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Ejercicios Bioquimica
Ejercicios Bioquimica
Licenciatura en
Ciencias Ambientales
Prcticas de Bioqumica
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Prcticas de Bioqumica
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42
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52
-3-
Prcticas de Bioqumica
-4-
Prcticas de Bioqumica
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Prcticas de Bioqumica
-6-
Prcticas de Bioqumica
PRACTICA N 1.
PRECIPITADO Y CUANTIFICACIN DE PROTEINAS.
inmunoglobulinas,
que
estn
purificando
totalmente
las
inmunoglobulinas
sino
obteniendo
-7-
Prcticas de Bioqumica
-8-
Prcticas de Bioqumica
1.1.2 METODO.
1. Realizar una dilucin 1/5 del ST en H2O destilada. Preparar un volumen final de
6 ml. Aplicar la frmula:
Concentracininicial
Volumeninicial = Concentracinfinal
(Ci
Vi = Cf
Volumenfinal.
Vf.)
Vsal=V [(S2-S1)/1-S2]
Vsal= volumen que hay que aadir de la disolucin saturada de sal a la muestra.
V= volumen de muestra que se tiene.
S2= tanto por uno de la concentracin de sal a la que se quiere llevar la muestra.
S1= tanto por uno de la concentracin inicial de sal en la muestra
-9-
Prcticas de Bioqumica
- Fraccin 1
- Fraccin 2
- Fraccin 3
Vi = Cf
Vf.)
- 10 -
Prcticas de Bioqumica
- 11 -
Prcticas de Bioqumica
1.2.2 METODO.
1.- A partir de una disolucin de albmina a concentracin 1 mg/ml (1000 g/ml)
y usando agua destilada como diluyente, preparar 6 diluciones con volumen
final de 1 ml (1000 l), cada una con concentraciones finales de 5, 10, 25, 50,
75 y 100 g/ml. Realizar las diluciones en tubos eppendorf de 1.5 ml con tapa,
tambin denominados microtubos. Mezclar bien cada dilucin.
2.- Recoger una alcuota de 200 l de cada una de las diluciones preparadas
de BSA (includo el blanco) y depositarlos en una nueva batera de microtubos.
3.- Aadir 600 l del reactivo de Bradford a cada alcuota de 200 ml de cada
dilucin (includo el blanco) y mezclar manualmente por inversin. Aadir el
reactivo por orden desde la concentracin ms baja a la ms alta.
4.- Programar el colormetro a 595 nm de longitud de onda. Calibrar el
colormetro a cero de absorbancia con el blanco. Medir la absorbancia de
cada una de las muestras anotando el resultado obtenido en cada caso. Por
- 12 -
Prcticas de Bioqumica
ltimo, medir el blanco COMO SI FUERA UNA MUESTRA MS (sin reajustar a cero)
para comprobar el error en la medida de las muestras. Para medir, seguir
ESTRICTAMENTE el mismo orden de concentracin ms baja a ms alta que se
sigui para aadir el reactivo de Bradford.
5.- Representar la recta patrn relacionando la absorbancia obtenida para cada
dilucin con la concentracin de esa dilucin de BSA. Ajustar la recta
grficamente.
6.- Recoger una alcuota de 200 l de cada una de las diluciones de las
fracciones obtenidas en la prctica anterior (includo el blanco) y depositarlos
en una nueva batera de microtubos.
7. Aadir 600 l del reactivo de Bradford a cada alcuota de 200 ml de cada
dilucin de las fracciones (inclur un nuevo blanco) y mezclar manualmente
por inversin. Aadir el reactivo por orden desde la concentracin ms baja a
la ms alta, desde Fraccin 1 hasta ST(1/5).
8. Calibrar el colormetro a cero de absorbancia con el blanco. Medir la
absorbancia de cada una de las muestras anotando el resultado obtenido en
cada caso. Por ltimo, medir el blanco COMO SI FUERA UNA MUESTRA MS (sin
reajustar a cero) para comprobar el error en la medida de las muestras.
9. Interpolar en la recta patrn los valores de absorbancia obtenidos para cada
dilucin de fraccin analizada, y deducir su concentracin.
Es muy importante seguir un orden a la hora de aadir el reactivo de Bradford
para la posterior medida de las muestras. Para que las medidas de absorbancia
sean fiables, todos las muestras deben estar, en la medida de lo posible, el
mismo tiempo en contacto con el reactivo de Bradford.
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Prcticas de Bioqumica
Vi = Cf
Vf.
Vi
Ci
Cf
Vf
ml
ml
S2
S1
(peso/volumen)
(Vsal)
30 %
ml
40%
ml
60%
ml
Volumen de agua
100 g/ml
75 g/ml
50 g/ml
25 g/ml
10 g/ml
5 g/ml
Blanco
0 l
1000 l
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Prcticas de Bioqumica
2.- Inserta aqu los resultados de los clculos de cada dilucin de las fracciones.
Fraccin
Dilucin
ST (diluido 1/5)
dilucin 1/450
dilucin 1/900
dilucin 1/12
dilucin 1/24
dilucin 1/90
dilucin 1/180
dilucin 1/90
dilucin 1/180
0 l
900 l
Fraccin 1
Fraccin 2
Fraccin 3
Blanco
Volumen de fraccin
----------
Volumen de agua
100 g/ml
u.a.
75 g/ml
u.a.
50 g/ml
u.a.
25 g/ml
u.a.
10 g/ml
u.a.
5 g/ml
u.a.
Blanco (ltima)
u.a.
Diluciones de fracciones
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
Blanco (ltima)
u.a.
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Prcticas de Bioqumica
Concentracin de
la dilucin (g/ml)
u.a.
g/ml
u.a.
g/ml
u.a.
g/ml
u.a.
g/ml
u.a.
g/ml
u.a.
g/ml
u.a.
g/ml
u.a.
g/ml
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Prcticas de Bioqumica
Factor de dilucin
Concentracin de
la fraccin (g/ml)
g/ml
g/ml
g/ml
g/ml
g/ml
g/ml
g/ml
g/ml
Concentracin
Masa de protena
media de la fraccin
de la fraccin
(g/ml)
(en g)
Fr1
g/ml
Fr2
g/ml
Fr3
g/ml
St1/5
g/ml
g/ml
St
6.- Ordenar entre s las fracciones obtenidas en funcin de su masa (de menor
cantidad a mayor cantidad), y justificar si el orden obtenido es lgico o no y
por qu.
- 17 -
Prcticas de Bioqumica
se
producira
la
hidrlisis
del
agua.
Se
generaran
altas
Prcticas de Bioqumica
Figura 1: Electroforesis en gel de acrilamida. Polo superior: Ctodo (carga negativa). Polo inferior:
nodo (carga positiva).
su
peso
molecular
podemos
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Prcticas de Bioqumica
Peso molecular
Miosina
207.000 Daltons
-galactosidasa
118.000 Daltons
81.000 Daltons
Ovoalbmina
52.500 Daltons
Anhidrasa carbnica
36.200 Daltons
Inhibidor de tripsina de
29.900 Daltons
soja
Lisozima
Aprotinina
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20.700 Daltons
7.100 Daltons
Prcticas de Bioqumica
Se observan las bandas correspondientes a las cadenas pesadas en las tres fracciones. En la
ST1/5, debido a la gran cantidad de protena, aparece una mancha en la que no se puede
distinguir la banda correspondiente a la cadena pesada. Las cadenas ligeras en la fraccin I y II
no se detectan debido a la baja concentracin de protenas. En la fraccin II comienza a
detectarse una banda muy tenue, mientras que en la ST1/5 se observa ntidamente pero en forma
de mancha en lugar de en forma de banda.
Se mide la distancia migrada en milmetros. Medir la distancia entre el inicio del gel resolutivo y el
centro de cada banda, tanto para las bandas del marcador de peso molecular de protenas
como para las bandas correspondientes a las cadenas pesadas y ligeras.
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Prcticas de Bioqumica
Ejercicio
1.- Inserta aqu las medidas de migracin de las bandas del marcador de peso
molecular y de las cadenas ligera (Cl) y pesada (Cp) de las inmunoglobulinas.
Bandas del Marcador
Peso molecular
Miosina
207.000 Daltons
mm
-galactosidasa
118.000 Daltons
mm
81.000 Daltons
mm
Ovoalbmina
52.500 Daltons
mm
Anhidrasa carbnica
36.200 Daltons
mm
29.900 Daltons
mm
Lisozima
20.700 Daltons
mm
Aprotinina
7.100 Daltons
mm
Fracciones
Distancia Migrada
Distancia migrada
Distancia Migrada
Cadena Pesada
Cadena Ligera
Fraccin 1
mm
mm
Fraccin 2
mm
mm
Fraccin 3
mm
mm
ST 1/5
mm
mm
Dilisis
mm
mm
Intercambio 1
mm
mm
Intercambio 2
mm
mm
Intercambio 3
mm
mm
CP =
mm
CL =
mm
2.- Construir SOBRE PAPEL MILIMETRADO ORIGINAL la recta patrn que relaciona el
logaritmo decimal de la distancia migrada (en mm) DE CADA BANDA DEL
MARCADOR con su peso molecular. Sobre esta recta INTERPOLAR la distancia
media de migracin de la cadena ligera y la cadena pesada de las
inmunoglobulinas para deducir su peso molecular. Representar sobre la
grfica ambas interpolaciones. Presentar los pesos moleculares de ambas
cadenas.
Peso molecular Cadena Pesada
Daltons
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Daltons
Prcticas de Bioqumica
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Prcticas de Bioqumica
PRACTICA N 2.
DETERMINACIN DE LA Km DE LA FOSFATASA CIDA PARA EL pNITROFENILFOSFATO Y DE LA Ki PARA LA INHIBICIN POR FOSFATO
La actividad enzimtica se ve afectada entre otros factores, por la
concentracin de sustrato inicial en la reaccin [S]inicial. La constante de
Michaelis-Menten (Km) se define como la concentracin de sustrato para la cual
la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima (Vmx). Permite
conocer la concentracin mnima de sustrato a la que hay que realizar los
ensayos de actividad enzimtica.
Fig. 1a: Grfica hiperblica Vo frente a [S]; Fig 2b: Grfica tipo Lineweaver-Burk (inversos).
en
presencia
del
inhibidor.
Los
enzimas
pueden
inhibirse
- 24 -
Prcticas de Bioqumica
Fig. 2: Grficas hiperblica Vo frente a [S] y representacin de inversos para inhibicin reversible
competitiva (A) e inhibicin reversible no competitiva (B).
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Prcticas de Bioqumica
E+I
EI
Ki =
[E] [I]
[EI]
- 26 -
Prcticas de Bioqumica
- 27 -
Prcticas de Bioqumica
2.1.2 METODO.
Preparar en tubos de 2 ml un banco de diluciones seriadas a partir de una
dilucin inicial de PNPP 50 mM. Utilizar la frmula Ci
Vi = Cf
Volumen inicial
Volumen de Tampn
Citrato pH 4.0
50 mM
2000 l
40 mM
l del 50 mM
30 mM
l del 40 mM
20 mM
l del 30 mM
10 mM
l del 20 mM
8 mM
l del 10 mM
4 mM
l del 8 mM
2 mM
l del 4 mM
- 28 -
Prcticas de Bioqumica
2.2.2 MTODO.
IMPORTANTE: Realizar primero las reacciones sin inhibidor y medir su absorbancia.
Una vez comprobado que los valores obtenidos son aceptables, realizar las
reacciones con inhibidor y medir su absorbancia.
1. Numerar los tubos de centrfuga, colocarlos en una gradilla y poner en cada
uno de ellos las cantidades de tampn, sustrato e inhibidor que se indica en la
tabla. Aadir a cada uno de los tubos (excepto el blanco) 0.2 ml de la
suspensin de clulas de Saccharomyces cerevisiae (que contienen fosfatasa
cida). Agitar la suspensin de clulas antes de pipetearla.
2. Incubar las reacciones durante 15 minutos a 30C en una estufa o bao.
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Prcticas de Bioqumica
Volumen de sustrato
Citrato pH 4.0
(p-Nitrofenilfosfato)
0.6 ml
0.2 ml del 2 mM
0.2 ml
0.6 ml
0.2 ml del 4 mM
0.2 ml
0.6 ml
0.2 ml del 8 mM
0.2 ml
0.6 ml
0.2 ml del 10 mM
0.2 ml
0.6 ml
0.2 ml del 20 mM
0.2 ml
0.6 ml
0.2 ml del 30 mM
0.2 ml
0.6 ml
0.2 ml del 40 mM
0.2 ml
0.6 ml
0.2 ml del 50 mM
0.2 ml
Blanco s
0.8 ml
0.2 ml del 2 mM
----------
nmero de reaccin
Levadura
Volumen de
Tampn
Citrato pH 4.0
Volumen de sustrato
(p-Nitrofenilfosfato)
Inhibidor (fosfato
monopotsico
Levadura
15 mM)
0.4 ml
0.2 ml del 2 mM
0.2 ml
0.2 ml
10
0.4 ml
0.2 ml del 4 mM
0.2 ml
0.2 ml
11
0.4 ml
0.2 ml del 8 mM
0.2 ml
0.2 ml
12
0.4 ml
0.2 ml del 10 mM
0.2 ml
0.2 ml
13
0.4 ml
0.2 ml del 20 mM
0.2 ml
0.2 ml
14
0.4 ml
0.2 ml del 30 mM
0.2 ml
0.2 ml
15
0.4 ml
0.2 ml del 40 mM
0.2 ml
0.2 ml
16
0.4 ml
0.2 ml del 50 mM
0.2 ml
0.2 ml
Blanco i
0.6 ml
0.2 ml del 2 mM
0.2 ml
----------
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Prcticas de Bioqumica
4. Centrifugar para evitar la turbidez producida por las clulas y conservar los
sobrenadantes.
5. Programar el colormetro a 400 nm de longitud de onda. Calibrar el
colormetro a cero de absorbancia con el blanco. Medir la absorbancia de
cada una de las reacciones anotando el resultado obtenido en cada caso.
Por ltimo, medir el blanco COMO SI FUERA UNA MUESTRA MS (sin reajustar a
cero) para comprobar el error en la medida de las muestras. Para medir, seguir
ESTRICTAMENTE el orden de concentracin ms baja a concentracin ms alta
de sustrato.
Inserta aqu las medidas colorimtricas obtenidas.
Nmero de reaccin
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
u.a.
Blanco s (ltima)
u.a.
u.a.
10
u.a.
11
u.a.
12
u.a.
13
u.a.
14
u.a.
15
u.a.
16
u.a.
Blanco i (ltima)
u.a.
- 31 -
Prcticas de Bioqumica
Volumen de sustrato
[S] inicial en la
Volumen de Inhibidor
[I] inicial en la
reaccin
usado en la reaccin
reaccin
usado en la reaccin
reaccin
0.2 ml del 2 mM
mM
----------
----------
0.2 ml del 4 mM
mM
----------
----------
0.2 ml del 8 mM
mM
----------
----------
0.2 ml del 10 mM
mM
----------
----------
0.2 ml del 20 mM
mM
----------
----------
0.2 ml del 30 mM
mM
----------
----------
0.2 ml del 40 mM
mM
----------
----------
0.2 ml del 50 mM
mM
----------
----------
0.2 ml del 2 mM
mM
0.2 ml del 15 mM
mM
10
0.2 ml del 4 mM
mM
0.2 ml del 15 mM
mM
11
0.2 ml del 8 mM
mM
0.2 ml del 15 mM
mM
12
0.2 ml del 10 mM
mM
0.2 ml del 15 mM
mM
13
0.2 ml del 20 mM
mM
0.2 ml del 15 mM
mM
14
0.2 ml del 30 mM
mM
0.2 ml del 15 mM
mM
15
0.2 ml del 40 mM
mM
0.2 ml del 15 mM
mM
16
0.2 ml del 50 mM
mM
0.2 ml del 15 mM
mM
- 32 -
Prcticas de Bioqumica
[S] inicial
1/[S] inicial
Vmax (Abs)
1/ Vmax (Abs)
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
10
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
11
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
12
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
13
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
14
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
15
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
16
mM
1/mM
u.a.
1/u.a.
- 33 -
Prcticas de Bioqumica
Vmax (Abs)
Km
Hiperblica
Grfica
mM
-1/Km
u.a.
1/Vmax (Abs)
(mM)-1
Inversos
Km
Kap
(u.a.)-1
Vmax (Abs)
mM
u.a.
- 34 -
Vmax-ap (Abs)
mM
-1/Kap
(mM)-1
Kap
u.a.
1/Vmax-ap
(Abs)
(u.a.)-1
Vmax-ap (Abs)
mM
u.a.
Prcticas de Bioqumica
Nmero de
reaccin
[S] inicial
% actividad
% inhibicin
mM
10
mM
11
mM
12
mM
13
mM
14
mM
15
mM
16
mM
Km
[I] inicial
Kap
mM
mM
- 35 -
mM
Ki
mM
Prcticas de Bioqumica
- 36 -
Prcticas de Bioqumica
- 37 -
Prcticas de Bioqumica
- 38 -
Prcticas de Bioqumica
PRCTICA N 3
PURIFICACION VIRTUAL DE PROTEINAS CON ACTIVIDAD ENZIMATICA
En esta sesin se utilizar un programa de ordenador, ProtNLab, que simula
el proceso de purificacin de un enzima. Este programa ha sido creado por el Dr.
A. G. Booth de la Facultad de Bioqumica y Biologa Molecular de la Universidad
de Leeds (Reino Unido). Las versiones del programa para distintas plataformas
(Windows,
Mac
Unix)
se
encuentra
disponible
en
la
pgina
web
- 39 -
Prcticas de Bioqumica
CARGA NETA
POSITIVA
CONTRAION
Anin
CM-Celulosa
NEGATIVA
Catin
Q-Sepharosa
POSITIVA
Anin
S-Sepharosa
NEGATIVA
Catin
Sephadex G50
1.5 - 30
Sephadex G100
4 - 150
Sephacryl S-200
5 - 250
Ultrogel ACA 54
5 - 70
Ultrogel ACA 44
10 - 130
Ultrogel ACA 34
20 - 350
Biogel P 60
3 - 60
Biogel P 150
15 - 150
Biogel P 300
60 - 400
- 40 -
Prcticas de Bioqumica
- 41 -
Prcticas de Bioqumica
igual a su punto isoelctrico (pI), en la cual su carga neta ser cero y por lo tanto
su movilidad ser nula. El isoelectroenfoque es la primera dimensin (figura 2).
2.- Electroforesis SDS-PAGE. El gel de isoelectroenfoque se sita perpendicular a la
direccin de migracin de la segunda electroforesis en un gel de poliacrilamida
en condiciones desnaturalizantes y reductoras (SDS-PAGE) (figura 2). Las protenas
migran en esta segunda dimensin en funcin de su peso molecular y se
detectan como manchas discretas en una posicin que se corresponde en la
dimensin horizontal con su peso molecular y en la vertical con su punto
isoelctrico ( pI ). La electroforesis bidimensional tiene una alta resolucin,
permitiendo separar incluso 2000 protenas diferentes en un solo gel.
3.1.2 MTODO.
Nuestro objetivo es purificar a homogeneidad (sin ningn otro enzima
contaminante) el enzima contenido en el material de partida. Para ello, a partir
de una muestra determinada se irn realizando secuencialmente las pruebas
indicadas en la descripcin del programa, variando las condiciones de cada
ensayo para optimizar la purificacin de la protena problema.
- 42 -
Prcticas de Bioqumica
Problema
Se dispone de una mezcla de tres protenas A, B y C que deseamos
purificar. La protena A es una enzima, por lo que utilizaremos la medida de su
actividad enzimtica para seguir su separacin. En primer lugar, realizamos
precipitacin con sulfato amnico hasta saturacin final del 45% y conservamos
la fraccin soluble. Teniendo en cuenta los resultados de valorar la mezcla inicial
y la fraccin soluble presentados en la tabla, calcular la actividad total y el
enriquecimiento de esta fraccin.
Como segundo paso del proceso de purificacin, realizamos cromatografa
de intercambio de iones en DEAE-Celulosa a pH 8,5 y elucin en un gradiente de
Cl Na. Los resultados de valorar la actividad enzimtica y la cantidad de protena
en cada una de las fracciones obtenidas se muestran en el siguiente grfico,
mientras que las mismas medidas realizadas en una mezcla de las fracciones 4 a
9 se presentan en la tabla. Calcular el rendimiento y el enriquecimiento para este
paso.
PROTEINA
ACTIV ENZ
RENDIMIENTO
ENRIQUECIMIENTO
MG
UI
INICIAL
511
6.000
100
Sulfato amnico
121
DEAE-CELULOSA
19
94
5.600
0.5
0
5
10
15
20
25
30
Nmero de fraccin
_________________Cantidad de protena
. . . . . . . . . . . . . . . . . . Actividad enzimtica de A
--------------------Concentracin molar
de Cl Na
- 43 -
35
40
45
50
Prcticas de Bioqumica
pH
kDa
94
68
C
B
45
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Prcticas de Bioqumica
PRACTICA N 4.
TCNICAS CROMATOGRFICAS.
Muchas de las tcnicas que se utilizan en Bioqumica para la separacin de
los componentes de una mezcla de molculas biolgicas, se basan en las
diferencias que existen en las propiedades fsicas y/o qumicas de sus
componentes. Los componentes con propiedades fsico-qumicas muy diferentes
son fcilmente separables, sin embargo,si presentan propiedades muy similares,
los mtodos de separacin tendrn que ser ms complejos.
En todas las cromatografas existen una fase mvil y una fase estacionaria.
La velocidad a la que cada componente atraviesa la fase estacionaria depende
de la suma de la fuerza de transmisin que produce el movimiento de la fase
mvil y de la fuerza de interaccin del componente con la fase estacionaria que
tiende a frenar este desplazamiento.
La interaccin de los componentes con la fase estacionaria puede consistir
en un reparto entre la fase estacionaria y la fase mvil o en una adsorcin a la
fase estacionaria. Un tipo particular de cromatografa de reparto lo constituye la
cromatografa de filtracin en gel (o tambin denominada de exclusin). Otras
cromatografas se basan en la adsorcin, como la cromatografia de intercambio
de iones y la cromatografa de afinidad.
- 45 -
Prcticas de Bioqumica
- 46 -
Prcticas de Bioqumica
4.1.2 MTODO.
1.- Recortar una tira de papel Whatman de 15 cm de largo por 2,5 cm de ancho.
Dibujar sobre el papel Whatman 2 lneas con lpiz. Una a 2 cm de uno de los
extremos y otra a 6 cm del otro extremo.
2.- Embeber el papel Whatman en fase estacionaria (agua) dentro de la placa
petri, procurando eliminar el exceso.
3.- En un tubo Falcon de 50 ml, aadir 3 ml de fase mvil (mezcla de disolvente).
Depositar el Falcon cerrado en una gradilla.
4.- Situar la tira de papel embebida en agua sobre la tapa seca de la placa de
petri. Sobre la lnea situada a 2 cm del papel de celulosa, depositar un par de
muestras de la mezcla de pigmentos. Cada muestra ser de 5 l y deben estar
suficientemente separadas entre s.
5.- Abrir el Falcon, tomar la tira de papel con la muestra de pigmentos e
Introducirla en el tubo de manera que no toque las paredes y que el disolvente
moje el extremo inferior de la tira, pero sin llegar a tocar la muestra. A
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Prcticas de Bioqumica
continuacin, doblar el extremo superior por fuera del Falcon (por encima de la
marca de 6 cm) y cerrarlo con la tapa.
6.- Esperar a que el disolvente ascienda por capilaridad hasta aproximadamente
la marca superior del papel. Sacar la tira del tubo, dejar secar y medir el Rf de
cada mancha de pigmento que aparezca.
Figura 2: Medicin de la distancia migrada por cada pigmento
Rf = DA / DS
DA=
distancia
alcanzada
por
el
alcanzada
por
el
pigmento.
DS=
distancia
disolvente
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B)
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Prcticas de Bioqumica
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Pigmento
Verde Luz
Azul dextrano
Hemoglobina
Muestra
aplicada
Valor DA
Valor Rf
Muestra 1
mm
mm
Muestra 2
mm
mm
Muestra 1
mm
mm
Muestra 2
mm
mm
Muestra 1
mm
mm
Muestra 2
mm
mm
Valor medio
Rf
mm
mm
mm
Valor Ds:______________mm
1er Pigmento ms hidroffico:
2do Pigmento ms hidroffico:
3er Pigmento ms hidroffico:
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ANOTACIONES
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Prcticas de Bioqumica
ANOTACIONES
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ANOTACIONES
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