ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGA

PRCTICA N 14
Aislamiento e Identificacin de
Clostridium perfringens
ASIGNATURA :

Microbiologa de los Alimentos I
DOCNT :
Dra. Graciela Albino Cornejo
A!U"NO :
Rmulo Aycachi Inga
CIC!O :
200 ! II
Lambayeque, 03 de abril de 2008.
"
PRCTICA N 14
Aislamiento e Identi#icacin de
Clostridium perfringens
I. Introduccin$
%l g&nero Clostridium est' #ormado (or m's de cien es(ecies con limitada relacin
gen&tica y (ro(iedades bio)umicas di*ersas. Com(rende a bacilos gram(ositi*os+
anaerobios+ es(orulados. ,on ubicuos (udiendo ser encontrados en el suelo y aguas
residuales as como tambi&n en la #lora intestinal de hombres y animales. %n su mayora
son sa(ro#itos+ (ero los (atgenos (ueden causar gra*es en#ermedades como gangrena
gaseosa+ botulismo+ t&tanos+ in#ecciones de (iel y (artes blandas+ colitis asociada a
antibiticos e into#icaciones alimenta$ias%
-a ca(acidad (ara (ro*ocar en#ermedad esta *inculada a la (osibilidad de sobre*i*ir
en condiciones ambientales ad*ersas mediante la #ormacin de es(oras+ crecer
r'(idamente y (roducir to.inas histolticas+ enteroto.inas y neuroto.inas.
Clostridium perfringens es la es(ecie del g&nero Clostridium m's #recuentemente
aislada en materiales clnicos. %s un bacilo gram (ositi*o grande /"0m de ancho (or 1
0m de largo+ en (romedio2 de bordes rectos y e.tremos romos. Desarrolla r'(idamente
en anaerobiosis+ (roduciendo colonias grandes /" a 3 0m de di'metro2 )ue muestran
doble halo de hemlisis en las (lacas de agar sangre.
,us caractersticas mor#olgicas+ la demostracin de (resencia de es(oras+ el r'(ido
desarrollo en anaerobiosis y algunas (ro(iedades bio)umicas /lecitinasa2 con#orman un
(er#il )ue #acilita su r'(ida deteccin en el laboratorio.
C. perfringens es agente etiolgico de muchas en#ermedades y es la tercera causa de
to.in#eccin alimentaria bacteriana des(u&s Samonella s((. y Saphylococcus aureus.
%.isten dentro de la es(ecie cinco ti(os llamados A+ 4+ C+ D y %. C. perfringens A
es el res(onsable de la mayora de los (rocesos in#ecciosos. 5roduce una enteroto.ina
/(oli(&(tido de 36.000 daltons de (eso molecular2 )ue se com(orta como un
su(erantgeno (romo*iendo la liberacin de mediadores de in#lamacin en #orma
masi*a.
-a enteroto.ina es susce(tible a (ronasa (ero no a tri(sina ni )uimiotri(sina. %n el
intestino delgado+ la enteroto.ina se une a un rece(tor de membrana del ribete en ce(illo
e induce una alteracin de la (ermeabilidad calcio de(endiente resultando en una
(&rdida de iones y metabolitos. %sta (&rdida electroltica altera la #uncin metablica
intracelular (ro*ocando da7o mor#olgico y e*entual lisis.
-a en#ermedad se (roduce cuando el indi*iduo ingiere alimento contaminado con un
ele*ado n8mero de organismos (roductores de enteroto.inas /"00 millones2.
-os alimentos )ue (ueden estar contaminados son carnes *acuna+ (ollo+ salsas
cocinadas y no re#rigeradas. Cuando los alimentos llegan al intestino delgado se
(roduce la es(orulacin y la liberacin de enteroto.inas.
9o son comunes los brotes #amiliares (ero si los (roducidos a tra*&s de alimentos
(re(arados comercialmente y destinados a restaurantes o instituciones.
5ara con#irmar la e.istencia de una en#ermedad de este ti(o es necesario recu(erar
el agente de la muestra clnica y del (aciente. ,e deben recu(erar al menos "00.000
:;C de C. perfringens (or gramo de alimento y ".000.000 de microorganismos (or
gramo de heces en las (rimeras 21 horas. %s (osible detectar anticuer(os contra la
enteroto.ina (ero ellos no tienen *alor (rotector
2
II. <bjeti*os$
! Determinar la (resencia de C. perfringens sul#ito reductores de muestras de
alimentos.
! ;amiliari=arse con los m&todos de aislamientos de bacterias anaerbicas en
alimentos.
! >omar conciencia de los (eligros )ue ocasionan la (resencia de estos
microorganismos en los alimentos.

III. Materiales$
! Medios de Culti*o$ Agar
?ilson!4lair.
! Diluyente$ Agua (e(tonada
! Muestras$ Agua de ace)uia+
(escado #resco salado.
! 4a7o Mara
! >ubos de ensayo con ta(a rosca
! 5i(etas
! ;rascos est&riles
! Gradillas
! Mechero 4unsen
I@. 5rocedimiento$
! 5ara muestra de agua$
a. >omamos 6 tubos de ensayo a los cuales les agregaremos 6 m- de aguas
ser*idas a cada uno.
b. -uego agregaremos el medio ?ilson!4lair+ (re*iamente calentado
/disuelto2 en el ba7o Mara.
c. %l agua ser*ida debe haber sido tambi&n calentada+ (re*iamente+ en el
ba7o Mara a A0 BC (or "0 min.
d. Al medio le agregamos la solucin sul#ato!#errosa.
e. -uego incubamos los tubos en anaerobiosis a 3 BC (or 1A h.
#. ,e obser*ar'n+ de ser (ositi*as+ colonias negras en la (ro#undidad.
g. -os resultados se dan en Ces(oras de Clostridium sul#ito reductorasD"00
m-E.
! 5ara muestra de alimentos$
a. -a muestra de (escado es e*iscerada+ le sacamos la (iel+ las agallas y si
hubiera+ los intestinos.
b. -uego+ (onemos todo eso en un #rasco est&ril y le agregamos el diluyente
/agua (e(tonada2 la cantidad su#iciente. Fomogeni=amos.
c. -uego reali=amos las diluciones res(eti*as /"0
!"
+ "0
!2
+
"0
!3
2.
d. De las diluciones reali=adas sembramos (or m&todo de Csiembra en
(ro#undidadE+ una (laca (or cada dilucin.
e. -uego en*iamos a incubar+ en anaerobiosis+ a 3 BC (or 1A h.
#. Al igual )ue en la anterior+ la (ositi*idad de las colonias se *er' (or su
caracterstico color negro.

3
@. Resultados$
! %n la muestra de alimentos /(escado #resco salado2+ no se lleg a aislar C.
perfringens. %n las (lacas utili=adas crecieron otro ti(o de bacterias+ (ero no con
las caractersticas deseadas+ t(icas del g&nero a estudiar.
! %l gru(o )ue trabaj con la muestra de agua obtu*o resultados (ositi*os /sul#ito!
reductores2.
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1
@I. 5reguntas$
! GCu'les son las (ruebas bio)umicas utili=adas (ara identi#icar C. perfringensH
a. 5ara la identi#icacin bio)umica de C. perfringens se reali=an las sgte.
5ruebas bio)umicas$
;ermentacin de a=8cares$ glucosa+ lactosa+ ramnosa+ manitol.
Fidrlisis de$ almidn+ gelatina+ esculina+ casena+ D9A+ lecitina.
5roduccin de$ hidrgeno sul#urado+ indol+ gas.
! GCmo se consigue un medio anaerobio (ara la incubacin de las bacterias de
este ti(oH
Como los anaerobios estrictos *aran en su sensibilidad al o.geno+
e.isten di#erentes m&todos (ara disminuir la cantidad de o.geno en los
culti*osI algunos sencillos y otros mucho m's com(lejos.
4otellas+ tubos o matraces com(letamente llenos con el medio de culti*o
y los ta(ones a(ro(iados+ (ro(orcionan condiciones an.icas
su#icientemente buenas (ara el crecimiento de muchos anaerobios.
>ambi&n es (osible a7adir alg8n com(uesto )umico )ue reacciona con
el o.geno del aire y la reduce hasta F
2
<. :n buen ejem(lo de esto es el
tioglicolato+ com8nmente utili=ado (ara ensayar el re)uerimiento de
o.geno de un microorganismo. Des(u&s de )ue el tioglicolato reaccione
con el o.geno del tubo+ el o.geno (uede (enetrar solamente en la (arte
su(erior+ donde el medio contacta con el aire.
5ara )uitar todas las tra=as de o.geno (ara el culti*o de anaerobios
(uede utili=arse una Cjarra de anaerobiosE. %l aire de la jarra de sustituye
(or una me=cla de hidrgeno y anhdrido carbnico y+ en (resencia de un
catali=ador+ se consumen las tra=as de o.geno )ue toda*a )uedan+ esto
(ro(orciona condiciones totalmente an.icas (ara el crecimiento de
anaerobios estrictos.
@II. Re#erencias$
! A(untes sobre bacteriologa /20032 Clostridium (er#ringens y Clostridium
botulinum. <btenido el "6 de mar=o de 200A en
htt($DDJJJ.b*so(s.org.uyD(d#Dclostridium.(d#
! 5I9%DA+ Kuraima+ A5<9>%+ ;anny y ,A9>A9D%R+ Lorge. AI,-AMI%9><
D% Clostridium (er#ringens %9 :9 >%R9%R< D% @%9%M:%-A. RC+ jun.
2001+ *ol."1+ no.3+ (.22N!22O. I,,9 0OA!226O.
! MADIGA9+ M.+ L. MAR>I9P<+ 5. 5ACP. "OOA. 4iologa de los
Microorganismos de 4rocQ. AB edic. %dit. 5rentice Fall. Madrid.
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