
Integracin
Informacin del estado
Relacin pico/valle 98
Divisin tangencial 100
Picos no asignados 105
Cdigos de separacin de picos
106
110
117
72
Integracin
Definicin de la integracin
Definicin de la integracin
73
Integracin
Funcin de la integracin
Funcin de la integracin
74
Integracin
Algoritmos de integracin de ChemStation
75
Integracin
Algoritmos de integracin de ChemStation
procesamiento de divisin tangencial, incluidos comandos de definicin de
picos de disolvente, y
capacidad de definicin de tablas de eventos individuales para clculos de
divisin tangencial frontal/de cola para toda la seal cromatogrfica o electroferogrfica,
parmetros de correccin de la lnea base (independientes de la seal),
comandos de control del integrador que definen los rangos de tiempos de
retencin o migracin para la operacin de integracin,
la asignacin de hombros de pico mediante el uso de la segunda derivada o
clculo del grado de curvatura,
muestreo mejorado de puntos de datos no equidistantes para un mejor
comportamiento con ficheros de datos LC-DAD reconstruidos a partir de
espectros DAD.
76
Integracin
Introduccin
Introduccin
77
Integracin
Introduccin
78
Integracin
Introduccin
la curvatura de la lnea base en el punto de datos (determinada por los filtros basados en derivadas) debe estar por debajo de un valor crtico determinado por el valor actual del parmetro de sensibilidad de la pendiente.
El punto de lnea base inicial establecido al comienzo del anlisis se restablece
as de forma continua, a una velocidad determinada por la anchura de pico,
como el promedio mvil de los puntos de datos que se encuentran dentro de la
zona de lnea base durante un perodo de tiempo determinado por la anchura
de pico. El integrador realiza un seguimiento continuo de la lnea base y la restablece peridicamente para compensar la deriva hasta que detecta la pendiente ascendente de un pico.
EjcidYZYVidh
ejcidVXijVa
]dgVYZ^c^X^d
6cX]jgVYZe^XdZheZgVYV
'I
'I
'I
'I
Figura 4
gZhiVWaZX^b^ZcidYZaVacZVWVhZ
Lnea base
Al comienzo del anlisis, el valor del parmetro de lnea base se utiliza como
lnea base inicial. Si no hay un valor fijado, se utiliza el primer punto de datos.
El punto de lnea base se restablece entonces peridicamente de acuerdo con
la siguiente frmula:
79
Integracin
Introduccin
Se suman las reas durante un tiempo T (anchura de pico esperada). Ese
tiempo no puede ser inferior a un punto de datos. El proceso contina mientras exista una condicin de lnea base. Se adquieren asimismo medidas de
pendiente y curvatura. Si tanto la pendiente como la curvatura son inferiores
al umbral, se combinan entre s dos sumas de reas y se comparan con la lnea
base previa. Si el nuevo valor es inferior a la lnea base previa, pasa a reemplazar inmediatamente al valor antiguo. Si es superior al valor previo, se graba
como nuevo valor provisional de la lnea base y se confirmar si un valor ms
cumple los criterios de planaridad de la pendiente y la curvatura. Esta ltima
limitacin no tiene efecto cuando se permiten picos negativos. Durante la fase
de lnea base, es preciso realizar asimismo comprobaciones para examinar
disolventes con rpida elevacin de la seal; la elevacin puede ser demasiado
rpida para permitir la deteccin de una pendiente ascendente (para cuando
se confirma la pendiente ascendente, el criterio de disolvente puede no ser ya
vlido). En el momento inicial, el primer punto de datos constituye la lnea
base. Ese valor se reemplaza por el promedio calculado sobre 2T si la seal
est en base. La lnea base se restablece entonces a cada intervalo T (consulte
Figura 4 en la pgina 79).
Inicio
1 Pendiente y curvatura dentro del lmite: prosigue el seguimiento de la lnea
base.
2 Pendiente y curvatura por encima del lmite: posibilidad de un pico.
3 La pendiente permanece por encima del lmite: se reconoce un pico, se
define el punto cardinal correspondiente.
4 La curvatura se hace negativa: punto de inflexin frontal.
80
Integracin
Introduccin
Mximo
1 La pendiente pasa por cero y se hace negativa: mximo del pico, se define el
punto cardinal correspondiente.
2 La curvatura se hace positiva: punto de inflexin trasero.
Final
1 Pendiente y curvatura dentro del lmite: se aproxima el final del pico.
2 La pendiente y la curvatura se mantienen dentro del lmite: final del pico,
se define el punto cardinal correspondiente.
3 El integrador vuelve al modo de seguimiento de la lnea base.
81
Integracin
Definicin de trminos
Definicin de trminos
Puntos cardinales
b{m^bdYZae^Xd
ejcidYZ^c[aZm^c
ejcidYZacZVWVhZ
XddgYZcVYV]dg^odciVa
YZi^ZbedigVchXjgg^Yd
ejcidYZ^c[aZm^c
ejcidYZacZVWVhZ
XddgYZcVYVkZgi^XVaYZVaijgV
Figura 5
Puntos cardinales
Los puntos cardinales son los puntos elegidos por el integrador para definir y
cuantificar un pico. Se designan como puntos cardinales y se graban los puntos de lnea base, puntos de valle, mximos de pico y puntos de inflexin. A
cada punto cardinal le corresponde una coordenada horizontal de tiempo
transcurrido y una coordenada vertical de altura desde la lnea base, adems
de otros parmetros tales como tipo de pico, cdigos de separacin, valores de
inicio/final de picos potenciales y las correspondientes lecturas de altura,
rea y pendiente que el integrador utiliza para calcular las reas de pico.
Pico de disolvente
El pico de disolvente, generalmente un pico de gran tamao sin relevancia
analtica, no suele integrarse. No obstante, cuando hay pequeos picos de inters analtico con elucin cercana al pico de disolvente, por ejemplo en la cola
del mismo, es posible establecer condiciones de integracin especiales para
calcular sus reas corregidas teniendo en cuenta la contribucin de la cola del
pico de disolvente.
82
Integracin
Definicin de trminos
Pendiente
La pendiente de un pico, que denota el cambio de concentracin del componente en funcin del tiempo, se utiliza para determinar el inicio, el mximo y
el final del pico.
83
Integracin
Principio de funcionamiento
Principio de funcionamiento
EVg{bZigdh^c^X^VaZh
9Z[^c^X^cYZaV
acZVWVhZ^c^X^Va
>c^X^Va^oVX^c
HZ\j^b^ZcidngZhiVWaZ"
X^b^ZcidYZaVacZVWVhZ
>c^X^dYZa\gjedYZe^Xdh
HZ\j^b^ZcidYZaVacZVWVhZ
EVg{bZigdh
egd\gVbVYVh
>YZci^[^XVX^cYZaVh
XddgYZcVYVhYZe^Xd
9ZiZXX^cYZaV
acZVWVhZ
;^cYZa\gjedYZe^Xdh
9ZiZXX^cYZa\gjed
8dchigjXX^cYZ
acZVhWVhZ
9ZiZXX^c
h`^bbZghQmY*
6abVXZcVb^ZcidYZ
e^XdhZciVWaVYZe^Xdh
8VaXjaVgZhiVYhi^XVh
YZe^Xd
:kVajVX^cYZa\gjed
Figura 6
84
Integracin
Reconocimiento de picos
Reconocimiento de picos
Anchura de pico
Durante la integracin, se calcula la anchura de pico a partir del rea y la
altura del pico:
Anchura = rea/Altura
o, si los puntos de inflexin estn disponibles, a partir de la anchura entre los
puntos de inflexin.
=
;h
Gh
=[
V&
i&
Figura 7
=g
V'
V(
i'
i(
V)
i)
85
Integracin
Reconocimiento de picos
En el clculo de la anchura de pico de la figura, el rea total A es la suma de
las reas a1, a2, a3 y a4. Fs es la pendiente frontal en el punto de inflexin, Rs
es la pendiente trasera en el punto de inflexin. En caso de no localizarse
alguno de los puntos de inflexin, la anchura de pico se define como sigue:
Anchura = rea ajustada/Altura ajustada
El parmetro de anchura de pico controla la capacidad del integrador para
distinguir los picos del ruido de la lnea base. Para obtener buenos resultados,
la anchura de pico debe ser cercana a la anchura de los picos cromatogrficos
o electroferogrficos reales.
Hay tres modos de cambiar la anchura de pico:
antes del anlisis, el usuario puede especificar la anchura de pico inicial,
durante el anlisis, el integrador actualiza automticamente la anchura de
pico como corresponda para que coincida con los filtros de reconocimiento
de picos,
durante el anlisis, el usuario puede restablecer o modificar la anchura de
pico utilizando un evento programado en el tiempo.
Para obtener informacin acerca de las definiciones de anchura de pico utilizadas en los clculos de idoneidad del sistema, consulte la seccin Anchura
de pico en la pgina 85.
86
Filtro 1
Filtro 2
Filtro 3
Integracin
Reconocimiento de picos
87
Integracin
Reconocimiento de picos
Agrupamiento
El agrupamiento es el medio que el integrador utiliza para ensanchar continuamente los picos dentro del rango de efecto de los filtros de reconocimiento
de picos con el fin de mantener una buena selectividad.
Cuando los picos se ensanchan, el integrador no puede continuar aumentando
la anchura de pico de forma indefinida. Llegara un momento en que los picos
fueran tan anchos que no pudieran ser identificados por los filtros de reconocimiento. Para superar esa limitacin, el integrador agrupa los puntos de
datos entre s, estrechando en trminos prcticos el pico sin que el rea se vea
alterada.
Cuando se agrupan datos, los puntos de datos se agrupan en dos elevado a la
potencia de agrupamiento, o sea, sin agrupar = x1, agrupamiento realizado
una vez = x2, realizado dos veces = x4, etc.
El agrupamiento se realiza basndose en la velocidad de datos y la anchura de
pico. El integrador utiliza esos parmetros para fijar el factor de agrupamiento de modo que se obtenga el nmero de puntos de datos apropiado
Tabla 9 en la pgina 88.
El agrupamiento se realiza en potencias de dos en funcin de la anchura de
pico esperada u obtenida. El algoritmo de agrupamiento se resume a continuacin en Tabla 9 en la pgina 88.
Tabla 9
88
Criterios de agrupamiento
Filtro(s) utilizado(s)
Agrupamiento realizado
0 - 10 puntos de datos
Primero
Ninguno
8 - 16 puntos de datos
Segundo
Ninguno
12 - 24 puntos de datos
Tercero
Ninguno
16 - 32 puntos de datos
Segundo
Una vez
24 - 48 puntos de datos
Tercero
Una vez
32 - 96 puntos de datos
Tercero, segundo
Dos veces
Tercero, segundo
Tres veces
Integracin
Reconocimiento de picos
i&
AcZVWVhZ
i(
i*
EZcY^ZciZVhXZcYZciZ
i)
i&&
i&%
EZcY^ZciZYZhXZcYZciZ
i,
i-
i+
:migVXX^cYZae^Xd
i.
6abVXZcVb^Zcid
YZae^Xd
Figura 8
Reconocimiento de picos
89
Integracin
Reconocimiento de picos
t2
t3
t4
t5
Se ha abortado el pico o
Se ha restablecido la lnea base
t6
t7
t8
t9
90
t10
t11
Integracin
Reconocimiento de picos
Filtro 1
Filtro 2
Filtro 3
+8
+5
+3
+0
+2
+1
-8
-5
-3
-4
-2
-1
-0
-2
-1
91
Integracin
Reconocimiento de picos
Tabla 11
Filtro 1
Filtro 2
Filtro 3
+8
+5
+3
+0
+2
+1
-11
-7
-4
-28
-18
-11
-0
-2
-1
Clculos no gaussianos
Picos solapados
Los picos solapados se producen cuando un pico nuevo comienza antes de
encontrar el final de otro pico. La figura ilustra cmo trata el integrador los
picos solapados.
EjcidYZkVaaZ
Figura 9
92
Picos solapados
Integracin
Reconocimiento de picos
Hombros
Los hombros son picos no resueltos ubicados en el avance o el rastro de un
pico ms grande. Cuando hay un hombro presente, no existe un verdadero
valle en el sentido de una pendiente negativa seguida por otra positiva. Un
pico puede tener cualquier nmero de hombros frontales y/o traseros.
&*#**%
V
W
&*#)&%
&*#+.%
Figura 10
Hombros de pico
Los hombros se detectan a partir de la curvatura del pico, que viene dada por
la segunda derivada. Cuando la curvatura cae a cero, el integrador identifica
un punto de inflexin, como los puntos a y b en Figura 10 en la pgina 93.
Existe un posible hombro frontal cuando se detecta un segundo punto de
inflexin antes del mximo del pico. Si se confirma la presencia de un hombro, el punto de inicio del mismo se fija en el punto de mxima curvatura
positiva previo al punto de inflexin.
93
Integracin
Reconocimiento de picos
Existe un posible hombro trasero cuando se detecta un segundo punto de
inflexin antes del final o el valle del pico. Si se confirma la presencia de un
hombro, el punto de inicio del mismo se fija en el punto tangente desde el
punto inicial a la curva.
El tiempo de retencin o migracin se determina a partir del punto de mxima
curvatura negativa del hombro. Con un evento de integracin programado, el
integrador puede calcular tambin reas de hombro como picos normales con
lneas de cada verticales en los puntos de inflexin del pico que presenta el
hombro.
El rea del hombro se resta del pico principal.
Los hombros de pico pueden tratarse como picos normales utilizando un
parmetro de integracin programado.
94
Integracin
Asignacin de la lnea base
Una vez completado un grupo de picos y encontrada la lnea base, el integrador solicita al algoritmo de asignacin de la lnea base la asignacin de sta
mediante una tcnica de "jalonamiento". El algoritmo utiliza correcciones de
rea trapezoidal y altura proporcional para normalizar la lnea base y mantenerla lo ms baja posible. Entre los valores de entrada al algoritmo de asignacin de la lnea base se incluyen tambin parmetros obtenidos de los ficheros
de mtodo y datos que identifican el detector y la aplicacin y que el integrador utiliza para optimizar los clculos.
AcZVWVhZ
Figura 11
95
Integracin
Asignacin de la lnea base
Marcas de sealizacin
Las marcas de sealizacin identifican el inicio y el final de un pico. Sus posiciones vienen determinadas por las horas de inicio y final de pico almacenadas en la tabla de picos.
96
Integracin
Asignacin de la lnea base
Figura 12
97
Integracin
Asignacin de la lnea base
HZ\j^b^ZcidZhi{cYVg
YZaVacZVYZWVhZ
Figura 13
N O TA
HZ\j^b^ZcidYZaVacZV
YZWVhZh^ceZcZigVX^dcZh
El seguimiento de la lnea base (sin penetraciones) no est disponible para los picos de
disolvente con sus hombros y picos secundarios.
Relacin pico/valle
Este parmetro especificado por el usuario forma parte del modo de seguimiento avanzado de la lnea base. Se utiliza para decidir si dos picos que no
muestran separacin a nivel de la lnea base deben separarse utilizando una
lnea de cada vertical o una lnea base de valle. El integrador calcula la relacin entre la altura corregida por la lnea base del menor de los picos y la
altura corregida por la lnea base del valle. Cuando la relacin pico a valle es
inferior al valor especificado por el usuario, se utiliza una lnea de cada verti-
98
Integracin
Asignacin de la lnea base
cal; de lo contrario, se traza una lnea base desde la lnea base del inicio del
primer pico al valle y desde el valle a la lnea base del final del segundo pico
(comprese Figura 13 en la pgina 98 con Figura 14 en la pgina 99).
=&
='
=k
Figura 14
Relacin pico/valle
99
Integracin
Asignacin de la lnea base
&-#*'.
&-#*'.
&.#%+%
GZaVX^ce^Xd$kVaaZ
^c[Zg^dgV
kVadgZheZX^[^XVYdedgZajhjVg^d
Figura 15
&.#%+%
GZaVX^ce^Xd$kVaaZ
hjeZg^dgV
kVadgZheZX^[^XVYdedgZajhjVg^d
Divisin tangencial
La divisin tangencial es una forma de lnea base construida para picos que se
encuentran en las pendientes ascendente o descendente de otro pico. Cuando
est habilitada, hay cuatro modelos disponibles para el clculo de las reas de
pico adecuadas:
ajuste a una curva exponencial,
nueva divisin exponencial
divisin mediante lnea recta,
clculos de recta y exponencial combinados para obtener el mejor ajuste
(divisin estndar).
100
Integracin
Asignacin de la lnea base
&)#'.+
&)#(*,
&)#&))
Figura 16
Divisin exponencial
E^Xdeg^cX^eVa
&)#'.+
&)#(*,
E^XdhhZXjcYVg^dh
&)#&))
AcZVhYZXVYVkZgi^XVaZh
8jgkVYZY^k^h^cZmedcZcX^Va
AcZVWVhZYZae^Xdeg^cX^eVa
Figura 17
101
Integracin
Asignacin de la lnea base
&)#(*,
&)#&))
Figura 18
Divisiones estndar
El mtodo de clculo apropiado se elige para cada aplicacin particular; por
defecto, el mtodo elegido es una combinacin de clculos de curva exponencial y lnea recta para obtener el mejor ajuste.
El paso de un clculo exponencial a uno lineal se realiza de modo que no haya
discontinuidades abruptas en las alturas o las reas.
Cuando la seal se encuentra apreciablemente por encima de la lnea base,
el clculo para ajustar la cola es exponencial.
Cuando la seal se encuentra en la zona de lnea base, el clculo para ajustar la cola es una lnea recta.
Los clculos combinados se muestran como divisin exponencial o tangencial.
Criterios de divisin
Dos son los criterios que determinan si se va a utilizar una lnea de divisin
para calcular el rea de un pico secundario que eluye en el rastro de otro principal:
relacin de alturas para divisin de cola
102
Integracin
Asignacin de la lnea base
relacin de altura con respecto al valle
=e
=k
Figura 19
=X
Criterios de divisin
103
Integracin
Asignacin de la lnea base
B = factor de decaimiento de la funcin exponencial
To = momento correspondiente al inicio de la divisin exponencial
A = pendiente de la lnea base del pico principal
C = desplazamiento de la lnea base del pico principal
&(#.()
&)#'.+
&)#(*,
&)#&))
=d
Id
=W
6
8
Figura 20
8jgkVYZe^XdhZXjcYVg^d
XdggZ\^YV
Figura 21
104
Integracin
Asignacin de la lnea base
Figura 22
La divisin de picos frontales se trata del mismo modo que la de picos de cola,
utilizando los mismos modelos de divisin.
Los criterios de divisin son los siguientes:
relacin de alturas para divisin frontal
relacin de altura con respecto al valle
La relacin de altura con respecto al valle tiene el mismo valor para divisiones
tanto de picos frontales como de picos de cola (vase la seccin Relacin de
altura con respecto al valle); la relacin de alturas para divisin frontal se calcula del mismo modo que la relacin de alturas para divisin de cola (vase la
seccin Relacin de alturas para divisin de cola) pero puede tener un valor
diferente.
Picos no asignados
Con algunas construcciones de lnea base, hay pequeas reas que quedan por
encima de la lnea base y por debajo de la seal y que no forman parte de ningn pico reconocido. Por lo general, estas reas ni se miden ni se muestran. Si
se habilita la funcin de picos no asignados, dichas reas se miden y se muesFamiliarizacin con Agilent ChemStation
105
Integracin
Asignacin de la lnea base
tran como picos no asignados. El tiempo de retencin o migracin correspondiente a tales reas es el punto medio entre el inicio y el final del rea, tal
como se muestra en Figura 23 en la pgina 106.
%#-('
%#)-'
%#*-&
Figura 23
Picos no asignados
Caracteres 1 y 2
El primer carcter describe la lnea base al inicio del pico, mientras que el
segundo carcter describe la lnea base al final del pico.
B
106
Integracin
Asignacin de la lnea base
Carcter 3
D
Carcter 4
El cuarto carcter describe el tipo de pico:
S
Pico con divisin tangencial definido por una lnea base manual.
Pico no asignado.
107
Integracin
Medida del rea de pico
Figura 24
Integracin
Medida del rea de pico
para picos de valle a valle (VV), el rea por encima de la lnea base segmentada con lneas de cada verticales trazadas a partir de las marcas de sealizacin, como se muestra en Figura 25 en la pgina 109,
KK
Figura 25
para picos tangenciales (T), el rea por encima de la lnea base restablecida,
para picos de disolvente (S), el rea por encima de la extrapolacin horizontal desde el ltimo punto de lnea base encontrado y por debajo de la lnea
base restablecida asignada a picos tangenciales (T). Es posible que un pico
de disolvente produzca una elevacin de la seal demasiado lenta para el
reconocimiento del pico o que en medio del anlisis aparezca un grupo de
picos que el usuario considere que deben ser tratados como un disolvente
con una serie de picos montados. se suele ser el caso de un grupo de picos
solapados en el que el primer pico es mucho mayor que el resto. El tratamiento ms simple, el de la lnea de cada vertical, exagerara los picos posteriores al estar stos en realidad sobre la cola del primero. Forzando el
reconocimiento del primer pico como pico de disolvente, es posible dividir
de la cola el resto del grupo,
los picos negativos que se dan bajo la lnea base tienen un rea positiva,
como se muestra en Figura 26 en la pgina 110.
109
Integracin
Medida del rea de pico
gZVidiVaYZaVodcV"gZVedgYZWV_dYZaVacZVWVhZ2gZVXdggZ\^YV
Figura 26
110
Integracin
Eventos de integracin
Eventos de integracin
Eventos iniciales
Initial peak width establece el valor de anchura de pico que el integrador utiliza
internamente al comienzo del anlisis. Esta anchura de pico inicial se utiliza
para escalar el acumulador que detecta pendientes ascendentes, pendientes
descendentes y colas. El integrador actualiza la anchura de pico como sea
necesario durante el anlisis para optimizar la integracin. El usuario especifica la anchura de pico en unidades de tiempo correspondientes a la anchura a
media altura del primer pico esperado (excluido el pico de disolvente).
Slope sensitivity establece el nivel de sensibilidad para la deteccin de picos. Es
un parmetro que cambia en una escala lineal.
Height reject establece el umbral de rechazo del pico por la altura final. Los
picos con altura inferior al valor fijado como mnimo aceptable no se muestran.
Area reject establece el umbral de rechazo del pico por el rea final. Los picos
con rea inferior al valor fijado como mnimo aceptable no se muestran.
Cuando shoulder detection est habilitada, el integrador detecta los posibles
hombros utilizando la curvatura de pico dada por la segunda derivada.
Cuando la curvatura se hace cero, el integrador identifica ese punto de
inflexin como un posible hombro. Si el integrador identifica otro punto de
inflexin antes del mximo del pico, se ha detectado un hombro.
111
Integracin
Eventos de integracin
Anchura de pico
El parmetro anchura de pico controla la selectividad del integrador para distinguir los picos del ruido de la lnea base. Para obtener buenos resultados,
debe fijarse un valor cercano a la anchura a media altura de los picos cromatogrficos o electroferogrficos reales. El integrador actualiza la anchura de pico
como sea necesario durante el anlisis para optimizar la integracin.
112
Integracin
Eventos de integracin
Refinamiento de la integracin
Con frecuencia resulta til modificar los valores de sensibilidad de pendiente,
anchura de pico, rechazo por altura y rechazo por rea para personalizar as la
integracin.
Figura 27 en la pgina 114 muestra cmo afectan esos parmetros a la integracin de cinco picos de una seal.
113
Integracin
Eventos de integracin
GZX]VodedgVaijgV
AcZVWVhZ
(
&
*
6cX]jgVYZe^Xd
'
)
Figura 27
114
Pico 1
Pico 2
se rechaza por estar el rea por debajo del valor fijado para el rechazo por
rea.
Pico 3
Pico 4
no se integra al estar la altura de pico por debajo del valor fijado para el
rechazo por altura.
Pico 5
se rechaza por estar el rea por debajo del valor fijado para el rechazo por
rea.
Pico 6
Pico 7
se integra.
Integracin
Eventos de integracin
Tabla 12
Parmetro de integracin
Pico 1
Pico 2
Pico 3
Pico 4
Pico 5
Pico 7
Por
encima
Por
encima
Por
encima
Por
debajo
Por
encima
Por
encima
Por
encima
Por
debajo
Por
encima
Por
debajo
Por
debajo
Por
encima
Pico integrado
No
No
No
Eventos programados
El usuario puede utilizar eventos programados para personalizar la construccin de la lnea base de la seal cuando la construccin por defecto no resulte
apropiada. Dichos eventos pueden resultar tiles para sumar reas de pico
finales y para corregir aberraciones a corto y largo plazo de la lnea base. Para
obtener informacin adicional acerca de los parmetros de integracin, consulte la seccin Eventos iniciales en la pgina 111.
Integracin automtica
La funcin Autointegrate proporciona un punto de partida para el establecimiento de valores de los eventos iniciales. Eso resulta particularmente til
durante la implantacin de un nuevo mtodo. El usuario parte de una tabla de
eventos de integracin por defecto que no contiene eventos programados y
optimiza entonces los parmetros propuestos para uso general por la funcin
Integracin automtica.
Principios de funcionamiento
La funcin Autointegrate lee los datos cromatogrficos y calcula los valores
ptimos de los parmetros de integracin iniciales para cada seal del cromatograma.
El algoritmo examina un 1% al inicio y el final del cromatograma y determina
el ruido y la pendiente de esas zonas. El ruido se determina como 3 veces la
desviacin estndar de la regresin lineal dividida por la raz cuadrada del
115
Integracin
Eventos de integracin
porcentaje de puntos utilizados en la regresin. Los resultados se utilizan para
asignar valores apropiados de los parmetros de rechazo por altura y sensibilidad de pendiente para la integracin. El algoritmo asigna entonces un valor
temporal de anchura de pico dependiendo de la longitud del cromatograma,
utilizando un 0,5% para LC y del 0,3% al 0,2% para GC. Se fija en cero el parmetro de rechazo por rea inicial y se lleva a cabo una integracin de prueba. La
prueba se repite varias veces si es necesario, ajustndose en cada intento los
valores de los parmetros hasta conseguir detectar al menos 5 picos o hasta
que la integracin se lleve a cabo con un valor de rechazo por altura inicial de
0. De no cumplirse las condiciones citadas despus de 10 intentos, se da por
terminada la integracin de prueba.
Se examinan los resultados de la integracin y se ajusta la anchura de pico en
funcin de las anchuras de los picos detectados, sesgndose el clculo a favor
de los picos iniciales. Se utiliza la simetra de los picos detectados para incluir
en el clculo de la anchura de pico nicamente aquellos picos con simetra
entre 0,8 y 1,3. Si no se encuentran suficientes picos simtricos, esos lmites se
relajan para permitir una simetra mnima/1,5 y una simetra mxima1,5.
Se examina entonces la lnea base entre los picos para refinar los valores previos de rechazo por altura y sensibilidad de pendiente. El rechazo por rea se
fija en el 90% del rea mnima del pico ms simtrico de los detectados
durante la integracin de prueba.
El cromatograma se integra nuevamente utilizando esos valores finales de los
parmetros de integracin y los resultados de la integracin se almacenan.
116
Integracin
Integracin manual
Integracin manual
Integracin manual
Este tipo de integracin permite al usuario integrar determinados picos o grupos de picos. A excepcin del valor de rechazo por rea inicial, los eventos de
integracin del software se ignoran dentro del rango especificado para la integracin manual. Si uno o varios de los picos resultantes de la integracin
manual estn por debajo del umbral de rechazo por rea, esos picos se desechan. Los eventos de integracin manual utilizan valores de tiempo absoluto.
No se ajustan por la deriva de la seal.
La Manual Integration permite al usuario definir los puntos de inicio y final del
pico para despus incluir las reas recalculadas en las rutinas de cuantificacin e informes. Los picos integrados manualmente se etiquetan en los informes con el cdigo de separacin de picos M.
La Manual Integration ofrece las siguientes funciones:
Draw Baseline especifica dnde se van a trazar las lneas base para un pico o un
conjunto de picos. El usuario puede especificar tambin si se debe producir o
no la separacin automtica en los puntos de valle de los picos incluidos en el
rango dado.
Negative Peaks especifica cundo considerar las reas por debajo de la lnea
base como picos negativos. El usuario puede especificar tambin si se debe
producir o no la separacin automtica en los puntos de valle de los picos
incluidos en el rango dado.
Tangent Skim calcula las reas de picos divididos tangencialmente de un pico
principal. El rea del pico dividido tangencialmente se resta del rea del pico
principal.
Split Peak especifica el punto donde dividir un pico con una lnea de cada vertical.
Delete Peak(s) elimina uno o varios picos de los resultados de integracin.
117
Integracin
Integracin manual
118
Integracin
Integracin manual
119
Integracin
Integracin manual
120
5
Cuantificacin
Definicin de la cuantificacin
Clculos de cuantificacin
122
123
124
126
127
128
Clculo de % Norm
131
Agilent Technologies
121
Cuantificacin
Definicin de la cuantificacin
Definicin de la cuantificacin
Una vez integrados e identificados los picos, el paso siguiente del anlisis es la
cuantificacin. La cuantificacin utiliza el rea o la altura de pico para determinar la concentracin de un compuesto en una muestra.
Un anlisis cuantitativo incluye varios pasos que se resumen a continuacin:
Conocimiento del compuesto que se analiza.
Establecimiento de un mtodo para analizar muestras que contengan este
compuesto.
Anlisis de una o varias muestras que contengan una o varias concentraciones conocidas del compuesto para obtener la respuesta debida a dicha concentracin.
Alternativamente, se puede analizar una serie de estas muestras con distintas concentraciones de los compuestos de inters si el detector genera una
respuesta no lineal. Este proceso se conoce como calibracin multinivel.
Anlisis de la muestra que contiene una concentracin desconocida del
compuesto para obtener la respuesta debida a la concentracin desconocida.
Comparacin de la respuesta de la concentracin desconocida con la respuesta de la concentracin conocida para determinar la cantidad del compuesto que est presente.
Para obtener una comparacin vlida para la respuesta de muestra desconocida a la de la muestra conocida, se deben adquirir y procesar los datos en
condiciones idnticas.
122
Cuantificacin
Clculos de cuantificacin
Clculos de cuantificacin
123
Cuantificacin
Factores de correccin
Factores de correccin
Multiplicador
El multiplicador se utiliza en cada frmula de clculo para multiplicar el resultado de cada componente. El multiplicador se puede utilizar para convertir
unidades en cantidades expresadas.
Factor de dilucin
El factor de dilucin es un nmero por el que se multiplican todos los resultados calculados antes de imprimir el informe. Se puede utilizar para cambiar la
escala de los resultados o corregir los cambios de una composicin de muestra
durante el trabajo previo al anlisis. Tambin se puede utilizar el factor de
dilucin para cualquier otra finalidad que requiera la utilizacin de un factor
constante.
124
Cuantificacin
Factores de correccin
Cantidad de muestra
Si se seleccionan los clculos % de ESTD o % de ISTD, los informes de ESTD e
ISTD ofrecen valores relativos en lugar de absolutos, es decir, la cantidad de
cada componente se expresa como un porcentaje de la cantidad de muestra.
La cantidad de muestra se utiliza en los informes de % de ESTD y % de ISTD
para convertir la cantidad absoluta de los componentes analizados en valores
relativos dividiendo por el valor especificado.
125
Cuantificacin
Procedimientos de clculo no calibrados
% de rea y % de altura
El procedimiento de clculo de % de rea proporciona el rea de cada pico del
anlisis como un porcentaje del rea total de todos los picos del anlisis. El %
de rea no requiere una calibracin previa y no depende de la cantidad de
muestra inyectada dentro de los lmites del detector. No se utiliza ningn factor de respuesta. Si todos los componentes responden del mismo modo al
detector y son eluidos, el % de rea ofrecer una aproximacin adecuada de
las cantidades relativas de los componentes.
El % de rea se utiliza por rutina cuando los resultados cualitativos son de
inters y para obtener informacin a fin de crear la tabla de calibracin necesaria para otros procedimientos de calibracin.
El procedimiento de clculo de % de altura proporciona la altura de cada pico
del anlisis como un porcentaje de la altura total de todos los picos del anlisis.
El multiplicador y el factor de dilucin del cuadro de dilogo Calibration Settings o Sample Information, o bien de Sequence Table no se aplican en el clculo
del % de rea o de altura.
126
Cuantificacin
Procedimientos de clculo calibrados
Los procedimientos de clculo de estndar externo o ESTD (External Standard), de normalizacin y el clculo de estndar interno o ISTD (Internal Standard) requieren factores de respuesta y, por lo tanto, una tabla de calibracin.
En la tabla de calibracin se especifica la conversin de respuestas en las unidades seleccionadas mediante el procedimiento seleccionado.
127
Cuantificacin
Clculo ESTD
Clculo ESTD
donde:
Responsex es la respuesta del pico x
RFx es el factor de respuesta del componente x, que se calcula del modo
siguiente:
128
Cuantificacin
Clculo ESTD
M es el multiplicador.
D es el factor de dilucin.
GZhejZhiV
G;m
GZhejZhiVm
8Vci^YVYm
Figura 28
8Vci^YVY
Factor de respuesta
donde:
La cantidad absoluta de x se calcula tal como se muestra ms arriba en el
clculo de ESTD.
129
Cuantificacin
Clculo ESTD
La cantidad de muestra se obtiene del cuadro de dilogo Informacin de
muestra o Configuracin de calibracin para anlisis individuales. Si la cantidad de la muestra es cero, se calcular el ESTD.
130
Cuantificacin
Clculo de % Norm
Clculo de % Norm
donde:
Respuestax
RFx
es el factor de respuesta,
(Respuesta RF)
es el multiplicador,
es el factor de dilucin.
131
Cuantificacin
Clculo ISTD
Clculo ISTD
El procedimiento ISTD elimina los inconvenientes del mtodo ESTD aadiendo una cantidad conocida de un componente, que sirve como factor de normalizacin. Este componente, el estndar interno, se aade tanto a las muestras
de calibracin como a las desconocidas.
El software recupera los factores de respuesta apropiados obtenidos de una
calibracin anterior almacenada en el mtodo. El software calcula las concentraciones de componentes mediante la concentracin y las reas de pico o
alturas del estndar interno del anlisis.
El compuesto utilizado como estndar interno debe ser similar al compuesto
calibrado, tanto qumicamente como en su tiempo de retencin/migracin,
pero debe ser cromatogrficamente distinguible.
Tabla 13
Procedimiento ISTD
Ventajas
Inconvenientes
132
Cuantificacin
Clculo ISTD
En una calibracin ISTD de dos anlisis, el clculo de la relacin de cantidad
corregida de un determinado compuesto de una muestra desconocida se realiza en las fases siguientes:
Anlisis 1: Calibracin
1 Los puntos de calibracin se crean calculando una relacin de cantidad y
una relacin de respuesta para cada nivel de un pico determinado de la
tabla de calibracin.
La relacin de cantidad es la cantidad del compuesto dividida por la cantidad del estndar interno a este nivel.
La relacin de respuesta es el rea del compuesto dividida por el rea o la
altura del estndar interno a este nivel.
2 Una ecuacin para la curva que pasa por los puntos de calibracin se calcula utilizando el tipo de ajuste de curva especificado en el cuadro de dilogo Configuracin de calibracin o Curva de calibracin.
GZaVX^cYZgZhejZhiV
G;m
GZaVX^cYZXVci^YVY
Figura 29
Relacin de cantidad
133
Cuantificacin
Clculo ISTD
donde:
RFx es el factor de respuesta para el compuesto x.
La cantidad real de ISTD es el valor indicado en el cuadro de dilogo Configuracin de calibracin o Informacin de muestra para el estndar interno aadido a la muestra desconocida.
M es el multiplicador.
D es el factor de dilucin.
Si se selecciona el tipo de informe % de ISTD, se utilizar la ecuacin siguiente
para calcular la cantidad relativa (%) del componente x:
134
Cuantificacin
Clculo ISTD
135
136
Cuantificacin
Clculo ISTD
6
Identificacin de picos
Definicin de la identificacin de picos
Reglas de asignacin de picos
138
139
142
144
147
Agilent Technologies
137
Identificacin de picos
Definicin de la identificacin de picos
Esta funcin identifica a los componentes de una muestra desconocida basndose en sus caractersticas cromatogrficas o electroferogrficas, determinadas por el anlisis de una muestra de calibracin bien definida.
La identificacin de estos componentes es un paso necesario en la cuantificacin si el mtodo analtico la requiere. Las caractersticas de la seal de cada
componente de inters se guardan en la tabla de calibracin del mtodo.
La funcin del proceso de identificacin de picos es comparar cada pico de la
seal con los picos guardados en la tabla de calibracin.
La tabla de calibracin contiene los tiempos de retencin o migracin esperados de los componentes de inters. Un pico que coincida con el tiempo de
retencin o migracin de uno de los picos de la tabla de calibracin recibe los
atributos de ese componente, por ejemplo, el nombre y el factor de respuesta.
Los picos que no coinciden con ninguno de los picos de la tabla de calibracin
se clasifican como desconocidos. El proceso se controla mediante:
el tiempo de retencin o migracin en la tabla de calibracin para los picos
designados como picos de referencia de tiempo,
las ventanas del tiempo de retencin o migracin especificadas para los
picos de referencia,
los tiempos de retencin o migracin en la tabla de calibracin para los
picos calibrados que no son picos de referencia de tiempo,
la ventana del tiempo de retencin o migracin especificada para estos
picos que no son de referencia, y
la presencia de otros picos de cualificacin en la relacin correcta.
138
Identificacin de picos
Reglas de asignacin de picos
139
Identificacin de picos
Tipos de identificacin de picos
Cualificadores de pico
Adems de identificar picos por su tiempo de retencin o migracin, pueden
utilizarse cualificadores de picos para obtener resultados ms precisos. Si ms
de un pico aparece en una ventana de tiempo de retencin o migracin, deben
utilizarse los cualificadores para identificar el compuesto correcto.
140
Identificacin de picos
Tipos de identificacin de picos
Lmites de cantidad
Los lmites de cantidad que se definen en el cuadro de dilogo Detalles de
compuesto se utilizan para cualificar la identificacin de los picos. Si la cantidad del compuesto identificado est dentro de los lmites, la identificacin del
pico se indica en el informe.
141
Identificacin de picos
Tiempo de retencin o migracin absoluto
E^Xd'
E^Xd(
E^Xd)
KZciVcVeVgVe^Xd'
Figura 30
142
Identificacin de picos
Tiempo de retencin o migracin absoluto
ventana de picos que no son de referencia, que se aplican a todos los dems
picos calibrados, y
valores de ventana especficos para componentes individuales que se establecen en el cuadro de dilogo Compound Details.
Los valores por defecto de estas ventanas se introducen en el cuadro de dilogo Configuracin de calibracin. La anchura a ambos lados del tiempo de
retencin o migracin que define la ventana de asignacin de picos es la suma
de las ventanas absoluta y porcentaje.
Una ventana del 5% significa que el pico debe tener un tiempo de retencin o
migracin por debajo del 2,5% y por encima del 2,5% del tiempo de retencin
calibrado para ese pico. Por ejemplo, un pico con un tiempo de retencin o
migracin de 2,00 en el anlisis de calibracin debe aparecer entre 1,95 y 2,05
minutos en los anlisis siguientes.
Por ejemplo, una ventana absoluta de 0,20 minutos y una relativa del 10% producen una ventana de tiempo de retencin o migracin de entre 1,80 y 2,20
minutos.
1,80 min = 2,00 min - 0,10 min (0,20 min/2) - 0,10 min (10% de 2,00 min).
2,20 min = 200 min + 0,10 min (0,20 min/2) + 0,10 min (10% de 2,00 min).
143
Identificacin de picos
Tiempos de retencin/migracin corregidos
144
Identificacin de picos
Tiempos de retencin/migracin corregidos
N O TA
El algoritmo de correccin del tiempo puede fallar si los tiempos de retencin de varios
picos de referencia estn demasiado prximos entre s y no se distribuyen en el tiempo
total del anlisis.
145
Identificacin de picos
Cualificadores de pico
Cualificadores de pico
Adc\^ijYYZdcYV
Figura 31
Cualificadores de pico
146
Identificacin de picos
Cualificadores de pico
Correlacin de la seal
Correlacin de la seal significa que dos picos medidos en seales de detector
diferentes en una ventana de tiempo definido estn asignados al mismo compuesto. La ventana de correlacin de la seal se puede controlar con el parmetro SignalCorrWin en la tabla QuantParm del registro _DaMethod. La correlacin
de seales se desactiva cuando se ajusta la ventana de correlacin a 0,0 minutos (consulte la Gua de Programacin de Macros para ms informacin).
Cuando est desactivada la correlacin de la seal, los picos que eluyen al
mismo tiempo de retencin/migracin se tratan como componentes diferentes.
La ventana de correlacin de la seal por defecto para datos LC, CE, CE/MS y
LC/MS es 0,03 minutos y para datos GC es 0,0 minutos.
147
Identificacin de picos
Cualificadores de pico
Los picos del cualificador pueden calibrarse del mismo modo que los compuestos objetivo. El usuario no necesita especificar la relacin de cualificador
esperada. La relacin de cualificador esperada se calcula de forma automtica:
ambos se miden en el tiempo de retencin del compuesto.
El parmetro QualTolerance define el rango aceptable de la relacin del cualificador, por ejemplo, 20%.
La tolerancia es un porcentaje absoluto y puede ajustarse en la interfase de
usuario de la tabla de calibracin (Detalles de identificacin).
Para calibraciones multinivel, ChemStation calcula una tolerancia de cualificador mnima basada en las relaciones del cualificador medidas en cada nivel
de calibracin. La tolerancia mnima del cualificador se calcula con la ecuacin siguiente:
148
Identificacin de picos
El proceso de identificacin
El proceso de identificacin
149
Identificacin de picos
El proceso de identificacin
150
7
Calibracin
Definicin de trminos
152
Tabla de calibracin
153
Curva de calibracin
154
Muestras desconocidas
156
164
165
Recalibracin 166
Definicin de la recalibracin 166
Por qu recalibrar? 166
Recalibracin manual 166
Recalibraciones con suma de picos 167
Opciones de recalibracin 167
Formas de recalibrar 168
Recalibracin de picos no identificados 168
Agilent Technologies
151
Calibracin
Definicin de trminos
Definicin de trminos
Calibracin
La calibracin es el proceso de determinar los factores de respuesta que se utilizan para calcular las concentraciones absolutas de componentes mediante la
inyeccin de estndares de calibracin especialmente preparados. La tabla de
calibracin se utiliza tambin para la identificacin. Consulte Identificacin
de picos en la pgina 137.
Compuesto
Nivel de calibracin
El nivel de calibracin comprende los puntos de calibracin de una concentracin de muestras de calibracin. En una calibracin multiseal, los puntos de
calibracin pueden distribuirse entre varias seales.
Punto de calibracin
Muestra de calibracin
152
Calibracin
Tabla de calibracin
Tabla de calibracin
153
Calibracin
Curva de calibracin
Curva de calibracin
GZhejZhiV
I^Zbedb^c
Figura 32
8Vci^YVYc\$a
El coeficiente de correlacin se muestra con el grfico de la curva de calibracin. El coeficiente de correlacin es la raz cuadrada del coeficiente de regresin y proporciona la medida del ajuste de la curva de calibracin entre los
puntos de datos. El valor del coeficiente se da a tres cifras decimales en el
rango:
0,000 a 1,000
donde:
0,000 = no hay ajuste
1,000 = ajuste perfecto
154
Calibracin
Curva de calibracin
Para cada nivel de calibracin, se muestra el resto relativo. que se calcula con
la siguiente frmula:
donde:
relRES = porcentaje de resto relativo
La respuesta calculada representa el punto de la curva de calibracin.
La desviacin estndar residual, que se imprime en algunos informes y
cuando se calculan las curvas y tabla de calibracin de la impresin utiliza la
siguiente frmula:
donde:
rResSTD = desviacin estndar residual
Respcalibratedi = respuesta calibrada del punto i
Respcalculatedi = respuesta calculada del punto i
n = nmero de puntos de calibracin
155
Calibracin
Muestras desconocidas
Muestras desconocidas
Una muestra desconocida es una muestra que contiene una cantidad desconocida de un compuesto para cuantificar.
Para descubrir qu cantidad de compuesto hay en la muestra desconocida, es
necesario:
crear una curva de calibracin para el compuesto,
inyectar una porcin alcuota de la muestra desconocida y analizarla del
mismo modo que la muestra de calibracin,
determinar la respuesta a partir de la seal, es decir, el rea o la altura del
pico causada por la cantidad desconocida de compuesto y
utilizar la curva de calibracin para calcular la cantidad de compuesto existente en la muestra desconocida.
Por ejemplo, si el rea del pico de la muestra desconocida es 500, se puede
determinar que la cantidad es 5 ng/l utilizando la curva de calibracin que se
muestra en Figura 33 en la pgina 156.
GZhejZhiV
GZhejZhiV
gZV2*%%
GZhejZhiVYZ
YZhXdcdX^Yd
2*%%
I^Zbedb^c
Figura 33
156
8Vci^YVYYZ
YZhXdcdX^Yd
2c\$a
8Vci^YVYc\$a
Calibracin
Tipos de calibracin
Tipos de calibracin
8jgkVYZXVa^WgVX^c
&%
8dcXZcigVX^cPc\$aR
Figura 34
157
Calibracin
Tipos de calibracin
Para obtener resultados cuantitativos precisos, la curva de calibracin debe
tener al menos dos niveles. Estos niveles tendran que agrupar las cantidades
que se esperan encontrar en las muestras desconocidas.
GZhejZhiV
&%%%
8jgkVYZXVa^WgVX^c
&%%
&
8dcXZcigVX^cPc\$aR
Figura 35
&%
Lmites de cantidad
ChemStation le permite definir los rangos de cuantificacin vlidos en trminos de cantidades absolutas de cada compuesto.
Calibracin multinivel
Se puede utilizar la calibracin multinivel cuando no sea lo suficientemente
exacta como para asumir que un componente tiene una respuesta lineal o confirmar la linealidad del rango de calibracin. Cada nivel de calibracin corresponde a una muestra de calibracin con una concentracin particular de
componentes. Las muestras de calibracin se prepararn de forma que la concentracin de cada componente vare dentro del rango de concentraciones
158
Calibracin
Tipos de calibracin
&%%%
*%%
&%%
&
Figura 36
*
&%
8dcXZcigVX^cPc\$aR
La tabla de calibracin correspondiente, que es la tabulacin de la informacin utilizada para generar esta curva, puede parecer similar a la mostrada en
Tabla 14 en la pgina 159.
Tabla 14
Tabla de calibracin
Nivel
Cantidad (ng/l)
100
500
10
1000
En este ejemplo, las muestras de calibracin utilizadas para generar los tres
niveles se han identificado como 1, 2 y 3.
Familiarizacin con Agilent ChemStation
159
Calibracin
Tipos de calibracin
Rangos de calibracin
Cada calibracin multinivel es vlida para el rango de concentraciones utilizadas en las muestras de calibracin. La mejor aproximacin es la extrapolacin
de una curva de calibracin, especialmente si no es lineal. El rango de calibracin de cada componente puede definirse en el cuadro de dilogo Detalles de
compuesto. Cada entrada de ese compuesto puede expresarse como lmites
inferiores y superiores. Si se exceden estos lmites, se anota en el informe.
Ajuste no lineal
En algunos casos, la respuesta del detector a los cambios en la concentracin
de muestra no es lineal. Para estos tipos de anlisis, no es apropiado el mtodo
de calibracin de regresin lineal y habra que utilizar un clculo de la calibracin multinivel.
160
Calibracin
Tipos de calibracin
incluir el origen,
forzar el origen, o
conectar el origen.
8Vci^YVYc\$a
Figura 37
161
Calibracin
Tipos de calibracin
Se pueden seleccionar las siguientes opciones de ponderacin:
Peso
Descripcin
Igual
Lineal (Ctd.)
Lineal (Rpta.)
Cuadrtico (Ctd.)
Cuadrtico (Rpta.) Un punto de calibracin con la respuesta x tiene una ponderacin 1/y2
normalizada a la respuesta ms pequea de forma que el factor de peso mayor
es 1. La normalizacin se calcula multiplicando el peso con la respuesta ms
pequea. Por ejemplo, el peso de un punto de calibracin con la respuesta y es
(1/y) b donde b es la respuesta correspondiente a la cantidad menor del
compuesto calibrado preparado en los estndares de calibracin.
N Calibraciones
162
Calibracin
Tipos de calibracin
163
Calibracin
Calibracin de grupo
Calibracin de grupo
La calibracin de grupo puede aplicarse a compuestos en los que no se conocen las concentraciones de forma individual, sino que se conoce la suma de
concentraciones del grupo de compuestos. Un ejemplo son los ismeros para
los que se calibran los grupos completos de compuestos. Para ello, se utilizan
las siguientes frmulas:
Calibracin
donde:
ConcAB es la concentracin del grupo de compuestos formada por un compuesto A y uno B
RespuestaA es el rea o altura de un compuesto A
RFA es el factor de respuesta
Para compuestos pertenecientes a un grupo de compuestos se asumen factores de respuesta iguales:
Por tanto, la concentracin de un compuesto perteneciente a un grupo se calcula del siguiente modo:
164
Calibracin
Suma de picos
Suma de picos
N O TA
Es necesario crear una tabla de calibracin para un anlisis antes de crear la tabla de suma
de picos.
165
Calibracin
Recalibracin
Recalibracin
Definicin de la recalibracin
La recalibracin es el proceso utilizado para actualizar un nivel de una curva
de calibracin. Cuando se recalibra se analiza otra muestra que contiene los
mismos compuestos de calibracin que la original y, lo ms importante, la
misma cantidad de stos. Cuando se analiza la muestra de calibracin, se
obtienen los factores de respuesta y los tiempos de retencin/migracin actualizados. Puede elegirse realizar la media de los factores de respuesta de un
nmero determinado de anlisis de calibracin de forma que los factores de
respuesta se ponderen por igual.
Por qu recalibrar?
La mayora de las calibraciones tienen una vida limitada debido a los cambios
en la cromatografa. La recalibracin es necesaria para mantener la exactitud
de los anlisis. Por ejemplo, se ha creado una tabla de calibracin para el compuesto cafena que se usa cuando es necesario cuantificar muestras que contienen cafena. En algn momento ser necesario reemplazar la
columna/capilar. Aunque la columna/capilar se reemplace con una exactamente del mismo tipo, no se comportar exactamente de la misma manera que
la columna/capilar anterior cuando se cre por primera vez la tabla de calibracin para la cafena. Por tanto, para asegurar la coherencia, se deben recalibrar los niveles de la tabla de calibracin antes de utilizar la nueva
columna/capilar para analizar las muestras que contengan cantidades desconocidas de cafena. De este modo se cuantifican muestras analizadas bajo las
mismas condiciones de sistema.
Recalibracin manual
Puede introducir manualmente la informacin de calibracin del pico y normalizar la tabla de calibracin con la opcin Configuracin manual del cuadro
de dilogo Nueva tabla de calibracin. Generalmente, se produce un nuevo
166
Calibracin
Recalibracin
Opciones de recalibracin
Existen diferentes formas de actualizar las respuestas en la tabla de calibracin con los nuevos datos de calibracin.
Promedio
El promedio de los anlisis de calibracin se calcula con la siguiente frmula:
Promedio flotante
Se calcula la media ponderada de los anlisis de calibracin. El peso actualizado se fija en el cuadro de dilogo Configuracin de recalibracin.
167
Calibracin
Recalibracin
Sustituir
Los nuevos valores de respuesta reemplazan a los anteriores.
Formas de recalibrar
La recalibracin se puede efectuar de dos formas con el software ChemStation. Puede recalibrar de forma interactiva o automtica durante una secuencia de anlisis automatizados. En la recalibracin interactiva el proceso de
recalibracin se realiza utilizando el software ChemStation despus de inyectar una o varias muestras de calibracin. En la recalibracin con secuencia se
debe especificar cundo se llevar a cabo el proceso, pero la recalibracin en
s la sigue realizando el software de automatizacin. Para obtener ms informacin, consulte Recalibracin automtica en la pgina 192.
Si desea informacin sobre cmo realizar la recalibracin con el software, consulte el apartado Cmo... de la ayuda.
Sin recalibracin
Si un pico de la tabla de calibracin no se puede identificar en los resultados
de integracin, se aborta la calibracin. Si esto sucede en una secuencia, tambin se aborta la secuencia.
Recalibracin parcial
Esta funcin permite la recalibracin slo de los picos identificados. Si faltan
picos, no se aborta la calibracin pero se anota en el informe que faltan picos.
168
Calibracin
Recalibracin
169
170
Calibracin
Recalibracin
8
Automatizacin
Definicin de la automatizacin
173
174
175
177
178
179
181
184
185
Estructura del fichero de datos de la secuencia (Activar creacin de carpeta nica) 187
Asignacin de nombres a ficheros de datos en una secuencia 188
Asignacin automtica de nombre al fichero de datos durante una
secuencia 188
Introduccin manual de nombres de ficheros de datos 189
Operacin postsecuencia 190
Tiempo de espera para instrumento no listo (slo LC y CE)
Agilent Technologies
190
171
Automatizacin
Recalibracin
Tiempo de espera (slo LC y CE)
Recalibracin automtica
191
192
193
196
197
198
199
203
206
172
Automatizacin
Definicin de la automatizacin
Definicin de la automatizacin
173
Automatizacin
Definicin de una secuencia o plantilla de secuencia
174
Automatizacin
Preferencias: ficha Secuencia
En la ficha Secuencia, el usuario puede escoger dos modelos de almacenamiento de datos diferentes. Estos modos definen la forma en que los datos de
la secuencia se almacenan en ChemStation.
175
Automatizacin
Preferencias: ficha Secuencia
176
N O TA
N O TA
Automatizacin
Parmetros de secuencia
Parmetros de secuencia
N O TA
177
Automatizacin
Tabla de secuencias
Tabla de secuencias
La tabla de secuencias determina los mtodos que se utilizan para analizar los
viales de muestra y el orden en el que se analizan. Esta tabla tambin contiene
informacin de cada muestra, incluyendo el nombre, los parmetros de cuantificacin y los parmetros de recalibracin.
El cuadro del grupo de inyectores se muestra en los instrumentos que admiten
muestreo doble (GC). Si selecciona Delante o Atrs se muestran las lneas de la
tabla de secuencia y el estado del inyector en ese momento.
Para describir las columnas de la tabla y el modo en que interactan con la
informacin almacenada con el mtodo, consulte la ayuda en lnea.
178
Automatizacin
Creacin de secuencias(Secuencias y plantillas de secuencias)
179
Automatizacin
Creacin de secuencias(Secuencias y plantillas de secuencias)
180
Automatizacin
Uso de secuencias (secuencias y plantillas de secuencias)
Muestras prioritarias
Se puede pausar una secuencia que est siendo analizada cuando se haya finalizado el mtodo actual para permitir el anlisis de una muestra prioritaria
por el mismo o por otro mtodo. Despus, la secuencia se puede reanudar y
contina con la muestra en la que se paus.
181
Automatizacin
Uso de secuencias (secuencias y plantillas de secuencias)
182
Automatizacin
Uso de secuencias (secuencias y plantillas de secuencias)
Figura 38
183
Automatizacin
Archivo de registro de secuencias
Un archivo de registro de secuencias indica qu ha sucedido durante el anlisis de secuencias. Resulta til para identificar cuando se producen errores si la
secuencia se analiza de forma desatendida o por la noche. El nombre del
archivo de registro tiene siempre extensin .log. El archivo de registro se
encuentra en el directorio en el que se almacenan los datos de la secuencia.
184
Automatizacin
Qu ocurre cuando se analiza una secuencia?
185
Automatizacin
Qu ocurre cuando se analiza una secuencia?
Durante todo el proceso, ChemStation realiza el seguimiento del progreso
de la secuencia en tiempo real y produce un fichero de registro de la
secuencia.
:hiVYdYZ8]ZbHiVi^dc
BVXgdedhiZg^dgVaVc{a^h^h
>cnZXX^c
:kVajVX^cYZYVidh
>cnZXX^cn
[jcX^dcVb^ZcidYZa^chigjbZcid
:hiVYd
c^kZaZh
BVXgdegZk^VVaVc{a^h^h
8Vg\VgbidYd
>c^X^VghZXjZcX^V
Figura 39
186
;^X]ZgdYZYVidhh^cegdXZhVg
XZggVYd
Estado de la secuencia
Automatizacin
Estructura del fichero de datos de la secuencia (Activar creacin de carpeta nica)
BidYdhji^a^oVYdhZc
aVhZXjZcX^V
BidYdYZVYfj^h^X^c
BidYdYZVc{a^h^hYZYVidh
8dciZcZYdgYZYVidhYZhZXjZcX^V
;^X]ZgdYZadiZh
GZ\^higdYZhZXjZcX^V
EaVci^aaVYZhZXjZcX^V
Figura 40
187
Automatizacin
Asignacin de nombres a ficheros de datos en una secuencia
Se puede asignar nombres a ficheros de datos en una secuencia de las siguientes formas:
automtica,
manual o
prefijo/contador.
Anlisis en blanco
Por ejemplo NV--0499.D
donde:
NV no se refiere a ningn vial.
- es un guin de separacin.
0499 es el anlisis en blanco 99 de la lnea 4 de la secuencia.
188
Automatizacin
Asignacin de nombres a ficheros de datos en una secuencia
Contador
long
000001
long000001
longname
000001
longname000001
testwithalongna
testwithalongna1
189
Automatizacin
Operacin postsecuencia
Operacin postsecuencia
Es posible especificar qu ocurre cuando se finaliza una secuencia en una ejecucin normal o cuando se produce un error en ChemStation durante la operacin de la secuencia. Para la operacin LC, esto se realiza activando la
casilla de verificacin Cmd/Macro postsecuencial de los parmetros de la
secuencia, donde puede elegir entre:
Configurar el sistema en estado STANDBY, en el que la bomba y la lmpara
estn desactivadas.
Configurar el sistema en estado LAMPOFF, en el que todas las lmparas
estn apagadas (slo LC y CE).
Configurar el sistema en estado PUMPOFF en el que todas las bombas estn
apagadas (slo LC y CE).
Utilizar la macro SHUTDOWN o modificar SHUTDOWN.MAC para determinar una operacin concreta.
Por ejemplo, si desea apagar el sistema antes de finalizar una secuencia. La
macro SHUTDOWN podra utilizarse tambin para configurar el flujo a cero
o reducirlo lentamente.
En los parmetros de la secuencia puede especificar la macro personalizada
que desea ejecutar incluyendo su nombre en el campo Cmd/Macro postsecuencial y marcando la casilla.
190
Automatizacin
Operacin postsecuencia
191
Automatizacin
Recalibracin automtica
Recalibracin automtica
192
Automatizacin
Especificacin de recalibraciones
Especificacin de recalibraciones
Nivel calibracin
Actualizar RT
Actualizar RF
Intervalo
Nivel de la tabla de
calibracin n (1-999)
No actualizar
No actualizar
Intervalo de recalibracin
cclica n (1-999)
Promedio
Promedio
En blanco
Sustituir
Sustituir
Agrupar
% Delta
193
Automatizacin
Especificacin de recalibraciones
La tabla muestra las columnas de la tabla de secuencia que contienen los
parmetros de recalibracin y los valores que pueden introducirse.
No actualizar
No cambia el factor de respuesta ni el tiempo de retencin/migracin.
Sustituir
Sustituye los tiempos de retencin/migracin y la respuesta previos (reas o
alturas) por aqullos slo del anlisis actual. No se cambia la respuesta de
picos que no se hayan encontrado en el anlisis de recalibracin.
Promedio
Promedia los tiempos de retencin/migracin y las respuestas (reas o alturas) para cada pico, basndose en el anlisis de calibracin original y todas las
recalibraciones promediadas desde entonces. Si falta un pico de una de las
recalibraciones, la respuesta promedio del pico no se ver afectada.
Agrupar
Las muestras se agrupan en calibraciones previas y posteriores a la muestra.
La evaluacin se efecta cuando la ltima muestra de calibracin del grupo de
cierre se ha analizado. Los datos de calibracin existentes se reemplazan por
los datos del resultado del anlisis de calibracin del grupo de apertura. Las
calibraciones del grupo de cierre se promedian en la tabla de calibracin.
Intervalo
El intervalo determina la frecuencia con la que se realiza una calibracin
durante una secuencia. La frecuencia de calibracin corresponde al nmero
de inyecciones de muestras que se realizan antes de proceder con el siguiente
grupo de calibracin. Al inicio del anlisis, se realiza una calibracin y los
resultados (factores de respuesta) se introducen en la tabla de calibracin.
Estos resultados se utilizan en clculos cuantitativos siguientes. Despus de
haberse aplicado el nmero de inyecciones especificado, se realiza otra calibracin y los resultados se introducen en la tabla de calibracin sobrescribiendo los resultados de los anlisis de calibracin anteriores.
194
Automatizacin
Especificacin de recalibraciones
% Delta
El clculo % delta permite comparar los factores de respuesta de un anlisis
con los factores de respuesta que se introducen de forma manual en la tabla
de calibracin. El % delta se aplica entonces a todos los picos calibrados de la
tabla. Puede identificar varios estndares internos, y las mediciones de sus
factores de respuesta se utilizarn para calcular los nuevos factores de respuesta de otros picos. Identifique qu estndar interno va a utilizarse para el
clculo de % delta de cada pico en la tabla de calibracin.
195
Automatizacin
Tipos de secuencia
Tipos de secuencia
196
Automatizacin
Secuencias de calibracin explcita
197
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclicas de un nico nivel
198
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclicas multinivel
Este tipo de secuencia utiliza muestras de calibracin diferentes para recalibrar un mtodo calibrado multinivel.
El ejemplo siguiente describe una secuencia de dos mtodos, que comprende
el mtodo A y el mtodo B, para analizar dos grupos de muestras. Los dos mtodos son de calibracin multinivel que se recalibrarn automticamente en los
intervalos definidos.
Para cada mtodo la tabla de secuencia tiene tres entradas:
Dos niveles de calibracin:
Lneas de secuencia 1 y 2 en el mtodo A.
Lneas de secuencia 8 y 9 en el mtodo B.
Cinco entradas para las muestras:
Lneas de secuencia 3 a 7 en el mtodo A.
Lneas de secuencia 10 a 14 en el mtodo B.
Las calibraciones se especifican a intervalos regulares con la entrada del intervalo de recalibracin de la tabla Recalibracin de secuencias.
El mtodo A recalibrar cada dos muestras.
El mtodo B recalibrar cada tres muestras.
La siguiente tabla de secuencia se ha truncado para simplificar el ejemplo.
Tabla 17
Lnea
Nombre
del
mtodo
Iny./Vial Tipo de
muestra
Nivel
calibr.
Actuali
zar RF
Actual Interval
izar RT o
Mtodo A
Calibraci
n
Promed No
io
actuali
zar
Mtodo A
Calibraci
n
Promed No
io
actuali
zar
199
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclicas multinivel
Tabla 17
Lnea
Nombre
del
mtodo
Iny./Vial Tipo de
muestra
Nivel
calibr.
Actuali
zar RF
10
Mtodo A
11
Mtodo A
12
Mtodo A
13
Mtodo A
14
Mtodo A
Mtodo B
Mtodo B
10
20
Mtodo B
11
21
Mtodo B
12
22
Mtodo B
13
23
Mtodo B
14
24
Mtodo B
Actual Interval
izar RT o
Calibraci
n
Promed No
io
actuali
zar
Calibraci
n
Promed No
io
actuali
zar
200
N iny.
Mtodo
Vial
Operacin
Mtodo A
Mtodo A
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclicas multinivel
Tabla 18
Mtodo A
10
Mtodo A
11
Mtodo A
Mtodo A
Mtodo A
12
Mtodo A
13
Mtodo A
10
Mtodo A
11
Mtodo A
14
N iny.
Mtodo
Vial
Operacin
12
Mtodo B
13
Mtodo B
14
Mtodo B
15
Mtodo B
20
16
Mtodo B
21
17
Mtodo B
22
18
Mtodo B
201
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclicas multinivel
Tabla 19
19
Mtodo B
20
Mtodo B
21
Mtodo B
23
22
Mtodo B
24
202
Automatizacin
Calibraciones explcitas y cclicas juntas
Ejemplo
La siguiente tabla de secuencia ilustra un mtodo calibrado de un nico nivel
denominado SimpReg. La tabla est truncada para simplificar el ejemplo.
Tabla 20
SimpRe
g
Calibraci
n
Promedi
o
Promedi
o
SimpRe
g
Calibraci
n
Sustituir
Sustituir
SimpRe
g
SimpRe
g
SimpRe
g
203
Automatizacin
Calibraciones explcitas y cclicas juntas
Tabla 20
SimpRe
g
SimpRe
g
Tabla de secuencia
La tabla de secuencia contiene siete lneas. La primera lnea especifica la
muestra de recalibracin cclica. La segunda lnea especifica la recalibracin
explcita que se realiza slo una vez al principio de la secuencia. Las lneas de
la tercera a la sptima especifican las muestras que hay que analizar.
El orden de las entradas en la tabla de secuencia es muy importante. Las
entradas del vial de recalibracin cclica que especifican la recalibracin cclica deben aparecer antes que las entradas de muestras o de recalibraciones
explcitas para el mtodo.
204
Lnea sec.
N iny.
Mtodo
Vial
Operacin
SimpReg
Calibracin simple
SimpReg
Calibracin regular
SimpReg
Anlisis de muestras
Automatizacin
Calibraciones explcitas y cclicas juntas
Tabla 21
SimpReg
Anlisis de muestras
SimpReg
Anlisis de muestras
SimpReg
Calibracin regular
SimpReg
Anlisis de muestras
SimpReg
Anlisis de muestras
205
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento
Ejemplo
Considere la situacin siguiente:
La respuesta del instrumento deriva.
Se especifican tres inyecciones con idntica mezcla de dos componentes.
Dos inyecciones estn especificadas como muestras de calibracin, y la tercera como una muestra.
La primera y la tercera son ejemplos de calibracin.
La segunda inyeccin es una muestra.
Para obtener un resultado cuantitativo preciso para la inyeccin dos (la muestra), deben interpolarse las dos muestras de calibracin (consulte la figura). El
proceso se conoce como agrupamiento.
206
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento
9Zg^kVYZa
^chigjbZcid
I^Zbed
8Va^WgVX^c&
BjZhigV
Figura 41
8Va^WgVX^c'
Agrupamiento
Ejemplo
En esta seccin se explica un ejemplo de agrupamiento de secuencia que comprende un mtodo llamado Brack.M. El mtodo Brack.M es un mtodo estndar interno de dos niveles que utiliza calibracin cclica.
Familiarizacin con Agilent ChemStation
207
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento
Tabla de secuencia
La tabla de secuencia de Brack.M (pgina siguiente) se ha truncado para simplificar el ejemplo. Consta de siete lneas. Las dos primeras lneas definen las
condiciones de recalibracin de cada nivel. Las lneas restantes corresponden
a las muestras que hay que analizar.
Ms concretamente, la tabla de secuencia del mtodo Brack.M tiene:
Una entrada Agrupamiento en la columna Actualizar factor de respuesta
que especifica el agrupamiento de muestras con las muestras de calibracin.
Una entrada Sustituir en la columna Actualizar tiempos de retencin/migracin que especifica una sustitucin de los tiempos de retencin.
Una entrada de 3 en la columna Recalibrar intervalo que especifica la recalibracin cada tres muestras.
Tabla 22
208
BRACK-M
Calibracin
Agrupar
Sustituir
BRACK-M
Calibracin
Agrupar
Sustituir
10
BRACK-M
11
BRACK-M
12
BRACK-M
13
BRACK-M
14
BRACK-M
Automatizacin
Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento
209
Automatizacin
Secuencias de recalibracin cclica con mltiples viales que contienen la misma dilucin de un estndar
210
8
Automatizacin
Secuencias de recalibracin cclica con mltiples viales que contienen la misma dilucin de un estndar
Tabla 23
Vial n
Nombre de la
muestra
Tipo de
muestra
Nombre del
mtodo
N de iny.
Nvl
Act. RT
Act. RF
Intervalo
Cal1a
Calib.
Mtodo A
Prom.
Prom.
Cal1b
Calib.
Mtodo A
Prom.
Prom.
Cal1c
Calib.
Mtodo A
Prom.
Prom.
Cal2a
Calib.
Mtodo A
Prom.
Prom.
Cal2b
Calib.
Mtodo A
Prom.
Prom.
Cal2c
Calib.
Mtodo A
Prom.
Prom.
10
Muestra10
Muestra
Mtodo A
11
Muestra11
Muestra
Mtodo A
12
Muestra12
Muestra
Mtodo A
13
Muestra13
Muestra
Mtodo A
14
Muestra14
Muestra
Mtodo A
211
Automatizacin
Secuencias de recalibracin cclica con mltiples viales que contienen la misma dilucin de un estndar
Vial 6 (Cal2b)
etc.
212
8
Automatizacin
Secuencias de recalibracin cclica con mltiples viales que contienen la misma dilucin de un estndar
Tabla 24
Vial n
Nombre de la
muestra
Tipo de
muestra
Nombre del
mtodo
N de iny.
Nvl Act. RT
Act. RF
Intervalo
Cal1a
Calib.
Mtodo A
Grp
Grp
Cal1b
Calib.
Mtodo A
Grp
Grp
Cal1c
Calib.
Mtodo A
Grp
Grp
Cal1d
Calib.
Mtodo A
Grp
Grp
10
Muestra10
Muestra
Mtodo A
11
Muestra11
Muestra
Mtodo A
12
Muestra12
Muestra
Mtodo A
213
214
Automatizacin
Secuencias de recalibracin cclica con mltiples viales que contienen la misma dilucin de un estndar
9
Revisin de datos, reprocesamiento y
revisin por lotes
Tabla de navegacin de Anlisis de datos 216
Configuracin de la tabla de navegacin 216
Barra de herramientas de la tabla de navegacin 217
Revisin de datos con la tabla de navegacin 218
Reprocesamiento de secuencias con la tabla de navegacin
Definicin de la revisin por lotes
219
221
226
Este apartado describe las opciones para revisar datos y cmo reprocesar datos
de secuencia. Asimismo, se detallan los conceptos de Revisin por lotes, Configuracin de lotes, funciones de revisin e informes de lotes.
Agilent Technologies
215
216
Superposicin
Superposicin
Fecha/hora
Lnea
Operador
Iny. (inyeccin)
Vial
Vial
Fichero de datos
Nombre de la muestra
Nombre de la muestra
Tipo de muestra
Eventos manuales
Eventos manuales
Informacin de muestra
Cantidad de muestra
Informacin de muestra
Cantidad ISTD
Cantidad de muestra
Multiplicador
Cantidad ISTD
Dilucin
Multiplicador
---
Dilucin
---
Fichero de datos
217
218
N O TA
Para sistemas LC, CE, LC/MS y CE/MS, la opcin Individual Method from Data File
(DA.M) est seleccionada por defecto.
Para sistemas GC, la opcin Current Method est seleccionada por defecto.
Los datos de secuencia adquiridos en las revisiones hasta la B.01.03 deben volver a
procesarse con la opcin de reprocess de la ventana Method and Run Control. Lo mismo
sucede con los datos adquiridos en B.03.01 cuando la creacin de carpeta nica est
desactivada.
Los datos de secuencia adquiridos con las revisiones de ChemStation B.02.01 o posteriores
deben ser reprocesados con el conjunto de herramientas de reprocesamiento de la tabla
Navegacin de Data Analysis.
219
220
La revisin por lotes es una funcionalidad del anlisis de datos diseada para
ayudar a un analista a realizar rpida y fcilmente la primera revisin de los
resultados de una secuencia o una seleccin de anlisis. Esta funcionalidad le
permitir ahorrar tiempo, especialmente con el reprocesamiento de grandes
cantidades de muestras. Cuando se analiza una secuencia, se genera de forma
automtica un archivo de lotes (con extensin.b) y se coloca en el directorio de
datos junto con los ficheros de datos. Este fichero de datos contiene indicadores de los ficheros de datos de la revisin del lote. Cuando se carga un lote, el
analista slo tiene que seleccionar el mtodo que vaya a utilizar con el lote y
despus seleccionar uno por uno los ficheros de datos que quiere analizar en
el lote. Antes de aprobar los resultados, es posible comprobar la exactitud de
la calibracin, el rendimiento del instrumento y las diferentes integraciones
Cualquier parmetro de integracin especfico del cromatograma que se modifique, puede almacenarse con el fichero de datos para la trazabilidad de datos.
Este entorno interactivo permite tambin acceder a todas las funciones de
anlisis de datos como pureza del pico, bsqueda de libreras, etc.
La revisin por lotes utiliza los mismos registros de anlisis de datos
(ChromReg y ChromRes) que los anlisis de datos estndares y no debera utilizarse en sesiones en lnea que estn analizando en ese momento.
221
222
Configuracin de lotes
Tabla de lotes
Los anlisis se muestran en una tabla de lotes que el usuario puede configurar:
puede especificarse el nmero y el contenido de las columnas de la tabla;
los anlisis pueden clasificarse por
ndice de anlisis (el orden en el que se adquieren los anlisis) independientemente de otros criterios,
tipo de muestra (muestras de control primero, luego muestras de calibracin, despus muestras normales) y por ndice de anlisis dentro de cada
tipo,
mtodo (si se utiliz ms de un mtodo para adquirir los anlisis) y por
ndice de anlisis dentro de cada mtodo,
muestras, muestras de calibracin y muestras de control que se visualizan
en la tabla o estn ocultas.
Cada anlisis seleccionado ocupa una lnea en la tabla de lotes. Puede excluir
un anlisis en la tabla de lotes (por ejemplo, desde la calibracin) cambiando
el tipo de muestra a Retirada.
223
Tabla de compuestos
Los resultados de compuestos se muestran en la tabla de compuestos, que el
usuario puede configurar, aunque su contenido depende del tipo de muestras
de la tabla de lotes:
La lista de compuestos contiene todos los compuestos del mtodo cargado
para la revisin por lotes.
Si en la tabla de lotes slo se visualizan las muestras de calibracin (se ocultan las muestras y las muestras de control), la tabla de compuestos muestra
columnas adicionales con informacin relacionada con la calibracin (cantidad esperada, error relativo y error absoluto).
Si en la tabla de lotes slo se muestran los anlisis de control (se ocultan las
muestras y las muestras de calibracin), la tabla de compuestos muestra
columnas adicionales de los lmites de control definidos).
Para las columnas que contengan informacin especfica del compuesto, es
posible incluir el nombre del compuesto en el ttulo de la tabla aadiendo %s a
las especificaciones de la columna.
Informe de lotes
El informe de lotes contiene dos tablas generalmente anlogas a la tabla de
lotes y a la de compuestos; el usuario puede configurar estas tablas.
Para las columnas que contengan informacin especfica del compuesto, es
posible incluir el nombre del compuesto en el ttulo de la tabla aadiendo %s a
las especificaciones de la columna. Se permiten ttulos multilnea; inserte el
carcter | para introducir un salto de lnea.
Interfase de usuario
La revisin por lotes le permite elegir entre dos interfaces de usuario:
la interfase estndar incluye una barra con los botones que representan la
mayora de las opciones del men Lote, junto con las tablas de lotes y compuestos.
224
225
Funciones de revisin
226
Informes de lotes
Historial de lotes
La revisin por lotes mantiene un registro de todas las acciones relacionadas
con el lote actual. Cualquier accin que cambie el lote (como por ejemplo, cambiar el cromatograma de la pantalla, el tipo de muestra o cargar y guardar el
lote) aade una lnea al historial de lotes con el nombre y la fecha, el nombre
del operador y una descripcin de la accin.
Tambin puede aadir sus propios comentarios al historial de lotes. No se
pueden editar las entradas del historial de lotes existentes y no se puede acceder a la lista del historial excepto a travs de la opcin de men Historial de
lotes.
227
228
10
Utilizacin de los informes de
ChemStation
Definicin de un informe
230
233
235
238
239
240
242
Agilent Technologies
229
Definicin de un informe
Un informe puede incluir informacin cuantitativa y cualitativa de las muestras que se analizan. El informe puede ser una copia impresa, informacin en
pantalla o un archivo electrnico. El informe puede incluir detalles de los
picos detectados durante el anlisis y grficos de las seales adquiridas.
230
10
Informes no calibrados
Entre los informes no calibrados se incluyen informes de Area% y Height%.
Estos informes se utilizan principalmente para preparar informes calibrados.
Pueden resultar de utilidad como informe final si las cantidades de compuesto
necesarias para generar el rea de una unidad o la respuesta de altura de los
compuestos de inters son similares.
Informes calibrados
Los informes calibrados corrigen la diferencia en la respuesta del detector a
los compuestos informados. Una o varias muestras de calibracin que contengan cantidades conocidas de los compuestos informados deben analizarse en
las mismas condiciones que la muestra desconocida. Los datos de integracin
de estas muestras de calibracin se utilizan para preparar una tabla de calibracin. sta no es ms que una lista de los tiempos de retencin/migracin,
cantidades y respuestas que se utilizan en la generacin del informe. Los informes calibrados se basan en dos procedimientos de calibracin llamados
estndar interno y estndar externo.
231
232
10
Resultados cuantitativos
233
234
10
Se pueden aadir al informe los valores de los campos personalizados adjuntos a una muestra determinada de acuerdo con su mtodo de adquisicin. Los
campos personalizados de muestra se enumeran al final de la cabecera del
informe que contiene la informacin general de la muestra. Los campos personalizados de compuesto aparecen al final del informe.
235
Estilos de informe
236
10
237
N O TA
238
Todos los informes, excepto los de rendimiento, enumeran las anchuras de picos
calculadas con una frmula ms compleja por el integrador (para obtener ms detalles
sobre el clculo de la anchura del pico, consulte Anchura de pico en la pgina 85).
10
239
240
.EMF
.DIF
10
.XLS
El informe se imprime en un fichero .pdf. La instalacin de ChemStation instala una impresora PDF, llamada "PDF-XChange 4.0". Esta impresora slo ser
visible en el men Inicio/Configuracin/Impresoras y faxes hasta que se reinicie el
equipo. Al iniciar ChemStation, se crea otra impresora temporal llamada "ChemStation PDF" basada en la impresora PDF-XChange. Mientras que haya una
sesin de ChemStation activa, ChemStation PDF aparecer en el men
Inicio/Configuracin/Impresoras y faxes. La opcin Unique pdf file name permite
almacenar los informes .pdf de forma independiente a los informes, con los
nombres de fichero
<nombre_contenedor_secuencia>_<nombre_fichero_datos>.pdf
241
Introduccin
ChemStation puede imprimir una variedad de informes estndar para el anlisis de muestras individuales. La elaboracin de informes de resumen de
secuencias es una forma adicional de elaborar informes que le permite calcular e informar de los parmetros de un nmero de anlisis diferentes. Es til,
por ejemplo, comprobar la estabilidad de un instrumento y la robustez de un
mtodo nuevo.
Un informe de resumen de secuencias incluye:
Una pgina de ttulo
La configuracin del instrumento, incluyendo los nmeros de revisin del
instrumento y detalles acerca de la columna/capilar empleada
Las listas de la tabla de secuencia que describen lo que hara una secuencia
automatizada de anlisis
Descripciones del libro de registros de lo que hizo la secuencia y de los
resultados inesperados que ocurrieron en la secuencia
Listas de mtodos
Informes individuales de cada ejemplo
Estadsticas de los anlisis basadas en los criterios seleccionados (slo se
calculan las estadsticas de los compuestos calibrados) y
Un ndice general con las referencias del nmero de pginas de las secciones detalladas del informe.
242
10
Configuration
Seleccione Configuration si desea incluir la configuracin del instrumento y las
especificaciones de la columna/capilar en el informe.
Sequence Table
Seleccione Sequence Table para incluir una lista de las secuencias, parmetros
de cuantificacin de muestras y nombres de los mtodos en el informe. La lista
muestra los anlisis efectuados por el sistema.
Logbook
Seleccione Logbook para obtener una lista de los anlisis que ha realizado el
sistema, incluyendo las condiciones del instrumento y los hechos inusuales
que ocurrieron mientras se analizaban las muestras.
Methods
Seleccione Methods para realizar una lista de los mtodos analticos que se utilizaron en la serie de anlisis automatizados.
Analysis Reports
Seleccione Analysis Reports para realizar informes de los diferentes anlisis con
el estilo de informe que configur para el mtodo.
Los informes de anlisis individuales pueden imprimirse despus de cada
anlisis segn el estilo de informe que especific para el mtodo en cuestin y
las secciones de informe especificadas en Sequence Summary Reporting. Consulte "Salida de secuencias" a continuacin.
243
SUILabel Type = Application > Statistics for Calibrated and Sample Runs
Si selecciona Anlisis estadsticos de calibracin se realizarn anlisis de tendencias estadsticas de las muestras de calibracin. Si selecciona Anlisis
Statistics de muestras, se realizarn anlisis de tendencias estadsticas de los
anlisis de muestras (desconocidas). Para estas selecciones estn disponibles
los estilos de plantilla Estadstica estndar y Estadstica ampliada. Extended
Statistics imprime las estadsticas de los anlisis como grficos, mientras que
si selecciona Standard Statistics se imprime slo el texto. Las selecciones que
realice en los cuadros de dilogo Items and Limits for Extended Statistics se utilizan slo cuando elija la opcin Extended Statistic en el cuadro de dilogo
Sequence Summary Parameters.
Si selecciona la opcin Standard Statistic en el cuadro de dilogo Sequence Summary Parameters, las estadsticas de las que se informa son:
tiempo de retencin/migracin,
rea,
altura,
cantidad,
anchura de pico (basada en el estilo del informe; consulte Estilos de
informe en la pgina 236)
y simetra.
El clculo de estadsticas no distingue entre niveles de calibracin diferentes
en una secuencia que utiliza mtodos de calibracin multinivel. Esto significa
que las opciones dependientes de la concentracin como, por ejemplo, el rea,
la altura o la cantidad (consulte el cuadro de dilogo Elementos y Lmites de
estadstica ampliada) se anan, independientemente del nivel de calibracin.
Los valores de las Statistics for Calibration Runs no son tiles para los mtodos
de calibracin multinivel en secuencias.
Resumen
La seleccin Summary imprimir una introduccin de la serie de muestras analizada y de los mtodos utilizados. Si se selecciona la opcin Resumen junto
con otras selecciones de resumen de secuencias, se incluyen los nmeros de
pgina con informacin de otras partes del informe de resumen de secuencias.
Existen dos estilos de resumen disponibles:
244
10
Salida de secuencias
Puede definir tambin en el cuadro de dilogo Sequence Output donde va a
imprimir el informe de resumen.
Seleccione Report to file e introduzca en nombre del fichero para imprimir el
informe en el fichero seleccionado. Viene configurado por defecto que los
datos se guarden en el fichero GLPrprt.txt. En sistemas GC con inyeccin dual
los datos se guardan en GLPrptF.txt y GLPrptB.txt, para el inyector delantero
y el inyector trasero respectivamente.
Seleccione Report to PDF para guardar el informe como un documento PDF. El
informe se guarda en la carpeta de secuencias con el nombre CLPrprt.PDF
Seleccione Report to HTM para imprimir el informe en formato HTML. El
informe se guarda en un directorio HTM en el directorio de datos especificado
en Sequence Parameters. El informe HTM se compone de un fichero de ndice
(index.htm) y, al menos, dos otros ficheros, un fichero de contenido (contents.htm) y un fichero GIF (Graphics Interchange Format) para cada pgina
del informe (p. ej. page1.gif). Para ver el informe html, abra el fichero de ndice
con el navegador.
Si selecciona Report to printer, el informe se imprime en la impresora del sistema. Si imprime uno por uno los informes de los anlisis se activa tambin la
impresin de los informes de muestras de cada anlisis. Estos informes se
imprimen junto con los especificados en el informe de resumen de secuencias
que se crean al final de la secuencia entera. Puede especificar un destino
nuevo para esos informes en el cuadro de dilogo Sequence Output o utilizar el
destino especificado en los mtodos.
245
246
11
Evaluacin de la idoneidad del sistema
Determinacin del ruido 251
Clculo del ruido utilizando seis veces la desviacin estndar
Clculo del ruido con la frmula pico a pico 252
Clculo del ruido con el mtodo ASTM 253
Clculo seal-ruido 255
Deriva y desviacin 255
Clculo de la simetra de picos
251
256
258
259
267
Agilent Technologies
247
271
248
11
Los tests se documentan en un formato aceptado generalmente por las autoridades apropiadas y por auditores independientes. Las estadsticas incluyen:
tiempo de retencin/migracin del pico,
rea de pico,
cantidad,
altura de pico
Anchura de pico a media altura
Simetra de pico
Cola de pico
Factor de capacidad (k)
Nmeros de placa
Resolucin entre picos
Selectividad relativa al pico anterior
Sesgo y
Exceso
Se calcula el valor medio, la desviacin estndar, la desviacin estndar relativa y el intervalo de confianza. Puede configurar los lmites para la desviacin
estndar, la desviacin estndar relativa o el intervalo de confianza de estos
parmetros. Si los valores superan los lmites, el informe le indica que les
preste atencin.
La calidad de los datos analticos se sostiene manteniendo los registros de las
condiciones reales en el momentos en el que las mediciones se realizaron. Los
libros de registro de ChemStation recogen las condiciones del instrumento
antes y despus de los anlisis. La informacin se almacena con los datos e
incluye los datos de muestras. Las curvas de rendimiento del instrumento se
registran durante el anlisis entero como seales y se almacenan en el fichero
de datos. Si el instrumento lo admite, estos registros, superpuestos en el cromatograma, pueden recuperarse cuando se desee, por ejemplo durante una
auditora.
El ruido y la deriva de la lnea de base se pueden medir de forma automtica.
Un nivel mnimo detectable puede calcularse con los datos de altura de pico
para cada componente calibrado en el mtodo.
249
250
11
a^cZVa
GZ\gZh^c
gj^Yd2
eZcY^ZciZ2YZg^kV
+mHY
HY29Zhk^VX^cZhi{cYVg
]dgV
Figura 42
251
{
]dgV
Figura 43
252
11
gj^Yd2
e^Xdb{m#
bZcdhbc#
YZhk^VX^c
Yi
Figura 44
]dgV
El clculo del ruido ASTM (ASTM E 685-93) se basa en una prctica estndar
para comprobar los detectores fotomtricos de la longitud de onda variable
que se utilizan en cromatografa de lquidos, segn define la Sociedad Americana para Ensayos y Materiales (American Society for Testing and Materials).
Se pueden distinguir tres tipos diferentes de ruido en funcin del tamao del
rango de tiempo. La determinacin del ruido se basa en las mediciones pico a
pico en los rangos de tiempo definidos.
253
donde N es el ruido pico a pico, Imax es el pico de intensidad ms alta (mxima) y Imin es el pico de menos intensidad (mnima) en el rango de tiempo.
254
11
Clculo seal-ruido
Para el clculo seal-ruido, ChemStation utiliza seis veces la desviacin
estndar (sd) de la regresin lineal de la deriva para calcular el ruido. El rango
ms cercano al pico se selecciona de los rangos que se especifican en la configuracin de idoneidad del sistema. El clculo seal-ruido se realiza con la
frmula:
Deriva y desviacin
La deriva se calcula por la pendiente de la regresin lineal (consulte la figura
Clculo del ruido utilizando seis veces la desviacin estndar) y la desviacin
se determina por el ruido pico a pico y los valores de los datos medios en los
ciclos de ruido ASTM (consulte Ruido determinado con el mtodo ASTM).
255
256
11
=[
^c^X^dYZ
e^Xd
i&
Figura 45
=g
V& V'
V(
i'
i(
V)
i)
[^cVa^oVX^cYZ
e^Xd
AcZVWVhZ
I^Zbed
donde:
ai = rea de corte
ti = tiempo de corte
Hf = altura del punto de inflexin delantero
Hr = altura del punto de inflexin trasero
H = altura en el punto mximo
257
258
11
Definiciones generales
Volumen nulo
donde:
d = dimetro de columna [cm]
= constante, relacin de circunferencia al dimetro de un crculo.
l = longitud de columna [cm]
f = fraccin del volumen de la columna que no ocupa la fase estacionaria pero
que estn disponibles para la fase mvil; valor por defecto de f = 0,68 (para
Hypersil)
donde:
F = velocidad de flujo de LC [ml/min]
259
Momentos estadsticos
donde:
N
Ai
dt
t0
260
11
261
WB
W4,4
W5,0
anchura al 5% de altura (anchura de pico con cola), para el factor de cola USP
W50,0
anchura al 50% de altura (anchura de pico a media altura verdadera o sigma 2,35).
donde:
TR = tiempo de retencin del pico [min]
T0 = tiempo nulo [min]
donde:
tw = distancia en minutos entre el frente del pico y TR, medida al 5% de la
altura de pico
W5.0 = anchura del pico al 5% de la altura del pico [min]
262
11
L
=
MOFBCBTFJOJDJBM
)
53
IPSB
UX
8
8#
Figura 46
Parmetros de rendimiento
donde:
WB = anchura de base [min]
donde:
W50 = anchura de pico a media altura [min]
263
Mtodo 5 sigma:
donde:
W4.4 = anchura del pico al 4,4% de la altura del pico [min]
Mtodo de varianza:
donde:
Mx = x o momento estadstico (consulte tambin Momentos estadsticos en la
pgina 260)
donde:
k'(x) = factor de capacidad del pico x
264
11
Mtodo 5 sigma:
Mtodo estadstico:
donde:
M1(x) = tiempo de retencin medio del pico x (momento estadstico 1) [min]
WB(x) = anchura de la base del pico x [min]
W4,4(x) = anchura al 4,4% de altura del pico x [min]
W50(x) = anchura al 50% de altura del pico x [min]
para el pico x
WS(x) = anchura derivada de momentos estadsticos =
[min] (consulte tambin Momentos estadsticos en la pgina 260)
265
Definiciones de reproducibilidad
Para la revisin estadstica de los datos analticos en cuando a la reproducibilidad, se considera una secuencia como una muestra aleatoria pequea extrada de un nmero infinito de resultados experimentales posibles. Para lograr
un conjunto de resultados completos, se requiere una cantidad sin lmite de
material de muestras as como tiempo. Estrictamente los datos estadsticos no
slo se aplican a un conjunto completo autocontenido o poblacin de datos.
Por consiguiente constituye un requisito previo para este tratamiento que la
muestra seleccionada sea representantiva de todos los datos.
Media de muestra M
El valor medio M de una muestra aleatoria consistente en N medidas, se calcula a partir de un nmero limitado de valores Xi nicos observados de N
indexados con un contador consecutivo y segn la frmula:
donde:
N = nmero de observaciones discretas
Xi = valor de observaciones discretas indexadas por i
266
11
267
Intervalo de confianza CI
El intervalo de confianza se calcula para proporcionar informacin sobre si es
bueno el valor medio de clculo, cuando se aplica a todos los datos y no slo a
la muestra.
El intervalo de confianza en 100 (1 -) % para la media global se calcula con
donde:
268
11
Anlisis de regresin
Dada
Funcin lineal:
Coeficientes:
donde:
Coeficiente de regresin
donde:
269
270
11
Para propsitos de validacin, sera necesario calcular manualmente los resultados de ChemStation como curvas de calibracin, coeficientes de correlacin,
platos tericos, etc. Al realizar esta operacin, hay que tener en cuenta el formato de nmeros que utiliza ChemStation.
Para todos los nmeros que ChemStation almacene internamente se utiliza el
tipo de datos "C" DOBLE. Esto quiere decir que se almacenan 14 dgitos para
cada nmero. La puesta en prctica de este tipo de datos se adhiere a la de
Microsoft de la normativa IEEE para datos de tipo C y las reglas que implican
(consulte los documentos de Microsoft Q42980, Q145889 y Q125056).
Debido al nmero ilimitado de parmetros que se utilizan en el clculo de la
tabla de calibracin, no es posible calcular el error exacto que posiblemente se
introduzca por la propagacin y acumulacin de errores relacionados. Los
tests exhaustivos con las distintas construcciones de las curvas de calibracin
muestran, en cambio, que se puede garantizar la exactitud hasta 10 dgitos.
Mientras que en la repeticin del rea, de la altura y del tiempo de retencin
de anlisis cromatogrficos tiene normalmente tres dgitos, son suficientes 10
dgitos importantes de los clculos. Por esta razn, la calibracin, y otras
tablas, muestran un mximo de 10 dgitos importantes.
Si se requiere un clculo externo (manual) para validacin, se recomienda que
se utilicen todos los dgitos para los clculos internos. Con los datos mostrados o relacionados de los clculos externos puede obtenerse resultados que
difieran de ChemStation por errores de redondeo.
En el prrafo siguiente se describe cmo acceder a los dgitos almacenados
internos para nmeros que normalmente se requieren para clculos manuales.
En todos los casos, es preciso cargar e informar sobre el fichero de datos con
el estilo de informe apropiado antes de ejecutar el comando de la lista. Todos
los comandos se introducen en la lnea de comandos de ChemStation, disponible en el men de visualizacin. La informacin del fichero C:\CHEM32\
TEMP.TXT puede visualizarse en el Bloc de notas o en un editor de texto
apropiado.
271
11
273
274
12
Verificacin del sistema
Ventanas de verificacin y diagnstico
Verificacin del sistema 276
Registro GLPsave
276
279
281
En este captulo se describen la funcin de verificacin y las funciones de verificacin GLP de ChemStation.
Agilent Technologies
275
276
12
Los resultados del test de verificacin se guardan en formato binario en el subdirectorio predeterminado: c:\CHEM32\1\Verify, junto con los archivos del
mtodo y de datos. El subdirectorio Verify est al mismo nivel que la secuencia, mtodos y subdirectorios de datos. Puede enviar los resultados a una
impresora o a un archivo. Los resultados del test, incluyendo el resultado de
un test de verificacin combinado, se consideran como aprobados o suspensos.
Los siguientes componentes del test de verificacin estn disponibles:
Cuantificacin de compuestos
Se cuantifican de nuevo los compuestos del fichero de datos. Se comparan los
resultados con los resultados de cuantificacin originales que se guardan en el
registro de verificacin. Si no coinciden, el test fracasa.
Impresin de informes
Se imprime de nuevo el informe original.
En la pgina siguiente se muestra un ejemplo del test de verificacin completado con xito.
277
278
12
Registro GLPsave
279
280
12
Se pueden utilizar los test del detector como un paso en la validacin del sistema rutinario de un instrumento analtico en un laboratorio regulado.
El test del DAD evala el rendimiento del detector de diodo-array. Cuando
selecciona el test del DAD del men Instrument (slo para LC3D y CE) se comprueba la intensidad y calibracin de la longitud de onda del instrumento. Si
presiona Save, los resultados del test se guardan de forma automtica en la
base de datos DADTest, en un fichero de registro llamado DADTest.Reg en el
directorio de instrumentos predeterminados.
Show Intensity
Spectra
Save as New
Database
Si cambia la lmpara del DAD puede reiniciar el DADTest borrando los resultados del test no deseados de la tabla y utilizando la funcin Save as New Database (Guardar como nueva base de datos).
Show Selected
Spectra
Show Intensity
Graph
281
Glosario UI
Glosario UI
A
access level
nivel de acceso
Analysis Reports
Informes de anlisis
Apply Manual Events from Method
Aplicar eventos manuales del mtodo
Area reject
Rechazo por rea
Area%
% de rea
Autointegrate
Integracin automtica
B
Batch
Lote
C
Calibration Settings
Configuracin de calibracin
Character
Carcter
Compound Details
Detalles de compuesto
Compound Summary
Resumen compuesto
Configuration
Configuracin
Contents
Contenido
Control Chart
diagramas de control
282
current method
mtodo actual
Current Method
Mtodo actual
Full
Completo
Header
Cabecera
height reject
Rechazo por altura
Height reject
Rechazo por altura
Height%
% de altura
Data Analysis
Anlisis de datos
Data Analysis Navigation table
Navegacin de anlisis de datos
Data File
Fichero de datos
Delete Peak(s)
Eliminar pico(s)
Description
Descripcin
Detail
Detalle
Draw Baseline
Dibujar lnea base
E
ESTD%
% ESTD
Extended
Ampliado
Extended Performance
rendimiento ampliado
Extended Statistic
Estadstica ampliada
Extended Statistic Parameters
Parmetros de estadstica ampliada
Extended Statistics
Estadstica ampliada
L
Library Search
Bsqueda en bibliotecas
Glosario UI
M
Manual Events
Eventos manuales
Manual Integration
integracin manual
Method and Run Control
Mtodo y Control de anlisis
Methods
Mtodos
N
Navigation Table
tabla de navegacin
Negative Peaks
Picos negativos
Noise
Ruido
None
Ninguno
Norm%
% Norm
O
One Page Header
Una pgina de cabecera
P
page x of y
pgina x de y
Partial Sequence
Secuencia parcial
Q
Quantification Parameters
Parmetros de cuantificacin
R
Remove Manual Events from Method
Quitar eventos manuales del mtodo
Report to file
Informe en fichero
Report to HTM
Informe en HTM
Report to PDF
Informe en PDF
Report to printer
Informe a impresora
reprocess
reproceso
Reprocessing only
Slo reprocesar
Review DAD Test
Revisar test del DAD
Run Time Checklist
Lista de control del anlisis
S
Sample Information
Informacin de muestra
Sample Summary
Resumen de muestra
save as
Guardar como
Save as New Database
Guardar como nueva base de datos
Save Current Sequence
Guardar secuencia actual
Sequence
Secuencia
Sequence Method
Mtodo de secuencia
Sequence Output
Salida de secuencias
Sequence Parameters
Parmetros de secuencia
Sequence Summary Parameters
Parmetros de resumen de secuencias
Sequence Summary Reporting
Informes de resumen de secuencias
283
Glosario UI
Sequence Table
Tabla de secuencia
Short
Breve
shoulder detection
Deteccin de hombros
shutdown
desconexin
Signal Options
Opciones de seal
Slope sensitivity
Sensibilidad de pendiente
Spectrum
Espectro
Split Peak
Divisin de pico
Standard Data Analysis
Anlisis de datos estndar
Standard Statistic
Estadstica estndar
Standard Statistics
Estadstica estndar
Statistics
estadsticos
Statistics for Calibration Runs
estadsticas de anlisis de calibracin
Status
Estado
SUILabel Type = Application > Statistics for
Calibrated and Sample Runs
SUILabel Type = Application > Estadsticas de anlisis calibrados y de muestras
Summary
Resumen
Tangent Skim
Divisin tangencial
U
Unique Folder Creation
Creacin de carpeta nica
Unique folder Creation OFF
Desactivar creacin de carpeta nica
Unique Folder Creation OFF
Desactivar creacin de carpeta nica
Unique Folder Creation ON
Activar creacin de carpeta nica
Unique pdf file name
Nombre de fichero pdf nico
Update .... Method
Actualizar mtodo...
Update Manual Events of Method
Actualizar eventos manuales del mtodo
Update Master Method
actualizacin del mtodo maestro
Update Sequence Method
actualizacin de la secuencia
Use Sequence Table information
Informacin de la tabla de secuencia
de uso
Use Sequence Table Information
Informacin de la tabla de secuencia
de uso
V
Valley
Valle
Valley Height Ratio
Relacin de altura con respecto al valle
View
Ver
284
ndice
ndice
% de altura
clculo 126
% de rea
clculo 126
% Norm
clculo 131
informe 131
A
adquisicin de datos
definicin 64
agrupamiento
calibracin cclica 206
ajustes de curva de
calibracin 161
ajustes de
curva de calibracin 161
curva 161, 161
anlisis de datos 46
informes especializados 24
anchura de pico inicial 111
anchura de pico
a altura x% 262
tangencial 262
rea de pico
108
A
asignacin de la lnea base
automatizacin 171
29
79, 95
picos 122
cuantificacin
definicin 122
procedimiento de ESTD 128
curva de calibracin
definicin 154
descripcin de 154
forzada a travs de cero
(origen) 161
multinivel 158
ponderacin del punto de
calibracin 161
nico nivel 157
curva de
calibracin 154
curva
calibracin 154
D
Da.M 59
derivada 86
desviacin estndar
de media 267
muestra 266
relativa 267
residual 155
desviacin 261
deteccin de hombros 111
Determinacin de ruido ASTM
determinacin de ruido 253
directorio
mtodo 54
distribucin t 268
divisin tangencial 100
253
285
ndice
E
estndar externo 128
estndar
externo 128
estructura de
directorios 36
eventos de integracin 77, 111
F
factor de capacidad 262
factor de cola USP 262
factor de cola 262
factor de dilucin 129
fichero de mtodo
parmetros de instrumentos 54
fichero
mtodo 54
filtro de
reconocimiento de picos 86, 86
fin del pico 91
formatos de ficheros
informe de lotes 227
informe de resultados 240
frmulas de idoneidad del sistema
anchura de pico 262
desviacin estndar 266
factor de capacidad 262
factor de cola USP 262
media 266
nmero de platos 263
resolucin 265
retencin relativa 264
RSD 267
volumen nulo 259
frmulas
definiciones del test de
rendimiento 260
definiciones generales 259
fuerza del
286
origen
161
G
guardar con datos
copia del mtodo
59
H
hombro 93
hora de inicio
77
I
idoneidad del sistema
estadsticas incluidas 248
lmites 249
ignorar el
origen 161
incluir el
origen 161
informacin del mtodo 46
informe de idoneidad del sistema
estilo de rendimiento y ruido 24
informe de rendimiento 24
rendimiento ampliado 25
informe de resumen de secuencias
configuracin 243
especificacin de la salida 245
estadsticas 244
informes de anlisis 243
libro de registro 243
mtodos 243
pgina de resumen 244
tabla de muestras 243
tabla de secuencia 243
informe de resmenes de secuencias
cabecera 243
informe
diagrama de control 26
estilo 236
formatos de ficheros 240
no calibrado 231
personalizado 26
resumen de secuencias 25
informes de diagramas de control 26
informes de idoneidad del sistema 24
informes de lotes
formatos de salida 227
informes
idoneidad del sistema 24
personalizados 26
inicio del pico 91
integracin manual 117
intervalo de confianza 268
L
lmites de cantidad 158
lnea base inicial 77, 78
lista de control del anlisis 47
M
marcas de sealizacin de
integracin 74
marcas de sealizacin 74
mximo del pico 92
mtodo
directorio 54
editar 52
Mtodos
almacenados 49
mdulos de evaluacin de datos
mdulos instrumentales 12
momento de finalizacin 77
momentos estadsticos 261
muestra de
calibracin 152
muestra desconocida 156
muestra
calibracin 152
desconocida 156
12
ndice
multinivel
secuencias cclicas
multiplicador 129
199
digital 64
sensibilidad de pendiente
ESTD 128
punto de
calibracin 152
punto mximo 77
N
nivel de
calibracin 152
nmero de platos 263
O
operacin del
mtodo 55
P
penetracin de la lnea base 97
Personalizacin de
ChemStation 27
peso
cuadrtico 161
igual 161
lineal 161
puntos de calibracin 161
pico de disolvente 109
pico negativo 80
pico
altura 126
picos de referencia
mltiples 146, 146
picos no asignados 105
pico
simetra 256
plantilla de secuencia 174
precisin de
anlisis 168
precisin
anlisis 168
formato del nmero 271
Preferencias 36
procedimiento de
111
R
recalibracin
definicin 168
por qu 168
rechazo por altura 111, 113
rechazo por rea 111
reconocimiento de picos 89
refinamiento de la integracin 113
relacin de capacidad 262
relacin de
respuesta 146
rendimiento
definiciones del test 260
resolucin 265
respuesta del detector 157
respuesta de
picos 146
respuesta
detector 157
resto
relativo 155
retencin relativa 264
tabla de calibracin
qu es? 153
tabla de lotes
informes 227
tipo de muestra eliminado
tiempo de retencin
absoluto 142
tratamiento del
origen 161
223
V
ventana de tiempo de retencin de
pico 143
ventana de referencia 143
ventana de tiempo
retencin/migracin 142
ventanas de tiempo de retencin 143
visin general del software
configuracin del sistema 15
mtodos y secuencias 15
sistema operativo 15
volumen nulo 259
S
secuencia
calibracin cclica
crear 181
editar 181
guardar 181
seal analgica 64
seal digital 64
seal
analgica 64
detalles 47
199
287
www.agilent.com
En este manual
Se describen varios conceptos de Agilent ChemStation. El objetivo es ampliar su comprensin sobre el funcionamiento de ChemStation.
Para obtener ms informacin acerca de cmo
utilizar ChemStation, consulte el sistema de
ayuda general y el "Tutorial" de la ayuda en lnea.
*G2070-95126*
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