Metodologa para la Extraccin Enzimtica Acuosa de Oleorresina de Marigold

Seleccin de Enzimas
En laboratorio, se compararn diferentes enzimas comerciales, complejos enzimticos a base de
celulasas, hemicelulasas, proteasas y pectinasas. Se determinar cul de las enzimas o complejos
enzimticos comerciales sern tcnica y econmicamente convenientes para el trabajo en campo,
as como temperatura y pH en que se logra mejor digestin.
1. Se tomar una muestra de 100 gr. De flores de marigold frescas.
2. Se les dar una inmersin en agua a temperaturas entre 72C y 75C para inactivar la posible
presencia de lipasas que pueden deteriorar las grasas. La inmersin se realizar por breve
tiempo (1 a 3 min) para evitar la degradacin de las xantofilas.
3. Para facilitar el trabajo de las enzimas, la muestra se triturar que la mezcla tenga
apariencia pastosa.
4. Se realizarn inoculaciones de enzimas a concentraciones del 1%, 2%, 3% y 5% con
respecto al peso de la muestra, para analizar el comportamiento.
5. Para determinar la temperatura ptima de trabajo, se ensayarn temperaturas en el rango
de 30C a 50C. (30C, 40 y 50C).
6. El pH ptimo es diferente para cada enzima pero est dentro del rango entre 5 y 7, se
ensayarn digestiones a diferentes pHs dentro de este rango. (pH 5, pH 6, pH 7).
7. El tiempo de digestin se determinar de acuerdo a la eficiencia de la digestin de los
diferentes complejos enzimticos a los diferentes parmetros de concentracin,
temperatura, pH.
8. Determinados los parmetros de temperatura, pH y tiempo de digestin, se reproducir el
ensayo determinado como ms conveniente en campo.
9. El contenido de grasas en la muestra de flores, se determinar mediante el mtodo de
extraccin soxhlet de la muestra seca.
10. El contenido de grasas extradas por digestin enzimtica se determinar mediante
centrifugacin.
11. El contenido de xantofilas se determinar mediante el mtodo espectrofotomtrico para
determinacin de xantofilas del AOAC 970.64
Escalamiento a pruebas en Campo:
1. Las flores frescas de marigold se tendrn que acondicionar para facilitar el trabajo de las
enzimas, para esto se picarn y desmenuzarn en partculas lo ms pequeas posible
(partculas menores a 0.5 cm). Se controla tamao de partculas.
2. Se inactivan las lipasas por inmersin en agua caliente y luego se aaden las enzimas,
reajustando temperatura y pH. Se controla el tiempo de digestin, se controla la
viscosidad, la cantidad de slidos y slidos disueltos
3. Luego de la digestin se separar el lquido de las partculas slidas que no llegaron a
digerirse, en esta fase lquida deber estar la fraccin grasa, para lo cual decantaremos la
micela para recoger el sobrenadante.
En laboratorio se determinar la cantidad de grasa en la materia prima, luego se
comparar con la fraccin grasa separada del sobrenadante.


Observaciones:
1. Se analizan los slidos sin digerir para determinar la grasa remanente y decidir si se
retorna al proceso de digestin, o se agrega otra etapa de digestin adicional.
2. Las temperaturas de digestin no deben pasar de 60C para no deteriorar las
xantofilas.
3. En principio las enzimas necesarias para la digestin son Celulasa, hemicelulasa,
Proteasa, Pectinasa. Para lo cual se seleccionarn complejos enzimticos de diferentes
proveedores.
4. Debido al costo de las enzimas, se debe repetir los ensayos a diferente concentracin
hasta encontrar la mnima necesaria para una extraccin eficiente. Esta eficiencia se
determinar comparando la grasa obtenida con el contenido de grasas de la materia
prima analizada.



Diagrama de Flujo de Metodologa de extraccin Enzimtica






















Flores de Marigold
Seleccin de enzimas y
determinacin de parmetros en
Laboratorio
Picado de Flores
Inactivacin Lipasas
Biodigestin
Filtrado
Slidos sin digerir
Micela
Oleorresina de
Marigold
Prensado
Decantacin