TIPOS DE FIJADORES

Existen multitud de fijadores en los manuales

de tcnicas histolgicas. Aqu slo trataremos
aquellos que consideramos de uso ms
comn para la observacin de tejidos al
microscopio, es decir, aquellos que mejor
preserven la estructura celular. Los fijadores
lquidos qumicos son los ms
frecuentemente empleados, bien con un solo
tipo de sustancia fijadora o con mezclas de
varias de ellas.

EL ALCOHOL ABSOLUTO.
LA ACETONA FRIA .
EL FORMALDEHIDO.
EL GLUTARALDEHIDO.
EL ACIDO ACETICO.
EL TETROXIDO DE OSMIO.
EL ACIDO PICRICO.
EL DICROMATO DE POTASIO.
EL CLORURO DE MERCURIO.
EL ACIDO CROMICO.


Fija por deshidratacin y se usa entre el 95 y
99 %. Es un buen elemento para preservar
molculas, como ciertas enzimas,
propiedades antignicas, glucgeno,
pigmentos y para las extensiones citolgicas.
Debido a que deshidrata, a la vez que fija, se
puede usar tambin como un conservante de
las muestras. Tiene inconvenientes como el
endurecimiento y la retraccin de los tejidos.
Es preferida cuando se efectan ciertos
estudios histoqumicos para enzimas,
especialmente lipasas y fosfatasas. No se usa
como fijador de rutina porque causa
distorsin nuclear y compresin del
citoplasma, adems no preserva el
glucgeno.
La formalina neutra al 10% estabilizada esta
considerada como el mejor fijador general
para todos los espsmenes patolgicos
porque preserva el nmero ms grande de
estructuras, requiere un perodo de fijacin
relativamente corto, puede ser usada para
conservar tejidos a largo plazo sin endurecer
el tejido.
. Forma puentes entre las molculas de los
tejidos. Se usa a una proporcin de entre el
0,5 y el 3 %. Tiene una alta capacidad para
preservar la estructura celular, por lo que es
el fijador de referencia para observacin de
ultraestructuras celulares con el microscopio
electrnico.
Forma puentes entre molculas. Se emplea al
1 % en soluciones tamponadas. Es buen
fijador de la ultraestructura de la clula por lo
que se emplea habitualmente para las
observaciones con el microscopio electrnico.
Es un buen fijador para grasas y membranas
celulares.
La fijacin la produce porque las sales del
tipo picrato coagulan con las protenas de los
tejidos. Se suele usar el 2 % de una solucin
saturada de cido pcrico. Preserva bien la
estructura celular, no produce retracciones
cuando el tiempo de fijacin es ptimo,
preserva bien glucgeno y lpidos. Es un buen
fijador para tinciones generales puesto que
favorece la unin de los colorantes. Hay que
eliminarlo completamente antes de proceder
a la inclusin en ceras como la parafina.
Su proceso de fijacin consiste en cambiar el
estado coloidal de las protenas. Se utiliza a
una concentracin que vara entre el 1 y el 5
%. Es el fijador ideal para cidos nuclecos y
nucleoprotenas. Como inconvenientes cabe
destacar la destruccin de las mitocondrias y
mala fijacin de membranas y citoplasma. Se
suele usar en combinacin con otros
fijadores.
Para resumir, la formalina neutra estabilizada
con fosfatos de sodio es el fijador mas verstil
y practico, su formula:
Formaldehido al 37%..........................100.0 ml.
Agua destilada..900.0 ml.
Fosfato de sodio, monobsico.4.0 g.
Fosfato de sodio, dibsico.6.5 g.
Metanol20 ml.


Los tres pasos del procesamiento de tejidos
son: deshidratacin, aclaramiento, e
infiltracin.
Pasos secuenciales designados para remover
toda el agua que se pueda extraer del tejido y
reemplazarla con un medio que solidifique y
nos permita realizar cortes de los tejidos.
Para la deshidratacin se prefieren los
alcoholes etlico e isoproplico, los cuales no
estn en la lista de sustancias controladas .
El uso de alcoholes graduados que vayan de
la concentracin mas baja hasta la mas alta
es de rutina.
El uso de procesadores automticos
perfeccionan el procesamiento, utilizando
calor, vacio, presin y agitacin.
El xileno es agente aclarante mas utilizado.
Es generalmente usado para la inclusin ruti
naria en parafina.
Otros medios de inclusin como la celoidina y
procesamientos en plstico tambin son
utilizados con los mismos solventes.
Formol al 10% buferado 1 hora.
Formol al 10% buferado 1 hora.
Alcohol 8O, 1 hora.
Alcohol 99, 1 hora.
Alcohol absoluto I, 1 horas.
Alcohol absoluto II, 1 horas.
Alcohol absoluto III, 1 horas.
Alcohol absoluto IV, 1 hora.
Xilol I, 1 hora.
Xilol II,1 1/2 hora.
Parafina I, 1 1/2 horas.
Parafina II, 1 horas.


El horno microondas (HM) fue introducido en
Anatoma Patolgica en los aos 80, siendo
utilizado en varios procesos dentro del
laboratorio. Se realiz la comparacin de algunos
parmetros histolgicos, histoqumicos e
inmunohistoqumicos, en muestras de tejido
normal, procesados paralelamente de manera
convencional y en HM. Se seleccionaron muestras
en duplicado de diversos tejidos; se procesaron
convencionalmente (PC) en un procesador
automtico y en HM utilizando un protocolo
estandarizado previamente
. Se realizaron tinciones histolgicas e
histoqumicas (H-E, PAS y Azul Alcian) e
inmunohistoqumicas (CD45, CD3, CD20
Citoqueratinas AE1/AE3, 5/18, 20, S-100,
Receptores de Estrgeno y Progesterona). Las
tcnicas se escogieron segn tipo de tejido. Se
evalu la calidad de los preparados (tincin
nuclear, tincin citoplasmtica y calidad general),
la intensidad de las tinciones histolgicas,
histoqumicas e inmunohistoqumica de
marcadores escogidos.
El HM posibilit la entrega de
la lmina histolgica en un
tiempo mucho menor que el
PC, disminuyendo el tiempo de
procesamiento de 12 a 1
hora.

La histologa de hueso requiere de la
remocin de sales de calcio sin alterar los
detalles celulares.
Fijar los tejidos en formalina al 10% neutra
estabilizada por lo menos 5 das.
Se realizan secciones adecuadas al tamao
del cassette, seguidamente se colocan los
especmenes en un recipiente con solucin
diaria de acido clorhdrico-acido frmico al
8% si no son tan duras y al 16% sin son
huesos muy duros.
SOLUCION MATRIZ DE FORMOL-ACETATO DE
SODIO(SOLUCION A).
Formaldehido al 37%.............................10 ml.
Acetato de
sodio.2.0 g.
Agua
corriente..90 ml















SOLUCION DIARIA DE FORMOL-GLICEROL
Solucin acetato de sodio-formol90 ml.
Glicerina (glicerol)10 ml.
Colocar los tejidos en solucin no mas de 8
horas para no tener efectos adversos.
Procesar los tejidos en la forma normal
usual.
Feliz fin de
semana!