TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE LA LAGUNA

ANÁLISIS INSTRUMENTAL
UNIDAD 2
EQUIPO # 2
Omar Alejandro Torres Hernández 171000218
Luis Alberto Cordero Blanco 16130524
José Antonio Gavaldon 19130438
Ramiro González Peña 19130432
Alondra Yazmin Estrada Navarro 19130410
Josseline Rivas Rosales 19130478
 TEMA 2.2
INSTRUMENTACIÓN PARA LA
ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN
EN EL VISIBLE Y EN EL U.V
“La disciplina de la ciencia que estudia la
interacción entre la radiación
electromagnética y la materia”.
En palabras más llanas es la rama de la
ciencia que analiza cual es el
comportamiento de nuestras muestras en
función de la luz que interacciona con ellas.
Esta definición deja fuera dos importantes
áreas de la espectroscopia en las que la
materia interacciona con las ondas de
sonido y con haces de partículas (iones y
electrones).
Hay seis tipos principales de métodos
espectroscópicos: absorción,
fluorescencia, fosforescencia, dispersión,
emisión y quimioluminiscencia. Los
instrumentos de medida de todos ellos
difieren poco en cuanto a sus
componentes; además, aunque muchos
de estos instrumentos utilizan regiones del
espectro no perceptibles por el ojo
humano, ultravioleta (UV) e infrarrojo (IR), a
todos ellos se les domina instrumentos
ópticos.
La espectrofotometría UV-visible es
una técnica analítica que permite
determinar la concentración de un
compuesto en solución. Se basa en
que las moléculas absorben las
radiaciones electromagnéticas y a
su vez que la cantidad de luz
absorbida depende de forma lineal
de la concentración.
Las moléculas absorben radiación electromagnética
Cuando una onda encuentra a una molécula, puede
cambiar la dirección de propagación (dispersión) de
esa onda, o puede ser absorbida. En este último caso,
una molécula absorbe un fotón y su energía interna
aumenta para entrar a un estado inestable, por lo que
rápidamente vuelve a liberar esa energía sobrante y
vuelve al estado inicial que es más estable
La espectrometría UV-VIS se utiliza con mayor frecuencia en forma
cuantitativa para determinar las concentraciones de especies
absorbentes en solución, usando la ley de Beer-Lambert. es
una relación empírica que relaciona la absorción de luz con las
propiedades del material atravesado.
l𝒐𝒈 𝟏𝟎 (I/Io) = A=εbc
Donde A es la absorbancia medida
iO es la intensidad de la luz incidente a una determinada longitud de
onda
I es la intensidad de transmicion
L es la longitud de ruta a través de la muestra
C es la concentración de las especies absorbentes
Para cada especie y longitud de onda , “ε “ es una constante
conocida como absortividad molar o coeficiente de extinción
Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un gráfico de
absorbancia de luz frente a una longitud de onda en el rango
del ultravioleta o la luz visible.

La espectroscopia UV/VIS se utiliza habitualmente en la

determinación cuantitativa de soluciones de iones metálicos de
transición y compuestos orgánicos muy conjugados.
Los espectrofotómetros UV-Visible por lo general constan de
dos fuentes de radiación:
La lámpara de Tungsteno- Halógeno .
La lámpara de Deuterio (D2) .
Análisis cuantitativo por espectroscopia UV-VIS
1 Poderosa herramienta para el análisis cuantitativo
2 En la región UV del espectro se pueden medir compuestos
orgánicos. Ejemplo: Fármacos

3 En la región visible se puede analizar cualquier sustancia

coloreada
¿Cómo se lleva a cabo el análisis por Absorción?
La mayoría de las fuentes producen luz con longitudes
de onda no deseadas además de la deseada. (La
excepción de esta característica general está en
las fuentes de radiofrecuencia y los láseres). El
paso de la luz a través de un monocromador o
un filtro selecciona la longitud de onda para
el análisis.
¿Cómo se lleva a cabo el análisis por
Absorción?
La mayoría de las fuentes producen luz
con longitudes de onda no deseadas
además de la deseada. (La excepción
de esta característica general está en
las fuentes de radiofrecuencia y los
láseres). El paso de la luz a través de
un monocromador o un filtro
selecciona la longitud de onda
para el análisis.
¿Qué es un Espectrofotómetro UV –
Visible?
Es un instrumento óptico que presenta la
capacidad de “resolver” radiaciones de
diferentes longitudes de onda, dentro
del Rango Ultravioleta y Visible. Este
rango, por lo general se encuentra
dentro de los valores de 190 a los 1100
nm.
• Una fuente estable de energía radiante.
Estas consisten de materiales que son excitados a niveles de
mayor energía, por medio de descargas eléctricas de alto
voltaje o por calentamiento. Cuando los electrones del
material regresan del estado excitado al estado basal, emiten
características correspondientes a ∆E, la diferencia en energía
entre el estado basal y el estado excitado.
Una fuente de radiación ideal, sería aquella que emitiese un
espectro de igual intensidad sobre la región de interés, sin
embargo la intensidad de ésta varía con la longitud de onda.
Una fuente de radiación ideal, sería aquella que emitiese
un espectro de igual intensidad sobre la región de interés,
sin embargo la intensidad de ésta varía con la longitud
de onda.
En instrumentos de doble haz la radiación que emerge de
la fuente es dividido en dos: El haz de referencia y el haz
de muestra. El transductor, el cual recibe las dos señales
compensa por los efectos de variación de voltaje o de
intensidad en la fuente misma cancelando de ésta
manera los efectos inherentes a la misma.
Las lámparas de hidrógeno y deuterio son las
fuentes más comunes de radiación UV. Estas
consisten de un par de electrodos en un tubo
de vidrio con ventanas de cuarzo, y que
además contiene hidrógeno o deuterio
gaseoso. Cuando se aplica un alto voltaje a
los electrodos, ocurre una descarga de
electrones, lo cual excita las moléculas de
gas y éstas pasan a niveles energéticos
superiores. Cuando los electrones de los
átomos del gas regresan a su estado basal
emiten radiación
La lámpara de tungsteno es la fuente más barata y más
satisfactoria en espectroscopia visible e infrarroja. El
filamento de tungsteno es calentado por medio de una
fuente de corriente directa o por una bateria. Los
filamentos de tungsteno, los cuales alcanzan una
temperatura de aproximadamente 2900ºC, emiten
radiación continua de 350 a 2500 nm. El arco de grafito
emite una radiación más intensa, sin embargo es muy raro
que ésta fuente sea utilizada en éste tipo de
espectroscopia.
 Un monocromador es un dispositivo
óptico que sirve para medir la
composición de la luz según su
distribución de longitudes de onda
(distribución espectral) ya sean
electromagnéticas o no a partir de una
fuente emisora que produzca una
amplia gama de longitudes de onda.
 Los monocromadores tienen capacidad de
resolución de ancho de banda 35 a 0.1 nm.
Los componentes de un monocromador son:
1. Una abertura que permita el paso de la
radiación policromática de la fuente.
2. Un colimador que puede ser una lente o un
espejo.
3. Un medio de dispersión que puede ser un
prisma o una rejilla.
4. Lentes de enfoque o espejos.
5. Una abertura de salida.
- Los filtros y monocromadores son utilizados para
obtener radiación de un rango angosto de longitudes de
onda (radiación casi monocromática). Los filtros son
materiales de un vidrio especial, el cual contiene
sustancias que le dan color al vidrio y que absorben una
parte de la radiación y transmiten otra. Estos filtros
transmiten radiación en anchos de bandas de 20 a 50
nm aproximadamente.
 .
-Separa la radiación policromática en bandas angostas y a
diferentes ángulos. Para dirigir la radiación de longitud de
onda seleccionada a la abertura de salida (slit) se hace girar
el prisma por medio de un mecanismo acoplado para este fin.
Para una alta resolución de la radiación prolicromática (buena
separación angular de la radiación de diferentes longitudes
de onda), se requiere que la dispersión sea lo mayor posible.
 .
-Las rejillas como medio de dispersión de la luz son muy superiores a los
prismas.
Hasta hace poco años una de las desventajas de este tipo de dispersor
era su costo. Actualmente se ha desarrollado la tecnología para la
elaboración de rejillas de difracción en grandes cantidades y con
aceptable calidad, lo cual ha traído como consecuencia un menor
precio y un desplazamiento casi total a la utilización de rejillas de
difracción como elementos de resolución de haces policromáticos.
 .
-La radiación es colimada y enfocada por lentes y espejos.
El material de los lentes debe ser por supuesto trasparente a la
radiación utilizada.
En el Infrarrojo se utilizan espejos, ya que la mayoría de los materiales
no son suficientemente trasparentes a la radiación Infrarroja y causan
significantes pérdidas de energía. También en espectroscopia Visible
y UV se emplean con frecuencia los espejos como elementos o
partes del monocromador.
Es el camino óptico que atraviesa la radiación
electromagnética, los recipientes de la muestra
tienen medidas de 0.5 a 5 cm., sus formas pueden
ser rectangulares y cilíndricas, el material del que
están elaborados varían dependiendo de la región
del espectro electromagnético en el cual serán
utilizadas.
 • Para UV es necesario utilizar celdas de cuarzo,
ya que el vidrio absorbe radiación UV.

• Para Visible pueden utilizarse cuarzo o vidrio

Celda de cuarzo
común.

Las celdas deben de estar marcadas para que el Celda de vidrio

paso del haz de radiación sea siempre en el mismo
lugar de la celda y de ésta manera compensar por
imperfecciones ópticas en las paredes de la celda.
Las muestras para espectroscopia UV, Visible o IR
pueden ser líquidas o gaseosas.
Por lo tanto para medir la concentración de un analito por
este método es necesario que el analito (o un producto de
reacción del analito) tenga la propiedad de absorber
radiación electromagnética (luz) en la región del UV-visible.
¿Qué significa que el analito absorbe luz?
Significa que cuando un haz de luz incide sobre la solución
del analito, éste absorbe energía la que utiliza para pasar de
su estado basal de energía (el más bajo, estado fundamental)
a un estado excitado (de mayor energía).
El solvente de la muestra, la cual es
responsable de la absorción de la radiación,
debe disolver completamente la especie y ser
trasparente a la región que se está estudiando.
Características:
• Alta pureza
• Deben disolver completamente la muestra.
• Compatibles con los materiales de las celdas.
• Transparentes en la región espectral de
interés.
 Muestra

Monocromador Detector

Fuente de
iluminación
• La transmitancia (T) de una
sustancia en solución es la
relación entre la cantidad de luz
transmitida que llega al detector
una vez que ha atravesado la
muestra, y la cantidad de luz que
incidió sobre ella. La
transmitancia nos da una medida
física de la relación de intensidad
incidente y transmitida al pasar
por la muestra.
• La absorbancia (A) es un
concepto más relacionado
con la muestra puesto que
nos indica la cantidad de luz
absorbida por la misma.
• La cantidad de luz
absorbida dependerá de la
distancia que atraviesa la
luz
Los detectores modernos general una señal como
resultado de los fotones que llegan y chocan con
él. Esta señal activa una aguja, envía una señal
digital a un microprocesador y/o activa un
graficador. El ruido, como ya se ha mencionado
anteriormente, se refiere a una señal de fondo
generada por la vecindad del instrumento con
otros aparatos y/o por cambios mismos en el
sistema electrónico en el detector.
Los fotones con radiación de longitud de onda en visible y
UV, poseen suficiente energía para causar la fotoeyección
de electrones cuando chocan en superficies que han sido
tratadas con compuestos específicos. La absorción de estos
fotones también puede causar que los electrones que se
encuentran en la banda no conductora pasen a la banda
de conducción, si el material sobre el que inciden los fotones
es un semiconductor.
Los detectores que utilizan este sistema se denominan
detectores fotoeléctricos y son clasificados como
fototubos y celdas fotovoltáicas.
Un FOTOTUBO consiste de:
a) un cilindro al alto vacío (con una ventana de cuarzo
para UV).
b) un cátodo semicilíndrico, el cual tiene en su superficie
un compuesto, con propiedades tales que los electrones
de ésa substancia se pueden desprender con relativa
facilidad.
c) un ánodo que es un alambre metálico
FOTOCELDAS.- Las celdas fotovoltaicas son utilizadas para
detectar y medir la radiación en la región visible y su rango
de detección es aproximadamente el del ojo humano.
Estas consisten de una hoja de cobre o hierro, la cual sirve
como electrodo, sobre la cual está depositada una capa
de un material semiconductor tal como óxido de cobre (I) o
selenio. La superficie exterior del semiconductor es cubierta
por una capa trasparente de oro, plata o plomo, el cual
sirve como segundo electrodo o electrodo colector. El
sistema está protegido por una cubierta trasparente.
TUBO FOTOMULTIPLICADOR
Cuando incide radiación sobre una superficie
fotoemisiba se genera un desprendimiento de
electrones de dicha superficie. Si estos electrones
desprendidos se aceleran por medio de un
campo eléctrico y chocan con otra superficie
fotoemisiba, se desprenden más electrones que
el primer caso. Si este proceso se repite una y
otra vez, se tendrá un efecto multiplicador de los
fotones.
TUBO FOTOMULTIPLICADOR
• Radiación ionizante
• Partículas cargadas
• Rayos Gamma
• Emisión de fotones
• Fósforos
• Fotocátodo
• Aceleración de electrones
primarios
• Electrones secundarios
• Último dinodo
La señal electrónica generada por un detector de radiación,
debe ser convertida a una señal que el operador del
instrumento pueda leer e interpretar fácilmente. Este proceso
se efectúa con amplificadores. Un amplificador toma una
señal de entrada del detector y por medio de una serie de
procesos electrónicos produce una señal de salida que es
mucho mayor a la de la entrada. El factor de amplificación
que es llamado “la ganancia del amplificador”, es la
relación entre la señal de salida y la señal de entrada.
Generalmente esta señales son voltajes.
Una vez que la señal de energía radiante ha sido
trasformada en una señal eléctrica y amplificada
posteriormente, dicha señal pasa a un sistema de lectura. En
algunos equipos, la señal eléctrica amplificada se procesa
para darle movimiento proporcional a una aguja, la cual
indica la absorbancia o trasmitancia registrada, en una
escala que contiene el aparato. En esta escala, la
absorbancia tiene como límites de 0 a infinito, mientras que
la transmitancia varía de 0 a 100%; la escala de
absorbancia es logarítmica y la de transmitancia es lineal.
file:///C:/Users/User/Downloads/lectura3%20(1).pdf
https://www.antaresinstrumentacion.com/que-es-espectroscopia-
instrumentacion-tecnicas/
https://navarrof.orgfree.com/Docencia/AnalisisInstrumental/UT2/electroe.pdf
https://materialeslaboratorio.com/espectrofotometro/
http://www.quimicafisica.com/espectroscopia-tipos-de-espectros.html
https://aulavirtual.agro.unlp.edu.ar/pluginfile.php/43546/mod_resource/content/3
/Espectrofotometr%C3%ADa%202019%20versi%C3%B3n%20final.pdf
http://riul.unanleon.edu.ni:8080/jspui/bitstream/123456789/1513/1/214676.pdf
https://www.monografias.com/trabajos106/componentes-instrumentos-
espectroscopicos/componentes-instrumentos-espectroscopicos.shtml
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf