Cinética y modelización de la producción de ácido kójico

Aspergillus flavus por Enlace en la fermentación por lotes

y resuspendido del sistema de micelio.

A. B. Ariff, M. * Rosfarizan, L. S. Herng, S. Madihah, y M.i.a. Karim

Se propuso un modelo estructurado sobre la base de ecuaciones logísticas y Luedeking-

Piret para describir el crecimiento, el consumo de sustrato y la producción de ácido kójico
por Aspergillus flavusEnlace cepa 44-1 en la fermentación por lotes y
también en un sistema de células resuspendido. El modelo mostró que la producción de
ácido kójico era de no crecimiento asociado. Los ácidos y celulares máximas
concentraciones kójico obtenidos en fermentaciones en lotes utilizando el fermentador con
optimizados control de oxígeno disuelto (32,5 g / l y 11,8 g / l, respectivamente) y el uso de
un frasco de agitación (36,5 y 12,3 g / l, respectivamente) no fueron significativamente
diferentes. Sin embargo, la tasa de crecimiento específico máxima y una tasa de crecimiento
no-asociado constante para la formación de ácido kójico (n) para la fermentación por lotes
utilizando el fermentador (0,085 / h y 0,0125 g de ácido kójico / g cell.h, respectivamente)
fueron aproximadamente tres y dos veces más altos que los valores obtenidos para la
fermentación utilizando un frasco de agitación, respectivamente. Conversión eficiente de la
glucosa a ácido kójico se logró en un precipitado resuspendido o sistema micelial, en una
solución que contiene sólo glucosa con tampón citrato a pH 3,5 y a una temperatura de 30?
C.

El material celular se volvió a suspender en la solución de glucosa se mantuvo activo en la

síntesis de ácido kójico después de prolongada de incubación (hasta alrededor de 600 h). La
constante de velocidad de la producción de ácido kójico (n) en un sistema celular
resuspendido utilizando 100 g de glucosa / l fue casi constante en un valor medio de 0.011 g
de ácido kójico / g cell.h hasta una concentración celular de 19,2 g / l, por encima de lo cual
disminuyó. Se observó una reducción drástica de n a una concentración celular de 26,1 g / l.
Sin embargo, El rendimiento basado en glucosa consumida (0,45 g / g) fue similar para
todas las concentraciones de células investigadas.

Palabras clave: hongos Aspergillus flavus Link, ácido kójico, el modelado, se volvieron a
suspender sistema de micelio.

El ácido kójico (5-hidroxi-2-hidroximetil-c-pirona) es ampliamente utilizado como un inhibidor

del crecimiento de Gram-gativobacterias Ative (Beelik 1956). El ácido kójico y sus derivados
han sido probados como posibles reactivos antibacterianos (Kayahara et al. 1990) y se
utiliza en el campo médico como un analgésico y antiinflamatorio (Anon, 1992). En la
industria alimentaria, se utiliza como un precursor de sabor
potenciadores (Le Blanc y Akers 1989). El ácido kójico tiene la capacidad para prevenir la
melanosis indeseable (ennegrecimiento) de los productos agrícolas mediante la inhibición de
la polifenol oxidasa (Chen et al. 1991), y también se utiliza como un producto de cuidado de
la piel para blanquear (Ohyama y Mishima 1990) y como un pro-protectora contra la luz U.V.
ligero.
El ácido kójico puede ser producida por Aspergillus spp. Y Penicilliumspp. Principalmente
pertenecientes a la flavus-oryzae-ta- marii grupos. Entre ellos, Aspergillus flavus Link
(Bajpaiet al. 1981, 1982; Megalla et al. 1987; Nandan y Polasa1985; Madihah et al. 1993) y
Aspergillus parasiticus (Nandan y Polasa 1985; Coupland y Niehaus 1987) tienen ha
informado que tiene la capacidad de producir grandes cantidades de ácido kójico. El ácido
kójico puede ser producido ya sea mediante el uso de la fermentación por lotes aeróbica
(Kitada et al 1971.; Madihah et al. 1993) o material celular se resuspendió en solución
tamponada que contiene sólo glucosa (Bajpai et al. 1981, 1982). Si bien, las condiciones
culturales de la im-mejora- de la producción de ácido kójico se han estudiado
extensivamente (Kitada et al 1967;.. Madihah et al 1993), in-formación sobre la cinética de la
producción de ácido kójico y desarrollo de modelos para describir el proceso son escasos.

En este estudio, los datos experimentales de lote fermentación del ácido kójico por cepa de
Aspergillus flavus Enlace Mundo Diario de Microbiología y Biotecnología, Vol 13, 1997 195
Los autores pertenecen al Departamento de Biotecnología de la Universidad
PertanianMalasia, 43400 UPM Serdang, Selangor D. E., Malasia; fax: 03 9485970 /
9423552. * Autor para la correspondencia. Mundo Diario de Microbiología y Biotecnología
13, 195-201 ª 1997 Rapid SciencePublishers
44-1 se analizó con el fin de formar la base para una cinética modelo del proceso. La
cinética de la producción de ácido kójico ción usando un sistema de células resuspendido
también se describe.

El modelo puede permitir una mejor comprensión y control de la producción de ácido kójico
por A. flavus Link.

Materiales y métodos

Microorganismos y Medio

El molde, Aspergillus flavus Enlace cepa 44-1, obtenida de la Departamento de

Biotecnología de la Universidad Pertanian Malasia, se utilizó para la producción de ácido
kójico. con- medio Solid Taining (g / l): sacarosa, 140; KH 2 PO 4, 1; MgSO 4 .7H 2 O, 0,25;
NH 4 NO 3, 2.5; agar, 15 se utilizó para la preparación de cultivos inclinados de la
producción de esporas. Después de la inoculación con un asa de siembra de esporas del
cultivo de reserva, la inclinación se incubó a 30 ° C durante la desarrollo de esporas. Para la
preparación del inóculo, 1 ml de esporas suspensión (aproximadamente 12 · 10 9 esporas /
ml) se inoculó en 100 ml de medio en un 250-ml frasco de agitación. El matraz estaba se
incubaron a 30? C en un agitador orbital (250 rev / min) durante 24 h.

Un 10% (v / v) de inóculo se utilizó en todos los experimentos.

El medio optimizado para la producción de ácido kójico por A. flavus Enlace como se
describe por Madihah et al. (1993) se utilizó en todos experimentos para la preparación del
inóculo y también para el ácido kójico fermentación. El medio contenía (g / l): glucosa, 100;
levadura extraer, 5; KH 2 PO 4, 1; MgSO 4 .7H 2 O, 0,5; y 10 ml de metanol / l.

Las fermentaciones

Las fermentaciones por lotes de ácido kójico se llevaron a cabo utilizando una sacudida de
frasco y el fermentador. El matraz de 250 ml que contiene 150 ml medio con un pH inicial de
3,0 se inoculó con un 10% (v / v) inóculo. El matraz se incubó a 30? C en un agitador
rotatorio y se agitó a 250 rev / min. En la producción mediante el fermentador, se utilizó un
2-l B. Braun agitada fermentador de tanque (Biostat. B). Dos impulsores de turbina de seis
palas con un diámetro (D) de 52 mm montado en el eje del agitador se utilizó para la
agitación. la fermentación Menter estaba equipado con la temperatura y el oxígeno disuelto
controladores. Durante la fermentación, la velocidad de agitación (N) era fijo a 600 rev / min
(velocidad periférica del impulsor = 2pND = 3,27 m / s) y la tensión de oxígeno disuelto
(d.o.t) en el caldo de cultivo se controlado a través de un control en cascada secuencial de
caudal de aire. Los puntos de ajuste máximo y mínimo de las velocidades de flujo de aire
permitidos eran 1,5 l / min y 0,1 l / min, respectivamente. el polar o gráfico sonda de oxígeno
disuelto (Ingold) se utilizó para medir d.o.t los niveles. La salida del controlador maestro
oxígeno trabaja directamente en la entrada del punto de ajuste del controlador de flujo de
aire utilizado. El punto nivel durante la fermentación se registró continuamente por usando
una grabadora (Kipp yZonen, Holanda) conectado a la controlador principal. La estrategia de
control de aireación óptima para máxima producción por lotes de ácido kójico fue empleado
(des obra publicada). En esta estrategia de control, la d.o.t durante el crecimiento y la
producción (cuando el crecimiento alcanzó una fase estacionaria)
fases se controlaron a 80% y 30% de saturación, respectivamente. El pH inicial del cultivo se
ajustó a 3,0 y de la cultura pH no se controló pero registró continuamente durante la
fermentación. La tem-peratura dentro del fermentador fue
mantenido a 30 ° C. CellSystemsresuspendidas

La producción de ácido kójico por A. flavus Link también se estudia con un sistema de
células resuspendido. La producción de material celular era primero realizado en el
fermentador y también en un frasco de agitación usando las mismas condiciones de medio y
culturales como en el lote fermentación. Después de crecimiento alcanzó una fase
estacionaria, las células fueron mazo de conferida por centrifugación a 6000 · g durante 20
min. Las células se lavaron con agua desionizada estéril y se centrifugaron el contenido
entero de los gránulos cosechadas a partir de un frasco de agitación cultivación y diferentes
concentraciones de micelio (3,36, 7,39, 19,2 y 26,1 g / l) cosechada del cultivo mediante el
fermentador fueron a continuación, se resuspendieron en matraces de agitación que
contenían 150 ml de estérilglucosa (100g / l) en tampón citrato, pH 3,5. Los matraces se in-
cubaron a 30? C en un agitador rotatorio se agitó a 250 rev / min. Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado.

Métodos analíticos.
Durante la fermentación, se extrajeron muestras en diversos intervalos de tiempo para el
análisis. Ellas fueron filtradas utilizando un pre pesaba papel de filtro de microfibra. Los
sobrenadantes se utilizaron para ácido kójico y otras determinaciones químicas mientras
que los residuos se secaron en un horno a 95? C para la medición de peso de células
secas. Concentración de ácido kójico en el cultivo se determinó por HPLC con luz U.V.
detector a 265 nm. La fase móvil consistió de una mezcla de tampón de fosfato M 50 m, pH
3 y metanol (95: 5 v / v), mientras que la fase estacionaria fue una HibarpreenvasadosRT
250-4 columna Lichrosorb RP-18 (10 lm). El método Kjeldahlse utilizó para determinar el
nitrógeno total presente en el caldo de cultivo y la glucosa se determinó por el ácido
dinitrosalicílico (DNS).

Método matemático

Los siguientes modelos cinéticos simplificado lote de fermentación para el crecimiento

celular, el consumo de sustrato y formación de producto basado en ecuaciones logísticas y
Luedeking-Piret, que tienen ha descrito en otra parte (Weiss y Ollis 1980; Mulchandani
et al. 1987) se utilizaron para evaluar la cinética de ácido kójico por A. flavus Link. Para la
definición de los términos, véase la sección Nomenclatura

Crecimiento celular: (1)

Consumo de sustrato: (2)

Formación de producto: (3)

De la investigación del mecanismo de la formación de ácido kójico usando marcaje isotópico

durante la fermentación, que ha sido encontrado que la principal vía de la formación de
ácido kójico fue una conversión directa de la glucosa sin una escisión del carbono cadena
en fragmentos más pequeños (Arnstein y Bentley 1953; y KitadaFukimbara 1971). Además,
la producción de ácido kójico cesó cuando glucosa en el cultivo se agota (Kwak y Rhee
1992; Ma-dihah et al. 1993). Por lo tanto, para los propósitos de modelado, puede ser
razonable afirmar que la producción de ácido kójico se detiene cuando la glucosa en el
medio se agota.
Los modelos cinéticos (ecuaciones 1 a 3) se ajustaron a la los datos experimentales por
regresión no lineal con un Marquadtalgoritmo utilizando software informático MATLAB.
Elmodelo valores de los parámetros fueron evaluados por primera vez por la resolución de
las ecuaciones 1 a 3 y luego se utilizó el programa de ordenador como un método de
búsqueda
para reducir al mínimo la suma de los cuadrados de las diferencias entre el predicho y los
valores medidos. Los valores predichos fueron entonces ,utilizado para simular los perfiles
de célula, sustrato y producto.
Las concentraciones durante la fermentación. Para determinar si las desviaciones entre el
experimental y los datos calculados son significativos o no significativo, el análisis
estadístico (No apareado t-test) también se llevó a cabo utilizando el programa SAS.
196 Diario Mundial de Microbiología y Biotecnología, Vol 13, 1997 A. B. Ariff et al.

Nomenclatura
α, constante de velocidad de crecimiento asociada para el consumo de glucosa (gglucosa / g
de células);

β, constante de velocidad no asociada al crecimiento de glucosa el consumo (g de glucosa

/g cell.h)

µ max. como máximo, máximo o inicial tasa de crecimiento específico (/ h);

m, constante de velocidad de crecimiento asociado para la producción de ácido kójico (g de

ácido kójico / g de células);

n, crecimiento no asociado
constante de velocidad correspondientes para la producción de ácido kójico (g de ácido
kójico / g cell.h);

P , la concentración de ácido kójico inicial (g / l); P, ácido kójico concentración (g / l);

P max, la concentración máxima de ácido kójico (G / l); S 0, la concentración de glucosa

inicial (g / l); S, con- gluco-centración (g / l); t, tiempo (h); x, la concentración de células (g /
l);

x 0, inicial concentración celular (g / l); x max, la concentración celular máxima (g / l);

Y p / s, el rendimiento de ácido kójico basado en glucosa consumida (g / g).

Resultados y discusión

Un curso de tiempo típico de la fermentación del ácido kójico en una el frasco de agitación
se muestra en la Figura 1. Las células crecieron en forma de gránulos esféricos (0,5 a 1 mm
de diámetro) y alcanzado una fase estacionaria después de 200 h cuando el nitrógeno en
el cultivo se agota. La concentración máxima de celda material obtenido era de 11,8 g / l.
kójico rápida la producción de ácido sólo se inició después había alcanzado el crecimiento
la fase estacionaria y se detuvo cuando la glucosa en el cultivo se agota. La concentración
máxima de ácido kójico acumulado al final de la fermentación (564 h) fue 32,5 g / l y esto
representa el rendimiento basado en glucosa consumida (Y p / s) y la productividad general
de 0,325 g / gy 0,0576 g / L.H, respectivamente.

La Figura 2 muestra un curso de tiempo típico de lote kójico, la fermentación del ácido en el
fermentador con dos fases d.o.t controlar. Patrones similares de crecimiento, la glucosa y el
nitrógeno consumo; y la producción de ácido kójico a la de fermentación se observaron en
un frasco de agitación. Sin embargo, en el fermentador, debido a las diferentes condiciones
hidrodinámicas, células crecieron en forma de micelio. El crecimiento alcanzó la fase
estacionaria después de aproximadamente 100 horas y la concentración del ácido kójico
fue máxima después de 264 h. En comparación con el frasco de agitación, las tasas de
crecimiento y pro- ácido kójico producción en el fermentador era sustancialmente mayor.

La limitación de oxígeno puede ser la causa de la baja crecimiento tasa de A. flavus Enlace
en el frasco de agitación. El máximo concentraciones de células y el ácido kójico obtenidos
en el fermentador fueron 12,1 g / l y 36,5 g / l que representan una el rendimiento y la
productividad general de 0,365 g / gy 0.138 g / L.H, respectivamente. Reducción de la
productividad y el rendimiento de fermentación en frasco de agitación puede ser debido a las
no óptimascondiciones de aireación. D.o.t alta durante la fase de crecimiento y se requiere
bajo d.o.t durante la fase de producción para la mejora de la producción de ácido kójico en
lote de fermentación (datos no mostrados).

Figura 1. Comparación de los datos calculados y experimentales para la fermentación por

lotes de ácido kójico usando un frasco de agitación. concentración de células r;
j-ácido kójico; d-glucosa; e-nitrógeno; s-pH; líneas continuas representan datos de acuerdo
con las ecuaciones 1-3.
Figura 2. Comparación de los datos calculados y experimentales para la fermentación por
lotes de ácido kójico usando el fermentador. Concentración de células r;
j-ácido kójico; d-glucosa; e-nitrógeno; s-pH; (- - - -) D.o.t; líneas continuas representan los
datos calculados de acuerdo a las ecuaciones 1-3.
Mundo Diario de Microbiología y Biotecnología, Vol 13, 1997 197 la producción de ácido
kójico, unaaumento de la concentración de células resultó en una reducción del tiempo de
procesamiento y por lo tanto, proporcionalmente aumenta la productividad general. Esto
significa que las ventajas de utilizar concentraciones de células lo más alto posible en un
sistema resuspendido, que no limitan la eficiencia de mezcla, son aumentar la productividad
y también para minimizar la desactivación de las enzimas durante el proceso. La utilización
eficiente del sistema de enzima muy estable implicado en la biosíntesis de ácido kójico
también se ha explotado el uso de células inmovilizadas de Aspergillus oryzae
(Kwak y Rhee, 1992). Aunque la producción de muy alta ácido kójico se obtuvo (80 g / l) en
el cultivo por lote repetido, la productividad 0,150 g / lh) y el rendimiento (0,40 g / g) fueron
comparables a los obtenidos en un sistema resuspendido utilizando concentraciones de
células de entre 19,2 g / l y 26,1 g / l como se informa en este estudio (véase la Tabla 2).
Dado que la inhibición de la actividad de las enzimas para la síntesis de ácido kójico no se
produjo en las concentraciones de glucosa dehasta 200 g / l (Bajpai et al 1981, 1982;.Kwak
y Rhee 1992) y las enzimas mantienen su actividad después de un tiempo de incubación
prolongado, un posible enfoque a la mejora de la producción de ácido kójico en células
resuspendidas en términos de la concentración máxima es el uso de una concentración muy
alta de glucosa. Según los modelos, si n es constante durante todo el proceso, la cantidad
de ácido kójico producida aumentará proporcionalmente con la cantidad de glucosa añadida
a un sistema de células resuspendido aunque el rendimiento y la productividad será el
mismo. Concentraciones finales más altas de ácido kójico en solución (más de 80 g / l)
causaron el ácido kójico a cristalizar en forma de agujas finas (Kwak y Rhee, 1992) y esto es
muy útil para la recuperación fácil y económica.

Los valores de los parámetros cinéticos de fermentaciones discontinuasen un frasco de

agitación y en el fermentador se dan en la Tabla 1.

Estos valores de los parámetros cinéticos se pueden utilizar para verificar la los datos
experimentales de la producción de ácido kójico por A. flavusEnlazar. Aunque la
concentración celular máxima observada contenidas en las fermentaciones usando un
frasco de agitación y de la fermentación Menter fueron similares, la tasa máxima de
crecimiento específico (L max) y una constante de velocidad no asociada al crecimiento de
formación de ácido kójico (n) para la fermentación en el fermentador son aproximadamente
tres y dos veces más altos que los valores calculado para fermentación mediante un frasco
de agitación, respectivamente. Para ambas fermentaciones los valores de m son cero, lo
que sugiere que la producción de ácido kójico es no-asociada al crecimiento. El valor del
crecimiento asociada constante de velocidad de consumo de glucosa (a) fue mayor para
fermentación mediante un frasco de agitación de lo que el uso de la fermentador. La
cantidad de glucosa consumida durante el fase de crecimiento se puede calcular a partir de
los valores de a y x max y las cantidades son 40,4 g / L y 22,4 g / l para fermentaciones
utilizando un frasco de agitación y el fermentador, respectivamente.

Esto significa que las cantidades de glucosa que queda en las fermentaciones usando un
frasco de agitación y el fermentador para la conversión a ácido kójico eran 59,6 g / l y 77,6 g
/ l, respectivamente. glucosa sustancialmente menor concentración que queda en el cultivo
después de la fase estacionaria del crecimiento alcanzado es otra posible causar la
producción de ácido kójico baja en el matraz de agitación.

Del estudio cinético, es muy claro que la fermentación por lotes de fermentación de ácido
kójico por A. flavus Link puede ser dividido en dos fases: fases de crecimiento y de
producción.

Durante la fase de crecimiento activo, parte de la glucosa y nitrógeno se requiere para

promover el crecimiento y para la mejora de la síntesis de enzimas implicadas en el ácido
kójico bio-síntesis. El sistema de enzima unida a las células consistía enzimas tales como la
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, hexo-quinasa y gluconato deshidrogenasa, que son
implicada en la síntesis directa de ácido kójico partir de la glucosa
(Bajpai et al. 1981). Durante la fase de producción, elglucosa restante en el cultivo se
convierte en kójico ácido por la acción de este sistema enzimático unido a la célula.
Dado que el modelo propuesto en este estudio no tiene en tener en cuenta el retraso de la
síntesis de ácido kójico debido a la enzima inducción, los datos calculados se desvían
significativamente de los datos experimentales durante las etapas iniciales de kójico la
producción de ácido. Aunque la tasa de la síntesis de ácido kójico no depende de la
concentración de glucosa, la producción se detuvo cuando la glucosa en el cultivo fue de
agotado a pesar de que las células pueden ser todavía activo en síntesis de ácido kójico. se
requiere sustrato externo para la producción de ácido kójico y el material endógeno presente
en el micelio no fue convertido en kójicoácido (Bajpai et al. 1982).

La modificación del ácido kójico modelo de formación (ecuación 3) por la introducción de la

romper manualmente cuando la glucosa se agota como se calcula por el modelo de
consumo de sustrato (ecuación 2) es suficiente para describir este fenómeno (ver figuras 1 y
2).

Reducción de la formación de ácido kójico después de la concentración se observó máxima

se convirtió y esto fue debido a su degradación a oxálico y ácido acético por el micelio en
condiciones de glucosa-agotado (Bajpai et al., 1982; Madihah et al. 1993).

Sistema Celular Resuspensión.

La producción de ácido kójico en una cultura de Resuspensión micelios intactos, en una

solución que contiene únicamente glucosa tiene sido descrito por Bajpai et al. (1981; 1982).

Como se suma ninguna fuente de nitrógeno para un sistema de células resuspendido para
la producción de ácido kójico, se puede suponer que el crecimientono se produce durante el
proceso (es decir, dx / dt = 0). Así,los modelos cinéticos (ecuación 2 y 3) se puede reescribir
como,

dP / dt = nx [4]
ds / dt = bx [5]

Un curso de tiempo típico de la producción de ácido kójico en un sistema celular

resuspendido (pellet) en un cultivo de frasco de agitación se muestra en la Figura 3, que
también muestra la idoneidad de los datos calculados de acuerdo con los modelos cinéticos
para un sistema de células resuspendido (ecuaciones 4 y 5) a los datos experimentales.

Como puede verse, los datos calculados armarios muy bien a los datos experimentales y el
análisis estadístico indica que las desviaciones no son significativas en una probabilidad de
5%. La producción de ácido kójico aumentó, mientras que la concentración de glucosa
disminuyó linealmente con el tiempo de incubación, lo que sugiere que el sistema de
enzimas para la síntesis de ácido kójico atado en la célula de A. flavus Enlace era muy
estable en solución de glucosa a pH 3,5 y 30? C. Bajpai et al. (1981) también informó de que
las enzimas implicadas en la biosíntesis de ácido kójico estaban todavía estable después de
240 h en tampón de fosfato 0,2 M a pH 6,5. La concentración celular se mantuvo en
alrededor de 12,2 g / l durante todo el proceso, lo que indica que el crecimiento no se
produjo posiblemente debido a la falta de disponibilidad de nitrógeno en el medio de cultivo.
Al igual que en la fermentación por lotes, la producción de ácido kójico se detuvo cuando la
glucosa se agotó. Los valores de los parámetros cinéticos de N y B (0,0057 g de ácido kójico
/ g cell.h y 0,0153 g de glucosa / g cell.h, respectivamente) fueron similares a los valores
obtenidos en la fermentación por lotes utilizando un frasco de agitación. La productividad
global y el rendimiento de este sistema de células resuspendidas se 0,069 g / L.H y 0,38 g /
g, respectivamente. Figura 4 muestra los cursos de tiempo de la producción de ácido kójico
por diferentes concentraciones de micelio en el que la fase de crecimiento se llevó a cabo en
el fermentador donde el d.o.t se controló a 80% de saturación. En estos casos, el peso seco
de micelio también se mantuvo sin cambios durante todo el proceso (datos no mostrados).

La Figura 4 muestra también la aptitud de los modelos (ecuaciones 4 y 5) a los datos

experimentales. En todos los casos, la producción de ácido kójico aumentó y la glucosa
disminuyó linealmente con el tiempo de incubación.

A partir del análisis de la prueba t, las desviaciones entre los datos calculados tal como se
presentan por líneas continuas no son significativas en el nivel de probabilidad del 5% 7.39,
19.2 y 26.1 g / l células. Sin embargo, una desviación significativa de los datos
experimentales de la producción de ácido kójico de los datos calculados se observó el uso
de teléfonos 3,36 g / l después de 800 h. Este resultado indica que una ligera desactivación
de las enzimas implicadas en la biosíntesis de ácido kójico
pudiera haber ocurrido durante la incubación prolongada.

Los valores de los parámetros cinéticos y el rendimiento de la producción de ácido kójico

usando células resuspendidas a diferentes concentraciones de células se dan en la Tabla 2.
Los valores de n y b eran casi constante con el aumento de la concentración de células
hasta 19,2 g / l, y los valores fueron similares a las obtenido por fermentación por lotes
utilizando el fermentador. Se observó una reducción significativa de los valores de n y b en
el sistema mediante la concentración de células muy alta (26,1 g / l). La alta concentración
de células aumentó la viscosidad de la mezcla de reacción y, por tanto, reduce la eficiencia
de mezcla y limita las acciones de las enzimas significativamente (Bhavaraju et al 1978;.
Miranda et al., 1991), que a su vez disminuye la tasa de conversión de glucosa en kójico
ácido. Aunque se redujo el valor de n aproximadamente dos veces, la concentración máxima
de ácido kójico obtenido en el sistema de células se resuspendió con 26,1 g / l de células se
similares a los obtenidos en los sistemas con 7,39 g / l y 19,2 g / células L, que dio
rendimientos de entre 0,453 g / g y 0.480 g / g. Estos rendimientos fueron
ligeramente más alto que el valor obtenido en un cultivo de células resuspendido de A.
flavus Link (0.392 g / g) utilizando 200 g / l de glucosa, lo que produjo una concentración de
ácido kójico máximo de 78,4 g / l después de aproximadamente 240 h (Bajpai et al. 1982)

Dado que las células utilizadas en los sistemas resuspendidos tienen la misma eficiencia en
la conversión de glucosa en ácido kójico,