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Este documento presenta la tesis de José Jesús Tapia Goné para obtener el grado de Doctor en Ciencias, Área Biotecnología en la Universidad de Colima. La tesis identifica hongos micorrízicos arbusculares aislados de suelos salinos y evalúa su eficiencia en plantas de lechuga. El documento incluye revisiones de literatura sobre salinidad, ecología de los hongos micorrízicos, su taxonomía y propiedades. También describe los materiales y métodos utilizados para caracterizar suelos sal
Descripción original:
Título original
Botanica - Agricultura - Tesis - Identificación de hongos micorrízicos - Cultivo de Lechuga
Este documento presenta la tesis de José Jesús Tapia Goné para obtener el grado de Doctor en Ciencias, Área Biotecnología en la Universidad de Colima. La tesis identifica hongos micorrízicos arbusculares aislados de suelos salinos y evalúa su eficiencia en plantas de lechuga. El documento incluye revisiones de literatura sobre salinidad, ecología de los hongos micorrízicos, su taxonomía y propiedades. También describe los materiales y métodos utilizados para caracterizar suelos sal
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Este documento presenta la tesis de José Jesús Tapia Goné para obtener el grado de Doctor en Ciencias, Área Biotecnología en la Universidad de Colima. La tesis identifica hongos micorrízicos arbusculares aislados de suelos salinos y evalúa su eficiencia en plantas de lechuga. El documento incluye revisiones de literatura sobre salinidad, ecología de los hongos micorrízicos, su taxonomía y propiedades. También describe los materiales y métodos utilizados para caracterizar suelos sal
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IDENTIFICACIN DE HONGOS MICORRZICOS ARBUSCULARES AISLADOS DE SUELOS SALINOS Y SU EFICIENCIA EN PLANTAS DE LECHUGA (Lactuca sativa L.)
TESIS QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
DOCTOR EN CIENCIAS, REA BIOTECNOLOGA
PRESENTA
JOS JESS TAPIA GON
ASESORES
DR. JOS GERARDO LPEZ AGUIRRE DRA. LUCA YOLANDA VARELA FREGOSO
TECOMN, COLIMA. MAYO DEL 2003.
UNIVERSIDAD DE COLIMA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS OFICIO No. 180/2003.
C. JOSE JESS TAPIA GONE EGRESADO DEL DOCTORADO EN CIENCIAS AREA: BIOTECNOLOGA PRESENTE.
Con fundamento en el dictamen emitido por el jurado revisor del colegiado del rea: de Bi otecnol oga de esta Facultad a mi cargo, de su trabajo de tesis de Doctorado y en vi rt ud de que efectu las correcciones y acat las sugerencias que le haban indicado los integrantes del mismo, se l e autori za l a i mpresi n de l a tesi s "IDENTIFICACIN DE HONGOS MICORRIZICOS ARBUSCULARES AISLADOS DE SUELOS SALINOS Y SU EFICIENCIA EN PLANTAS DE LECHUGA (Lactuca sativa L.)", misma que ha sido dirigida por los C.C. DR. Jos Gerardo Lpez Agui rre, Profesor - Investi gador de l a Uni versi dad de Col i ma y l a Dra. Luca Yolanda Varela Fregoso, del Instituto Politcnico Nacional .
Este documento reuni todas las caractersticas apropiadas como requisito parcial para obtener el grado de Doctor en Ci enci as; rea: Bi otecnol oga y fue revi sado en cuanto a forma y contenido por los C.C. Dra. Luca Yolanda Varela Fregoso, del Instituto Politcnico Nacional. Dr. Alfonso Pescador Rubio, Dr. Oscar Rebolledo Domnguez, Dr. Javier Farias Larios, Dr. Sergi o Agui l ar Espi nosa, Profesores-Investi gadores de l a Uni versi dad de Col i ma.
Sin otro particular de momento, me despido de usted muy cordialmente.
C.C.P. EXPEDIENTE ACADEMICO DEL ALUMNO C.C.P.EXPEDIENTECORRESPONDIENTE. C.C.P. ARCHIVO. RVMD/nlpv** Of. No. 180/2003 " 2003,45' ANIVERSARIO DE LA FACULTAD DE DERECHO "
Km 40 Autopista Colima-Manzanillo Tecomn, Colima, Mxico C.P 28100 Tel01(313) 322 94 05 Ext. 52251 Fax 52252 fcba@tecoman.ucol.mx ii
ADQUIERE SABIDURA Y SOBRE TODAS TUS POSESIONES ADQUIERE INTELIGENCIA, ENGRANDCELA Y ELLA TE HONRAR, CUANDO TU LAS HAYAS ABRAZADO. (PROVERBIOS 4:7-8)
iii
A J EHOV DI OS, PORQUE EN L, HE CONFI ADO (SALMOS 16:1)
A la memoria de mi Madre
Ma. Del Carmen Gon viuda de Tapia, porque gracias a ella tengo la vida y con su amor y consejos, los cuales llevo en el fondo de mi ser, he logrado mis proyectos y metas.
A mi esposa
Triny, por su gran apoyo en todos los instantes de nuestra vida diaria y que solo con su amor y comprensin estamos logrando una meta ms en nuestra familia.
A mis hijos
Lily, Ivan y Dalys, quienes contribuyeron con su amor y sus alegras un motivo para dar el mejor esfuerzo y demostrarles cuanto los quiero.
A mis hermanas
Guadalupe "Lupe" y Carmen "Carmela", por ese amor desinteresado que siempre me han mostrado, gracias.
iv
AGRADECIMIENTOS
A LA UNIVERSIDAD DE COLIMA, quien a travs de la Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias, me permitieron lograr los estudios de Doctor en Ciencias.
AL CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGA (CONACyT), por las facilidades que me brindo al otorgarme la beca-crdito a travs de la Universidad de Colima, para realizar los estudios de Posgrado.
A LA SECRETARIA DE EDUCACION PBLICA, quien a travs de su programa PROMEP, me otorgo la beca-complementara y las facilidades para realizar los estudios de Posgrado.
A LA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE SAN LUIS POTOS, quien a travs de la Facultad de Ingeniera, me apoyo para m superacin personal, por lo que le estar eternamente agradecido.
AL DR. RONALD FERRERA CERRATO, ASESOR EXTERNO, quien en todo momento me brindo su amistad, su experiencia y con sus consejos y su apoyo, logre la meta trazada.
A LA DRA. LUCIA VARELA YOLANDA FREGOSO, ASESOR EXTERNO, quien me dio la oportunidad de trabajar y convivir, naciendo una sincera amistad en todo momento, le doy las gracias en forma especial.
AL DR. JOS GERARDO LPEZ AGUIRRE, ASESOR INTERNO, quien con su amistad desinteresada, me brindo su apoyo y consejos para la culminacin del trabajo.
AL DR. JAVIER FARIAS LARIOS Y AL DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA, ASESORES INTERNOS, primero por la amistad que en forma desinteresada me brindaron y por su apoyo, comentarios y consejos, muchas gracias.
AL DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA DEL COLEGIO DE POSTGRADUADOS, por haberme brindado un lugar para la realizacin de m trabajo.
AL DEPARTAMENTO DE ECOLOGA MICROBIANA DE LA ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS DEL I.P.N., por las facilidades que me dieron para llevar a cabo m trabajo.
A LA FUNDACIN PRODUCE A.C., por la aprobacin de los recursos econmicos que aporto, para realizar la investigacin complementara del presente trabajo.
A LOS M.C. JESS HUERTA DAZ y JESS ANTONIO FLORES REYES, por sus consejos y asesora en los resultados estadsticos, sinceramente muchas gracias.
A TODAS AQUELLAS PERSONAS, que sera muy difcil nombrarlas, pero que colaboraron en forma especial con su amistad, su motivacin y su compresin, sinceramente muchas gracias.
v CONTENIDO
Pg. DEDICATORIAS iii AGRADECIMIENTOS iv NDICE DE CUADROS vii NDICE DE FIGURAS viii RESUMEN ix ABSTRACT x I. INTRODUCCIN 1 II. REVISIN DE LITERATURA 6 2.1. Salinidad 6 2.1.1. Salinidad del suelo 6 2.1.2. Procesos de salinizacin en lo suelos 7 2.1.3. Accin de las sales en las plantas y sus trastornos fisiolgicos 7 2.2. Ecologa de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) 10 2.2.1. Generalidades 10 2.2.2. Importancia de los HMA 13 2.2.3. Antecedentes de los HMA 15 2.2.4. Caractersticas de la asociacin micorrzica arbuscular 18 2.2.5. Morfologa de la simbiosis micorrzica arbuscular 20 2.2.6. Fisiologa y anatoma de la colonizacin micorrzica arbuscular 21 2.3. Taxonoma de los hongos formadores de la micorriza arbuscular 23 2.3.1. Clasificacin de los hongos formadores de micorriza arbuscular 23 2.3.2. Propagacin de esporas para la clasificacin taxonmica 29 2.4. Propiedades de los HM 31 2.4.1. Infectividad y efectividad de los HMA 31 2.4.2. Factores que afectan la colonizacin micorrzica 33 2.4.3. La simbiosis micorrzica y la asimilacin de nutrimentos 34 2.5. Los hongos micorrzicos arbusculares y la salinidad del suelo 36 2.5.1. Presencia de los HMA en suelos salinos 36 2.5.2. Efectos de la salinidad sobre los HMA 39 2.5.3. Efecto de la salinidad sobre el desarrollo de las hifas y del micelio 40 vi 2.6. Importancia del cultivo de la lechuga (Lactuca saliva L.) 41 2.6.1. Caractersticas botnicas 42 2.6.2. Requerimientos de clima y suelo 42 2.6.3. Hongos micorrzicos asociados con lechuga 43 III. MATERIALES Y MTODOS 45 Caracterizacin y seleccin de los suelos salinos 45 3.1. Localizacin de los sitios de muestreo 45 3.2. Muestreo de suelos 46 3.3. Anlisis fsicos y qumicos de suelos 47 3.4. Cuantificacin de esporas de HMA 49 3.5. Colonizacin micorrzica en cultivos agrcolas 49 3.6. Propagacin de esporas de las muestras representativas de suelos salinos 49 3.7. Identificacin de HMA de los sitios representativos de suelos salinos 50 3.8. Identificacin de las especies aisladas y propagadas de los sitios representativos de los suelos salinos
50 3.9. Descripcin del sitio experimental 51 3.10. Material vegetal e inculo 51 3.11. Diseo experimental y anlisis estadsticos 52 3.12. Inoculacin micorrzica 52 3.13. Variables de estudio 53 IV. RESULTADOS 55 4.1. Caracterizacin y seleccin de suelos salinos 55 4.2. Identificacin de los HMA nativos de los sitios agrcolas representativos de los suelos salinos
67 4.3. Descripcin de las especies de los HMA aislados y propagados de suelos salinos 71 4.4. Eficiencia en plantas de lechuga de los HMA aislados y propagados de suelos salinos 75 V. DISCUSIN 80 5.1. Caracterizacin de los suelo salinos 80 5.2. Identificacin de HMA nativos de suelos salinos 82 5.3. Descripcin de las especies de HMA aislados y propagados de suelos salinos 83 5.4. Eficiencia de los HMA aislados y propagados de suelos salinos en lechuga 84 VI. CONCLUSIONES 86 VII. LITERATURA CITADA 88
vii NDICE DE CUADROS
Pg. Cuadro 1. Antecedentes de la evolucin de los HMA 17 Cuadro 2. Clasificacin taxonmica de los HMA (Morton y Beny, 1992) 24 Cuadro 3. Clasificacin taxonmica de los HMA (Morton y Redcker, 2001) 27 Cuadro 4 Clasificacin taxonmica de los HMA (Schessler et al., 2001) 29 Cuadro 5. Variables para la seleccin de los HMA (Abbott et al., 1992). 32 Cuadro 6. Localizacin de los sitios de muestreos realizados por ejidos 47 Cuadro 7. Clasificacin de suelos (6 clases) (Richards, 1954). 56 Cuadro 8. Salinidad y sodicidad de los sitios muestreados en las diferentes localidades
57 Cuadro 9. Caracterizacin del clima de los sitios representativos de suelos salinos
58 Cuadro 10. Caracterizacin de la vegetacin arbustiva aledaa a los sitios representativos de los suelos salinos
59 Cuadro 11. Caracterizacin del los sitios agrcolas representativos de los suelos salinos en el estado de San Luis Potos
65 Cuadro 12. Cuantificacin de esporas y colonizacin micorrzica en los suelos salinos 67 Cuadro 13. Anlisis de varianza de la colonizacin micorrzica 75 Cuadro 14. Anlisis de varianza del volumen radical 76 Cuadro 15. Anlisis de varianza del rea foliar 76 Cuadro 16. Anlisis de varianza del peso seco del follaje 76 Cuadro 17. Prueba de Tukey de las variables fisiolgicas 77
viii NDICE DE FIGURAS
Pg. Figura 1. Tipos de micorriza en diferentes ecosistemas 19 Figura 2. Grupos taxonmicos de los Glomales 25 Figura 3. Representacin esquemtica de las caractersticas morfolgicas de los HMA 26 Figura 4. Mapa del estado con los municipios y las reas con suelos salinos 45 Figura 5. Cultivo de sorgo como cultivo trampa de los HMA 54 Figura 6. Sitio agrcolas representativos de los suelos salinos en el estado de San Luis Potos 66 Figura 7. Cuantificacin de las esporas nativas de los HMA de diferentes suelos salinos 68 Figura 8. Colonizacin micorrzica de los HMA nativos de diferentes suelos salinos 68 Figura 9. Identificacin de los HMA presentes en los suelos salinos 69 Figura 10. Diversidad de las esporas presentes en los suelos salinos 70 Figura 11. Glomus mosseae 71 Figura 12. Glomus aff etunicatum 72 Figura 13. Glomus intraradices 73 Figura 14. Paraglomus sp. 74 Figura 15. Colonizacin micorrzica de los HMA aislados de los suelos salinos 78 Figura 16. Desarrollo de plantas de lechuga inoculadas con HMA aislados y propagados de suelos salinos 79
ix RESUMEN
Los objetivos del presente estudio fueron la identificacin de las especies de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA), aislados de suelos salinos y la evaluacin de su eficiencia en plantas de lechuga (Lactuca sativa L.). Se seleccionaron siete municipios en el estado de San Luis Potos, para posteriormente realizar el muestreo de suelos en diferentes ejidos, as como el anlisis fsico y qumico de los mismos. Se obtuvieron un total de 15 muestras de suelos que se tomaron al azar y solo en cinco sitios se reportaron valores de conductividad elctrica igual o mayor a 8 dS m -1 . Los sitios se clasificaron como suelos altamente salinos, representativos de cuatro ejidos: La Matanza (sitio 1), municipio de Moctezuma; Gonzlez (sitio 5), municipio de Villa de Arista; Norias del refugio (sitio 8 y 10), municipio de Matehuala y El Sabinito (sitio 12), municipio de Ro Verde, localizndose dentro de la zona media y altiplano del estado.
En las muestras de la rizosfera, de los sitios antes mencionados, se registr la presencia de HMA y se determin el porcentaje de colonizacin micorrzica en los cultivos de chile ancho (sitio 1), jitomate (sitio 5), maz (sitio 8), girasol (sitio 10) y maz (sitio 12). Se identificaron tres gneros de HMA: Gigaspora sp., Acaulospora sp. y Glomus sp. Posteriormente se aislaron y propagaron en cultivo trampa esporas de HMA de los cinco sitios representativos de suelos salinos, logrndose propagar e identificar cuatro morfoespecies, Glomus mosseae, Glomus aff etunicatum, Glomus intradices y Paraglomus sp.
Asimismo se evalu la eficiencia de las multicepas de los HMA, asilados y propagados de suelos salinos en plantas de lechuga demostrando que las multicepas conservaron su capacidad infectiva, ya que la colonizacin micorrzica fue mayor del 80 % ; sin embargo no se observ efectividad de los HMA, para las variables fisiolgicas evaluadas (volumen radical, rea foliar y peso seco del follaje). Lo anterior no precisa que los HMA aislados y propagados de suelos salinos no sean efectivos para las condiciones evaluadas.
x ABSTRACT
The objetive of the present study, were the identification of the species of the mycorrhizal arbuscular fungi (AM), isolated of soil saline and to evaluate its infectivity and effectiveness in lettuce plants (Lactuca sativa L.). Seven area were selected in state of San Luis Potos, later on to carry out sampling of soil in different land and their respective physical and chemical analysis of the same one. They were obtained a total of 15 samples of soil that they took at random and alone in five places same or bigger values of electric conductivity were reported to 8 dS m -1 . Likewise the placces were classified as higly soil saline representative of four land "La matanza" (siege 1) municipality of Moctezuma, "Gonzlez" (siege 5) municipality of Villa de Arista, "Norias del Refugio" (siege 8 and 10) municipality of matehuala and "El Sabinito" (siege 12) municipality of Rio Verde, being located inside the half area and highland in the state.
In the samples of the rizopshere of the places before mentioned, the presence of the AM was observed and the percentage of mycorrhizal colonization was determined in the cultivations of wide pepper (siege 1), tomato (siege 5), corn (siege 8) sunflower (siege 10) and corn (siege 12). They were identification three goods Gigasporas sp., Acaulospora sp. and Glomus sp. later on they were isolated an they spread in cultivation trap spores of AM of the five representative places of soil saline, achivied you to spread and to identify four morphospecies, Glomus mosseae, Glomus aff. etunicatum, Glomus intraradices and Paraglomus sp.
Likewise the efficiency of the multicepas of the AM, was evaluated, refugees and spread of soil saline in lecttuce cultivation being observed that the multicepasconserved its capacity infectiva, since the colonization micorrzica was bigger than 80 %; however effectivences of the AM, was not observed, for the physiologic variables that were measured (radical-volume, leaf area and dry weight of the foliage). The above-mentioned dosesn't specify thea the isolated and spread AM, of soil saline not effective for the evaluated conditions.
1 I. INTRODUCCIN
La desertificacin es un problema actual que limita la produccin de alimentos, y a pesar de que el suelo es uno de los recursos ms importantes para la sostenibilidad humana, ha sido descuidado el punto de vista de su biologa y ecologa, de esta manera la ciencia del suelo ha sido estudiada por reduccionistas de la qumica y la fsica, con poca actualizacin de la biologa y ecologa (Swift, 1999). Al concluir el segundo milenio, la crisis ambiental (erosin, contaminacin, prdida de la biodiversidad y el cambio climtico global) origina que la desertificacin avance en forma alarmante, por lo que ha motivado a que se tome conciencia de usar nuestros recursos de manera sostenible, de esta manera es como se ha visto que es en el suelo donde hay mayor biodiversidad de microorganismos (Hawksworth, 1991).
El componente biolgico del suelo es fundamental para los agroecosistemas y a pesar de ellos los organismos del suelo poco influyen en el desarrollo de la ecologa terica contempornea, sin embargo el funcionamiento de un ecosistema terrestre depende en gran medida de la actividad microbiana del suelo. No solo los ciclos biogeoqumicos de los nutrimentos son propulsados por microorganismos, sino que, adems, los componentes de la microbiota del suelo protagonizan diversas acciones que producen beneficios para las plantas con las que se asocian (Wardle, 1996).
Los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) establecen una simbiosis mutualista con las races de la mayora de las plantas (Morton y Benny, 1990); esta simbiosis ayuda a mejorar el crecimiento de las plantas gracias al sistema de hifas que se desarrollan fuera de la raz y que permiten una mayor exploracin y explotacin de los suelos incrementando la captacin de nutrimentos poco mviles como el fsforo, cobre y zinc. El uso de los HMA contribuyen a la disminucin de la contaminacin ambiental, debido a que permite reducir la aplicacin de fertilizantes qumicos y otros insumos (Janerette, 1991), facilitando la captacin de nutrientes, e incrementando la resistencia y/o tolerancia de la planta a la sequa y salinidad (Barea et al., 2000). 2
Por lo anterior los HMA que se encuentran en todos los ecosistemas terrestres podran representar el segundo componente ms grande en biomasa, en muchos de ellos y si se lograran obtener cepas altamente eficientes adaptados a condiciones ridas o semiridas, sera una alternativa de solucin al problema de la desertificacin. La asociacin entre los HMA y las diferentes especies vegetales, se presenta principalmente bajo condiciones estresantes de ambiente como la salinidad, sequa, baja fertilidad y altas temperaturas. La salinidad de los suelos podra influir en el desarrollo y actividad de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA), de esta manera los HMA siempre reducen el estrs ambiental del suelo como la sequa (Sylvia y Wiliams, 1992) y la salinidad (Ruiz-Lozano et al., 1996). Existe poca informacin acerca de los efectos de la salinidad sobre la germinacin de las esporas de los HMA (Hirrel, 1981; Juniper y Abbott, 1993).
Las investigaciones proponen que el incremento de la nutricin del fsforo en plantas micorrizadas es una respuesta del incremento a la tolerancia a la salinidad y demuestran que un adicin de fertilizante fosfatado en plantas no micorrizadas, puede minimizar los efectos de los suelos salino (Hirrel y Genderman, 1980). Tambin se ha reportado gran absorcin de agua por plantas micorrizadas bajo condiciones salinas, esto es posible que mejore la nutricin de las plantas por los hongos micorrzicos y permitan a las clulas efectivamente regular mas el paso de los solutos al interior y separar los iones transportados (Rosendahl y Rosendahl, 1991). Es necesario mas trabajos que investiguen los efectos de la salinidad sobre los diferentes estados de la germinacin y comparacin de la sensibilidad de las diferentes especies y hongos aislados en estrs salino (Abbot, 1992).
Se han realizado numerosos estudios en los que se demuestra que la inoculacin artificial con hongos HMA en especies de inters agrcola, hace ms eficiente el desarrollo y crecimiento de la planta, y le permite a su vez superar situaciones de estrs bitico y abitico (Calvet y Camprubi, 1996). La micorrizacin temprana de las plantas puede ser tambin interesante en situaciones en que la cantidad de inculo HMA en el suelo agrcola sea muy bajo o por la existencia de un cultivo anterior no 3 hospedador y/o donde las poblaciones autctonas no sean lo suficientemente agresivas y eficaces (Rhoades, 1982; Sierverding, 1991).
Por otra parte la infectividad del los HMA, es la capacidad para penetrar e invadir la raz intensamente y explorar el suelo, as como su habilidad de persistir en el sistema productivo., mejorando el desarrollo del hospedante (Abbott et al., 1992), mientras que la efectividad del HMA no siempre est relacionada con la capacidad infectiva de estos hongos y si se ha logrado una interaccin entre la extensin y la colonizacin dentro y fuera de la raz con la infectividad de la misma, es indudablemente que el crecimiento de las hifa asegura el funcionamiento de la simbiosis por lo que su papel debe considerarse al hacer la seleccin de las cepas (Abbott et al., 1992; Bagyaraj, 1992). Asimismo, las condiciones de infectividad y efectividad del hongo micorrzi co dependen no solo del simbionte, sino tambin de las condiciones ambientales lo que aumenta la importancia de los estudios ecolgicos realizados con propsito de seleccionar cepas eficientes (Haas y Krikun, 1985).
Los estudios sobre el efecto de los hongos micorrzicos y la tolerancia de las plantas al estrs salino son recientes, se ha demostrado que el efecto inducido por la micorrizacin, en lo que se refiere a disminuir la deficiencia nutritiva provocada por antagonismos inicos debido al estrs salino, permite un crecimiento mayor de las plantas micorrizadas, esto aumenta el inters de utilizar hongos aislados de entornos salinos, ms adaptados a dichas condiciones de estrs (Junniper y abbot, 1993; Barea et al., 2000). Por otra parte, se establece que concretamente las plantas con asociacin micorrzica, mejoran diversos procesos fisiolgicos, tal como el ritmo del intercambio de bixido de carbono, transpiracin, cambios en la conductancia estomatica, eficiencia en la absorcin del agua y tolerancia a la salinidad (Bago et al., 2000). Sin embargo se desconoce cual es el comportamiento y diversidad de los HMA en los suelos salinos y cual sera su efectividad en plantas crecidas en condiciones controladas, se menciona que los aspectos ecolgicos y taxonmicos de los HMA han sido poco estudiados (Varela y Estrada-Torres, 1997). 4
Por lo anterior, el presente trabajo de investigacin, esta enfocado a la identificacin de los HMA aislados y propagados de suelos salinos y a la evaluacin de la eficiencia de estos simbiontes en funcin de la infectividad y efectividad en plantas de lechuga.
PLANTEAMIENTO
Cules son las especies de los hongos micorrzicos arbusculares adaptados a condiciones salinas y sern eficientes en el desarrollo de las plantas de lechuga bajo condiciones no salinas?
HIPTESIS
Las especies de HMA nativas de los suelos salinos son eficientes colonizando y promoviendo el desarrollo vegetal bajo condiciones salinas, por lo tanto conservaran su eficiencia infectiva y efectiva, al propagarlos bajo condiciones no salinas, y ser inoculados en plantas de lechuga.
OBJETIVO GENERAL
Identificar los HMA, aislados de suelos salinos y evaluar su eficiencia en funcin de la infectividad y efectividad en plantas de lechuga.
OBJETIVOS PARTICULARES
1.- Identificar y caracterizar suelos agrcolas con problemas de salinidad en estado de San Luis Potos. 2.- Identificar los HMA nativos de suelos salinos, en sitios agrcolas, del estado de San Luis Potos. 3.- Identificar las especies de los HMA aislados y propagados de suelos salinos del 5 estado de San Luis Potos. 4.- Evaluar la eficiencia de consorcios de HMA provenientes de suelos salinos en plantas de lechuga, crecidas en sustrato no salino.
6 II. REVISIN DE LITERATURA
2.1. Salinidad
2.1.1 Salinidad del suelo
El problema de la salinidad generalmente es ms acentuado en las zonas ridas y semiridas, en donde las escasas lluvias anuales son insuficientes para transportar las sales solubles fuera de la zona radicular de las plantas. Aunado a lo anterior, los altos niveles de evaporacin y radiacin solar, caractersticos de estas regiones, contribuyen a incrementar ms la salinidad de los suelos (Shainberg y Shalhevet, 1984).
Se estima que ms de 380 millones de hectreas del planeta estn ocupadas por suelos salinos, cifra que tiende a incrementarse a consecuencia de inadecuadas prcticas de riego y drenaje. Esta situacin se agrava, principalmente en zonas ridas y semiridas donde el riego tiende a realizarse con aguas subterrneas de baja calidad y la lluvia es insuficiente para producir la lixiviacin de las sales. En promedio, una tercera parte de las tierras de riego del mundo, estn afectadas por la salinizacin secundaria (Ortega, 1993).
El problema tiende a incrementarse, ya que el constante aumento de la poblacin mundial demanda cada vez mayores cantidades de alimentos, situacin que obliga a la ampliacin de las fronteras agrcolas, a la extensin del riego e incluso a trabajar suelos no aptos para la agricultura, adems de la explotacin intensiva de los mantos acuferos subterrneos, con contenidos cada vez mayores de sales, para utilizarlas en el riego. Esta circunstancia se presenta de manera muy marcada en las zonas donde las condiciones climticas, determinan un ecosistema semirido en el que la potencialidad agrcola alcanza sus valores mximos en regados, siendo muy baja en secano (Serrano y Glaxiola, 1994).
7 2.1.2. Procesos de salinizacin en los suelos
La utilizacin de aguas subterrneas de baja calidad para el riego es una situacin que ocurre en el mbito mundial en las zonas ridas y semiridas. Los principales iones que participan en las sales de los suelos salinos son calcio, magnesio, sodio y potasio, como cationes predominantes, cloro y sulfato como aniones y en menor proporcin, se encuentran nitrgeno, boro y iodo (Minhas, 1996; Shainberg y Shalhevet, 1984).
Las sales del suelo originan germinacin deficiente de la semilla, crecimiento inadecuado de los cultivos, as como una clara disminucin de su capacidad productiva. La alta concentracin de electrolitos provoca una elevada presin osmtica, que limita la disponibilidad del agua para los cultivos, lo que se conoce como sequa fisiolgica. Por otra parte, provoca un estado nutricional deficiente, ocasionado por un alto nivel de sodio intercambiable lo que inhibe la asimilacin de diversos elementos tales como el fierro, manganeso y zinc. Adems los elevados contenidos de sodio, aparte de originar salinizacin sdica en el suelo, inducen la defloculacin del suelo, es decir provocan la dispersin de los coloides del suelo, destruyndose los agregados estructurales, provocando que el suelo pierda permeabilidad y el drenaje sea ms lento (Serrano y Glaxiola, 1994).
2.1.3. Accin de las sales en las plantas y sus trastornos fisiolgicos
Por remoto que parezca, la mayora de los factores importantes que limitan la produccin agrcola son el estrs fisiolgico, de los cuales la salinidad y la sequa son de los ms serios (Boyer, 1982). La salinidad ha afectado en promedio una tercera parte de las tierras irrigadas, especialmente las de mayor productividad, esto es debido a la explotacin de los mantos acuferos subterrneos con aguas de salinas, las cuales contaminan los suelos, especialmente en las regiones ridas y semiridas (Flowers y Yeo, 1988).
8 La ingeniera tecnolgica existente, para combatir la salinidad (drenaje de aguas salinas y aplicacin suplementaria de aguas libres de sales de otras fuentes remotas), es extremadamente costoso. Por consiguiente, se necesita aprovechar la tolerancia de los cultivos como una alternativa lgica (Serrano y Gaxiola, 1994).
La tolerancia de los cultivos a la salinidad, puede definirse como la habilidad de las plantas para sobrevivir y producir rendimientos econmicos, bajo las condiciones adversas causadas por los suelos salinos. La tolerancia se basa en crecimiento ms que en el rendimiento, asimismo la tolerancia a las sales de los cultivos agrcolas, es tpicamente expresada en trminos de su relacin con la disminucin en los rendimientos, en suelos que presentan salinidad ascendente, o bien como el rendimiento relativo, en condiciones salinas, comparado con aquel obtenido en suelos sin problemas de salinidad (Ortega, 1993).
En trminos generales, los efectos adversos de las sales en las plantas, se pueden dividir en tres categoras (Bernstein, 1975)
a) Efectos debidos a la concentracin total de sales disueltas en la solucin del suelo, de gran importancia en los procesos osmticos, debido a que afectan la habilidad de la planta para absorber agua de la solucin, la cual es de vital importancia para la realizacin de los procesos metablicos.
b) Efectos del ion especfico, que influye en varios procesos fisiolgicos de la planta.
c) Exceso de sodio (Na) intercambiable, el cual puede originar hinchamientos o dispersin de las partculas finas (arcillas) del suelo, incrementando a la vez problemas en la infiltracin del agua, aireacin y penetracin de las races al suelo.
Sin embargo no hay absoluta incompatibilidad entre las plantas y las sales, tal como lo demuestra la existencia de las plantas halfitas, las cuales pueden tolerar hasta 15.0 dSm -1 de cloruro de sodio presente en las aguas saladas (Downton, 1984; Flowers y Yeo, 1991). Por consiguiente esto es un potencial gentico para las plantas 9 tolerantes a las sales, pero este potencial no est presente en todas las plantas cultivadas. La transferencia de los genes que pueden mejorar la tolerancia a la sal (genes halo-tolerantes) a las plantas cultivadas ha sido intentado por los mtodos genticos clsicos con cierto xito (Tal, 1985; Wyn Jones y Gorham, 1986; Epstein y Rains, 1987).
Las clulas de las plantas expuestas a la sal sufren un ajuste osmtico, esto debi do a l a acumulacin de cloruro de sodio en las vacuolas y acumulacin de cloruro de solutos en el citoplasma (Greenway y Munns, 1980; Win Jones y Gorhamn, 1986; Flowers y Yeo, 1988).
Por otra parte, la tolerancia a las sales, tambin depende de factores como el mtodo y frecuencia de riego. As, en suelos secos, las plantas experimentan estrs matricial y estrs osmtico, que limitan la absorcin del agua. En las clulas de las plantas, las vacuolas establecen la concentracin osmtica dentro de los rganos y la mayora siempre se regulan durante el estrs osmtico, de esta manera la turgencia de la vacuola es restaurada y la sal es removida del citoplasma (Serrano y Gaxiola, 1994).
Las plantas son ms sensibles a la salinidad en la zona radicular, ya que es ah donde se efecta la mayor absorcin de agua. Por lo que, idealmente, la salinidad debera relacionarse a esa zona (Rhoades et al., 1992). Las plantas desarrolladas en suelos salinos estn sujetas a dos estrs fisiolgicos distintos:
1.) Los efectos txicos de los iones absorbidos como el sodio y el cloro que prevalecen en los suelos salinos, los cuales interrumpen las estructuras enzimticas y otras macromolculas, daando clulas orgnicas, interrumpiendo la fotosntesis y respiracin, inhibiendo la sntesis de protenas e induciendo deficiencias por salinidad (Epstein y Rains, 1987).
2.) Las plantas cuando son expuestas a bajo potencial osmtico por la solucin salina de los suelos, corren el riesgo de una "sequa fisiolgica", debiendo de 10 mantener internamente un bajo potencial osmtico ordenado, previniendo el movimiento del agua por la smosis de las races dentro del suelo (Greenway y Munns, 1980).
En suma la alta concentracin de las sales pueden causar una disminucin en la permeabilidad de las races, y desde aqu bajar el porcentaje del agua al interior de la planta (Epstein y Rains, 1987). En la mayora de las plantas no-halofitas, los primeros sntomas del estrs salino, estn asociados con elevadas concentraciones de sacarosa y/o almidn en los brotes y raz, debido a los disturbios fisiolgicos inducidos por el cloruro de sodio en el metabolismo y la produccin de sacarosa (Greenway y Munns, 1980).
Los efectos de la salinidad sobre la fotosntesis, difieren entre las diferentes especi es de plantas, principalmente en los diferentes estados de desarrollo. Sin embargo, en general, la fotosntesis es reducida por la salinidad, debido probablemente al cambio en la concentracin osmtica de la savia de las hojas, al potencial del agua y la conductancia estomatal (Juniper y Abbot, 1993). Asimismo los suelos salinos pueden interferir siempre con la absorcin de cationes absorbidos tal como el calcio y magnesio (Bernstein, 1975).
2.2. Ecologa de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA)
2.2.1. Generalidades
La existencia y permanencia de la alta diversidad de las comunidades vegetales desarrolladas sobre suelos con bajos contenidos nutricionales, como es la mayor proporcin de los suelos que ocupan las zonas semiridas y ridas, una de sus principales causas es la actividad biolgica de la rizosfera. Esto implica que la nutricin vegetal depende en gran medida de los componentes nutritivos liberados a partir de la materia orgnica, gracias a las interacciones establecidas entre los microorganismos transformadores y enriquecedores del 11 suelo, los cuales generan procesos de mineralizacin, solubilizacin, descomposicin y fijacin de elementos minerales (Barea y Montoya, 1995).
Los hongos formadores de micorriza arbuscular (HMA) constituyen parte de esta riqueza biolgica. Establecen relaciones mutualistas con un gran nmero de plantas, contribuyendo a una mayor y ms eficiente toma de nutrimentos, especialmente de fsforo, cuando su disponibilidad es deficiente. Asimismo forman parte esencial de la microbiota natural del suelo; su xito depende de los factores edficos y las prcticas culturales, que son determinantes en la distribucin, desarrollo, actividad y supervivencia de dichos hongos (Sieverding, 1991).
La abundancia de los hongos micorrzicos arbusculares en el suelo es dependiente de las caractersticas fsicas y qumicas del mismo. En este aspecto, la supervivencia de estos endfitos, est limitada por la profundidad del suelo y se seala que en los primeros 20/30 cm del perfil del suelo son ms abundantes; es decir el nmero de esporas y el grado de colonizacin radicular es menor conforme la profundidad es mayor (Abbott y Robson, 1991).
La ocurrencia y funcionalidad ecolgica de los HMA, vara con relacin a la variabilidad estacional e influye en las plantas dominantes, de esta manera, la vegetacin existente y la variacin estacional, son factores determinantes en la presencia de los hongos micorrzicos arbusculares. En este sentido, en los agroecosistemas, la vegetacin nativa con cierto grado de micotrofa, juega un papel definitivo para que los HMA, puedan establecerse y ser funcionales en cultivos de importancia agrcola (Sanders y Fitter, 1992).
La colonizacin de las races por HMA, provocan alteraciones morfolgicas y anatmicas en las plantas hospederas, como cambios en la relacin tallo-raz, en la estructura de los tejidos radicales, en el nmero de cloroplastos, aumento de resistencia y alteraciones de los balances hormonales, efectos que no solo son explicables como una simple mejora nutritiva de la planta, aumentando la eficacia 12 en la absorcin de nutrientes por la raz gracias a la formacin de la micorriza, sino que responde a cambios ms profundos y complejos debido a la integracin fisiolgica de los simbiontes (Barea et al., 2000).
Los HMA, participan como agentes de regulacin de las comunidades microbianas que se desarrollan en los sistemas radicales micorrizados. La interaccin de los hongos con otros microorganismos permite regular poblaciones de microorganismos fitopatgenos de hbito radical y mediante la habilidad que tienen los hongos micorrzicos de incrementar la microbiota benfica, sta puede presentar actividad antagnica, ya sea por antibiosis o micoparasitismo (Linderman, 1992).
El conocimiento de los procesos involucrados en el establecimiento de la simbiosis micorrzica, permite que el xito de la colonizacin de las races por los hongos benficos, pueda realizarse al tiempo o edad apropiada en que las plantas hospedantes la necesitan, este conocimiento ser la base de los lineamientos a seguir en el manejo del suelo con la finalidad de maximizar los beneficios que la simbiosis provee (Abbott y Gazey, 1994).
La relativa tolerancia de algunos endfitos a perturbaciones especficas en sus nichos, inducir hongos con caractersticas para persistir en ambientes especficos, este tipo de situaciones tiene consecuencias en la funcionalidad de los HMA, dentro de las comunidades vegetales, sin embargo, para tener ms clara la funcin de estos endfitos, se requiere mayor conocimiento de la ecologa de las especies fngicas (Sanders y Fitter, 1992).
Se ha estudiado poco el efecto de la humedad del suelo sobre el establecimiento y funcin de los HMA, algunas observaciones de campo e invernadero han sugerido que las esporas de los HMA inhiben su germinacin bajo presin hdrica, con la subsiguiente escasa colonizacin de las races. Se ha establecido que tambin el estado del agua en la planta tambin puede afectar la colonizacin de la raz, por ejemplo, la suberizacin o dficit hdrico, origina que las esporas se colapsen y no puedan germinar (Sieverding, 1991b). 13
El aprovechamiento adecuado de los recursos que la naturaleza nos ofrece juega un papel muy importante en la agricultura, siendo los HMA un potencial considerable en la sustitucin de los fertilizantes inorgnicos, ya que esta asociacin mutualista es generalizada en la mayora de los cultivos. Asimismo debido a lo anterior, las plantas colonizadas por estos hongos, se tornan ms tolerantes a las condiciones adversas tales como los cambios de pH, desbalance de nutrimentos, salinidad, sequa y algunos elementos txicos (Barea, 1991).
Las condiciones climatolgicas (intensidad y duracin de luz, pocas de lluvia y sequa) y las prcticas agronmicas (preparacin del terreno, aplicacin de abonos, agroqumicos, rotacin de cultivos, uso de plaguicidas y prcticas de sistemas culturales) pueden modificar las condiciones fsicas y qumicas del suelo, afectando la supervivencia de los HMA nativos e introducidos en el suelo (Bethlenfalvay et al., 1991). La estimacin de la abundancia y diversidad de esporas de HMA, nativos de suelos salinos ha sido poco estudiada, por lo que es necesario realizar ms estudios en los diferentes suelos salinos, salinos-sdicos, sdicos-salinos y sdicos, para conocer su comportamiento (Barea, 1991).
2.2.2. Importancia de los HMA
Los microorganismos, como parte integral de la rizosfera, llevan a cabo actividades que modifican la morfologa y fisiologa de las plantas y el ambiente del suelo. Entre los microorganismos que conforman la rizosfera se encuentran los hongos de los que se derivan diversas actividades benficas para las plantas como son, aumento en la disponibilidad de los nutrimentos del suelo y produccin de reguladores de crecimiento de la planta (Pelczar y Chan, 1984).
Los hongos que habitan en el suelo constituyen gran parte del protoplasma microbiano total de ese ambiente, es la regin en la que se sustenta la vida vegetal y de la cual se obtienen sus nutrimentos, siendo uno de los sitios ms dinmicos en 14 interacciones biolgicas. De esta manera desempean un papel muy importante en la biosfera, actuando en la degradacin de la materia orgnica, contribuyendo de esta manera a la fertilidad del suelo como resultado de su participacin en el ciclo del carbono (Smith y Read, 1997).
De entre las asociaciones mutualistas existentes entre algunas especies de hongos y las races de las plantas cabe destacar el caso de la micorriza arbuscular, debido a que el hongo incrementa la absorcin de fsforo y algunos otros microelementos poco disponibles para las plantas como, calcio, zinc, cobre y azufre, a cambio de algunos compuestos orgnicos que contribuyen a su desarrollo (Barea et al., 2000). La arquitectura tridimensional del micelio externo de los hongos micorrzicos, adems de incrementar la absorcin de nutrimentos para las plantas, contribuye a la estabilizacin de agregados al mantener fsicamente unidas a las partculas del suelo (Tisdall, 1994).
Los hongos micorrzicos se encuentran en todos los ecosistemas terrestres y muy bien podran representar el segundo componente ms grande en biomasa, en muchos de ellos, otro papel muy importante de los hongos en los ecosistemas, es su participacin en las cadenas trficas (Allen, 1991b), asimismo su diversidad y funcionamiento estn probablemente relacionadas con el papel ecolgico de los HMA, sin embargo, tanto los aspectos ecolgicos como los taxonmicos han sido poco estudiados (Varela y Estrada, 1997).
En diferentes tipos de agroecosistemas se encuentra a los HMA, independientemente de los tipos de clima y de suelos, sin embargo su presencia puede ser nula o escasa en suelos perturbados por la actividad mineral, con problemas de erosin, fumigados, salinos o con presencia de elementos txicos (Abbott y Robson, 1991; Sieverding, 1991a).
Por otra parte, hasta ahora la diversidad de los HMA mexicanos, no ha sido evaluada en forma precisa, pero cabe suponer que sta es una de las ms grandes del mundo, tal y como sucede con otros grupos de organismos. Sin 15 embargo, los pocos estudios taxonmicos fungsticos existentes sobre los HMA, mexicanos y la informacin dispersa en una gran cantidad de fuentes bibliogrficas, por el momento impide hacer estimaciones exactas sobre este importante grupo (Estrada-Torres et al., 1992).
A pesar del gran inters que recientemente se ha generado en nuestro pas acerca del estudio de los hongos micorrzicos arbusculares, los esfuerzos por establecer sus colecciones no se han cristalizado, debido al intenso trabajo requerido para su mantenimiento y a la falta de infraestructura y personal especializado que se dedique de tiempo completo a esta actividad, as mismo a la falta de compresin para los estudios taxonmicos, los cuales pocas veces son econmicamente apoyados para su realizacin (Varela y Estrada-Torres, 1997).
2.2.3. Antecedentes de los hongos micorrzicos
Por tradicin, el nombre de hongo se ha venido aplicando a organismos que se parecen morfolgicamente entre s, pero que no estn filogenticamente relacionados y por lo tanto forman un grupo heterogneo de seres vivos (Bruns et al., 1991).
Una de las simbiosis ms sobresalientes en la naturaleza es la que se da entre las races de las plantas superiores con un tipo especial de hongo en el suelo. Esta asociacin simbitica, se denomina micorriza, nombre que significa "Hongo de la raz" (del griego myces: hongo y rhiza: raz). Por otra parte, Frank un patlogo forestal alemn, en 1885, acu el trmino micorriza, definindolo como simbiosis mutualista formada por las races de las plantas hospedantes y un hongo del suelo, llamado actualmente hongo micorrzico (Simon et al., 1993).
La micorriza es la simbiosis mutualista (asociacin no patognica) entre ciertos hongos del suelo y las races de la mayora de las plantas terrestres (Sieverding, 1991a; Bethlenfalvay et al., 1991). El hongo micorrzico arbuscular es 16 considerado un simbionte obligado, mutualista cuyo desarrollo se conoce desde hace 400 millones de aos atrs, particularmente en el perodo Devoniano (Cuadro 1), lo que permite suponer que la colonizacin y evolucin de las plantas en la tierra fue factible gracias a la co-evolucin entre ellas y los hongos micorrzicos arbusculares (Simon et al., 1993; Remy et al., 1994; Barker et al., 1998).
Por definicin, la micorriza debe entenderse como una estructura especializada con diversas funciones, la cual se origina al asociarse, en forma mutualista, los diversos grupos de hongos especficos, con el sistema radical de las plantas. Algunas veces existen confusiones con la definicin, principalmente cuando se dice que la micorriza corresponde a hongos que se establecen en la raz de la planta, debindose de entender que los hongos micorrzicos o micorrizgenos, son aquellos que originan la estructura denominada micorriza (Linderman, 1992).
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Cuadro 1. Antecedentes de la evolucin de los hongos micorrzicos arbusculares y ectomicorrzicos (Simon et al, 1993).
18 Se ha mencionado que existen de manera natural diversos hongos que se establecen en el sistema radical y que a partir de este proceso se origina la micorriza. Sin embargo, en forma natural, se pueden reconocer diversos tipos de micorriza, los cuales se presentan en el ecosistema en funcin de las caractersticas relacionadas con la presencia de fsforo y nitrgeno, tanto orgnico como inorgnico, y su relacin con el tipo de vegetacin primaria (Fig. 1). El mayor grupo de hongos endomicorrzicos es la micorriza arbuscular y estn asociadas con una gran mayora de especies vegetales (Linderman, 1992).
Actualmente los dos tipos de micorriza ms importantes desde el punto de vista aplicativo en los sistemas agrcolas y forestales son la endomicorriza arbuscular y ectomicorriza. Sin embargo, la endomicorriza arbuscular (antes vesiculo- arbuscular) tiene una distribucin ms amplia y es la que tiene ms repercusin biolgica y econmica en la mayora de los cultivos agrcolas de clima templado, rido, tropical y subtropical (Simon et al., 1993).
2.2.4. Caractersticas de la asociacin micorrzica arbuscular
La simbiosis micorrzica arbuscular es interesante desde el punto de vista morfolgico, ecolgico, taxonmico y fisiolgico. Asimismo es importante por los efectos que tiene en la biologa de la planta en procesos involucrados en la nutricin, promocin del crecimiento, fisiologa y otros beneficios directos e indirectos (Fitter, 1991).
Los hongos se consideran biotrofos obligados, ya que para su desarrollo y reproduccin requieren del sistema radical del hospedante, de modo que pueden satisfacer sus requerimientos energticos, cuya base son diferentes fuentes de carbono generadas por el proceso fotosinttico de la planta. La importancia de los hongos micorrzicos arbusculares puede traducirse en los beneficios que por su simbiosis aporta a las plantas, con relacin al mejor aprovechamiento de agua y nutrimentos, especialmente el fsforo cuando ste es limitado (Sieverding, 199lb; Bethlenfalvay et al., 1991). 19
Figura 1. Tipos de micorriza en diferentes ecosistemas (Modificado de Francis y Read, 1994).
Adems, mantienen por mayor tiempo la funcionalidad de las races y el micelio externo (extramatrical), generan una extensa red de hifas en el suelo que permite a la raz mayor capacidad de exploracin del volumen de suelo, por lo que contribuyen a que la zona de agotamiento aledaa a la raz no sea limitativa en la disponibilidad de nutrimentos y agua. De este modo, la fisiologa de la simbiosis micorrzica provee a las plantas mejor capacidad de adaptacin, establecimiento y crecimiento (Linderman, 1992).
Por otra parte, el suelo tambin es favorecido por la actividad de los hongos micorrzicos arbusculares. En cuanto a la estabilidad del suelo, las hifas permiten la agregacin de las partculas de suelo, lo que evita que la prdida de ste por agentes de erosin sea menor (Abbott y Gazey, 1994). A su vez, la actividad de los hongos micorrzicos permite que las poblaciones microbianas 20 se incrementen, participando como agentes reguladores de microbiota benfica y patognica y, de este modo, influir directamente en la dinmica del carbono orgnico del suelo y de la fertilidad del mismo (Sieverding, 1991a).
Pocas son las familias en las que se excluye la posibilidad de asociarse con los hongos micorrzicos arbusculares, como Pinaceae, Betulaceae, Fagaceae, Orchidaceae, Ericaceae, Chenopodiaceae, Fumaraceae, Cyperaceae, Commelinaceae, Urticaceae, Poligonaceae, Amaranthaceae, Capparidaceae, Caryophyllaceae, Cruciferaceae, Gentianaceae, Myrtaceae y Portulaceae (Gerdemann, 1975; Hirrel y Gerdeirinann, 1980; Sieverding, 1991a). Sin embargo, en algunas de ellas la colonizacin por los hongos puede ser efmera, sin que su efecto sea esencial para la planta (Mikola, 1982). Tal es el caso de algunas familias, entre ellas las Chenopodiaceae, Cruciferaceae Fumariaceae, Urticaceae y Pogonaceae, poseen especies que habitualmente no forman este tipo de simbiosis (Trappe, 1984; Miller et al., 1999).
2.2.5. Morfologa de la simbiosis micorrzica arbuscular
Los hongos micorrzicos arbusculares no producen cambios visibles en la morfologa de la raz de sus hospedantes. Su presencia puede ser detectada mediante observaciones al microscopio.. ptico. En suelo, los hongos formadores-de: esta simbiosis presentan una extensa red de hifas que : favorecen la absorcin de nutrimentos y: agua (Bago, et al., 1998; 2000), permitiendo que la raz posea un mecanismo alterno que explore mayor volumen de suelo. Este micelio puede formar estructuras microscpicas que favorecen la propagacin de los hongos a las . cuales se les conoce como esporas que pueden .estar solitarias o. _agrupadas (Declerck et al., 2000).
Una vez que la hifa del hongo penetra la raz, sta crece a lo largo del tejido radical y .llega a formar estructuras tpicas de esta simbiosis tales como: 1) Hifas intercelulares e intracelulares: 2) Arbsculos que facilitan el intercambio 21 bidireccional de nutrimentos entre hongo-planta, 3) Vesculas las cuales almacenan reservas para el hongo; 4) Enrollamientos hifales y 5) Esporas simples o esporocrpicas en el suelo, pero algunas especies pueden esporular dentro de la raz (Bago et al., 2000).
La ntima relacin biotrfica hongo-planta, junto con la dependencia recproca de los dos organismos para crecer y sobrevivir, permite sugerir que la micorriza forma y constituye parte integral de las plantas (Gianinazzi, 1991). Por lo que se considera que el establecimiento de la micorriza puede ser determinado por una secuencia de fenmenos de reconocimiento entre los simbiontes, involucrando mltiples procesos (Giovanneti y Gianinazzi-Pearson, 1998).
2.2.6. Fisiologa y anatoma de la colonizacin micorrzica arbuscular
Las estructuras que forman los hongos micorrzicos arbusculares son: esporas, arbsculos, vesculas e hifas. Las esporas son los propgulos ms resistentes a condiciones adversas, por lo tanto su funcin principal es la propagacin y preservacin (Abbott y Robson, 1991). De esta manera, tras la emisin del tubo o tubos germinativos, el micelio del hongo crece hasta encontrar una raz hospedera, donde forma entonces una estructura similar a un apresorio y penetra entre las clulas epidrmicas o a travs de los pelos radicales, despus de la penetracin las hifas producto de la germinacin de las esporas, comienzan la colonizacin del tejido parnquimatico de la raz, generando al nivel del crtex, arbsculos y vesculas. La colonizacin del hongo se extiende por la epidermis y el parnquima cortical, nunca penetra los tejidos vasculares y meristemticos (Harley y Smith, 1983a).
Los arbsculos cumplen la funcin de intercambio de nutrimentos, las vesculas de almacenamiento y las hifas extraradicales que se extienden dentro del suelo, incrementan el potencial del sistema radical (Linderman, 1992) y la funcin de exploracin, absorcin y transiocacin de nutrimentos al 22 hospedante, sin embargo las vesculas no se forman en los gneros Gigaspora y Scutellospora (Gianinazzi-Pearson y Gianinazzi, 1983).
Las esporas vivas presentes en el suelo pueden no funcionar como propgulos s ellas estn inactivas, debido a condiciones del suelo estn en su perodo natural de dormancia, el cual puede ayudarles a sobrevivir perodos largos bajo condiciones adversas. Los factores que pueden influir en la presencia y efectividad de las asociaciones micorrzicas son: propiedades de la raz, factores edficos y climticos, perturbacin del suelo y compatibilidad hospedante-hongo (Brundrett, 1991).
El desarrollo de la colonizacin en el interior de las clulas corticales, est acompaado por un crecimiento exterior y en forma radial, de las hifas extramatriciales, las cuales constituyen el sistema bioqumico de absorcin de nutrimentos (Gianinazzi, 1991). Las hifas extramatricales o externas se desarrollan en el suelo y, en conjunto, forman un sistema complejo de redes de hifas responsables de la absorcin de nutrimentos, distribucin de la asociacin, formacin de esporas, etc.
Se ha discutido si estas hifas tienen la capacidad de formar estructuras BAS que se puedan homologar a los arbsculos (Bago et al., 1998; 2000) cuya funcin puede estar relacionada con la absorcin de nutrimentos como fsforo y nitrgeno, pero no de carbono, lo que las diferencia de los arbsculos, as como tambin pueden participar en la capacidad de intercambio de los mismos nutrimentos (Bago et al., 1998).
La micorriza arbuscular domina en comunidades vegetales de herbceas y leosas en suelos minerales a bajas latitudes (Read et al., 1976), se encuentra distribuida desde el rtico hasta el trpico, en ambientes ridos, hmedos, comunidades estables y an en ecosistemas altamente pertubardos (Mosse et al., 1981).
Se ha demostrado que las plantas con micorriza arbuscular incrementan la 23 captacin de nutrimentos minerales, especialmente aquellos que son poco mviles en el suelo, como P, Cu y Zn (Smith y Read, 1997). Tambin se ha observado que las plantas micorrizadas son ms tolerantes a fitopatgenos y condiciones ambientales adversas como salinidad del suelo (Hildebrandt et al., 2001; Al-karaki, 2000) sequa (Kalpunik y Douds, 2000), altas temperaturas y contaminacin del suelo (Sylvia y Williams, 1992).
En el suelo donde se presentan plantas micorrizadas, el micelio externo del hongo contribuye a la estabilizacin de agregados, al mantener fsicamente unidas a las partculas del suelo (Sutton y Sheppard, 1976; Tisdall, 1994; Bearden, 2001).
La micorriza arbuscular se presenta en ms especies vegetales que los dems tipos de micorrizas juntas y se ha observado en ms de 1000 gneros de plantas que representan alrededor de 200 familias. Se calcula que cerca del 90% de las 300,000 especies de plantas vasculares en el mundo forman micorriza arbuscular (Marks, 1991; Smith y Read, 1997), existiendo poca evidencia de especificidad entre el hongo y la planta aun cuando se ha demostrado especificidad ecolgica y compatibilidad funcional (Molina et al., Trappe, 1992; Clapp et al., 1996; Varela y Gonzlez, 2001).
2.3. Taxonoma de los hongos formadores de la micorriza arbuscular
2.3.1. Clasificacin de los hongos formadores de micorriza arbuscular
Los hongos micorrzicos arbusculares fueron ubicados inicialmente en la divisin de la Eumycota y la Clase de los Zygomicetos (hongos con micelio cenoctico, sin septos, cuyo principal componente estructural de la pared celular es la quitina). El orden al que pertenecen estos hongos es de los Glomales y su clasificacin se bas en caractersticas morfolgicas de la pared de las esporas (asexuales) producidas por estos hongos. Este tipo de clasificacin permiti describir lo que se denomina morfoespecies fngicas. Con base en lo anterior, 24 en 1990, las aproximadamente 150 especi es de HMA conocidas, se clasificaron en dos subrdenes (Glomineae y Gigasporineae), tres familias (Glomaceae, Acaulosporaceae y Gigaspraceae) y seis gneros (Glomus, Sclerocystis, Acaulospora, Entrophospora, Gigaspora y Scutellospora) (Morton y Benny, 1990), (Cuadro 2).
Asimismo cada uno de los gneros de los hongos formadores de micorriza arbuscular est definido por criterios relacionados con la forma en que se originan las esporas (Fig. 2); es decir, cada uno de ellos tiene una formacin especial de esporas, adems de que presentan diferente morfologa en los puntos de unin de las hifas sustentoras o formadoras (Schenck y Prez, 1990).
2. Clasificacin taxonmica de los HMA (Morton y Benny, 1992). Clase Orden Subrdenes Familias Gneros Zygomycetes Glomales Glomineae Glomaceae Gl omus Sclerocystis Acaulosporaceae Acaul ospora Entrophospora Gigasporinae Gigasporaceae Gigaspora Scutel l ospora
La identificacin de las especies ha estado basada en el estudio de las esporas en funcin de su pared y grupos o capas que las conforman (Walker, 1983). Por lo anterior se dise una serie de representaciones esquemticas (Murgrafos y Murnimos) sealando las posibles caractersticas de las paredes (Fig. 3) (Walker, 1992).
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Figura 2. Grupos taxonmicos en los Glomales, Zigomicetos con base en el crec miento y diferenciacin de sus partes en un organismo fngico (Morton y Bentinvenga, 1994).
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Figura 3. Representacin esquemtica de las diferentes capas que conforman la pared de las esporas de hongos micorrzicos arbusculares.
27 Actualmente, la biologa molecular puede representar una va alternativa viable en la identificacin de las especies de los hongos formadores de este tipo de micorriza, as como en la identificacin de las molculas orgnicas que intervienen en la estimulacin e inhibicin de la germinacin de esporas y establecimiento de los hongos micorrzicos arbusculares en la planta hospedante (Bago et al., 2000).
Recientemente, con base en los avances en lo que se refiere a tcnicas moleculares y relacionndolas con las caractersticas morfolgicas de las esporas, se han realizado cambios significativos en la taxonoma de los hongos formadores de micorriza arbuscular. El uso de nuevas tcnicas que involucran la secuenciacin de ADN, las determinaciones de perfiles de cidos grasos, reacciones inmunolgicas hacia anticuerpos monoclonales especficos y junto con la caracterizacin de la morfologa de las esporas y hbitos de colonizacin de los HMA han permitido tener avances sustanciales en la taxonoma de estos hongos (Morton y Redecker, 2001). En este sentido, las tcnicas moleculares, con base en el estudio del ADN, han revelado que el grupo de hongos formadores de micorriza arbuscular puede ser ms diverso de lo que actualmente se piensa y cuya clasificacin taxonmica, puede ser diferente eliminando al gnero Sclerocystis y fusionndolo con el gnero Glomus (Cuadro 3). Cuadro 3. Clasificacin taxonmica de los HMA (Morton y Redecker, 2001). Clase Orden Subrdenes Familias Gneros Zygomycetes Glomales Glomineae Gloamaceae Glomus Gigasporineae Acaulospoaceae Gigasporaceae Paraglomaceae Archaeosporaceae Aculospora Entrophospora Gigaspora Scutellospora Paraglomus Archaeospora
28 Esta clasificacin trata de describir la ruta filogentica de los HMA. Las nuevas familias comprenden especies que presentaban caractersticas morfolgicas atpicas a los gneros en los que estaban ubicados. La familia Archaeosporaceae incluye tres especies que forman esporas atpicas a las de Acul ospora y dos de ellas son dimrficas y forman esporas de tipo Glomoide (Morton y Redecker, 2001).
Por otra parte, la familia Paraglomaceae incluye dos especies formadoras de esporas que no son distinguibles con aquellas especies del gnero Gl omus y su creacin se basa en caractersticas del habito de colonizacin y su morfologa es muy similar a los miembros de la familia Achaesporaceae. La descripcin de est familia se basa en caractersticas moleculares (cidos grasos y secuenciacin de ADNr 18S), lo que permite considerarla como un grupo ancestral de los Glomales y son distantes de otras familias de los Glomales (Morton y Redecker, 2001).
Recientemente se ha reconocido un nuevo phylum denominado Glomeromycota, en el cual han sido ubicados los HMA (Cuadro 4). Sin embargo esta clasificacin aun se encuentra en estudio (Schessler et al., 2001).
29 Cuadro 4. Reciente clasificacin taxonmica de los hongos formadores de la micorriza arbuscular (Schessler et al., 2001). Phylum Orden Fami l i as Gneros Glomeromycota Paraglomerales Archaeosporales Glomerales Diversisporales Paraglomaceae Archaeosporacea e Glomeraceae Gigasporaceae Acaulosparaceae Diversisporaceae* Paraglomus Archaeospora Glomus Gigaspora Acaulospora * Esta familia es indita, ya que actualmente se encuentra en discusin los gneros que se ubicaran dentro de la misma.
2.3.2. Propagacin de las esporas de los HMA para la clasificacin taxonmica
La principal estructura que stos hongos poseen para propagase y con las que pueden estudiarse taxonmicamente son las esporas (Varela y Estrada-Torres, 1997). Estas estructuras, hasta la fecha no se han logrado propagar y multiplicar en medios de cultivos convencionales de laboratorio (Sylvia y Jarstfer, 1994).
Por lo anterior y debido a que los hongos que forman micorriza arbuscular son biotrofos obligados que habitan en el suelo, para poderlos identificar adecuadamente, es necesario propagarlos durante 4 - 6 meses en macetas con una planta hospedera apropiada. Las esporas recolectadas directamente de suelo de campo frecuentemente estn parasitadas y no es posible obtener suficiente informacin confiable con relacin a la variabilidad de sus caractersticas (Varela y Estrada-Torres, 1997).
Es importante sealar que no todas las especies presentes en la muestra de campo logran propagarse en maceta. Por otro lado, a partir de las macetas de 30 propagacin se obtienen esporas de diferentes especies, por lo que para hacer una identificacin confiable, en muchos casos es necesario hacer cultivos monoespecficos a partir de una sola espora (Sylvia y Jastfer, 1994).
Una vez que se han propagado las esporas en maceta, se separan del suelo por la tcnica de tamizado hmedo y decantacin (Gerdemann y Nicolson, 1963). En ocasiones si la muestra tamizada contiene gran cantidad de materia orgnica y partculas de suelo, puede aplicarse una centrifugacin utilizando un gradiente de sacarosa (20 y 60%) con el objeto de eliminar partculas de materia orgnica, que impidan la separacin de las esporas. Despus de la centrifugacin, las esporas deben lavarse abundantemente con agua para evitar su plasmolisis.
La suspensin de esporas obtenida se coloca con agua en una caja de Petri o bien se filtra a travs de papel filtro y ste se coloca sobre una caja de Petri. Las esporas se observan en un estreomicroscopio y se separan, en grupos discretos de acuerdo con su tamao, forma, color, hifa de sostn y ornamentacin. En esta etapa, con ayuda de un microscopio ptico debe anotarse el color de las esporas (luz reflejada). Para evitar subjetividad en cuanto al color es recomendable utilizar una tabla de colores como la de Kornerup y Wanscher (1978) o la de Munsell (1966) para suelos. Estas tablas aunque tiles, tienen la desventaja de que no tienen la diversidad de colores que presentan las esporas de los hongos micorrzicos arbusculares (Varela y Gonzlez, en prensa).
La Coleccin Internacional de HMA y vesculo-arbusculares (INVAM) cuenta con su propia tabla de colores. En dicha tabla se utilizaron distintas combinaciones de los colores azul, magenta, amarillo y negro para dar diversas tonalidades que al compararse con el color de las esporas nos permiten definir su color. El color de las esporas se expresa con una frmula que nos indica la concentracin de cada uno de los colores antes mencionados. Una vez que se tienen las esporas de un mismo tipo, se prepara una laminilla de acuerdo con la tcnica propuesta por Schenck y Prez en 1990, la cual una vez preparada la laminilla, se observan las esporas al microscopio y se identifica la especie (Varela y Gonzlez, en prensa). 31 2.4. Propiedades de los HMA
2.4.1. Infectividad y efectividad de los hongos micorrzicos arbusculares
Se han realizado numerosos estudios en los que se demuestra que la inoculacin artificial con hongos HMA en especies de inters agrcola, mejora el desarrollo y crecimiento de la planta, y le permite a su vez superar situaciones de estrs bitico y abitico (Calvet y Camprubi, 1996). La micorrizacin temprana de las plantas puede ser tambin interesante en situaciones en que la cantidad de inculo HMA en el suelo agrcola sea muy bajo o por la existencia de un cultivo anterior no hospedador y/o donde las poblaciones autctonas no sean lo suficientemente agresivas y eficaces (Rhoades, 1982; Sierverding, 1991).
Asimismo se ha demostrado un efecto benfico de la inoculacin temprana para la mayora de los cultivos hortcolas y para los ctricos. La existencia de estos hongos en el suelo hace que se produzcan una serie de interacciones con otros microorganismos que viven tambin en ese hbitat. Se ha sealado que el tipo de cultivo ejerce un efecto selectivo en la abundancia de diferentes especies de hongos micorrzicos (Abbott y Robson, 1991).
La infectividad es la capacidad del hongo para penetrar e invadir la raz intensamente y explorar el suelo, as como su habilidad de persistir en el sistema productivo. Un hongo micorrzico efectivo mejora el desarrollo del hospedante ya sea en forma directa o indirecta. Indirectamente la simbiosis micorrzca es efectiva al proteger contra patgenos del suelo y condiciones de estrs, as como incrementar la agregacin del suelo y la estabilidad del mismo, cualidades en las que el desarrollo hifal es fundamental (Abbott et al., 1992).
Directamente mejorando la absorcin de fsforo, cuando ste es limitante y de algunos otros nutrimentos como el zinc, cobre y amoniaco anhidro (Stribley, 1990; Marchner y Dell, 1994). Aunque se conoce poco cunto fsforo llega hasta el 32 hospedante y la capacidad del hongo para transferirlo (Abbott et al., 1992).
Se ha mencionado que la efectividad del HMA no siempre est relacionada con la capacidad infectiva de estos hongos y si se ha logrado una interaccin entre la extensin la colonizacin dentro y fuera de la raz con la infectividad de la misma, es indudablemente que el crecimiento de las hifa asegura el funcionamiento de la simbiosis por lo que su papel debe considerarse al hacer la seleccin de las cepas (Abbott et al., 1992; Bagyaraj, 1992).
Por otro lado, las condiciones de infectividad y efectividad del hongo micorrzico dependen no solo del simbionte, sino tambin de las condiciones ambientales lo que aumenta la importancia de los estudios ecolgicos realizados con propsito de seleccionar cepas eficientes (Haas y Krikun, 1985). Las cualidades del endosimbionte que deben tomarse en cuenta al realizar su seleccin es fundamental para su propagacin (Cuadro 5) (Abbott et al., 1992).
Cuadro 5. Variables para la seleccin del inculo de los HMA (Abbott et al., 1992). Calidad requerida del hongo Caracterstica relevante Habilidad para absorber y transportar fsforo del suelo hasta la planta.
Extensin de la hifa, capacidad para colonizar races con relacin al suministro de fsforo Habilidad para incrementar el crecimiento y desarrollo de la planta. Capacidad para mantener estable la relacin transferencia de fsforo y demanda de carbohidratos en el hospedante. Habilidad para persistir en el suelo Produccin de propgulos en las races. Habilidad para soportar los mtodos de produccin de inculo a gran escala. Resistencia de los propgulos a la desecacin; supervivencia de los mismos en los sistemas productivos.
33 2.4.2. Factores que afectan la colonizacin micorrzica
Los recientes progresos en los mtodos para identificacin y cuantificacin de hongos micorrzicos arbusculares en suelo y dentro de races han permitido aclarar los factores que influencian su distribucin. El desarrollo de las micorrizas arbusculares vara con el pH, tipo y profundidad del suelo, vegetacin (especie, edad), grado de perturbacin del sistema (Abbot y Robson, 1991; An et al., 1993; Wang et al., 1993), contenido de humedad y materia orgnica del suelo, prcticas agrcolas como el uso de agroqumicos y rotacin de cultivos (Jonson y Pfleger, 1992; Hepper y Warner, 1993).
La mayora de esporas y la colonizacin micorrzica arbuscular se presentan en los 20 cm, superiores del suelo, disminuyendo en forma exponencial con la profundidad (Abbot y Robson, 1991). Se ha encontrado una correlacin positiva entre el pH del suelo que vari de 5.10 a 6.20 y la colonizacin micorrzica de races de pasto y hierbas desarrolladas en suelos con aplicacin de lquido efluente de cerdo y vaca (Christie y Kilpatrick, 1992).
El nivel de fsforo, el uso y tipo de fertilizantes afectan grandemente la colonizacin micorrzica, se ha establecido que a baja o moderada fertilidad del suelo, se mejora la respuesta de la planta. Asimismo las aplicaciones pesadas de fertilizantes sean de nitrgeno o fsforo, a menudo perjudican la colonizacin micorrzica aunque en campo la respuesta es impredecible (Azcn y Barea, 1985). La colonizacin radical se reduce a muy altos o muy bajos niveles de fsforo disponible (Trimble y Knowles, 1995; Thomson et al., 1991; Daft, 1991; Marschner y Dell, 1994), los efectos parecen estar mediados por la planta a niveles bajos y medios (Thomson et al., 1991).
El grado de disminucin o aumento en los niveles de colonizacin micorrzica arbuscular no solo depende del nivel del fsforo sino tambin del nivel de nitrgeno suministrado, probablemente relacionada con la cantidad de carbohidratos presentes en la raz, asimismo se ha encontrado que las plantas 34 de lechuga micorrizadas, obtenan un mximo nivel de colonizacin cuando el nitrgeno se suministraba como nitrato, independientemente de la nutricin del fsforo (Marschner y Dell, 1994).
En los sistemas agrcolas existen efectos positivos sobre la colonizacin y produccin de esporas, cuando se maneja una adecuada rotacin de cultivos contrario a manejar una sola especie (Benthlenfalvay, 1991). En una rotacin con soya seguida de dos aos de maz, mijo, pasto y nuevamente soya se obtuvo una alta densidad de poblacin micorrzica de Glomus sp., contrario al monocultivo de soya por tres aos (An et al., 1993). En los ecosistemas naturales tambin hay una correlacin positiva entre planta de cobertera y el nmero de esporas (Miller y Jastrow, 1994). Por otro lado en la conversin de sistemas naturales a artificiales o viceversa, existen cambios en las especies de plantas y en el manejo de estas especies lo que afecta la microbiota del suelo y por consiguiente a la micorriza (Kurle y Pfleger, 1994).
2.4.3. La simbiosis micorrzica arbuscular y la asimilacin de nutrimentos
La colonizacin micorrzica aumenta el desarrollo de las plantas al incrementar la asimilacin de nutrimentos va incremento en la absorcin del rea superficial radical, o por la movilizacin de las fuentes de nutrimentos aprovechables (por la excrecin de compuestos quelatantes o ectoenzimas). La colonizacin micorrzica puede tambin proteger a las races de patgenos del suelo y as aumentar el desarrollo de la raz y la adquisicin de nutrimentos por la raz del hospedante, es por esto que una mayor asimilacin de nutrimentos no puede ser atribuida exclusivamente a las hifas del hongo (Marschner y Dell, 1994).
En general, una gran parte del efecto en el desarrollo de races colonizadas con hongos micorrzicos, es causado por aumentos en absorcin de fsforo, particularmente de las fuentes escasas de fsforo soluble (Bolan et al., 1987). Este incremento en disponibilidad de fsforo por las hifas externas, esta 35 relacionada a una mayor exploracin de la raz de la planta hospedante (hasta 80%) y la produccin de cido-fosfatado extracelular que cataliza la liberacin de complejos de fsforo orgnico en el suelo, contribuyendo a una mejor utilizacin de ciertas fuentes de fsforo orgnico por la planta micorrizada y una mayor tasa de flujo (dos a seis veces ms) debido a la longitud de las hifas externas (Jakobsen et al., 1992).
La colonizacin de la raz con el hongo micorrzico arbuscular puede incrementar la eficiencia de la absorcin de los nutrimentos, incrementando el crecimiento de las plantas micorrizadas, particularmente cuando existe baja disponibilidad del fsforo en el suelo. La morfologa radical y el micelio externo de los hongos arbusculares determinan la utilizacin de iones de baja velocidad de difusin como el fsforo, zinc y molibdeno (Sieverding, 1991b).
Las hifas del hongo micorrzico arbuscular, pueden absorber nutrimentos tales como P, Zn, Ca, S, Cu, Mg, Cl Y N (Buwalda et al., 1982) del suelo y translocarlos a las races de las plantas hospedantes. Pero es ms importante su funcin en la absorcin de los elementos poco mviles como P, Zn y Cu (Kothari et al., 1991); esto es determinante en el caso del P por ser un macronutrimento y porque en su ciclo geoqumico al perderse del continente e ingresar al fondo del ocano ya no se puede recuperar, por eso la naturaleza trata de retenerlo en los ecosistemas terrestres (Paul y Clark, 1989).
Se ha discutido cmo los hongos micorrzicos arbusculares pueden afectar la respuesta de las plantas a las condiciones de sequa, se especula que este efecto es regulado mediante la alteracin del metabolismo del carbono. De este modo la colonizacin micorrzica puede influenciar la acumulacin de azcar por induccin de la sequa tanto en las hojas como en las races (Schellembaum et al., 1996).
La fotosntesis es un proceso esencial para el crecimiento y supervivencia de las plantas en etapas especficas de desarrollo vegetativo, la disponibilidad de 36 fotosintatos (carbono) puede ser limitante (Flore et al., 1985). Este aspecto es importante considerarlo cuando se establece la simbiosis micorrzica, ya que la demanda de carbono. De este punto se desprende la importancia que tiene la micorriza arbuscular en los proceso fisiolgicos de las plantas, ya que ambos son componentes de la simbiosis si se beneficia mutuamente (Sierverding, 1991 a). Sobre la asimilacin de potasio, calcio, magnesio y azufre, no es muy conocido el papel de la micorriza y son muchos e inconsistentes los resultados que se han obtenido, adems son difciles de interpretar (Sierverding, 1991).
En plantas micorrzicas, la estructura del suelo puede ser alterada en la rizosfera. La alta tasa de asimilacin de agua por unidad de longitud radical en plantas micorrizadas puede agotar el agua del suelo ms rpidamente en la rizosfera, esto dificultar la asimilacin de nutrimentos va difusin, a menos que la conductividad hidrulica del suelo sea incrementada por la hifa externa (Davies y Sylvia, 1992).
2.5. Los hongos micorrzicos arbusculares y la salinidad del suelo
2.5.1. Presencia de los hongos micorrzicos arbusculares en suelos salinos
La inoculacin est influenciada por la fisiologa de la planta husped, porque la mayora de la energa de la extensin de la hifa, la obtiene de la translocacin del carbono de la planta el hongo. Por lo anterior, considerando los efectos de la salinidad en la formacin de los hongos micorrzicos se deber incluir los efectos de la salinidad sobre el desarrollo de la planta hospedera. Las plantas reducen los niveles de la colonizacin de los HMA, con el incremento de la salinidad en los suelos, esto puede ser debido, a los cambios fisiolgicos de la mayora de las plantas, los cuales afecta la simbiosis o tiene un efecto indirecto sobre el hongo micorrzico arbuscular (Juniper y Abbott, 1993).
La colonizacin de los hongos micorrzicos es modificada por el contenido de sales que se encuentran en el suelo y regulada por el genotipo hospedante. En 37 condiciones de altos contenidos de sales, se ha encontrado que la colonizacin de los HMA disminuye, producindose mayor esporulacin de los endofitos, lo que asegura su supervivencia (Sylvia y Schenck, 1982; Duke et al., 1986).
Hay claras evidencias, que demuestran que la germinacin de esporas y el subsiguiente desarrollo de las hifas de algunos hongos micorrzicos arbusculares, son reducidos por el incremento de la salinidad de los suelos (Abbott et al.,1992). Sin embargo, los diseos experimentales y las metodologas, no consiguen generalmente separar los efectos directos de la salinidad sobre el desarrollo del hongo. Se necesitan realizar estudios sobre la respuesta de los hongos micorrzicos arbusculares a los suelos salinos (Juniper y Abbott, 1993).
Los hongos micorrzicos arbusculares estn presentes en la mayora de los suelos y generalmente no son considerados hospederos especficos de las plantas. Sin embargo los niveles de poblacin y la composicin de las especies, son altamente variables y estn inducidos por las caractersticas de las plantas y el nmero de los factores del ambiente tales como: la temperatura, el pH, la textura, contenidos de nitrgeno y fsforo y las trazas de metales pesados, as como a la presencia de otros microorganismos, la. aplicacin de fertilizantes, fungicidas y la salinidad de los suelos (Barea y Azcon Aguilar, 1982).
Hay pocas investigaciones sobre los efectos de la salinidad en la biologa o ecologa de los hongos micorrzicos arbusculares. La mayora de los estudios se han concentrado sobre los efectos de la inoculacin con hongos micorrzicos arbusculares, la informacin sobre el desarrollo de los hongos en suelos salinos es escasa y otras veces circunstancial (Abbott et al., 1992).
La comparacin de los resultados de los experimentos sobre suelos salinos es complicada por los diferentes mtodos de medicin en los suelos salinos. Usualmente todas las sales solubles son extraidas y la salinidad es expresada como concentraciones de iones especficos o como el total de sales solubles en suelo seco. Sin embargo la salinidad de la solucin del suelo depende no solamente de la 38 concentracin de las sales en los suelos secos si no tambin del volumen del agua en los suelos. Los suelos ligeros (arenosos), arriba de cinco veces de la capacidad de campo de suelos pesados (arcillosos), tienen un contenido de sales menor que los suelos pesados, los cuales tienen en su solucin cinco veces el contenido de los suelos ligeros (Bernstein, 1975).
La salinidad de los suelos es frecuentemente expresados como conductividad elctrica (C.E) del extracto del suelo. Esto permite que sea medida la conductividad mtrica o calculada para conocer la relacin lineal estrechamente entre la conductividad elctrica (C.E) y el total de sales disueltas en la solucin a una temperatura determinada. Un suelo generalmente es considerado salino cuando la conductividad elctrica excede de 4.0 dSm -1 . Cuando un suelo se describe en trminos de concentracin de sales, es un suelo salino, cuando el contenido de sales excede de 0.1%. Las sales disueltas podran afectar a los organismos del suelo por lo especfico de la toxicidad de las altas concentraciones de los iones, tales como el sodio y el cloro o por los efectos no especficos de los solutos sobre el potencial osmtico (Juniper y Abbott, 1993).
La discusin de la ecologa de los hongos micorrzicos arbusculares en ambientes salinos ha sido confusa por la necesidad de distinguir los efectos biticos y abiticos sobre la distribucin y la abundancia relativa del hongo. Los hongos micorrzicos han sido registrados en varios trabajos como sucesos naturales en ambientes salinos. En una investigacin en suelos desrticos alcalinos con porcentajes de salinidad entre 1.26 y 13.0 dSm -1 se encontr colonizacin de hongos micorrzicos arbusculares en pastos tolerantes a la salinidad, tales como Festuca idhoenis y Distichlis stricta. El nmero de las esporas de los hongos micorrzicos arbusculares fueron correlacionados con las altas concentraciones de sodio de los suelos, pero no fueron relacionados con el pH, conductividad elctrica y los porcentajes de concentracin de otros cationes (Ho, 1987). Los hongos micorrzicos arbusculares ms comnmente observados en suelos salinos son Glomus sp. (Pond et al., 1984; Ho, 1987).
39 A pesar de las extensas investigaciones de los efectos interactivos de los suelos salinos y las micorrizas sobre las plantas, hay claras deficiencias en el conocimiento de los efectos de la salinidad sobre la formacin de micorrizas, por lo que es necesario ms trabajos con nfasis en el desarrollo y fisiologa de los hongos simbiticos en condiciones de salinidad (Juniper y Abbott, 1993).
2.5.2. Efectos de la salinidad sobre los hongos micorrzicos arbusculares
La asociacin entre los HMA y las diferentes especies vegetales, se presenta principalmente bajo condiciones estresantes del ambiente como salinidad, sequa, baja fertilidad, altas temperaturas, etc. La salinidad de los suelos podra influir en el desarrollo y actividad de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) por varios mecanismos; indirectamente o directamente (Juniper y Abbott, 1993). Los HMA siempre reducen el estrs del ambiente tal como la sequa (Sylvia y Wiliams, 1992) y la salinidad (Ruiz-Lozano et al., 1996). La germinacin de las esporas en los suelos salinos, pueden describirse en cuatro formas: hidratacin, activacin, formacin del tubo de germinacin y desarrollo de la hifa (Tommerup, 1984).
Existe poca informacin acerca de los efectos de la salinidad sobre la germinacin de las esporas de los HMA. Sin embargo los datos disponibles indican la inhibicin de la germinacin de esporas por los incrementos de concentraciones de cloruro de sodio en el suelo (Hirrel, 1981; Juniper y Abbott, 1993).
Los datos que se han obtenido en experimentos, usando la incubacin de esporas en medios artificiales, no representan necesariamente la respuesta que ocurre en el suelo (Bowen, 1987). En un ensayo sobre los efectos del cloruro de sodio sobre la germinacin de las esporas de HMA en los suelos. Se incubaron esporas de Acaulospora laevis, A. trappei , Scutellospora calospora y Gigaspora decipiens entre papel filtro enterrado en suelo hmedo a capacidad de campo con 40 una proporcin de solucin salina de 0.3 mol- 1 de cloruro de sodio. En general el incremento en la concentracin del cloruro de sodio retras la germinacin y diminuy la proporcin de la extensin de la hifa del hongo (Abbott et al.,1992).
Las investigaciones proponen que el incremento de la nutricin del fsforo en plantas micorrizadas es una respuesta del incremento a la tolerancia a la salinidad y demuestran que un adicin de fertilizante fosfatado en plantas no micorrizadas, puede minimizar los efectos de los suelos salino - (Hirrel y Genderman, 1980). Sin embargo otras investigaciones, indican que el mejor estado nutricional de la plantas es debido a los hongos micorrzicos o por lo menos es debido a la participacin de los hongos micorrzicos al incrementar el desarrollo de la plantas bajo condiciones salinas (Ojala et al., 1983).
Se ha reportado gran absorcin de agua por plantas micorrizadas bajo condiciones salinas, esto es posible que mejore la nutricin de las plantas por los hongos micorrzicos y permitan a las clulas efectivamente regular mas el paso de los solutos al interior y separar los iones transportados (Rosendahl y Rosendahl, 1991). Es necesario mas trabajos que investiguen los efectos de la salinidad sobre los diferentes estados de la germinacin y comparacin de la sensibilidad de las diferentes especies y hongos aislados en estrs salino (Abbot, 1992).
2.5.3. Efecto de la salinidad sobre el desarrollo de la hifa y las esporas
En algunos hongos micorrzicos, el desarrollo del tubo germinativo de una espora en germinacin, podra ser estimulado por la proximidad a la raz de las plantas y por los exudados de la raz. Si los exudados de la raz estimulan el desarrollo y alteran la morfologa de los tubos germinativos, entonces esta estimulacin podra ser alterada en condiciones de salinidad, puesto que la exudacin es grandemente influenciada por la qumica del suelo y la textura del mismo (Rosendahl y Rosendahl, 1991).
41 Los mecanismos de la osmoregulacin de los hongos micorrzicos arbusculares, son desconocidos. Los ajustes del potencial osmtico por la absorcin de los iones sodio y cloro, ha sido bien documentado en plantas halofitas. Sin embargo, la mayora de los hongos han mostrado que mantienen bajo el potencial osmtico por la sntesis de alcoholes como glycerol, erytrol y porcentajes de mannitol (Flowers et al., 1988).
Por otra parte, no hay reportes publicados de investigaciones de los efectos de la salinidad del suelos sobre las esporas producidas por los HMA. Si los suelos salinos reducen la germinacin de las esporas, desarrollo hifal y la formacin de micorrizas, entonces la produccin total de esporas es probable sea reducida en salinidad relativa y no en suelos no salinos, a menos que el estrs salino estimule la esporulacin, como ocurre en algunos mucorales y especies de Aspergillus. Hay algunos experimentos sobre los efectos de la disponibilidad del agua sobre la esporulacin de los hongos micorrzicos, pero ms all de sealar las diferencias de diferentes hongos, los resultados son inconclusos (Abbot et al., 1992).
La produccin de esporas por algunos HMA puede ser incrementada por la sequa, Glomus mosseae y Gigaspora margarita, produjeron 40% mas esporas despus de 18 semanas en macetas de las cuales el agua se retuvo por 9 das durante la incubacin. Sin embargo, la produccin de esporas por Glomus clarum no fue afectada por este tratamiento (Sylvia y Schenk, 1982).
2.6. Importancia del cultivo de la lechuga
La lechuga es la planta ms importante del grupo de las hortalizas de hoja, es ampliamente conocida y se cultiva en casi todos los pases del mundo. Es una de las hortalizas tpicas de ensalada y ha sido considerada como planta de propiedades tranquilizantes. Su alto contenido en vitaminas la hace una planta muy apreciada en la dieta moderna. De acuerdo con los anlisis realizados, la lechuga contiene los siguientes elementos: 94.3% de agua; 1.2.% de protena; 0.2% de grasas; 2.9% de carbohidratos; 0.7% de fibras y 0.7% de cenizas; 42 adems son ricas en vitamina A, C y D. En Mxico la lechuga se puede cultivar durante todo el ao bajo riego; se reporta una superficie sembrada de 4 000 ha., con rendimientos que pueden variar desde 7 a 23 ton/ha. Los principales estados productores son Guanajuato, Sonora, Puebla, Baja California, Jalisco y San Luis Potos (INIFAP, 2001).
2.6.1. Caractersticas botnicas
La lechuga, es una planta herbcea anual, pertenece a la familia Asteraceae (Compositae), del gnero Lactuca y de la especie sativa. Est planta cuando es joven, contiene en su tejidos un jugo lechoso llamado ltex, cuya cantidad disminuye con la edad. Las principales races de absorcin son relativamente pequeas y poco extendidas (5 a 30 cm) las hojas pueden ser de forma redondeada, lanceolada o casi estipuladas; son lisas, sin pecolo (ssisiles); la consistencia de las mismas puede ser correosa o blanda. El borde de los limbos foliares puede ser liso, ondulado o aserrado. Su color va del verde amarillo hasta el morado claro, dependiendo del tipo y del cultivar. El tallo es pequeo y no se ramifica, sin embargo, cuando existen condiciones de altas temperaturas (mayor de 26 C) y das largos (mayor de 12 h), el tallo se alarga hasta 1.20 m de longitud, ramificndose del extremo y presentndose en cada punta de las ramillas terminales, una inflorescencia. Son plantas autogamas, cuyas semillas son aquenios tpicos (Azcon y Barea, 1997).
2.6.2. Requerimientos de clima y suelo
Las semillas germinan a temperaturas de 20 a 25 C, en el suelo, rebasando los 25C, aunque se reporta que la ptima es de 20 a 30 C . Estas plantas exigen mucha luz, se ha comprobado que la escasez de sta provoca que las hojas sean delgadas y que en mltiples ocasiones las cabezas se suelten. La lechuga se caracteriza por adaptarse a una amplia variedad de suelos, aunque prefiere los suelos francos- 43 arenosos y frtiles con alto contenido de materia orgnica y buen drenaje, este cultivo no resiste la acidez y es muy sensible a la salinidad, principalmente en estadios jvenes (Marschner y Dell, 1994).
2.6.3. Los HMA y la asociacin con la familia Asteraceae (Compositae)
Despus de reconocer que la micorriza arbuscular mejora el desarrollo y nutricin de las plantas, el siguiente paso es establecer la posibilidad de su explotacin en especies hortcolas. La investigacin sobre el uso de la micorriza arbuscular esta siendo enfocada hacia el desarrollo y definicin de tecnologas necesarias para la produccin de planta de calidad en diferentes sistemas y especialmente en aquellos de valor hortcola (Ruiz et al., 1996).
Sin embargo este tipo de actividad fngica representa un costo para la planta, la cual tiene que compensar mediante la aportacin de fuentes energticas carbonatadas para que se facilite la actividad metablica del hongo. Se ha hecho la estimacin de que aproximadamente entre 10 y 30% de los fotosintatos producidos se requieren para la formacin, mantenimiento y funcionalidad de las estructuras micorrzicas, generndose as un sistema de beneficio mutuo (Marschner y Dell, 1994).
El establecimiento de la micorriza arbuscular bajo condiciones "especiales" (fertilizantes de lenta liberacin, utilizacin de fungicidas a base de metalaxyl o aluminio etil fosfanato para el control de hongos patgenos, que no interfieren con el desarrollo de la micorriza, etc.) permite que por lo menos tres mtodos de inoculacin se hallan introducido exitosamente en los semilleros de los cultivos hortcolas, preinfeccin de plantas en semillero, en el proceso de transplantes a contenedores y en mezcla de medio del cultivo con el inculo (Sieverding, 1991a).
Especficamente para la produccin de plantas de calidad de lechuga se ha establecido que los hongos micorrzicos arbusculares tienen la capacidad de 44 conferir mayor vigor a las plantas con las que se establece simbiosis micorrzica (Ruiz et al., 1996), misma que se ha manifestado en cada uno de los componentes de desarrollo de la planta, influyendo de este modo en el peso fresco de follaje (Gianinazzi-Pearson, 1991).
La inoculacin en semilleros de plantas de lechuga puede originar plantas desarrolladas vigorosamente a pesar de que no se cuente con un sustrato o contenedores tal que asegure el ptimo desarrollo de la micorriza arbuscular, de esta manera el argumento mas fuerte para. usar micorriza arbuscular en las especies la lechuga, es la produccin de plantas vigorosas mejorando su establecimiento y respuesta al desarrollo en el sitio definitivo (Ruiz-Lozano et al., 1996).
45 III. MATERIAL Y MTODOS
Caracterizacin y seleccin de los suelos salinos
3.1. Localizacin de los sitios de muestreo
El estado de San Luis Potos, est localizado entre los 98 20' y 101 18' de Latitud Norte y los 21 10' y los 24 29' de Longitud al Oeste, a una altitud de 1750 msnm. Se divide en tres zonas, altiplano, media y huasteca basadas en sus caractersticas climatolgicas. Para la ubicacin de las reas salinas, se revisaron estudios realizados por la Subdireccin de Agrologa (SARH), entre los aos 1988 y 1994, ubicndose los problemas de salinizacin de lo suelos en los municipios de Moctezuma, Villa de Arista, Bocas, Mexquitic, Matehuala, Salinas y Rioverde del estado de San Luis Potos (Fig. 4), los cuales se localizan dentro de la zona media y altiplano, las que registran precipitaciones medias anuales de 270 a 450 mm.
Figura 4. Mapa del estado de San Luis Potos, con la ubicacin de los municipios, con problemas de salinizacin en las reas agrcolas. 46 3.2. Muestreo de suelos
Se recorrieron 7 municipios del estado de San Luis Potos, en donde se reportaron suelos afectados por salinidad. Una vez localizadas las reas se realiz un recorrido en campo para determinar la homogeneidad y/o heterogeneidad del suelo, identificndose manchas de sales en el suelo, en forma de costras de color blanco o amarillentas, as como escaso desarrollo de los cultivos establecidos. Primeramente se realizaron 3 muestreos de suelo de cada parcela agrcola que presentaron las caractersticas a simple vista de un suelo salino ya descritas, a una profundidad de 0 a 20/30 cm, para el anlisis fsico y qumico del suelo, obtenindose un total de 15 muestras de suelo compuestas (Cuadro 6). Por otra parte se tomaron 3 muestras de suelo rizosfrico de los cultivos de las parcelas agrcolas, es decir se cort el tallo y se desprendi de la raz, la cual fue recolectada, para el anlisis microbiolgico y asegurar la mayor cantidad de esporas presentes, posteriormente en el laboratorio de microbiologa del Col egi o de Postgraduados, se separaron las races, con el mayor contenido de suelo adherido a la raz y se guard en refrigeracin para su posterior utilizacin.
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Cuadro 6. Localizacin de los diferentes sitios agrcolas donde se tomaron las muestras de suelos , julio del 2000 Zona Municipio Ejido Cultivo Nmero de muestras compuestas Altiplano Moctezuma La Matanza Chile ancho 4 Altiplano Villa de Arista Gonzlez Jitomate 1 Altiplano Bocas La Herradura Avena 1 Media Mexquitic Palmar Repollo 1 Altiplano Matehuala Norias del Refugio Maz y Girasol 3 Altiplano Salinas Diego Martn Frjol 1 Media Ro Verde El Sabinito Maz 1 Media Ro Verde La Muralla Maz 2 Media Ro Verde San Francisco Frjol 1
3.3. Anlisis fsicos y qumicos de suelos
A las 15 muestras de suelo, previamente obtenidas en campo, se les determin la conductividad elctrica, sodio intercambiable capacidad de intercambio cationico y se calcul el porcentaje de sodio intercambiable mediante la metodologa descrita a continuacin.
Conductividad elctrica (1:5). Se realiz por medio del mtodo de puente de conductividad en el extracto de saturacin (Chavira y Castellanos, 1987).
Sodio intercambiable, se realiz por mtodo de acetato de amonio y se ley en el espectrofotmetro de flama, Modelo AK-140 (Normandin et al.,1998).
Capacidad de intercambio cationico, se determin por el mtodo de acetato de amonio, (Normandin et al., 1998). 48
Porcentaje de sodio intercambiable (calculado). El porcentaje de sodio intercambiable se obtiene a partir de la divisin del sodio intercambiable entre la capacidad de intercambio cationico y se expresa en porcentaje (Normandin et al., 1998).
Por otra parte con base en los resultados de las determinaciones fsicas y qumicas ya mencionadas, se seleccionaron 5 sitios agrcolas en base a los valores reportados de la conductividad elctrica (igual o mayor de 8 dSm 1 )
a los que se les realiz, adems de las determinaciones ya mencionadas, textura del suelo, pH, materia orgnica, porcentaje de carbonato de calcio total y fsforo aprovechable, de acuerdo a la metodologa que a continuacin se describe y caracteriza los sitios agrcolas representativos de suelos salinos.
Textura del suelo, se utiliz el mtodo del Hidrmetro de Bouyucos, para determinar el porcentaje de arena, limo y arcilla (Aguilar-Santelisis, 1988), pH en agua (1:2), se midi a travs del electrodo de referencia, utilizando un potencimetro Modelo EP.3456 (Uvalle, 1987).
Materia orgnica, se obtuvo por el mtodo de Walkley y Black,, con base al tipo de suelo muestreados (Aguilar-Santelisis, 1988).
Porcentaje de Carbonato de calcio total por el mtodo de Neutralizacin cida agregndose a una muestra de suelo cido clorhdrico y se titula con hidrxido de sodio (Aguilar-Santelisis, 1988).
Fsforo aprovechable, se obtuvo por el mtodo de Olsen recomendado para suelos calcreos, realizndose la lectura en el espectrofotmetro de flama Modelo AK-140 (Etchevers et al., 1986).
49 3.4. Cuantificacin de esporas de HMA
Las 5 muestras de los sitios seleccionados se llevaron al laboratorio de Ecologa microbiana de la E.N.C.B. del I.P.N. donde se extrajeron las esporas utilizando el mtodo de tamizado hmedo y decantacin establecido por Gerdemann y Nicolson (1963) y se procedi a realizar el conteo de esporas en 100 gramos de suelo.
3.5. Colonizacin micorrzica en los cultivos agrcolas
Para el porcentaje de colonizacin micorrzica, se utilizaron las races de los cultivos establecidos en las parcelas agrcolas de los 5 sitios, utilizando las raicillas ms finas para realizarles el clareo y tincin de races por el mtodo de Phyllips y Hayman (1970) y el porcentaje de colonizacin micorrzica por la tcnica de Mc. Gonigle et al., (1990).
3.6. Propagacin de esporas de las muestras representativas de suelos salinos
Para la propagacin de esporas, se utiliz una parte de las muestras de suelos de cada una de los 5 sitios representativos de los suelos salinos y se extrajeron las esporas, utilizando el mtodo de tamizado en hmedo y decantacin de Gerdermann y Nicolson (1963), las esporas se separaron del suelo bajo el estereomicroscopio y se colocaron en una caja Petri, la cual tenia una base de papel filtro hmedo, donde se depositaron el mayor nmero de esporas posible (aproximadamente de 100 a 150), realizndose esta metodologa para cada muestra de suelo de los cinco sitios seleccionados.
Posteriormente las esporas retenidas en papel filtro se propagaron en macetas de 1 L de capacidad, conteniendo arena de ro, lavada y esterilizada en autoclave durante 3 horas a 18 libras de presin. Se utiliz sorgo como cultivo trampa (Fig. 5), a las 50 semillas se les dio un tratamiento de pregerminacin en una caja petri, a la cual se le puso de base papel filtro y enseguida las semillas de sorgo, despus se cubrieron con agua destilada y se dejaron durante 12 horas en reposo, despus de ese lapso se elimin el agua destilada y se volvieron a dejar durante 24 horas en la caja petri con el papel filtro hmedo, con la finalidad de que estuvieran en condiciones de humedad relativa y asegurar la germinacin de la semilla. Una vez que germinaron las semillas, las plntulas se transplantaron, envuelta la raz en el papel filtro con las esporas, para asegurar el contacto directo de las raz con las esporas de los HMA. Posteriormente se aplic el riego a base de solucin nutritiva (Hoagland) cada 10 das. El cultivo trampa se mantuvo por un periodo de cuatro meses. Despus de este tiempo se extrajeron las esporas por el mtodo anteriormente mencionado, y se trabaj con esporas sanas para la identificacin taxonmica.
3.7. Identificacin de HMA de los sitos representativos de los suelos salinos
Para la identificacin de los HMA de los suelos salinos, las esporas se separaron en grupos, de acuerdo con su color y tamao, preparndose laminillas con las esporas extradas, utilizando alcohol polivinlico y cido lctico glicerol (PVLG) y PVLG con reactivo Melzer, como lquidos de montaje, aplicndose una ligera presin sobre cada uno de los cubreobjetos para romper levemente las esporas y posteriormente poder observar la estructura de la pared.
3.8. Identificacin de las especies aisladas propagadas de los sitios representativos de los suelos salinos.
Para la identificacin especies, las esporas se separaron en grupos de acuerdo con su color y tamao, preparndose laminillas con 20 a 25 esporas utilizando alcohol polivnilico y cido lctico gricerol (PVLG) y PVLG con reactivo Melzer, como lquidos de montaje, aplicndose una ligera presin sobre cada uno de los 51 cubreobjetos para romper levemente las esporas y posteriormente poder observar la estructura de la pared laminilla, se sec a temperatura ambiente durante 72 horas, despus de este tiempo, se procedi a medir las esporas con ayuda de un ocular micromtrico. El color de las esporas se obtuvo con ayuda de la carta de color del INVAM (1992). Para la identificacin de las especies se utiliz el manual de Schenck y Prez (1990) as como la pagina Web del INVAM y las descripciones originales de las especies publicadas en literatura especializada. Los ejemplares de referencia, fueron depositados en el herbario de la ENCB del Instituto Politcnico Nacional.
3.9. Descripcin del sitio experimental
El ensayo experimental de lechuga se llev a cabo en los invernaderos del rea de microbiologa, localizado en el predio de "Montecillos", localizado en terrenos del ex-Lago de Texcoco, situado en la cuenca del Valle de Mxico. Sus coordenadas geogrficas son Latitud Norte 19 22' y la Longitud Oeste 98 54', con una altitud media de 2,200 msnm.
Se estableci en invernadero en febrero del 2001 y se termin a mediados de julio del mismo ao. Las condiciones de invernadero que se presentaron fueron las siguientes: 20.0 C como temperatura promedio, con una temperatura mxima de 23.1 C y una temperatura mnima de16.5 C mnima, la humedad relativa fue de 52.9%.
3.10. Material vegetativo e inculo
Se emplearon semillas de lechuga, variedad tipo "orejona" Parris Island Coos. Para la inoculacin se utilizaron 20 g de inculo de los HMA aislados propagados de las muestras de suelo, de los sitios seleccionados como representativos de los suelos salinos, "La matanza" (sitio1), Mexquitic de Carmona; "Gonzlez" (sitio 5), 52 Villa de Arista; "Norias del Refugio" (sitio 8 y 10), Matehuala y "El sabinito" (sitio 12) Ro Verde.
3.11. Diseo experimental y anlisis estadstico
El diseo experimental se realiz completamente al azar con tres repeticiones para cada HMA aislado y propagado de "La Matanza" (sitio 1), "Gonzlez" (sitio 5), "Norias del Refugio" (sitio 8 y 10) y "El Sabinito" (sitio 12), utilizados como inculos ms el "testigo" (sin inoculacin) como control del experimento. A los datos obtenidos se les realizo el anlisis de varianza para un solo factor con un nivel de significancia del 95 % y la comparacin de medias mediante la prueba de Tukey, con un nivel de significancia de 0.05.
3.12. Inoculacin micorrzica
Como sustrato se utiliz arena de ro lavada y esterilizada con vapor de agua durante tres horas en autoclave a 18 libras de presin. Las macetas se lavaron con agua y jabn, secndose cuidadosamente para posteriormente llenar la maceta con tres cuartas partes de arena, para enseguida depositar el inoculante, obtenido de la propagacin de esporas de los sitios ya mencionados anteriormente, aproximadamente una cama de 20 g de inculo y sembrar en forma directa, depositando de 5 a 10 semillas de lechuga y cubrirlas muy ligeramente con arena para asegurar su germinacin, de manera que al emerger las primeras raicillas de inmediato estuvieron en contacto con el inculo. Despus de la siembra cada una de las macetas se cubri con papel aluminio para favorecer la germinacin. Una vez que ocurri la germinacin se retir el papel y se cubri la superficie con tezontle estril para evitar contaminacin.
53 3.13. Variables de estudio
Para el clareo y tincin de races se seleccionaron las raicillas mas finas y se utiliz el mtodo de Phillips y Hayman (1970), las cuales una vez que se tieron se tomaron de 25 a 30 segmentos de aproximadamente 2 cm cada uno y se colocaron en el portaobjetos y se aplic lactoglicerol y sobreponiendo un cubreobjetos, se observaron en el microscopio compuesto a 100x, para determinar el porcentaje de colonizacin micorrzica por el mtodo de Mc. Gonigle et al., (1990).
El porcentaje de colonizacin micorrzica se realiz de acuerdo a la siguiente frmula.
% colonizacin = nmero de segmentos colonizados X 100 nmero total de segmentos observados
A los 66 das despus de la siembra, se realizaron muestreos destructivos y se midieron las variables siguientes:
El Volumen Radical se midi por la tcnica de desplazado (VR cm 3 ).
El rea Foliar (AF, cm 2 ) se midi mediante un integrador marca LI-COR modelo LI-3000 A. El Peso Seco del Follaje se determin por el mtodo de la estufa, es decir la parte rea se puso a secar en la estufa a 70C hasta peso constante, posteriormente se pes, para obtener el peso seco del follaje (PSF,g).
54
Figura 5. Cultivo de sorgo como cultivo trampa
55 IV. RESULTADOS
4.1. Caracterizacin de los sitios agrcolas representativos de suelos salinos
Con base en los resultados del laboratorio de suelos y de acuerdo a las variables de salinidad y/o sodicidad (Cuadro 7), establecidos por el Servicio de Conservacin de Suelos del departamento de Agricultura de los Estados Unidos (Richards, 1954), de las 15 muestras de suelos de los sitios agrcolas, recolectadas en campo, se seleccionaron los sitios agrcolas de los ejidos "La Matanza" (sitio 1) municipio de Moctezuma, "Gonzlez" (sitio 5) municipio de Villa de Arista "Norias del Refugio" (sitios 8 y 10) municipio de Matehuala y "El Sabinito" (sitio 12) municipio de Ri Verde, con base al valor reportado de la conductividad elctrica igual o mayor a 8 dSm -1 , por lo que se los sitios mencionados se clasificaron como suelos fuertemente salinos (Cuadro 8).
Asimismo se clasific el clima de los sitios agrcolas representativos de los suelos, con base a informacin recabada en la Comisin Nacional del Agua (CNA), elaborndose una caracterizacin del clima de los sitios agrcolas ya mencionados (Cuadro 9). El clima es un factor que influye en la salinizacin de los suelos.
De la misma forma la clasificacin de la vegetacin, de los sitios agrcolas representativos de los suelos salinos ya mencionados (Cuadro 10) con base al Mapa de Vegetacin de la Repblica Mexicana elaborado por Rzedowsky (1978) y con las observaciones directas de campo. La vegetacin es indicador natural de las condiciones del suelo.
56 Cuadro 7. Variables para la clasificacin de suelos (6 clases) con fines de riego establecidas por el Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (Richards, 1954). Factores 1 2 3 4 6 Textura friable permeable
poco pesada
coloidal
gruesa a muy gruesa Profundidad > 120 60 - 120 30-60 10 - 30 <10 Permeabilidad Buena moderada lenta o rpida muy lenta muy rpida Impermeable Pedregosidad en el perfil (cm) <10 110 - 20 20 - 40 40-60 >60 Rocosidad (%) <5 5-10 10 -30 30 -70 >70 Drenaje superficial Buen a eficiente deficiente muy deficiente o rpido nulo excesivo ----- Profundidad (cm) del manto fretico >200 150 -200 100 -150 25- 100 <25 Profundidad (cm) del estrato impermeable >200 150 -200 100 - 150 25 -100 <25 Sal i ni dad (dSm - 1 ) <4 4 -8 8-16 16 -25 >25 Sodi ci dad (%) <15 15 -20 20-30 30-40 >40 Pendiente (%) 0.5-3 3 -6 6-12 12 -20 >20 Relieve (%) <2 2 -8 8-16 16 -30 >30 Erosin Inundacin suave libre ligera ocasional moderada temporal anual fuerte durante parte del ao muy fuerte permanente Nota: No se presentan las variables de la 5 a clase debido a que el factor de clasificacin es inundacin.
57
Cuadro 8. Salinidad y sodicidad de los sitios agrcolas muestreados en las diferentes localidades y municipios del estado de San Luis Potos, julio del 2000. SITIO LOCALIDAD EJIDO CULTIVO C.E (dS m -1 )
P.S.I. (%) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Moctezuma Moctezuma Moctezuma Moctezuma Villa de Arista Bocas Mexquitic Matehuala Matehuala Matehuala Salinas Ro Verde Ro Verde Ro Verde Ro Verde La Matanza La Matanza La Matanza La Matanza Gonzlez La Herradura El Palmar Norias del Refugio Norias del Refugio Norias del Refugio Diego Martn El Sabinito La Muralla La Muralla San Francisco Chile Alfalfa Chile Maz Jitomate Avena Repollo Maz Alfalfa Girasol Maz Maz Maz Alfalfa Avena 10.00 * 1.00 2.50 2.20 8.00 * 2.00 2.10 8.50 * 3.00 8.70 * 4.20 10.80 * 4.00 2.80 4.80 4.47 2.57 2.56 2.60 5.29 3.11 2.99 6.08 2.18 6.14 4.40 7.51 2.15 2.22 5.47 * Sitios seleccionados por alta concentracin salina
58 Cuadro 9. Clasificacin del clima de los sitios agrcolas representativos de los suelos salinos, con base en la informacin de la Comisin Nacional del Agua, enero del 2001. Sitios Localidad Clima Precipitacin media (mm) Evaporacin total anual (mm) 1 La Matanza (zona altiplano) D B 2 a ; (seco con pequea o nula demasa de agua, templado fro, con baja concentracin de calor en el verano) 349.9 2,004.00 5 Gonzlez (zona altiplano) D B 2 a (seco con pequea o nula demasa de agua, templado fro, con baja concentracin de calor en el verano) 346.08 2,004.00 8 Norias del Refugio (zona altiplano) D d B 3 a; (seco con pequea o nula demasa de agua, templado clido, con baja concentracin de calor en el verano) 299.3 2,343.3 10 Norias del Refugio (zona altiplano) D d B 3 a; (seco con pequea o nula demasa de agua, templado clido, con baja concentracin de calor en el verano) 299.3 2,343.3 12 El Sabinito (zona media) D d B 4 a (seco con pequea o nula demasa de agua, semiclido, con una concentracin trmica ms baja para ese clima) 402.71 1,089.08
59
Cuadro 10. Clasificacin de la vegetacin primaria, de los sitios agrcolas representativos de los suelos agrcolas (Rzedowsky, 1978) Sitios Localidad Clasificacin vegetativa Especies comunes 1 La Matanza (zona altiplano) Matorral desrtico micrfilo con intrusiones de crasicaule (Mdm) Gobernadora, Mexquite, Huizache, Hojasen, Palma samandoca, Maguey, Nopal y Clavellina 5 Gonzlez (zona altiplano) Matorral desrtico micrfilo con intrusiones de crasicaule (Mdm) Gobernadora, Mexquite, Huizache, Hojasen, Palma China, Palma samandoca, Maguey, Nopal y Clavellina 8 Norias del Refugio (zona altiplano) Matorral desrtico micrfilo con intrusiones de crasicaule (Mdm) Gobernadora, Mexquite, Huizache, Hojasen, Palma China, Palma samandoca, Maguey, Nopal y Clavellina 10 Norias del Refugio (zona altiplano) Matorral desrtico micrfilo con intrusiones de crasicaule (Mdm) Gobernadora, Mexquite, Huizache, Hojasen, Palma China, Palma samandoca, Maguey, Nopal y Clavellina 12 El Sabinito (zona media) Mexquital asociado con matorral submontano (rboles bajos de 3 m de altura, asociado con matorral, mesquite, huizaches, Hojasen y matorral espinoso (Mz y Ms) Pirul, Gobernadora, Mexquite, Huizache, Hojasen, Nopal, Clavellina, Coyonoxtle, Tasajillo y Granjeno.
60 Descripcin general de los sitios agrcolas representativos de los suelos salinos
"La Matanza" (sitio 1) municipio de Moctezuma
Los suelos del rea agrcola son de origen sedimentario, con ligera influencia gnea, son moderadamente profundos, derivados de la desintegracin de rocas calizas, calcilutitas y algo de areniscas. Por su grado de desarrollo se consideran jvenes, ya que sus horizontes son poco diferenciados. En general la topografa es plana con un pequeo microrelieve. El color del suelo es caf claro a grisceo opaco en la superficie, textura franca arcillosa, permeabilidad moderada a lenta, con un estrato calichozo entre los 120/140 cm de profundidad (Fig. 6). De acuerdo con la Leyenda del mapa de suelos del Mundo FAO/UNESCO, los suelos se clasifican como Xerosoles clcicos, es decir "son suelos con contenido de moderado de materia orgnica, los cuales con una fertilizacin y aplicacin de mejoradores son capaces de producir buenas cosechas.
El sistema de explotacin agrcola es de bajo a medio, ya que trabajan la tierra en forma individual, utilizan la traccin animal para las labores de campo y pocas veces rentan el tractor para la preparacin de la siembra. Por otra parte aplican fertilizantes y controlan las plagas con insecticidas. El rendimiento de sus cosechas se considera de bajo a medio con rendimientos de 17.0. a 20 ton/ha., en chile seco(segn datos del productor).
De acuerdo con el sistema de clasificacin interpretativa de tierras para fines de riego que establece la USDA (Richards, 1954), los suelos se clasifican como de cuarta clase con una tendencia a sexta clase por concentracin salina, es decir son suelos que tienen severas limitaciones para fines de riego, generalmente son adecuados para unos cuantos cultivos adaptados climatolgicamente y que solo pueden producir con buenos rendimientos bajo un nivel muy alto de manejo.
61 Interpretacin de anlisis fsicos y qumicos De acuerdo con los anlisis fsicos y qumicos realizados a la muestra de suelo se interpreta que la textura son de los suelos se consideran como ligeros es decir fcil de trabajar en campo; por lo que se refiere al pH del suelo son fuertemente alcalino, originando inhibicin en la absorcin de algunos nutrimentos; por su contenido de materia orgnica se clasifica como "medianamente rico", lo que hace que se considere un suelo frtil; el contenido de carbonato es mediano, es decir no afecta la disponibilidad de la materia orgnica; los niveles del fsforo aprovechable son de bajo a medio para la absorcin de la planta; la conductividad elctrica los clasifica como altamente salinos, es decir solo los cultivos tolerantes rinden satisfactoriamente, y de acuerdo con los valores del porcentaje de sodio intercambiable no tiene problemas (Cuadro 11).
"Gonzlez" (sitio 5) municipio de Villa de Arista
Los suelos del rea agrcola son de origen sedimentario, con ligera influencia gnea, son moderadamente profundos, derivados de la desintegracin de rocas calizas, calcilutitas y algo de areniscas. Por su grado de desarrollo se consideran jvenes, ya que sus horizontes son poco diferenciados. En general la topografa es plana con un pequeo microrelieve. El color del suelo es caf claro a grisceo opaco en la superficie, textura franca arcillosa, permeabilidad moderada a lenta, con un estrato calichozo entre los 120/140 cm de profundidad (Fig. 6). De acuerdo con la Leyenda del mapa de suelos del Mundo FAO/UNESCO, los suelos se clasifican como Xerosoles clcicos, es decir "son suelos con contenido de moderado de materia orgnica, los cuales con una fertilizacin y aplicacin de mejoradores son capaces de producir buenas cosechas.
El sistema de explotacin agrcola es bajo, ya que se trabajan en forma individual, utilizan la traccin animal para las labores culturales y algunas veces rentan el tractor para la preparacin de la siembra. Por otra parte aplican fertilizantes y controlan las plagas con insecticidas. El rendimiento de sus 62 cosechas se considera de bajo a medio con rendimientos de 20 22 ton/ha., de jitomate (segn datos del productor).
De acuerdo con el sistema de clasificacin interpretativa de tierras para fines de riego que establece la USDA (Richards, 1954), los suelos se clasifican como de cuarta clase por concentracin salina, es decir son suelos que tienen severas limitaciones para fines de riego, generalmente son adecuados para unos cuantos cultivos adaptados climatolgicamente y que solo pueden producir con buenos rendimientos bajo un nivel muy alto de manejo.
Interpretacin de los anlisis fsicos y qumicos De acuerdo con los anlisis fsico y qumico realizado a la muestra de suelo, se interpreta que por sus texturas son suelos ligeros, el pH del suelo es fuertemente alcalino, lo cual puede inhibir la absorcin de algunos nutrimentos por su contenido de materia orgnica se clasifica como medianamente rico, lo que hace que se considere un suelo frtil; el contenido de carbonato es mediano, es decir no afecta la disponibilidad de la materia orgnica; los niveles del fsforo aprovechable se consideran como moderados para la absorcin de la planta; la conductividad elctrica los clasifica como altamente salinos, es decir solo los cultivos tolerantes rinden satisfactoriamente, y de acuerdo con los valores del porcentaje de sodio intercambiable no tiene problemas (Cuadro 11).
"Norias del refugio" (sitio 8 y 10) municipio de Matehuala
Los suelos del rea agrcola son de origen sedimentario, son suelos poco profundo a moderadamente profundos (60/110cm); derivados de la desintegracin de rocas calizas y calcilutitas. Por su grado de desarrollo se consideran jvenes, ya que sus horizontes son poco diferenciados. En general la topografa es plana con un pequeo microrelieve. El color del suelo es caf claro a grisceo opaco en la superficie, de textura media, permeabilidad moderada a lenta (Fig. 6). De acuerdo con la Leyenda del mapa de suelos del Mundo FAO/UNESCO, los suelos se clasifican como Xerosoles clcicos-gypsicos, es decir "son suelos con 63 moderado contenido de materia orgnica, los cuales con una fertilizacin y aplicacin de mejoradores son capaces de producir buenas cosechas".
De acuerdo con el sistema de clasificacin interpretativa de tierras para fines de riego que establece la USDA, estos suelos se clasifican como de cuarta clase por la concentracin salina, es decir son suelos que tienen severas limitaciones para fines de riego, generalmente son adecuados para unos cuantos cultivos adaptados climatolgicamente y que solo pueden producir con buenos rendimientos bajo un nivel muy alto de manejo.
El sistema de explotacin agrcola es individual, utilizan la fuerza de traccin animal para la preparacin de sus tierras, ya que por las caractersticas de la zona no cuentan con maquinaria agrcola la mayora de los ejidos. No aplican fertilizantes ni controlan las plagas y sin embargo obtienen buenos rendimientos en sus cosechas, de 1.5. a 2.0 ton/ha de maz (datos del productor).
Interpretacin de anlisis fsicos y qumicos De acuerdo con los anlisis a la muestra de suelo que se realizo, se interpreta que por las textura son suelos ligeros es decir fcil de trabajar en campo; por lo que se refiere al pH del suelo se clasifica como fuertemente alcalino, originado inhibicin en la absorcin de algunos nutrientes; por su contenido de materia orgnica se clasifica como medianamente rico, lo que hace que se considere un suelo frtil; el contenido de carbonato es mediano, lo cual no afecta a la materia orgnica; los niveles del fsforo aprovechable son medianos a altos, es decir adecuados para el desarrollo de los cultivos; por la Conductividad Elctrica se clasifican como altamente salinos, es decir solo los cultivos tolerantes rinden satisfactoriamente, y de acuerdo con los valores del Porcentaje de Sodio Intercambiable no tiene problemas (Cuadro 11).
"El sabinito"(sitio No.12) municipio de Ro Verde
Los suelos del rea agrcola son de origen sedimentario, moderadamente profundos 130/150 cm a profundos, derivados de la desintegracin de rocas 64 calizas. Por su grado de desarrollo los suelos se consideran jvenes, ya que sus horizontes estn poco diferenciados. En general la topografa es plana con un pequeo microrelieve. El color del suelo es gris crema claro a caf crema; son suelos de texturas arcillosas, de textura media, permeabilidad moderada a lenta, con un estrato calichozo fuertemente cementado a los 120/180 cm de profundidad (Fig. 6). De acuerdo con la Leyenda del mapa de suelos del Mundo FAO/UNESCO, los suelos se clasifican como Xerosoles con asociacin de Vertisoles es decir "son suelos con contenido de moderado de materia orgnica, cuando se secan son suelos duros para la labranza, generalmente rinden buenas cosechas.
De acuerdo con el sistema de clasificacin interpretativa de tierras para fines de riego que establece la USDA, estos suelos se clasifican como de cuarta clase con tendencia a sexta clase por la concentracin salina, es decir son suelos que tienen severas limitaciones para fines de riego, generalmente son adecuados para unos cuantos cultivos adaptados climatolgicamente y que solo pueden producir con buenos rendimientos bajo un nivel muy alto de manejo.
El sistema de explotacin agrcola es colectiva, utilizan tractores para la preparacin de sus tierras, aplican fertilizantes y controlan las plagas de sus cultivos. Los rendimientos de sus cosechas alcanzan las 2.5 a 3.0 ton/ha, a pesar de la presencia de las sales en los suelos (segn datos del productor).
Interpretacin de los anlisis fisicos y qumicos De acuerdo con el anlisis que se realizo al suelo, se interpreta que por sus texturas son suelos ligeros es decir fcil de trabajar en campo; por lo que se refiere al pH del suelo es fuertemente alcalino, originado inhibicin en la absorcin de algunos nutrimentos; por su contenido de materia orgnica se clasifica como rico, lo que hace que se considere un suelo frtil; el contenido de carbonato es medianamente alto, pudiendo inhibir la accin de la materia orgnica; los niveles del fsforo aprovechable son altos es decir adecuados para el desarrollo del cultivo; por la Conductividad Elctrica se clasifican como altamente salinos, solo cultivos 65 tolerantes rinden satisfactoriamente, y de acuerdo con los valores del Porcentaje de Sodio Intercambiable no tiene problemas (Cuadro 11).
Cuadro 11. Caracterizacin de los sitios agrcolas representativos de los suelos salinos en el Estado de San Luis Potos, enero del 2001.
Figura 6. Sitios agrcolas representativos de los suelos salinos en el estado de San Luis Potos.
67 4.2. Identificacin de los HMA nativos de los sitios agrcolas representativos de los suelos salinos
Las muestras de suelos agrcolas de los sitios 1, 5, 8, 10 y 12, representativos de los suelos salinos, se llevaron al laboratorio para identificar los HMA nativos de suelos salinos y determinar el porcentaje de colonizacin micorrzica y cuantificar el nmero de esporas en 100 g de suelo seco. En las muestras de suelos de los sitios representativos de los suelos salinos, se cuantificaron ms de 100 esporas en 100 g de suelo seco y la colonizacin micorrzica vari de 10.5 a 27.10% (Cuadro 12). Asimismo se grafic el nmero de esporas y la colonizacin micorrzica de los HMA nativos en los diferentes sitios agrcolas, representativos de los suelos salinos, para observar el comportamiento de los HMA de diferentes sitios agrcolas bajo condiciones salinas (Fig. 7 y 8).
Las esporas nativas de suelos salinos identificadas corresponden a tres dieron: Acaulospora sp., la cual se forma a partir de un sculo esporfero (espora madura) sin hifa de sostn, Gigaspora sp., la cual se observa con una hifa sustentora bulbosa y la pared de la espora al romperse no se separa en varias capas y Glomus sp., esta espora se presenta solitaria o en grupos, formada sobre una hifa de sostn recta, curva en forma de embudo. (Figura 9), observndose poca diversidad de los HMA nativos (Fig. 10).
Cuadro 12. Cuantificacin de esporas y colonizacin micorrzica en los sitios agrcolas representativos de los suelos salinos. Sitio Localidad Cultivos Nm. esporas (100 g) Colonizacin (%) 1 La Matanza Chile ancho 210 26.6. 5 Gonzlez Jitomate 460 10.6 8 Norias del Refugio Maz 160 15.5 10 Norias del Refugio Girasol 400 27.1 12 El Sabinito Maz 280 12.2
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Figura 7. Cuantificacin de las esporas nativas de los HMA de los diferentes sitios agrcolas representativos de los suelos salinos.
Figura 8. Colonizacin micorrzica de los HMA nativos de los diferentes sitios agrcolas representativos de los suelos salinos.
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Fig. 9. Esporas de los HMA nativos colectadas de en las muestras de los suelos salinos.
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Figura 10. Diversidad de las esporas presentes en los muestras de los suelos salinos.
Esporas del sitio 8 y 10 Norias del Refugio (4x) Esporas del sitio 12. El Sabinito (4x) 71 4.3. Descripcin de las especies de los HMA aislados y propagados de suelos salinos
Por otra parte despus de cuatro meses de mantener en cultivo trampa, a los HMA aislados de los sitios agrcolas 1,5,8,10 y 12 representativos de los suelos salinos, se identificaron cuatro morfoespecies de estos hongos, tres de ellos pertenecientes al gnero Glomus, y uno al gnero Paraglomus.
De las muestras de los suelo salinos de "La matanza" (sitio 1) Mexquitic, "Norias del Refugio" (sitios 8 y 10) Matehuala y "E1 sabinito (sitio 12) Ro Verde, se propag e identific la especie Glomus mosseae. La descripcin de esta especie se realiz por primera vez en Inglaterra, se encontr en el cultivo de trigo, forma micorriza con los cultivos de fresa y maz. Se est propagando por primera vez de suelos salinos con actividad agrcola del estado de San Luis Potos. Las esporas presentaron las siguientes caractersticas; esporas solitarias o formando esporocarpos, globosas a subglobosas, de color paja (0-0-20-0) a caf amarillento (0-10-60-0), el tamao de la espora es de 160 a 240 m. La Pared de la espora est formada por tres capas, la primera capa es hialina, evanescente, se tie de prpura (0-60-20-0) con reactivo de Melzer, la segunda capa es hialina, unitaria, difcil de distinguir y la tercera capa es laminada de color caf amarillento (0-40-100-0). Se encontr rodeadas por un peridio de color caf amarillento (0-10-60-0), la hifa de sostn se observ en forma de embudo con un septo curvo que se forma 20 m, por abajo del punto de unin de la espora. La morfologa de las esporas observadas, se cotejaron con las caractersticas descritas en el manual de Schenck y Prez (1990) y la pgina Web del INVAM (2002), (Fig. 11).
72 Asimismo de las muestras de los suelo salinos de "La matanza" (sitio 1) Mexquitic, Norias del Refugio (sitios 8 y 10) Matehuala se propag e identific la especi e Glomus aff. etunicatum. Esta especie se describi por primera vez de los Estados Unidos de Amrica, asociada con pastos, maz y caa de azcar, forma micorriza con cebolla, ajo chile y trbol. Se propag por primera vez de suelos salinos con actividad agrcola del estado de San Luis Potos. Las esporas presentaron las siguientes caractersticas; esporas solitarias, globosas de color amarillento (0-60-70-10) a caf anaranjado (0-60-100-0), el tamao de la espora es de 100 a 140 m. La pared de la espora formada por dos capas, la primera capa externa es hialina evanescente que se degrada y se desprende, conforme la espora madura, la segunda capa es laminada de 4.8 a 6.9 m de color caf amarillento (0-60-70-10) a caf anaranjado (0-60-100-0). La hifa de sostn tiene forma cilndrica de 4.8 micrmetros de grosor, la pared de la hifa esta formada igual manera que la pared de la espora. Sin embargo, no se pudo precisar la especie con exactitud, debido a la falta de esporas en buen estado, ya que la mayora de ellas se encontraban parasitadas y otras en mal estado (Fig. 12). La morfologa de las esporas observadas, se cotejaron con las caractersticas descritas en el manual de Schenck y Prez (1990) y la pgina Web del INVAM (2002).
73 De la muestra de suelo salino de "Gonzlez" (sitio 5) Villa de Arista se propag e identific la especie Glomus intraradices. Esta especie fue descrita por primera vez de Estados Unidos de Amrica, asociada con papaya, ajo, jitomate, ctricos, cacahuate, maz, frjol y zanahoria, forma micorriza con pastos. Se propag por primera vez de suelos salinos con actividad agrcola del estado de San Luis Potos. Las esporas presentaron las siguientes caractersticas; esporas solitarias, globosas a subglobosas, de color amarillo paja (0-0-20-0) a caf amarillento (0-0-40-0), el tamao de la espora es de 70 a 130 m . La pared esta formada por tres capas de un grosor de 7.2-10.8 m, la primera capa es hialina evanescente, se tie de rosa (0- 40-20-0) con reactivo Melzer, tiene un grosor de 2.4 m, la segunda capa es unitaria hialina, se tie del mismo color que la primera capa, con el reactivo Melzer y la tercera capa tiene un grosor de 3.9-8.1 m de grosor formada por varias laminas, de color amarillo paja (0-0-40-0). La hifa de sostn es de forma cilndrica, tiene un grosor de 18.0 micrmetros en el punto de unin con la espora, la pared esta formada de igual manera que la pared de la espora (Fig. 13). La morfologa de las esporas observadas, se cotejaron con las caractersticas descritas en el manual de Schenkck y Prez (1990) y la pgina Web del INVAM (2002).
74 Finalmente en la muestra de suelo salino de "Gonzlez" (sitio 5) Villa de Arista, se propago e identific la especie Paraglomus sp. Se propag por primera vez de suelos salinos con actividad agrcola del estado de San Luis Potos. Est especie tiene una semejanza idntica con los morfotipos de las esporas del genero Glomus. El desarrollo de las esporas procede exactamente como se ha encontrado en la familia Glomaceae, por la extensin de un extremo de la hifa. La capa externa de la pared a menudo se observa sucia, la capa de la espora frecuentemente cambia con la maduracin de la espora. El desarrollo de esta capa, es el primer componente de la pared para formar esporas juveniles. Generalmente tiene material orgnico acumulado en la superficie; no tiene ninguna reaccin al reactivo de Melzer. La hifa sustentora se distingue y esta formada por las mismas capas encontradas en la pared de la espora. En algunas especies la hifa sustentora es tan delgada que es difcil observarla o se desprende de la espora (Fig. 14). Solamente dos especies se han descubierto en este gnero, ambos estn clasificados primero como especie de Glomus basadas en la morfologa de la espora.
75 4.4. Eficiencia en plantas de lechuga de los HMA aislados y propagados de suelos salinos
Para determinar el porcentaje de colonizacin micorrzica en las plantas de lechuga a los 66 das se realizaron muestreos destructivos de plantas y con los valores obtenidos, al realizar la prueba de hiptesis a travs del ANVA (Cuadro 16) se encontr respuesta significativa, por lo que se prosigui a aplicar la prueba de Tukey (Cuadro 19) para ver la diferencia significativa entre los inoculantes de los diferentes siti os, representativos de los suelos salinos, observndose que el inculo de "La Matanza" (sitio 1) fue menos infectivo que los de "Gonzlez" (sitios), "Norias del Refugio" (sitio 8), "Norias del Refugio" (sitio 10) y "El Sabinito" (sitio 12). Sin embargo todos los inculos se consideran que fueron altamente infectivos (Fig. 15).
Cuadro 13. Anlisis de varianza de la colonizacin micorrzica FV GL SC CM Fc F0.05 Tratamientos 4 2.61973 0.65493 5.1427 3.47 Error 10 1.27351 0.127351 Total 14 3.89325
Por los que se refiere al volumen radical y el rea foliar, despus de haber realizado la prueba de hiptesis a travs del ANA VA (Cuadro 17 y 18), no se encontr respuesta significativa, es decir no se presentaron diferencias entre los diferentes inculos de lo sitios salinos (1,5,8,10 y 12), de tal manera que las plantas de lechuga, no manifestaron respuesta a colonizacin micorrzica, presentndose valores similares en cuanto al volumen radical y el rea foliar (Cuadro 20).
76 Cuadro 14. Anlisis de varianza del volumen radical FV GL SC CM Fc F 0.05 Tratamientos 5 11.6250 2.3250 0.80869 NS 3.10 Error 12 34.5026 2.8750 Total 17 46.125
Cuadro 15. anlisis de varianza del rea foliar. FV GL SC CM Fc F 0.05 Tratamientos 5 135565.412 271 13.084 0.7650 NS 3.10 Error 12 425271.97 35439.331 Total 17 560837.384
Finalmente para el peso seco del follaje, despus de realizar la prueba de hiptesis a travs del ANA VA (Cuadro 19), se encontr respuesta significativa, por lo que se prosigui a realizar la prueba de Tukey (Cuadro 20), en la cual se present respuesta de la planta a la colonizacin micorrzica, observndose que el inculo de "La Matanza" (sitio 1) fue el que proporcion mayor peso seco del follaje a las plantas de lechuga y el inculo de "Gonzlez" (sitio 5) fue el que proporcion menor peso seco del follaje, incluso abajo del testigo (sin inocular), el resto se comport en un nivel similar (Fig. 16).
Cuadro 16. Anlisis de varianza del peso seco del follaje. FV GL SC CM Fc F 0.05 Tratamientos 5 14.4680 2.8693 12.9942** 3.10 Error 12 2.64976 0.22081 3.10 Total 17 16.9960
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Cuadro 17. Prueba de Tukey para la variables fisiolgicas en plantas de lechuga inoculadas con HMA aislados y propagados de suelos salinos en invernadero ciclo P-V 2001 Tratamientos(HMA) Colonizacin micorrzica (%) rea foliar (cm 2 ) Volumen radical (cm 3 ) Peso seco del follaje (g) "La Matanza" (sitio 1) 68.233 b 1275.7a 16.167a 9.537a "Gonzlez" (sitio 5) 85.133a 1063.3a 14.000a 7.107 b "Norias del Ref." (sitio 8) 87.400a 1088.2a 13.667a 7.650 ab "Norias del Ref."(sitio 10) 89.067a 1093.5a 15.000a 9.397 ab "El Sabinito" (sitio 12) 83.000a 1087.6a 15.000a 8.420 ab Testigo (sin inoculante) - 987.6a 14.667a 8.467 ab DHS 0.05 14.235 532.38 7.438 3.1698 * Medias con la misma letra dentro de la columna son iguales estadsticamente.
78 79 80 V. DISCUSIN
5.1. Caracterizacin de los suelos salinos
De las 15 muestras de suelo que se recolectaron en campo, en los 7 municipios de San Luis Potos, solo en cuatro de ellos se observ la presencia de sales, seleccionndose cinco sitios por el valor de la conductividad elctrica igual o mayor a 8 dS m -1 siendo los siguientes: "La Matanza" (sitio 1), Mexquitic de Carmona; "Gonzlez" (sitio5), Villa de Arista, "Norias del Refugio" (sitio 8 y 10), Matehuala y "El sabinito" (sitio 12), Ro Verde, los cuales reportaron valores igual o mayor a 8.0 dS m -1 , por lo anterior los suelos, se clasificaron como altamente salinos. Estos sitios se localizan en la zona altiplano y media del Estado, donde la precipitacin es baja (250 a 470 mm) y la evapotranspiracin es tres veces mayor que la misma.
Lo anterior demuestra que los problemas de salinidad, generalmente son ms acentuados en las zonas ridas y semiridas, donde las escasas lluvias anuales son insuficientes para transportar las sales solubles fuera de la zona radicular de las plantas. Aunado a lo anterior, los altos niveles de evaporacin y radiacin solar, son caractersticos de estas regiones, contribuyendo a incrementar ms la salinidad de los suelos (Shainberg y Shalhevet, 1984).
Por otra parte, el contenido de las sales solubles del suelo, es un factor limitante en los suelos reduciendo el potencial osmtico de la solucin del suelo, originando baja disponibilidad de agua para las plantas, aun cuando el suelo muestre un razonable nivel de humedad. De esta manera, la mayora de los factores importantes que limitan la produccin de plantas, son el estrs del ambiente, de los cuales la salinidad y la sequa son de los ms serios (Boyer, 1982).
En Los sitios agrcolas 1,5,8,10 y 12, representativos de los suelos salinos, riegan con agua subterrnea de pozo profundo que de acuerdo con los reportes de la CNA, est clasificada corno agua salina con bajo contenido de sodio (C 3 S 1 ) . Esto por consiguiente contribuye a una mayor salinizacin, en forma paulatina, de los suelos 81 y con el sistema de riego rodado, sobre canales de tierra, la tendencia a la salinizacin del suelo es mayor.
De alguna manera los cultivos agrcolas establecidos han desarrollado cierta tolerancia a la salinidad, a pesar de que los cultivos que se muestrearon se clasifican como sensibles a las salinidad cuando la conductividad elctrica es mayor de 3.5 dS m -1 (Castellanos, 2000). Esta tolerancia a las sales, se observa que depende de factores del manejo agrcola y relacionadas con el mtodo y frecuencia de riego, as como las labores culturales, de tal manera que en suelos secos, las plantas experimentan estrs matricial y estrs osmtico, lo que limita la absorcin del agua (Rhoades et al., 1992). Por otra parte, los valores de tolerancia que las plantas de los sitios representativos de los suelos salinos han desarrollado a la salinidad, tienen una explicacin ms directa con el sistema de riego en surcos o inundacin de surcos, ya que esto implica en su aplicacin el equivalente a un lavado de suelos (sobre riego) que si contaran con otro sistema de riego.
La salinidad ha afectado a ms del 40% de las tierras irrigadas, especialmente las de mayor productividad, en algunas de las reas del planeta, esto debido a los efectos que a travs de las dcadas, los aumentos de agua con sales disueltas en el suelo han contaminado las regiones ridas (Dowton, 1984; Wyn Jones Gorham, 1986; Flower y Yeo, 1988). Por otra parte la utilizacin de aguas subterrneas de baja calidad para el riego, es una situacin que ocurre en el mbito mundial en las zonas ridas y semiridas (Minhas, 1996; 1998), situacin que se observa en la zona altiplano y media del estado de San Luis Potos.
Finalmente la ingeniera tecnolgica existente nos menciona que combatir la salinidad (drenaje de aguas salinas y aplicacin suplementaria de aguas libres de sales de otras fuentes remotas), es extremadamente muy costoso, por los que es necesario aprovechar la tolerancia de los cultivos como una lgica alternativa (Serrano y Gaxiola, 1994) sin dejar de mencionar que la biotecnologa microbiana ser otra alternativa de solucin.
82 5.2. Identificacin de HMA nativos de suelos salinos.
A pesar de los altos contenidos de sales (mayor o igual a 8 dSm -1 ), reportados para los sitios 1,5,8,10 y 12 , representativos de los suelos salinos, el nmero de esporas de los HMA presentes en los suelos salinos se considera aceptable, con base a lo que menciona Gonzlez-Chvez et al., (1994) que el sustrato de un inculo infectivo, debe de contener mnimo 100 esporas en 100 g de suelo seco.
En la raz de los cultivos agrcolas muestreados, se observ que la infectividad de estos simbiontes es baja, con base en los valores obtenidos del porcentaje de colonizacin micorrzica, pero se debe de considerar la etapa fenolgica del cultivo al momento del muestreo, los cuales fueron muestreados en poca de cosecha y se ha mencionado que los HMA, reducen su actividad cuando el cultivo fisiolgicamente est en la fase terminal, asimismo se ha encontrado que el incremento de la salinidad de los suelos reduce la colonizacin micorrzica (Juniper y Abbott, 1993).
Asimismo la presencia de esporas y lo colonizacin micorrzica observada en los cultivos establecidos fue variable y que la colonizacin micorrzica de los HMA, es modificada por el contenido de sales que se encuentran en el suelo y regulada por el genotipo del hospedante y que en condiciones de altos contenidos de sales, se ha encontrado que la colonizacin de los HMA disminuye, y la germinacin de esporas de los endofitos es mayor, lo que asegura su supervivencia (Sylvia y Schenck, 1983; Duke et al., 1986).
Por lo anterior es necesario realizar estudios sobre la respuesta de los hongos micorrzicos arbusculares en suelos salinos para distinguir cuales efectos inciden sobre las diferentes fases del ciclo de vida de los HMA (Juniper y Abbott, 1993).
Por otra parte en las muestras de suelos agrcolas, recolectadas directamente del campo, de los sitios 1, 5, 8, 10 y 12, representativos de los suelos salinos, se identificaron tres gneros de los HMA, Acaulospora sp., Gigaspora sp. y Glomus 83 sp., observndose poca diversidad de estos hongos en los suelos salinos (Fig. 14).
Para entender el conocimiento de la diversidad funcional y taxonmica de los HMA, existen criterios bien definidos para manejar la diversidad de estos simbiontes, sin embargo los factores del ambiente influyen en la presencia de las especies. Se ha establecido que el comportamiento de los HMA nativos de un rea y los aislados y manejados en invernadero es diferente. Asimismo la diversidad de los HMA tiene varios significados pero generalmente, se refleja en la presencia de las especies presentes en los suelos, las cuales viven congregadas en comunidades y generalmente establecen relaciones estrechas entre la poblacin microbiana.
Por otra parte en los suelos perturbados debido a la labranza disminuye la abundancia y diversidad de los HMA, pero los datos sobre esto son muy escasos, sin embargo hay una clara evidencia que indica que la diversidad de las comunidades de los HMA, en lo suelos agrcolas, tienden a disminuir con la aplicacin de insumos y el manejo tecnificado (Jonson y Pfleger, 1992).
Asimismo hay evidencias claras que el incremento de la salinidad en la solucin del suelo establece poca diversidad de especies de los HMA (Sylvia y Williams, 1992), esto comprueba el porque se observ poca diversidad de los HMA en los suelos salinos.
5.3. Descripcin de las especies de HMA aislados y propagados de suelos salinos
Se identificaron cuatro morfoespecies de estos hongos, tres de ellos pertenecientes al gnero Glomus, y uno al gnero Paraglomus, las especies fueron:
Glomus mosseae (Nicolson & Gerdemann) Gerdemann & Trappe. Esta especie ha sido citada de Mxico para los estados de Mxico, Tlaxcala y 84 Veracruz, se registra por primera vez para el estado de San Luis Potos. Glomus aff. etunicatum Becker & Gerdemann. Esta especie ha sido citada de Mxico para los estados de Morelos y Tlaxcala, se registra por primera vez para el estado de San Luis Potos. Glomus intraradices Schenck & Smith. Esta especie ha sido citada de Mxico para los estados de Jalisco y Tlaxcala. Se registra por primera vez para estado de San Luis Potos. Paraglomus sp. Morton & Redecker. Este gnero, se esta citando por primera vez para Mxico en el estado de San Luis Potos
La taxonoma de los HMA ha sido pobremente estudiada en Mxico, siendo necesario intensificar la exploracin taxonmica (Varela y Trejo, 2001). Los gneros Acaulospora y Gigaspora, observados inicialmente en los sitios representativos de los suelos salinos, no se propagaron en el cultivo trampa ya que no necesariamente las especies presentes en las muestras de campo se logran propagar debido a la variabilidad de sus caractersticas (Varela y Estrada-Torres, 1997). La especie Glomus fue la ms dominante en los suelos salinos, sin embargo su infectividad no est correlacionada directamente con su presencia (Miller, 1995).
5.4. Eficiencia de los HMA, aislados y propagados de suelos salinos en lechuga
El porcentaje de colonizacin micorrzica que produjeron los inculos "La Matanza" (sitio 1), "Gonzlez" (sitio 5), "Norias del Refugio" (sitios 8 y 10) y "El Sabinito" (sitio 12), los sitios agrcolas 1,5,8,10 y12, aislados y propagados de los suelos salinos, en plantas de lechuga varo de un 68.23 a 89.05 %, probando que los HMA conservaron su capacidad infectiva, adems de incrementar el porcentaje de colonizacin micorrzica, que la que se observ en la raz de los cultivos agrcolas establecidos, en los sitios muestreados en campo, la que report valores del 10.60 a 27.10%. Asimismo se ha establecido que un HMA que coloniza la raz ms del 50 se considera altamente infectivo (Bago, 2000). 85 La colonizacin micorrzica de los inculos de suelos salinos, de los sitios 1, 5, 8, 10 y 12, mencionados anteriormente, no estimularon el crecimiento del volumen radical, ni el rea foliar, se establece que un hongo micorrzico efectivo mejora el desarrollo del hospedante aumentando el desarrollo de las plantas al incrementar la asimilacin de nutrimentos, a travs de una mayor absorcin del rea radical (Marschner y Dell, 1994).
Por otra parte el inculo de "La Matanza" (sitio l), incremento mayor peso seco del follaje que el resto de los inculos en las plantas de lechuga, a pesar de que presento menor porcentaje de colonizacin micorrzica. Lo anterior no demuestra que los HMA aislados de los suelos salinos no sean eficientes, siendo necesario probar con otra planta husped y medir otras variables fisiolgicas. Se comprueba que los conceptos de infectividad y efectividad no estn relacionados y se dice que los hongos micorrzicos arbusculares que establecen abundantemente colonizacin micorrzica (80-90%) no necesariamente inducirn mayores efectos, ya que se pueden encontrar hongos micorrzicos que colonicen la raz en menor proporcin (15-40%) y muestren excelentes efectos en la nutricin y crecimiento de la planta (Bago et al., 2000).
Por otra parte dice que la variacin de las condiciones ambientales influye en la fisiologa de las plantas y por lo tanto en la colonizacin micorrzica, asimismo es probable que aunque se observe la colonizacin micorrzica no todas las estructuras fngicas estn activas (Varela y Estrada-Torres, 1997).
Finalmente los factores que deben de considerarse en la eficiencia de los HMA son la agresividad, infectividad y capacidad de dispersin, asimismo algunas veces las condiciones de infectividad y efectividad del hongo micorrzico dependen no solo del simbionte, sino tambin de las condiciones ambientales lo que aumenta la importancia de seguir realizando estudios con propsito de seleccionar cepas eficientes (Haas y Krikun, 1985).
86 VI. CONCLUSIONES
De los 15 sitios de muestreo que se realizaron en diferentes reas agrcolas de 7 municipios del estado de San Luis Potos, se identificaron 5 sitios agrcolas con problemas de sales, con base a los valores reportados de la conductividad elctrica igual o mayor a 8 dS m -1 , clasificndolos como suelos altamente salinos, estos sitios son: "La Matanza" (sitio 1), Mexquitic de Carmona; "Gonzlez" (sitios), Villa de Arista, "Norias del Refugio" (sitio 8 y 10), Matehuala y "El sabinito" (sitio 12), Ro Verde, localizados en la zona altiplano y media del estado, donde la precipitacin es de 250 a 470 mm.
En las muestras de suelos agrcolas de los sitios 1, 5, 8, 10 y 12, representativos de los suelos salinos, se identificaron tres gneros de los HMA, Acaulospora sp., Gigaspora sp. y Glomus sp., encontrndose poca diversidad de los HMA.
Por primera vez para el estado de San Luis Potos se identifican cuatro morfoespecies de estos hongos, tres de ellos pertenecientes al genero Glomus, y uno al genero Paraglomus, las especies fueron:
1.- Glomus mosseae, esta especie ha sido citada de Mxico para los estados de Mxico, Tlaxcala y Veracruz y se registra por primera vez para el estado de San Luis Potos. 2.- Glomus aff. etunicatum, esta especie ha sido citada de Mxico para estado de Morelos y Tlaxcala, se registra por primera vez para el estado de San Luis Potos. 3.- Glomus intraradices, esta especie ha sido citada de Mxico para los estados de Jalisco y Tlaxcala. Se registra por primera vez para estado de San Luis Potos.
El gnero del Paraglomus sp. este gnero, se esta citando por primera vez para Mxico en el estado de San Luis Potos.
87 Finalmente la eficiencia en lechuga de los consorcios HMA aislados de suelos salinos, fueron eficientes al ser inoculados en semillas de lechuga, conservando su capacidad infectiva y estimulando el desarrollo vegetativo.
Los HMA incrementaron la colonizacin micorrzica en las plantas de lechuga, en condiciones no salinas, sin embargo en el volumen radical y el rea foliar no reportaron incremento. Por otra parte en relacin al peso seco del follaje, el inculo de "La matanza" (sitio 1), estimul mayor peso seco del follaje que el resto de los inculos.
Por lo anterior se acepta parcialmente la hiptesis, ya que los HMA conservaron su eficiencia al propagarlos en condiciones no salinas e inoculados en plantas de lechuga, siendo necesario probar con otra planta hospedera y medir otras variables fisiolgicas especificas, para poder evaluar en forma ms directa la eficiencia de los HMA aislados y propagados de suelos salinos.
88 VII. LITERATURA CITADA
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Universidad de Colima E S T U D I A L U C H A T R A B A J A FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS POSGRADO EN BIOTECNOLOGA
ING. RODOLFO V. MORENTN DELGADO DIRECTOR DE LA F.C.B.A. PRESENTE
En atencin a que el C. Jos Jess Tapia Gon, alumno egresado del Doctorado en Ciencias, rea: Biotecnologa, con nmero de cuenta 90-3006, ha realizado todas las correcciones al manuscrito de tesis que present al cuerpo acadmico de revisores, constituido por: Dra. Luca Varela Fregoso, Dr. Alfonso Pescador Rubio, Dr. Oscar Rebolledo Domnguez, Dr. Javier Farias Larios, Dr. Sergio Aguilar Espinosa, me dirijo respetuosamente para solicitarle la autorizacin de impresin de la tesis titulada: "Identificacin de hongos micorrzicos arbusculares aislados de suelos salinos y su eficiencia en plantas de lechuga (Lactuca sativa L.)".
Esta tesis ha sido dirigida por el Dr. Jos Gerardo Lpez Aguirre y la Dra. Luca Varela Fregoso de la Universidad de Colima e Instituto Politcnico Nacional respectivamente.
Sin otro asunto ms que tratar, reciba saludos.
Atentamente
Tecomn, Colima a 9 de Abril de 2003
c.c.p Expediente Acadmico del Alumno c.c.p. Interesado
INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS PROL DE CARPIO Y PLAN DE AYALA 11340, MXICO, D.F. FAX: 5396 - 3503
Mxico, D. F. a 26 de marzo de 2003
Dr. Sergio Aguilar Espinoza Coordinador del Posgrado Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias Universidad de Colima Presente
Por este conducto me permito comunicarle que despus de haber revisado la tesis "Identificacin de los hongos micorrzicos arbusculares aislados de suelos salinos y evaluacin de sus eficiencia en plantas de lechuga", que como requisito parcial para obtener el grado de doctor presenta el C. Jos Jess Tapia Gon, manifiesto su aprobacin en virtud de que fue corregida de acuerdo con las indicaciones sugeridas.
Sin ms por el momento, agradezco su atencin y aprovecho la oportunidad para enviarle un cordial saludo.
Atentamente
UNIVERSIDAD DE COLIMA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS PROGRAMA DE POSGRADO EN BIOTECNOLOGIA
Asunto: Aprobaci n de tesi s de Doctorado.
DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA COORDINADOR DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGA PRESENTE.
De la manera ms atenta me permito comunicarle que he concluido con la revisin del Informe en Extenso de los estudios de Doctorado en Ciencias del C. Jos Jess Tapia Gon, titulado "IDENTIFICACIN DE HONGOS MICORRIZICOS ARBUSCULARES AISLADOS DE SUELOS SALINOS Y SU EFICIENCIA EN PLANTAS DE LECHUGA". Luego de su segunda revisin he encontrado que el documento rene los requisitos necesarios, tanto en su contenido como en su forma. Por lo anterior, deseo expresarle mi aceptacin para su impresin final.
Agradezco la oportunidad brindada para fungir como revisor de este documento, a la vez que ratifico mi firme deseo de continuar contribuyendo en la formacin de recursos humanos altamente calificados y con carcter independiente.
Sin otro particular, aprovecho la presente para enviarle un cordial saludo.
ATENTAMENTE Tecomn, Col., a 27 de Marzo del 2003.
C.c.p. Dr. Carlos E. Izquierdo Espinal. Delegado Regional No. 2 C.c.p. Ing. Rodolfo Valentino Morentn Delgado. Director de la FCBA C.c.p. Archivo. Dr. Sergio Aguilar Espinosa Responsable del Posgrado P R E S E N T E .-
Por este conducto me permito comunicar que he revisado el documento doctoral Identificacin de hongos micorrzicos arbusculares aislados de suelos salinos y su eficiencia en plantas de lechuga (Lactuca sativa L.), que presenta el C. Jos Jess Tapia Gon, mismo que considero que incluy las revisiones que le fueron recomendadas, por lo que expres mi aprobacin para que se sigan los trmites acadmicos que correspondan.
Sin otro particular, agradezco su atencin.
ATENTAMENTE Tecomn, Colima 28 de Marzo de 2003
Profesor-Investigador saguilar@ucol.mx
c.c.p. Ing. Rodolfo Valentino Morentn Delgado- Director de la F. C. B. A. c.c.p. Interesado c.c.p. Archivo Personal
DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA COORDINADOR PROGRAMA DE POSGRADO DE LA FCBA P R E S E N T E.
Por este conducto informo a usted que he revisado y evaluado el trabajo de Informe Final de investigacin de Doctor en Ciencias: rea Biotecnologa, titulado, Identificacin de hongos micorrzicos arbusculares aislados de suelos salinos y su eficiencia en plantas de lechuga (Lactuca sativa L.), dicho documento es presentado por el alumno, Jos Jess Tapia Gon; del Programa de Doctorado en ciencias, rea: Biotecnologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias de la Universidad de Colima; en el cual, se han incluido, de manera satisfactoria, todas y cada una de las observaciones que hice al borrador de la misma y durante el examen predoctoral.
Por la razn antes expuesta, considero que este documento rene las atributos necesarios para que sea autorizada su impresin como Tesis de Doctor en Ciencias.
Agradezco la amabilidad de sus atenciones por haberme distinguido como revisor de este documento y sin ms por el momento me reitero a sus respetables rdenes.
ATENTAMENTE
c.c.p.- Ing. Rodolfo V. Morentn Delgado.- Director de la FCBA. c.c.p.- Interesado. c.c.p - Archivo
UNIVERSIDAD DE COLIMA CENTRO UNIVERSITARIO DE INVESTIGACIN Y DESARROLLO AGROPECUARIO (CUIDA)
DR. SERGIO AGUILAR ESPINOZA COORDINADOR DEL POSGRADO DE BIOTECNOLOGIA P R E S E N T E .
Me permito informar a usted que como revisor del documento final del trabajo de investigacin de doctorado del alumno JOSE JESS TAPIA GON, doy mi aprobacin para que el sustentante contine los trmites correspondientes para llevar a cabo la defensa de su tesis, titulada Identificacin de los hongos micorrzicos arbusculares aislados de suelos salinos y evaluacin de su eficiencia de plantas de lechuga (Latuca sativa L.). Esto en virtud a que fueron hechas las correcciones correspondientes al documento citado, y considerando que rene los requisitos para obtener el grado de Doctor en Ciencias.
Sin otro particular aprovecho la oportunidad para enviarle un cordial saludo.
ATENTAMENTE ESTUDIA * LUCHA *TRABAJA Tecomn, Colima., 27 de marzo de 2003
UNIVERSIDAD DE COLIMA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
Asunto: Autorizacin de Tesis de Doctorado
DR SERGIO AGUILAR ESPINOSA COORDINADOR DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGA PRESENTE.
Por este medio me dirijo a Usted para comunicarle que he discutido el documento de tesis titulado IDENTIFICACIN DE HONGOS MICORRZICOS ARBUSCULARES AISLADOS DE SUELOS SALINOS Y SU EFICIENCIA EN PLANTAS DE LECHUGA (Lactuca sativa L.) en forma conjunta con el alumno JOS JESS TAPIA GON, en donde revisamos las observaciones hechas por los revisores, mismas que fueron tomadas en cuenta, por lo que considero que el documento rene los requisitos necesarios para que el mencionado alumno la presente ante un jurado y realice su defensa, as mismo, que pueda continuar los trmites acadmicos para tal fin.
Sin ms por el momento, envindole un cordial saludo.