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Resumen. Los frutos de pltano Dominico Hartn (Musa AAB Simmonds) en estado
maduro se utilizaron en la elaboracin de un sustrato lquido a partir de la pulpa. Al
sustrato se le determin el contenido de Mn, Zn, Fe, Mg, Cu, N y P, para evaluar si la
concentracin de los metales estaba dentro de los rangos permitidos para los procesos
metablicos del Aspergillus niger, descartndose la adicin o remocin de alguno de
stos. En el trabajo del que da cuenta este artculo se obtuvo cido ctrico a partir de
sustrato de pulpa de pltano Dominico Hartn en estado maduro, empleando la cepa
del hongo Aspergillus niger (donada por la universidad EAFIT). Se utiliz un inculo
al 5% de suspensin de esporas (concentracin aproximada de 1.0X107 esporas/mL)
para proceso de fermentacin por lotes, se utiliz un volumen de 2 litros de sustrato
de pltano al cual se le ajustaron el pH y la concentracin de azucares reductores,
para alcanzar el mejor rendimiento en la obtencin de cido. En la evaluacin de la
eficiencia de produccin se obtuvieron 13.5 g/L de cido ctrico.
Palabras clave: Pltano, cido ctrico, Aspergillus niger.
Abstract. Ripe Dominico Hartn plantain fruits (Musa AAB Simmonds) were used
in the elaboration of a liquid substratum from the pulp. Contents of Mn, Zn, Fe, Mg,
Cu, N and P in the substratum were determined, in order to evaluate if the concentration of the metals was among the appropriate ranges for the metabolic processes of
Aspergillus niger, being discarded the addition or removal of some of these metals. In
this paper we present some results of a work performed in order to obtain citric acid
from substratum made with ripe Dominico Hartn pulp, using the stump of the Aspergillus niger fungus (donated by EAFIT university). It was used an inoculate to 5%
of suspension of spores (approximate concentration of 1.0X107 spores/mL) for the
in-batch fermentation process. A volume of 2 liters of banana substratum was used,
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II
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Laboratorio Diseo de Nuevos Productos, Universidad del Quindo. Calle 12 Norte Cra 15, Armenia,
Colombia.
johnalexvelasquez@gmail.com
Director del Grupo de Investigacin Agroindustria de Frutas Tropicales perteneciente a la Universidad del
Quindo, Ingeniera de Alimentos.
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whose pH and concentration of sugar reducers were adjusted, in order to reach the
best yield in the acid obtaining. In the evaluation of the production efficiency 13.5
g/L of citric acid were obtained.
Key words: Plantain, citric acid, Aspergillus niger.
1. INTRODUCCIN
El cido ctrico ha sido conocido como una sustancia natural de las plantas desde
finales del siglo XIX, y desde 1893 los cientficos saben que es producido por hongos
filamentosos. En 1923 se inici la primera fermentacin prctica para la produccin
de este cido orgnico utilizando microorganismos que crecan sobre la superficie de
los cultivos (1). En la actualidad el uso de hongos para la elaboracin de importantes productos comerciales ha aumentado rpidamente en los ltimos tiempos (2),
instaurando un marco en el cual el cido ctrico se ha posicionado como el mayor
cido orgnico producido por fermentacin con Aspergillus niger, a la vez que es ampliamente usado en la industria de alimentos, bebidas, farmacutica, qumica entre
otras (3).
Los microorganismos capaces de producir y acumular cido ctrico son las especies de
los gneros Aspergillus, Citromyces, Penicillium, Monilia, Candida y Pichia, aunque
para la produccin comercial slo se utilizan mutantes de Aspergillus niger. Comparados con las cepas de Penicillium, los Aspergillus producen ms cido por unidad
de tiempo, debido a que presentan baja actividad de las enzimas isocitrato deshidrogenasa y aconitasa hidratasa, y una alta actividad de citrato sintetasa. Las anteriores
constituyen ventajas importantes si se toma en cuenta que adems la formacin de
productos laterales no deseados como cido oxlico, cido isoctrico y cido glucnico puede ser fcilmente suprimida en estos mutantes (4).
En Colombia inicialmente se emple azcar refinada como materia prima para la
obtencin de cido ctrico en Sucromiles, generando un alto costo de produccin.
Con los aos se han buscado nuevas alternativas de produccin ms econmicas y se
ha logrado cultivar A. niger con azcar morena obteniendo buenos resultados, pero
el costo an es alto (5).
En cuanto a la produccin de cido ctrico, Grewal y Kalra (6) afirman que el pH
inicial requerido depende de la fuente de carbono utilizada, y Ruijter y sus colegas
(7) mencionan que los hongos filamentosos Aspergillus niger acumulan altas concentraciones de cido ctrico a partir de hexosas o disacridos cuando es cultivado bajo
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en el sustrato se emple para evaluar el pH inicial de 4.0, 5.0 y 6.0. Para evaluar la
concentracin del sustrato se ajust, diluyendo con agua o aumentando la concentracin utilizando rotavapor a 60 C y 75 mbar, para evaluar las concentraciones de 50,
100 y 150 g/L de azucares reductores, se utiliz el pH inicial de 5.0. Se tomaron las
muestras cada 0, 24, 48, 72, 96, 120 y 144 horas para realizar los respectivos anlisis.
2.3 Mtodos de anlisis
El contenido de Mn, Zn, Fe, Mg y Cu se determin por absorcin atmica, empleando la metodologa para anlisis de minerales en jugos de frutas descrita por Ross
y Price (9). El nitrgeno se cuantific por el mtodo de kjeldhal (10). La concentracin de fsforo se determin mediante U.V. visible empleando la metodologa de
Norma (11). La concentracin de la solucin de esporas se cuantific en una cmara
de Neubauer, y por dilucin se obtuvo la concentracin deseada para la inoculacin.
Para la determinacin de biomasa se utiliz el mtodo de peso seco, mediante el cual
se separ la biomasa del medio empleando filtracin por gravedad. La biomasa obtenida se sec en una estufa a 80C, posteriormente se registr su peso hasta obtener
peso constante en la muestra. Los azcares reductores se cuantificaron empleando la
metodologa descrita por Miller (12), mediante el uso del mtodo colorimtrico del
cido 3,5-dinitrosaliclico (DNS). La concentracin de cido ctrico se determin
por el mtodo espectrofotomtrico reportado por Marrier and Boulet (13), utilizando un espectrofotmetro U.V. visible.
Se emple el mtodo emprico para evaluar las variables en el proceso fermentativo.
Este mtodo tradicional emplea la estrategia de un factor al tiempo e involucra la variacin de un factor mientras que los otros permanecen constantes bajo unas condiciones especficas. Slo es til cuando se aplica a pocas variables, es simple de manejar
y permite la interpretacin de resultados sin anlisis estadstico (14).
3. RESULTADOS Y DISCUSIN
3.1 Sustrato de pltano
De acuerdo a los resultados obtenidos sobre el anlisis de los metales en el sustrato
(Tabla 1), se encontr que no se requiere ningn tratamiento previo para remocin
de los mismos, debido a que los metales no estn en lmites extremos que puedan
afectar el proceso de fermentacin sumergida para la produccin de cido ctrico.
El Aspergillus niger produce poco cido ctrico a niveles bajos de Mn2+, debido a
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Concentracin
0,771 ppm
149,592 ppm
0,271 ppm
1,048 ppm
2,015 ppm
8,000 ppm
7,330 ppm
3.2 Fermentacin
3.2.1 Evaluacin del pH
El sustrato evaluado se emple como medio de cultivo en los procesos fermentativos
por lotes, donde se evalu la produccin de cido ctrico a diferente pH inicial de
4.0, 5.0 y 6.0 (figura 1a).
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1a)
pH6.0
pH5.0
pH4.0
8
7
6
5
4
3
2
1
0
-1
-20
20
40
60
80
Horas
Biomasa g/L
1b)
28
26
24
22
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
-2
-20
pH6.0
pH5.0
pH4.0
20
40
60
80
100
120
140
160
Horas
Parmetros evaluados a diferente pH inicial. Figura 1a. Produccin de cido ctrico. Figura 1b.
Produccin de biomasa.
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remolacha como medio de cultivo obtuvieron la mxima produccin de cido ctrico a los cuatro das y a partir de este periodo la produccin decreci, debido a la
disminucin de la fuente de carbono en el sustrato y su repercusin en la muerte del
microorganismo. Este fenmeno se observa en la figura 1b, donde se muestran las
fases de crecimiento del Aspergillus niger en el sustrato de pltano bajo diferentes
pH. En ella para el pH de 5.0, no se hace evidente la fase de latencia, debido que en
las primeras 24 horas ya existe un crecimiento micelial, indicando que esta fase se
encuentra entre 0 y 24 horas. A partir de este periodo y hasta las 48 horas se presenta
la fase exponencial, seguida por la fase estacionaria, que se extiende desde las 48 a las
96 horas, y por ltimo se presenta la fase de muerte a partir de las 96 horas.
Al evaluar el factor del pH sobre la produccin de cido ctrico y el crecimiento del
hongo, se evidenci el factor inhibidor de la disposicin de la fuente de carbono, por
lo que se plante evaluar la concentracin de azucares reductores en el sustrato.
3.2.2 Evaluacin de la concentracin de azcares
Se utilizaron concentraciones en el sustrato de pltano de 50, 100 y 150 g/L de azucares reductores, con el fin de evaluar la influencia de este factor sobre la produccin
de cido ctrico y el crecimiento del Aspergillus niger.
2a)
conc.150
conc.100
conc.50
14
12
10
8
6
4
2
0
-2
50
100
Horas
141
150
200
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2b)
conc.150
conc.100
conc.50
35
30
Biomasa g/L
25
20
15
10
5
0
-5
0
50
100
150
200
Horas
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120
14
a)
b)
12
100
10
80
4
2
0
-2
Biomasa g/L
36
34
32
30
28
26
24
22
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
-2
50
100
150
40
20
0
200
50
Horas
c)
60
100
150
200
Horas
d)
4
pH
50
100
150
200
Horas
50
100
150
200
Horas
Fermentacin a pH inicial 5.0 y concentracin inicial de 150 g/L de azucares reductores, donde
se muestra. Figura 3a. Produccin de cido ctrico. Figura 3b. Produccin de biomasa. Figura 3c.
Consumo de azucares reductores. Figura 3d. Variacin del pH.
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4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Se encontr que el sustrato de pltano Dominico Hartn no es txico para el crecimiento del hongo filamentoso Aspergillus niger y la produccin de cido ctrico, a
pesar de que este medio es un sustrato complejo y no convencional.
Se obtuvo la mxima concentracin de 13,5 g/L de acido ctrico, utilizando un pH
5.0 y 150g/L de azcar reductores, a las 192 horas del proceso fermentativo.
Resulta necesario evaluar el crecimiento de Aspergillus niger y la produccin de cido
ctrico, utilizando sustrato de pltano con concentraciones de azcares reductores
mayores a 150 g/L.
Tambin sera de utilidad evaluar en el sustrato de pltano diferentes concentraciones
de aditivos utilizados para mejorar el crecimiento de Aspergillus niger y la produccin de cido ctrico.
AGRADECIMIENTOS
Los autores manifiestan su agradecimiento al programa de Qumica de la Universidad del Quindo y al grupo de investigacin Agroindustria de Frutas Tropicales,
perteneciente a los programas de Qumica y Ciencias Agroindustriales de la misma
universidad.
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Fecha de
recepcin
Fecha de
aprobacin
Da/mes/ao
27/09/2010
Referencia
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