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Prctica 1
Principios bsicos de laboratorio, uso de pipetas y
clculos de utilidad en Bioqumica

Objetivo:queelestudiantesefamiliariceconlametodologa,equipoyformade
trabajodentrodelcursodelaboratoriodeBioqumica.

Fundamento

1. Algunos conceptos bsicos utilizados en la bioqumica
experimental

En el ao de 1960 la Conferencia General de Pesas y Medidas y la Oficina

Internacional de Pesas y Medidas con sede en Pars, Francia acordaron crear el
SistemaInternacionaldePesasyMedidas(SIUoSI)conelobjetivodefacilitarel
intercambio de informacin cuantificable y universalizar su uso. El SI es
bsicamente una versin ampliada del sistema mtrico decimal y consta de siete
unidadesbsicasindependientesparacuantificardiferentesmagnitudesfsicas.En
el Cuadro 1 se describen estas unidades, adems de los smbolos que se deben
utilizarcuandosehacemencinastas.

Cuadro1.UnidadesbsicasdelSI

Magnitudfsica Nombredelaunidad Smbolo

Longitud metro m
Masa kilogramo kg
Tiempo segundo s
Corrienteelctrica amperio A
Temperatura kelvin K
Intensidadluminosa candela cd
Cantidaddesustancia mol mol

Dosomsunidadesbsicaspuedensercombinadasmediantemultiplicacino
divisin para generar unidades SI derivadas. Algunas de estas unidades poseen
nombres particulares en honor a cientficos que contribuyeron al conocimiento de
untemaenparticular.EnelCuadro2sepresentanalgunosejemplosdeunidades
SIderivadas.
2

Cuadro2.UnidadesSIderivadasdeusocomnenmedicina

Magnitudfsica Nombre Smbolo Unidades

rea Metrocuadrado

m
2

Volumen Metrocbico m
3
Velocidad Metroporsegundo m/som
.
s
-1
Concentracindesustancia Molpormetrocbico mol/m
3
omol
.
m
3
TemperaturaCelsius GradoCelsius
o
C K-273.16
Potencia Watt W J/soJ
.
s
-1
Potencialelctrico Volt V W/AoW
.
A
-1

Resistencia Ohmio V/AoV

.
A
-1

Muchasveceslasunidadesbsicasoderivadaspuedensermuygrandesomuy
pequeaspararepresentarunacantidadenparticular.Paraesoscasos,elSI
admiteelusodeunaseriedeprefijosquepermitenformarmltiplososubmltiplos
decimalesdelasunidadesdelSI.EstosprefijossemuestranenelCuadro3.

Cuadro3.PrefijosutilizadosenelSI.

Prefijo Factor Smbolo Prefijo Factor Smbolo

Ato 10
-18
a Deca 10
1
da
Femto 10
-15
f Hecto 10
2
h
Pico 10
-12
p Kilo 10
3
k
Nano 10
-9
n Mega 10
6
M
Micro 10
-6
Giga 10
9
G
Mili 10
-3
m Tera 10
12
T
Centi 10
-2
c Peta 10
15
P
Deci 10
-1
d Exa 10
18
E

Los prefijos se anteponen directamente al nombre o smbolo de la unidad en

cuestin,porejemplonanogramoongynonano-gramoon-g.

Sibienescierto,elusodelSIeslareglahoyenda,existenexcepcionesquela
Oficina Internacional de Pesas y Medidas debi adoptar debido a su uso
generalizado. Algunas de estas excepciones de uso en ciencias mdicas se
muestranenelCuadro4.
3

Cuadro4.AlgunasunidadesdeusocomnquenopertenecenalSI.

Magnitudfsica Unidad Smbolo ValorenSI

Tiempo da d 86400s
hora h 3600s
minuto min 60s
Volumen litro loL 10
-3
m
3

Masa tonelada t 1000kg

dalton Da 1.66x10
27
kg
rea hectrea ha 10000m
2
Longitud ngstrm 0.1nm
Energa calora cal 1.1868J

Debidoasuusorutinarioenlabioqumicaexperimental,valelapenamencionar
algunas normas sobre la expresin de concentraciones de sustancias. La
concentracin de sustancias cuya masa molecular se conoce, se expresa como
cantidad de sustancia (moles o submltiplos como mmol, nmol) por litro (l).
Ejemplo:concentracindeglucosaensuerohumano:3.6mmol/la6.1mmol/l.Los
trminosconcentracin molar, molaridad o M, normalidad o N son obsoletos y en
sulugardebeusarseeltrminocantidaddesustanciaconcentracindeXoms
comnmente,concentracindeX.Eltrminomolalysusmbolomnodebenser
msutilizadosyensulugarseutilizaeltrminocantidadmolalidaddelsolutoX
conlasunidadesSImol/kg.

LaConferenciaGeneraldePesasyMedidasnorecomiendaelusodelaescala
depHyensulugar,laconcentracindeioneshidronioenunasolucindebeser
reportadacomonmol/l.Sinembargo,laeliminacindelaescaladepHnohasido
aceptada por la mayora de la comunidad cientfica. En el ao 2002, la Unin
Internacional de Qumica Pura y Aplicada elabor una propuesta para que dicha
medidacumplieraconlosrequisitossolicitadosporlaConferencia.Alafecha,esta
propuestaseencuentraendiscusin.

Acontinuacinseenumeranalgunasreglasparalaconsignacindesmbolosy
cifrasdelSI:

-Lossmbolosseescribensiempreensingular.Ejemplo:2mmyno2mms.
-El nombre completo de una unidad se pluraliza si es necesario. Ejemplo: 35
kilogramos.
-Los prefijos no deben usarse solos, sino siempre acompaados de una unidad.
Ejemplo:14gigawattsyno14gigas.
-Elpuntonodebeusarsedespusdeunsmbolo,amenosquesteseencuentre
alfinaldeunafrase.Ejemplo:55kgdemasayno55kg.demasa.
-Siempresedejaunespacioentreel nmeroquedenotalacantidadyelsmbolo
delaunidad.Ejemplo:15syno15s.
4
-Nmeros muy grandes pueden ser separados en grupos de tres para facilitar su
lectura, sin puntos o comas. Los puntos o comas se utilizan para las notaciones
decimales.Ejemplo:1000257,35yno1.000.257,35.
-Siempresecolocaunceroalaizquierdadelacomaoelpuntodecimalparalos
nmerosmenoresdeuno.Ejemplo:0.38o0,38yno.38o,38.
-Lossmbolosdelasunidadesosusnombresnodebensermodificadosmediante
adicindesubndices.Ejemplo:V
max
=1000VynoV=1000V
max.
-La redaccin de la informacin no debe ser mezclada con los smbolos de las
unidadesosusnombres.Ejemplo:elcontenidodeaguaesde20ml/kgyno20
mlH
2
O/kgo20mldeagua/kg.
-Debe quedar explcito cul smbolo pertenece a cul valor numrico y qu
operacinmatemticadebeseraplicadaacadavalornumrico.Ejemplos:
45cmX46cmyno45X46cm
20
o
Ca30
o
Co(20a30)
o
Cyno20
o
C-30
o
Co20a30
o
C
-Los smbolos de las unidades o sus nombres no pueden ser mezclados y las
operaciones matemticas no son aplicadas a los nombres de las unidades sino a
los valores numricos. Ejemplos: pueden ser usadas formas como: kg/l, kg l o
kilogramoporlitroynoformascomo:kilogramo/l,kg/litro,kilogramo/litrookgporl.
-Losvaloresdecantidadessonexpresadosenformanumricayconlossmbolos
delasunidades.Ejemplos:m=5kgynom=cincokilogramosom=cincokg,ola
corrientefuede15Aynolacorrientefuede15amperios.

2.Medicindevolmenes:pipetasymicropipetas.

Las mediciones y transferencias de volmenes exactos y precisos son

requisitos bsicos de la bioqumica experimental. Estos procedimientos son
hechos utilizando instrumentos como las pipetas manuales, las micropipetas, las
buretas, las probetas o los balones de aforar. Cada uno de ellos cumple una
funcinenparticulardentrodellaboratorioperoenalgunoscasosestasfunciones
pueden sobreponerse. El grado de precisin de los mismos puede variar
considerablemente as que la escogencia del instrumento a utilizar para realizar
una medicin en particular es un paso crtico para obtener el resultado esperado.
Debido al uso rutinario dentro de las prcticas a realizar en este curso, se
introducir el uso apropiado de las pipetas y micropipetas. Sin embargo, es
recomendable que el estudiante realice una revisin de sus cursos de qumica
anteriorespararecordarelmanejoyusodeotrotipodeinstrumentosvolumtricos.

2.1.Usocorrectodelaspipetas.

Existen bsicamente dos tipos de pipetas manuales: aquellas para contener y

aquellasparaverter.Aquellasparacontenerdebenserenjuagadasconelsolvente
despusdehaberdispensadolasolucinencuestin.Estaspipetascontienenun
volumenexactodelquido,elcualdebesertransferidocompletamenteparaquela
medida sea precisa. Algunas pipetas de contener de uso comn en el laboratorio
tienen nombres particulares como Micro-Folin, Sahli para medicin de
hemoglobina,KirkMicro,White-BlackLambdaentreotros.
5

Figura 1. Tipos de pipetas de verter: de soplar (A) y no de soplar (B). Note las
diferentesescalasydndeterminanlasgraduacionesdelaescalaencadatipode
pipeta.

Estaspipetasnopuedenserutilizadasparalapreparacindesolucionesypor
lo tanto su uso en este curso es limitado. Nuestra atencin se enfocar en las
pipetas para verter que son de utilidad para la preparacin de soluciones y
mediciones durante el curso y de las cuales existen dos tipos. Aquellas pipetas
paraverteryquedebensoplarseestncalibradashastalapuntaporloquedeben
llenarse con el lquido a medir, dispensarse, y el lquido remanente en la punta
debe soplarse. Son tambin conocidas como pipetas Ostwald-Folin o pipetas
serolgicas (Figura 1). Estas pipetas pueden ser distinguidas fcilmente ya que
sus graduaciones de escala se extienden hasta la punta de la pipeta. Adems,
poseen uno o dos anillos esmerilados cerca de la boquilla. El otro tipo de pipeta
paraverteresaquellaquenosesoplayaqueestcalibradaentredosmarcasque
noincluyenlapunta.Porlotanto,estaspipetasnuncadebensoplarsesinoqueel
6
volumenadispensardebeserreguladomanualmentedeformatalqueellquidoa
dispensar se encuentre entre una marca y otra. Algunos nombres comunes que
reciben este tipo de pipetas son: pipeta volumtrica, tipo Mohr o bacteriolgica
(Figura1).

2.2.Tcnicadepipeteo.

El primer paso de una buena tcnica de pipeteo es seleccionar la pipeta ms

apta para el volumen que se desea medir. Es precisamente este volumen el que
determina la pipeta a utilizar: el volumen a pipetear debe ser lo ms cercano
posible a la capacidad mxima de la pipeta. Adems, debe considerarse que el
volumen mnimo que una pipeta puede dispensar con precisin es
aproximadamente el 10 % de su capacidad. A continuacin se describen algunos
ejemplos.

Usted tiene tres pipetas cuyas capacidades mximas son de 25 ml, 10 ml y 5

ml.Culpipetausaraparapipetearlassiguientescantidades:a)10ml,b)15ml
yc)5.5ml?
Si se tiene en cuenta el criterio mencionado anteriormente entonces para
dispensar10mlsedebeutilizarlapipetade10ml,paradispensar15mlsedebe
utilizarlapipetade25mlyparadispensar5.5mlsedebeusarlapipetade10ml.

Ustedtienetrespipetascuyascapacidadesmximassonde0.1ml,1mly2ml.
Culpipetausaraparapipetearlassiguientescantidades:a)100l,b)200ly
c)1.1ml?

En este caso, es necesario tener claro que 100 l equivalen a 0.1 ml y 200 l
equivalena0.2ml(verCuadro3).Porlotanto,paradispensar100lseutilizala
pipetade0.1ml,paradispensar200lseutilizalapipetade1mlyparadispensar
los1.1mlseutilizalapipetade2ml.

Unavezseleccionadalapipeta,esnecesariocerciorarsequtipodepipetaes,
siesdesoplarono.Durantelasprcticasdelaboratorioseutilizarnpipetascon
capacidadesmximasqueoscilanentrelos0.1mlalos25mlquepuedenserde
soplarono.Esimperativoquesefamiliariceconestostiposdepipetasysus
escalas.

El siguiente paso es ajustar en la boquilla de la pipeta el dispositivo que se

utilizar para crear vaco y succin. En nuestro caso utilizaremos la pera de hule,
cuyofuncionamientosedescribeenlaleyendadelaFigura2.

Figura2.Dispositivotipoperaparacrearvacoysuccinenlapipeta.Estaperade
hulecuentacontrespuntosrotuladosconflechasoA,ByCo1,2y3.Alejercer
presinmanualenunodeesospuntos,unbalninternopermitirlaentradao
salidadeaireparaquelapipetapuedasuccionar(A)odispensar(B)ellquidoque
contiene.ElpuntoCo3estilparadispensarlaltimagotaenaquellaspipetas
quesondesoplar(C).Elusocorrectodeestedispositivorequieredeprcticapara
ajustarlafuerzamanualquedebeusarseparaejercerpresin.Sienalgn
momentosuperasehumedececonellquidoadispensar,dejardefuncionar
puesnosepodrejercervaco.Paraproceder,esnecesariosecarantesbienla
pera.

Lapipetasedebellenarhastaunpocomsarribadeliniciodelagraduacin
delaescalayluegopocoapocoseajusta,frentealosojosyenposicinvertical,
alpuntoexactodegraduacindelaescala(generalmente0).Recuerdequepara
lquidos transparentes, el fondo del menisco del lquido se ajusta a la graduacin,
mientrasqueparalquidosnotransparentes,losextremosdelmeniscoseajustan
a la graduacin de la escala. Una vez ajustado el volumen, la pipeta conteniendo
ellquidoadispensarestransferidaalrecipientedondesedepositarellquido.En
estemomentosepresionalaperasuavementeenelpuntoquepermitirlasalida
dellquido,manteniendolapipetaenposicinverticalyconlapuntadelamisma
descansandoenelrecipiente.Unavezdispensadoelvolumen,seretiralaperay
la pipeta se descarta cuidadosamente, con la punta hacia abajo en el recipiente
paradescartarpipetas.Siporalgnmotivodebevolverautilizarunapipetaen la
misma solucin en la que fue utilizada, es recomendable dejar la pipeta en
posicin horizontal sobre la mesa de trabajo, con la punta de la misma unos
centmetrosfueradelbordedelamesa.
8

2.3.Usocorrectodelasmicropipetas.

Las micropipetas son dispositivos que permiten medir volmenes pequeos que
van desde 1 l hasta 1 ml o ms. Al igual que las pipetas stas pueden ser para
conteneroparavertervolmenes.Duranteelcursoutilizaremosmicropipetaspara
verter,yaseaunvolumenfijoounvolumenvariable.Enlasdevolumenvariable,
sepuedeseleccionarunvolumendentrodeunrangodevaloresdeterminado.La
micropipetamscomnmenteusadaenloslaboratoriosdeanlisisfueintroducida
porlacompaaEppendorfyestenombreseadoptdeformagenricaparaestos
dispositivos, aunque hoy en da existen una gran cantidad de compaas y
modelossimilaresquefuncionanbajounmismoprincipiodepistonesparaoperar.
Por lo tanto, es aconsejable consultar las instrucciones del fabricante sobre el
empleocorrectodecadamodelo.Sinembargo,todasellasutilizanpuntasotips
descartables plsticos que se ajustan al extremo de la micropipeta. En estas
puntasdeplsticoesdondesedepositaellquidoamedir.

Figura3. EsquemageneraldelasmicropipetasmarcaBioRadautilizarduranteel
curso. A
1
: botn pulsador, A
2
: tornillo del botn pulsador, B: rueda dentada de
graduacin del volumen, C: cono de la pipeta, D: expulsor de punta y E: punta o
tipdescartable.TomadodelmanualdemanejodemicropipetasBiorad,BR/06/05

Paraabsorberellquido,elpistnespresionadohastaunaprimeraposicin,el
tip es puesto en contacto con el lquido y luego, lentamente, se permite que el
pistn vuelva a su posicin original. Este paso permite el llenado del tip con el
9
volumencorrespondiente.Eltipdeplsticogeneralmentenosesecaporfueraya
que se considera que su superficie no absorbe lquido. A continuacin se
describen las instrucciones especficas para los modelos de micropipetas que se
utilizarnduranteelcurso(Figura3).

1. Seleccin de la micropipeta a utilizar segn el volumen a dispensar. Para

este paso, se aplican las mismas reglas que se utilizan para el manejo de
las pipetas. El Cuadro 5 muestra los rangos de volmenes que se pueden
pipetear con cada modelo de micropipeta de la marca Biorad, adems de
los usos ms comunes. La mayora de la micropipetas indican en el botn
pulsadorelrangoovolumenmximoquepuedenpipetear.Paraprevenirun
daoenelmecanismointernodelamicropipetarecuerdenuncasobrepasar
losvolmenesmximospermitidosparacadamicropipeta.

Cuadro5.Modelo,rangodevolmenesyaplicacionesmscomunes
delasmicropipetasmarcaBioradautilizarduranteelcurso

Modelo Rangode
volumen(l)
Usomscomn
BR10 0.5-10
Medidaytransferenciademicrovolmenes.Biologamolecular
yensayosenzimticos
BR20 2-20
Medidaytransferenciadesolucionesacuosasengeneral,
cidosybases
BR200 20-200
IgualaBR20
BR1000 100-1000
IgualaBR20

2. Debido a que la micropipeta tiene un rango de volumen ajustable, es

necesario seleccionar el volumen a medir. Para ello se debe localizar el
indicador de volumen, compuesto de tres dgitos que se deben leer de
arriba hacia abajo. En la parte ms baja del indicador hay una escala que
permite el ajuste del volumen al ltimo dgito o decimal permitido segn el
caso. En las micropipetas de 2 hasta 200 l, los dgitos negros indican
microlitros y los dgitos rojos representan dcimas de microlitro. En el
Cuadro6semuestranejemplosdecmodebelucirelindicadordevolumen
paramedirdiferentesvolmenes.
3. Ajustar el volumen de la pipeta con eltornillo del botn pulsador (Figura 3,
A
2
) o la rueda de graduacin del volumen (Figura 3, B), hasta llegar a 1/3
por encima del valor deseado. Luego, lentamente, girando el tornillo o la
rueda,disminuirelajustehastaelvalordeseadoprestandoatencinparano
excederlo.Siseexcede,esaconsejablerepetirelprocedimientodeajuste.
Siempre se debe ajustar el volumen deseado desde un volumen ms alto
disminuyendolasindicacionesdelindicador.
10

Cuadro6.Disposicindelosdgitosenelindicadorsegnlamicropipetaausar.

Micropipetaconvolumenmximoadispensar*:
10l 20l 100l 200l 1000l
0 1 0 1 0
7 2 7 2 7
5(rojo) 5(rojo) 5 5 5
Volumenadispensar: 7.5l 12.5l 75l 125l 750l

* todos los dgitos deben aparecer en negro, excepto cuando se indique lo contrario en
parntesis

4. Seleccionar la punta o tip plstico apropiado para la micropipeta: la punta

debeajustarsealconodelamicropipeta(Figura3).Alinsertarlapuntaenel
cuerpo de la pipeta hay que aplicar una fuerte presin con movimiento
giratorio para asegurar la hermeticidad. Nunca usar la pipeta con lquidos
sinlapuntacolocada.Esposiblequelapuntaplsticaseencuentreenuna
cajatambinplsticaquefacilitasuuso.Silapuntanoquedabienajustada
onoestencaja,deberajustarseconlamanosintocarlasuperficieque
estarencontactoconlasolucinaextraer.
5. Aspiracin:apretarelbotnpulsadorhastaelprimertope(Figura4A)
6. Conlapipetaenposicinvertical,sumergirlapuntaentre1mmy3mmen
lamuestra.
7. Lentamenteseaspiraellquidoalrelajarlapresindeldedosobreelbotn
pulsador(Figura4B).Siestepasonoserealizaconatencin,puedeentrar
aireenlapuntaylacantidaddemuestraaspiradanoeslaadecuada.
8. Esperarunsegundoyretirarlapuntadellquido.
9. Dosificacin:colocarlaparteinferiordelapuntacontralaparedinteriordel
recipientedondesedepositarellquido,conunnguloentre10
o
y40
o
.
10. Apretarelbotnpulsadorsuavementehastaelprimertope(Figura4C)y
esperarunsegundo.
11. Apretarelbotnpulsadorhastaelsegundotopeparavaciarelrestodel
lquido(Figura4D).
12. Manteniendoapretadoelbotnpulsadorenelsegundotope,retirarla
pipetadeslizandolapuntaporlapareddelrecipiente.Soltarluegoelbotn
pulsador(Figura4E).
13. Expulsarlapuntaapretandoelbotndelexpulsor(Figura4FyFigura3,D).

11

Figura4.Posicionesdelamicropipetaalahorademedirunvolumenespecfico.
A:Botnpulsadorenelprimertope,B:lapuntadelamicropipetaessumergida
entre1mmy3mmenlamuestraparaluegoliberarelbotnpulsadorsuavemente
hastasuposicinoriginal,C:Formacorrectadedispensarellquidomedidoenel
recipientecorrespondiente,D:Posicindelamicropipetaalapretarelbotn
pulsadorhastaelsegundotope,E:Vueltaalaposicininicial,F:Expulsindela
punta,lacualdebeserdescartadaenunrecipienteapropiado.Tomadodelmanual
demanejodemicropipetasBiorad,BR/06/05

Paranodaarelsistemainternodepistonesqueposeelamicropipeta:

-ellquidonuncadebeentrarencontactoconelconodelamicropipeta
-nuncavuelquelamicropipetaconlapartedearribahaciaabajo
-nuncacoloquelamicropipetaenformahorizontalsilapuntatienelquido
-nuncaajusteelvolumenfueradelrangodelamicropipeta

Con respecto a la micropipeta multicanal, stas tienen la ventaja de que se

puedepipetearelmismovolumenalmismotiempoenvariosrecipientesalavez.
Estas micropipetas fueron diseadas principalmente para los ensayos en formato
micro,dondeseutilizatambinunplatodeplsticode96pozosparatrabajaresa
cantidad de ensayos de forma simultnea. Las micropipetas multicanal son
dispositivos ms complejos que las micropipetas unicanal ya que bsicamente
puedenrepetirvariasveceslafuncinquerealizaestaltimaenunsolomomento.
Paraello,poseenunsolomango,botnpulsador,etcperounconoquepermitela
insercin de 4 hasta 12 puntas al mismo tiempo. En el curso se utilizarn
micropipetasmulticanales(12canales)conunrangodevolumende50la300l
similares a las de la Figura 5. Para su uso, se deben tener los mismos cuidados
que con las micropipetas unicanal, adems de cerciorarse que todas las puntas
estn bien colocadas, extrayendo la misma cantidad de solucin y que no se
observenburbujasdeaireenninguna.
12

Figura5.Micropipetamulticanal(8canales),modeloBiohitderangodevolumen
de50la300l.Estetipodemicropipetaesmuytilparamicroensayossemi
automatizadosoautomatizadosenplatosdescartablesde96pozos.

3.Clculosbsicosdeutilidadenbioqumicaexperimental.

3.1. Preparacindesoluciones

Unasolucinesunamezclahomogneadealmenosdossustancias,unaque
seconocecomosolutoyotraqueseconocecomosolvente,disolventeodiluyente
yquegeneralmenteestenmayorproporcinquelaprimera.Elsolventeuniversal
eselaguayporlotantonoesdeextraarquecasitodaslassolucionesutilizadas
enbioqumicautilicenaguacomodisolvente.

13
Como se mencion anteriormente, la concentracin de una solucin debe ser
expresada en unidades del SI, es decir en mol/l cuando el peso molecular del
soluto se conoce, o en trminos de peso (masa) por litro si el peso molecular del
soluto se desconoce. Sin embargo, existen todava algunas expresiones que no
pertenecen al SI pero que su uso se ha mantenido, por razones histricas o
prcticas.Aunqueelusodedichasexpresionesenestemanualnoesestimulado,
sesnecesariointroducirlosyaquemuchosdelosprotocolosautilizartodavason
descritos con esta nomenclatura. Existen bsicamente dos tipos de expresiones
que prevalecen: aquellas que expresan la concentracin de forma porcentual y
aquellas que la expresan como molaridad. Las concentraciones expresadas de
forma porcentual se refieren a partes de soluto por 100 partes de la solucin, de
aheltrminoporcentajeoporcien.Estaspuedenenunciarsecomo:
-Peso por unidad de peso (o peso en peso o p/p): los dos, el soluto y el solvente
son pesados en gramos y la proporcin de soluto se expresa por 100 g de
solucin. Ejemplo: una solucin de NaCl al 24% (p/p) contiene 24 g de NaCl por
cada100gdesolucin,o240gdeNaCly760gdedisolvente.
-Volumen por unidad de volumen (o v/v): nmero de ml de soluto en 100 ml de
solucin.Ejemplo:unasolucindeHClal1%(v/v)contiene1mldeHClpuropor
100mldesolucin.
-Pesoporunidaddevolumen(op/v):nmerodegdesolutoen100mldesolucin.
Si el porcentaje no especifica la forma de expresin, es decir, p/p, v/v o p/v, se
asumequeelporcentajeestexpresadoenpesoporunidaddevolumen.Ejemplo:
unasolucindeMgCl
2
al7%contiene7gdeMgCl
2
porcada100mldesolucin.

Cabedestacarquealserestasrelacionesporcentuales,elvolumenopesofinal
puede ser cualquier cantidad pero lo importante es mantener la relacin entre las
partes.Acontinuacinalgunosejemplos:

CalculecuntosgramosdeNaOHsepesaronparaobtener300mldeunasolucin
al10%

Una solucin al 10 % de NaOH contiene 10 g de NaOH por cada 100 ml de

solucin. Sin embargo el enunciado menciona que se tena tres veces ms
solucin (300 ml). Por lo tanto, conservando la proporcin porcentual, se puede
decirquesepesaron30gdeNaOHparaobtener300mldesolucinal10%o:

100mldesolucintienen10gdeNaOH
300mldesolucintienenXgdeNaOH
X=30gdeNaOH.

Con respecto al trmino molaridad, ste expresa la concentracin de una

sustanciaenparticularentrminosdenmerodemolesporlitrodesolucinysu
smbolo es M. Este trmino tambin debe ser descontinuado y reemplazado por
laexpresinmol/lomol/m
3
.Ejemplo:calculecuntosgramosdeNaOHsedeben
pesarparapreparar2.5ldeunasolucindeNaOH0.1M.

El primer dato que se requiere para poder obtener lo solicitado es el peso

moleculardelNaOH,esdecir,40g/mol.Posteriormente,esnecesariosaberquela
expresin 0.1 M quiere decir que la solucin posee 0.1 mol/l. En este caso en
14
particular,serequiereno1lsino2.5ldesolucin,porlotantohayquepesar0.1X
2.5=0.25mol.Estacantidadcorrespondea0.25molX40g/mol=10g.Entonces
parapreparar2.5ldeunasolucindeNaOH0.1Msedebenpesar10gdeNaOH
yllevara2.5lconagua.

3.1.1Clculoyexpresindediluciones.

Una dilucin consiste en preparar una solucin menos concentrada a partir de

una ms concentrada. Esta prctica es muy comn en los laboratorios y de ella
depende en gran parte el resultado final analtico que se obtenga. Por lo tanto es
imperativo el manejo de este tipo de clculos para cualquier persona que trabaje
dentro de un laboratorio. Las diluciones generalmente se expresan como una
razn matemtica, por ejemplo 1:5 (o 1/5), 1:10 (o 1/10), etc. En el caso de una
dilucin1:5,staexpresalacantidad,seavolumenopesodeunasustanciaenun
volumentotalofinaldelaforma1volumen(opeso)enunvolumen(opeso)total
de 5 volmenes. Ntese que el volumen total o final estar compuesto de 1
volumen de la sustancia a diluir y 4 volmenes del disolvente. Para calcular la
concentracin final de una solucin diluida, se multiplica la concentracin de la
solucinoriginalporladilucinexpresadacomofraccin.Ejemplo:unasolucinde
ureacuyaconcentracinesde5mg/mlesdiluda1/10.Laconcentracinfinaldela
solucindiluidaes5X1/10=0.5mg/ml.

Laecuacinmscomnmenteutilizadaparaprepararsolucioneses:

V
1
XC
1
=V
2
XC
2

donde V
1
es el volumen de la solucin concentrada que se debe aadir para
prepararlasolucindiluida,
C
1
eslaconcentracindelasolucinconcentrada
V
2
eselvolumendelasolucindiluida
C
2
eslaconcentracindelasolucindiluida.

AlutilizarestaecuacindebetomarseencuentaquetantolasunidadesdeV
1
y
V
2
as como las de C
1
y C
2
deben ser las mismas, preferiblemente ml y mol/l
respectivamente. Ejemplo: prepare 500 ml de una solucin de glucosa 5 mol/l a
partir de una solucin de glucosa a 45 mol/l. Aplicando la ecuacin antes
presentadatenemos:

xX45mol/l=500mlX5mol/l
x=55.56mldeglucosa45mol/l

Entonces, para preparar 500 ml de una solucin de glucosa 5 mol/l, se

requieren55.56mldeglucosa45mol/lyllevara500mlconagua.Ntesequela
solucinoriginalfuediluida1/9oenotraspalabras,seutilizunfactordedilucin
de9:

45X1/x=5
x=9
15

El factor de dilucin representa el nmero de veces que fue diluida la solucin

concentrada. Si se hace no una sino una serie de diluciones, la concentracin de
la solucin final se obtiene al multiplicar la concentracin original por el producto
de los factores de dilucin. Ejemplo: si la solucin de glucosa a 45 mol/l del
ejemplo anterior es primero diluida 1/9 y luego 1/100, la concentracin final de la
solucinser45X1/9X1/100=0.05mol/l,conunfactordedilucinde900.

Las diluciones seriadas son tambin muy tiles. Estas diluciones son aquellas
en las cuales todas las diluciones hechas a partir de la primera o luego de la
primera poseen el mismo factor de dilucin. Ejemplo: para determinar la
concentracindeprotenasenunsueroanimal,lamuestraesdiluida1/5mediante
la adicin de 0.02 ml de suero a 0.08 ml de solucin salina en el tubo nmero 1.
Los tubos 2 al 8 contienen 0.5 ml de solucin salina como diluyente. La dilucin
seriadaserealizaaltransferir0.5mldeltubo1altubo2,mezclarytransferir0.5ml
deltubo2altubo3yassucesivamentehastaeltubo8.Laconcentracindesuero
en los tubos 2 al 8 decrece por un factor de 2, siendo cada dilucin: tubo 1:1/5,
tubo2:1/10,tubo3:1/20,tubo4:1/40,tubo5:1/80,tubo6:1/160,tubo7:1/360y
tubo8:1/640.

Materialesyreactivos

-Pipetasserolgicasdevariasgraduaciones:25ml,10ml,5ml,1mly0.1ml

-Unaperadehuleconnmero:estaperaserlaqueseleasignaryutilizar
durantetodoelcurso.Asegresedequefuncionecorrectamente.Laperadebeser
devueltaalfinalizarcadaprcticaenperfectoestado.

-Unerlenmeyerobeakerllenodeaguadestilada

-Unerlenmeyerobeakervaco

-Unamicropipetadeunadelassiguientesgraduaciones:de100a1000l,de20
la200lode2la20lunicanalomulticanalde50a300l.Ustedrecibiren
custodiaunamicropipetaparasuusodurantetodoelcurso.Estamicropipeta
deberserutilizadaporsuscompaerostambin.Essuresponsabilidad
entregarlaalfinaldelcursoenperfectoestado.

-Puntasdeplsticodescartablequeseajustenalasdiferentesmicropipetas

-Envasesparadescartarlaspuntasusadas(habrunoporladodemesa)

-Envasesparadescartarlaspipetasusadas(habrunopormesa)

-Equipogeneraldelaboratorioparademostracin:balanza,agitadores,centrfuga,
espectrofotmetro,etc.

16
Procedimiento

Conozcaelequipoconelquevaatrabajarduranteelcurso:recibayanoteel
nmerodeperaqueseleasignar.Estaperadeberserentregadaalasistente
al final de cada sesin. Reconozca el tipo de pipetas que le fueron
administradas.

Recibalamicropipetaqueseleasignarparasucustodiaduranteelcurso.
Anoteelnmerodemicropipetaasignada.Esimportantequesefamiliaricecon
la misma, conozca qu tipo de puntas debe utilizar, qu rango de volumen
puede medir la micropipeta. Ensaye los puntos de tope de la micropipeta y
luego siga el procedimiento para pipetear varios volmenes de agua con la
micropipetacorrespondiente.Porejemplo:7.5l,10l,200l,450l,etc.

Conozca el resto del equipo con el que trabajar durante el curso y que se
encuentra dentro del laboratorio como la centrfuga, los agitadores tipo vortex,
eltermociclador,elespectrofotmetro,etc.

RealicelosclculosparadiluirunasolucindeNaClal0.145mol/lparaobtener:

a) 1.1mldeunasolucin0.12mol/ldeNaCl
b) 5mldeunasolucin0.045mol/ldeNaCl
c) 3mldeunasolucin0.033mol/ldeNaCl
d) unadilucinseriadade4tubosconfactordedilucinde5.

Describa detalladamente sus clculos en la seccin de resultados, as como el

factor de dilucin utilizado en cada caso y el procedimiento que utilizara para
realizarcadadilucin.Indiqueculpipeta,delasqueselesuministraronutilizara
pararealizarcadamedicin

Resultados

1)Escribaohagaunesquemadecmodistinguirlosdiferentestiposdepipetasy
micropipetas que se le suministraron. Indique cules pipetas son de soplar y
cules no, adems de cmo distinguir la escala tanto en las pipetas como en las
micropipetas.

17

2) Haga la descripcin de los clculos solicitados en la seccin de procedimiento

aqu:

18

Bibliografa

-Amato M, S y Granados P, F. Manual de Laboratorio. Ctedra de Bioqumica.

UniversidadNacional,1994
-AnguloUgalde,Y.BioqumicaManualdeLaboratorio.UniversidaddeCostaRica.
1999
-Kaplan, L et al. Clinical Chemistry: theory, analysis and correlation. 2nd edition.
CW.MosbyCompany,1989
-FacultaddeMedicinaUNAM,DepartamentodeBioqumica.BioqumicayBiologa
Molecular.Objetivosdelcursoymanualdeprcticasdelaboratorio.McGraw-Hill
InteramericanaEditores,Mxico,2000.
-Schosinsky, K et al. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Qumica Clnica. X
Edicin,UniversidaddeCostaRica,1997
-Switzer, R. y L. Garrity. Experimental Biochemistry: Theory and exercises in
fundamentalmethods.3rdedition,FreemanandCompany,NewYork1999
-ManualdeusodemicropipetasBiorad,versinBR0605
-http://www.bipm.fr/en/si/consultadoel10deenerodel2007

19
EJERCICIOS(paraserrealizadosporelestudianteenhorasdeestudio
independiente)

1. Calculelassiguientesconcentraciones:

10MNaOH,diluido1:20=_____M
2MHCl,diluido1:5=_____M
1000mg/Lglucosa,diluido1:10yluego1:2=_____mg/L
250mlde5%NaClcontienen____gdeNaCl
CuntoCuSO
4
5H
2
Odebeserpesadoparapreparar100mldeCuSO
4
al
5%?PMdelCuSO
4
5H
2
O:250g/mol,PMdelCuSO
4
:160g/mol
QuporcentajedeCuSO
4
5H
2
Oesagua?

2. CuntosgramosdeMgCl
2
hayen1gdeMgCl
2
3H
2
O?PMdelMgCl
2
3H
2
O:149
g/mol,PMdelMgCl
2
:95g/mol

3. Cuntos mililitros de NaOH 0.4 M se necesitan para preparar 20 ml de una

solucin0.2M?

4. QuporcentajedeMgcontieneelMgCl
2
3H
2
O?

5. Cunto CuSO
4
5 H
2
O debe ser pesado para preparar 1 L de una solucin que
contenga80mgdeCuSO
4
?

6. Elpesomolecularde CaCO
3
es100g/mol,cuntosgramossonnecesariospara
preparar:
1Lde0.1MCaCO3?
50mg/LdeCaCO3?

7. Una solucin estndar de hemoglina contiene 200 g/L. Cuntos ml deben usarse
parapreparar6mldelassiguientesconcentraciones:

200g/L
150g/L
100g/L
50g/L

8. La solucin salina normal tiene una concentracin de 0.85%. Cul es su

molaridad?(PMNaCl:58.5g/mol)

9. Cuntos gramos de Na
2
HPO
4
deben ser pesados para preparar 1 L de una
solucincuyaconcentracinesde50mg/ml?

10. Culesladilucinfinaldeunamuestradesueroenuntuboquecontiene200lde
suero,500ldesolucinsalinay300ldereactivo?

11. Cul es la concentracin en mol/l de una solucin que tiene 100 g de NaOH
disueltosen100mldeagua?PMNaOH:40g/mol

20
RESPUESTASALOSEJERCICIOS

1. Calculelassiguientesconcentraciones:

10MNaOH,diluido1:20=___0.5__M
2MHCl,diluido1:5=__0.4___M
1000mg/Lglucosa,diluido1:10yluego1:2=__50___mg/L
250mlde5%NaClcontienen__12.5__gdeNaCl
CuntoCuSO
4
5H
2
Odebeserpesadoparapreparar100mldeCuSO
4
al
5%?PMdelCuSO
4
5H
2
O:250g/mol,PMdelCuSO
4
:160g/molR/7.82g
QuporcentajedeCuSO
4
5H
2
Oesagua?R/36%

2. CuntosgramosdeMgCl
2
hayen1gdeMgCl
2
3H
2
O?PMdelMgCl
2
3H
2
O:149
g/mol,PMdelMgCl
2
:95g/molR/0.64g

3. Cuntos mililitros de NaOH 0.4 M se necesitan para preparar 20 ml de una

solucin0.2M?R/10ml

4. QuporcentajedeMgcontieneelMgCl
2
3H
2
O?R/16.1%

5. Cunto CuSO
4
5 H
2
O debe ser pesado para preparar 1 L de una solucin que
contenga80mgdeCuSO
4
?R/125mg

6. Elpesomolecularde CaCO
3
es100g/mol,cuntosgramossonnecesariospara
preparar:
1Lde0.1MCaCO3?R/10g/l
50mg/LdeCaCO3?R/0.05g

7. Una solucin estndar de hemoglina contiene 200 g/L. Cuntos ml deben usarse
parapreparar6mldelassiguientesconcentraciones:

200g/LR/6ml
150g/LR/4.5ml+1.5mldediluyente
100g/LR/3ml+3mldediluyente
50g/LR/1.5ml+4.5mldediluyente

8. La solucin salina normal tiene una concentracin de 0.85%. Cul es su

molaridad?(PesomolecularNaCles58.5g/mol)R/0.145mol/l

9. Cuntos gramos de Na
2
HPO
4
deben ser pesados para preparar 1 L de una
solucincuyaconcentracinesde50mg/ml?R/94.4g

10. Culesladilucinfinaldeunamuestradesueroenuntuboquecontiene200lde
suero,500ldesolucinsalinay300ldereactivo?R/1:5

11. Cul es la concentracin en mol/l de una solucin que tiene 100 g de NaOH
disueltosen100mldeagua?PMNaOH:40g/molR/25mol/l