Manual de Tec. Inmunohematologicas 2013

MANUAL DE PRACTICAS DE INMUNOHEMATOLOGIA
42
INDICE
INTRODUCCION. 2
OBJETIVO GENERAL. 4
INDICE DE PRACTICAS. 5
CREDITOS DE ELABORACION42
VALIDACION.43
42
1.INTRODUCCIN
Los conocimientos tericos de la respuesta inmunolgica

se han empleado desde su funcin protectora contra la
infeccin
hasta
su
papel
como
causa
de
varias
enfermedades inmunolgicas importantes.

Estas enfermedades pueden deberse a interacciones con
antgenos extrnsecos (enfermedades alrgicas y por
inmunocomplejos)
intrnsecos(
enfermedades
autoinmunes).
La falla de la respuesta inmunolgica o un cambio maligno
puede producir enfermedades. La inmunidad protectora y
la produccin de la enfermedad en cierto modo son
productos coincidentes de una funcin biolgica aun mas
fundamental de la inmunidad como el proceso fisiolgico
bsico que permite distinguir las molculas extraas de los
constituyentes del propio ser.
Todas
las
clulas
tienen
cierta
capacidad
de
reconocimiento, y en los vertebrados sta funcin reside en

un rgano especial, el aparato inmunolgico. Este se ha
especializado para desempear su funcin con gran
eficacia interactuando diferentes tipos de clulas.
Esta gran aceptacin de la Inmunologa se debe al lugar
42
creciente que ocupan los conceptos y tcnicas de

la Inmunologa en las ciencias biolgicas y en
todos los sectores de la medicina.
Este manual de prcticas para alumnos de cuarto semestre
de la especialidad de Laboratorio Clnico, tiene la finalidad
de que cuenten con las tcnicas inmunolgicas que les
ayuden a encontrar las causas probables de enfermedades
infecciosas, dotndolos de datos valiosos para dar un
diagnstico del estado actual del paciente, apoyndose en
parmetros ya establecidos de valores normales de
referencia.
42
I.
OBJETIVO GENERAL
Aplicar las tcnicas Inmunohematolgicas accesibles de laboratorio

Que ayude al alumno a tener un conocimiento mas completo de
las reacciones inmunolgicas.
42
II.
INDICE DE PRACTICAS
Prctica No.
Titulo de la Prctica
Determinacin de Grupo Sanguneo
2
3
4
5
6
7
Reacciones Febriles
Factor Reumatoide
HGC
Determinacin de VDRL
Determinacin de PCR
Determinacin de Antiestreptolisinas
42
Pgina
6
11
16
21
25
30
36
Prctica No.
Titulo de la Prctica:
Determinacin de Grupo Sanguneo
Ubicacin:
Tcnicas Inmunohematolgicas
Unidad:
II
Fecha de
realizacin:
Marzo 2013
Mtodos de Aglutinacin activa directa.
Temas:
1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA:

Aplicar la metodologa de los grupos sanguneos para conocer los diferentes
aglutingenos encontrados en los glbulos rojos del individuo.
2.- INTRODUCCIN:
Los antgenos de grupos sanguneos son de naturaleza proteica, casi siempre
forman parte integral de la membrana del glbulo rojo. Se les llaman tambin
aglutingenos y representan una caracterstica hereditaria, y no cambian
durante la vida.
Se han descubierto muchsimos aglutingenos diferentes.
3.- FUNDAMENTO DEL MTODO
La prueba se basa en la unin de un aglutingeno presente en la superficie de los
eritrocitos con un anticuerpo especfico que da como resultado la aglutinacin de
los eritrocitos.
4.- MATERIALES A UTILIZAR:
42
CANTIDAD
1
1
1
1
1
1
1
2
5
DESCRIPCIN
Placa de vidrio para grupo sanguneo
Torunda con alcohol
Torniquete
Jeringa de 3 ml
Tubo vacutainer de BH
Pipeta pasteur
bulbo
Aplicadores
Tubos de ensaye
5.- EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD
1
Centrfuga
DESCRIPCIN
6.- MATERIAL BIOLGICO

CANTIDAD
DESCRIPCIN
3 ml.
Sangre con anticoagulante
7.- REACTIVOS:
CANTIDAD
1
1
1
1
1
DESCRIPCIN
Suero hemotipificador anti A
Suero hemotipificador anti B
Suero hemotipificador anti AB
Suero hemotipificador anti D
Solucin salina fisiolgica al 0-85%
8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO):

Sangre Venosa
42
Se extrae sangre venosa por las tcnicas conocidas y se deposita

en un tubo de ensaye con anticoagulante y se mezcla suavemente.
9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA
1.- Obtener 3 ml de sangre venosa.
.2-- Se puede usar sangre total o bien una suspensin de glbulos rojos al 25% en solucin salina fisiolgica o en su propio suero plasma.
3- Colocar una gota de sangre total a cada uno de los 4 crculos marcados en
la placa de vidrio.
4.- Adicionar a cada gota de sangre una de cada uno de los antisueros en el
siguiente orden: anti A, anti B, anti AB, anti D.
5.- Usando un aplicador de madera distinto para cada suero mezcle bien e
incline suavemente la placa a uno y a otro lado.
6.- Observe si hay aglutinacin. No lea por mas de dos minutos.
Mtodo en tubo:
1.- Prepare una suspensin de glbulos rojos al 2-5% usando solucin salina
fisiolgica al 0.85% o bien el propio suero o plasma de la muestra desangre2.- Marcar cada uno de los tubos como anti A, anti B, antiAB Y anti D
respectivamente3.- Colocar una gota de la suspensin de eritrocitos a cada uno de los cuatro
tubos.
4.- Adicionar una gota de cada uno de los antisueros en el orden antes
mencionados.
5- Mezcle y centrifugue a 1500 rpm durantes un minuto o bien a 3400 rpm por
20 segundos.
6.- Resuspender suavemente cada uno de los cuatro tubos.
7.- Observar si hay aglutinacin.
10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Las reacciones posibles son las siguientes:
Suero hemoclasificador
Anti A
Anti B
Anti AB
+
+
+
+
+
+
+
Grupo
O
A
B
AB
11.- OBSERVACIONES
Existen causas de reacciones falsas + en la determinacin del grupo ABO:
. Cuando la placa de vidrio est sucia , con grasa.
.Es indispensable prevenir el crecimiento bacteriano en el suero, ya que esto
ocasiona aglutinacin bacteriognica inespecfica.
42
12.- NOTAS IMPORTANTES

Recordar que existen dentro de los mismos grupo sanguneos, subtipos de los
mismos.
13.- ACTIVIDADES
Anota tus resultados.

Informa tus resultados
Comenta conclusiones con tus compaeros.
Contesta el siguiente cuestionario.
Completa el glosario de trminos.
CUESTIONARIO
1.- Que tratas de identificar en un grupo sanguneo?
2.- Cuantos sistemas tiene el sistema ABO?Cuales son?
3.- Cuantos sistemas de grupo sanguneo existen?Menciona al menos 5 de
stos.
4.- Cual es la importancia de realizar el grupo sanguneo en un paciente?
5.- Una persona que es del grupo O que tipo de aglutingenos y de aglutininas
tiene en su sangre?
14- GLOSARIO DE TERMINOS
Aglutinogeno.Aglutininas.Reaccin Ag-Ac.-
15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA

AUTOR
TTULO
42
EDITORIAL
1.- INMUNOLOGIA.
Biologa y Patologa del sistema inmune.
1.- J.R. Regueiro Gonzlez.

C. Lpez Larrea
S. Gonzlez Rodriguez.
1.- .- 3. Edicin Editorial

Panamericana.
2.- INMUNOLOGIA
2.- Oscar Rojas Espinoza
2.- 2 Edicin 2001.

Editorial Panamericana.
3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA
3.- Nemirovsky Mario S.
3.- Trillas Mxico 2003
4.- INMUNOLOGIA CELULAR y

molecular
4.- Abbas Abul K.
4.- Mc Graw Hill Espaa

2002.
Prctica No.
42
Fecha de
Reacciones Febriles
2
realizacin:
Marzo 2013
Ubicacin:
2.1 Aplicar tcnicas de laboratorio
Unidad:
Temas:
2.1- 2.4

Conocer la metodologa de las reacciones febriles.
2.- INTRODUCCIN:
Las reacciones febriles son tiles para el diagnstico de muchas enfermedades
tales como: fiebre tifoidea, paratifoidea, tifo y enfermedades producidas por
otras rickettsias.
Los procesos febriles provocados por distintos microorganismos pueden
diagnosticarse por el laboratorio sea por el descubrimiento del agente causal o
por el hallazgo de los anticuerpos generados durante el transcurso de la
infeccin.
Las reacciones de aglutinacin se emplean con frecuencia en el estudio de
infecciones provocadas por distintos grmenes: Salmonellas, Brucellas, etc.
La temperatura aumenta considerablemente y aparecen otros sntomas
igualmente inespecficos, dificultando enormemente el diagnstico de la
enfermedad. Tal es el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi;
las paratifoideas causadas po S. paratyphi A y S. paratyphi B; la fiebre de malta
causada por Brucella melitensis y tifo causado por rickettsia prowasekii.
Cada uno de stos microorganismos inducen una respuesta humoral
produciendo anticuerpos
que se identifican fcilmente con antgenos
especficos. En el caso de Rikettsia prowasekii es muy difcil contar con
antgenos provenientes de ella, pero se utiliza Proteus OX 19 el cual posee
determinantes antignicos comunes con la rikettsia.
Para la determinacin de los anticuerpos se utiliza el suero del enfermo y
antgenos purificados. El ttulo de anticuerpos depende del tipo y curso de la
enfermedad.
42
Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el

organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde
produciendo anticuerpos aglutinantes contra ellos, los cuales se
ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el
antgeno especfico.
CANTIDAD
1
1
1
4
2
1
1
1
DESCRIPCIN
Lmpara
Agitador mecnico
Placa de vidrio
Aplicadores
Torundas
Torniquete
Jeringa de 5 ml
Tubo vacutainer de tapn rojo

CANTIDAD
4
Cronmetros
DESCRIPCIN

CANTIDAD
DESCRIPCIN
Suero humano
7.- REACTIVOS:
CANTIDAD
1
1
1
1
1
1
DESCRIPCIN
Antgeno O ( somtico)
Antgeno H ( flagelar)
Antgeno paratyphi A
Antgeno paratyphi B
Antgeno Brucella
Antgeno Proteus OX 19
8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO): Sangre por

puncin venosa.
42
9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA:

1.- Realizar la toma de muestra y obtener 5 ml de sangre total.
2. Dejar coagular y centrifugar el tubo a 3400 rpm durante 3
minutos. Separa el suero en otro tubo de ensaye limpio.
3.- En la placa de vidrio colocar 0.02 ml ( 20 microlitros) de suero problema en
cada una de las 6 divisiones circulos de la placa.
4.- Adicionar a cada divisin o circulo una gota de cada uno de los 6 antgenos
en el orden siguiente: Antgeno O , Antgeno H , Antgeno paratyphi A,
Antgeno paratyphi B, Antgeno Brucella , Antgeno Proteus OX 19.
5.- Mezclar bien todas las divisiones o crculos con aplicadores diferentes.
6.- La placa se oscila en un agitador mecnico durante 4 minutos.
7.- Observar si hubo aglutinacin en cada uno de los crculos ayudndose con
la luz de una lmpara.
8.- En caso de que aparezca aglutinacin de alguno de los antgenos con
alguno de los sueros, se toma otra placa y en ella se depositan los siguientes
volmenes de dicho suero y antgeno:
_______________________________________________________________
No Div.
1
2
3
4
Ml de suero
0.02
0.01
0.005
0.0025
Volmen de antgeno
1 gota
1:80
1 gota
1:160
1 gota
1: 320
1 gota
1:640
Titulo
9.- Se agrega una gota del antgeno positivo a cada dilucin, mezclar bien con
aplicadores diferentes y agitar 4 minutos.
10.- Observar la aglutinacin . La lectura de la misma no debe de exceder de 2
minutos.
El ttulo del suero se informa como la recproca de la dilucin mas alta en la
que todava se observa aglutinacin.
Las lecturas se harn con una fuente de luz indirecta observando la
aglutinacin macroscpica.
El criterio de positividad se determina por la menor cantidad de suero capaz de
producir 50% de aglutinacin.
Cualquier ttulo mayor de 1: 160 debe ser considerado como positivo.
11.- OBSERVACIONES
42
La mayora de los sueros considerados como normales pueden

mostrar ttulos de 1:20, 1:40 y casualmente 1:80.
La presencia de ttulos bajos pueden deberse a vacunaciones infecciones
pasadas o subclnicas del paciente.La mejor indicacin de un proceso
activo lo marca dos titulaciones sucesivas con una diferencia importante
entre el primer y segundo ttulo aunque tambin se observe esto en
personas convalescientes.
13.- ACTIVIDADES

CUESTIONARIO
1.- D un concepto de las reacciones febriles.
2.- Explique el fundamento de la prctica de las reacciones febriles.
3.- Qu tipo de enfermedades identificamos al realizar sta prueba de
laboratorio.
4.- Como se llama la enfermedad que resulta de dar positivo en proteus OX19.
5.- Interprete el siguiente resultado: Tifico O 1:160, Tfico H 1: 320
.15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA

AUTOR
1.- INMUNOLOGIA.
TTULO
42
EDITORIAL
C. Lpez Larrea
Panamericana.
2.- INMUNOLOGIA
2.- 2 Edicin 2001.


molecular
4.- Abbas Abul K.

2002.
42
Prctica No.
Titulo de la Prctica
Factor Reumatoide
Fecha de
realizacin:
Mar2013
Ubicacin:
Manejar tcnicas de laboratorio de
aglutinacin pasiva indirecta.
Unidad:
Temas:
2.1- 2.2

Aplicar la metodologa de la tcnica adecuada para realizar tcnicas de
laboratorio para detectar la presencia de anticuerpos en pacientes con Artritis
Reumatoide.
2.- INTRODUCCIN:
Es el anticuerpo mas importante detectado en la artritis reumatoide . Puede ser
de tipo IGM, IgG e IgA, principalmente. El FR no es especfico de la Artritis
reumatoide y se encuentra con distinta incidencia y con ttulos no muy elevados
42
en pacientes con Lupus eritemataoso sistmico, tuberculosis, lepra,

sfilis, leishmaniasis y an en individuos normales.
Para estudiar la presencia del FR se emplea una metodologa
variada, del cual el mas simple es el que utiliza la aglutinacin de
partculas de ltex, bentonita o glbulos rojos cubiertos con globulina humana.
En la artritis reumatoide, otras enfermedades vasculares de la colgena,
endocarditis infecciosa activa y algunos padecimientos distintos, el factor
reumatoide est presente en el suero.
Es una IgM o IgG con reactividad de anticuerpo para la IgG humana.
El factor reumatoide se detecta en los pacientes por medio de partculas de ltex
que estn cubiertas con la fraccin gammaglobulina humana, que precipitan en
contacto con el suero del pacientes con artritis reumatoide que contiene una
sustancia parecida a un anticuerpo de alto peso molecular, llamado Factor
reumatoide.

CANTIDAD
DESCRIPCIN
1
Cronmetro
1
Lmpara de luz intensa

CANTIDAD
DESCRIPCIN

CANTIDAD
DESCRIPCIN
3 ml.
Sangre con anticoagulante
7.- REACTIVOS:
42
CANTIDAD
1
1
1
1
1
DESCRIPCIN
Antgeno adsorbido a partculas de ltex
Suero control positivo
Suero control negativo
Diluyente
Concentrado(regulador
glicina-salina
concentrado
Placa de reaccin
pH
8.2

Sangre Venosa
Se extrae sangre venosa por las tcnicas conocidas y se deposita en un tubo
de ensaye con anticoagulante y se mezcla suavemente.
METODO CUALITATIVO:
El ltex debe de estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado
1.- Colocar en una gradilla 1 tubo de13x100
2.- Depositar 1 ml del frasco No 4( diluyente concentrado) diluido.
3.- Aadir 0.05 ml de suero problema.
4.- Despus de haber agregado el suero problema, la dilucin obtenida es 1:20
y est lista para su uso.
5.- En un anillo de la placa depositar 0.05 ml del suero diluido.
6.- En otro anillo depositar una gota del frascoNo 2 ( suero control positivo)
7.- En un tercer anillo depositar una gota del frasco No 3 ( suero control
negativo)
8.- Aadir a cada uno de los 3 anillos una gota del frasco No 1( ltex)
previamente resuspendido.
9.- Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos.
10.- Realizar la lectura del resultado en este momento bajo una fuente de luz
directa.
VALORES DE REFERENCIA: Negativo.
RESULTADO POSITIVO: Presencia de agregados macroscpicos
( aglutinacin comparable al control positivo)
RESULTADO NEGATIVO: Ausencia de agregados macroscpicos ( sin
aglutinacin comparable al control negativo)
42
11.- OBSERVACIONES
Deben tomarse en cuenta las posibles causas de aglutinacin inespecficcas
tales como:
.Lecturas posteriores a los 3 minutos de efectuada la mezcla de suero y el ltex
.Suero con fibrina.
.Suero alto en contenido de lpidos.

Sueros provenientes de personas sanas pueden presentar reacciones
falsas positivas.
13.- ACTIVIDADES

CUESTIONARIO
1. Qu es el factor reumatoide?
2.- Que tipo de enfermedades tambin nos dan un ttulo de anticuerpos elevado
al realizar sta tcnica?
3. Qu tipo de inmunoglobulina representa el anticuerpo del Factor
reumatoide?
4. Menciona algunas caracteristicas de la artritis reumatoide como
enfermedad.

Factor Reumatoide.-
42

AUTOR
TTULO
EDITORIAL
1.- INMUNOLOGIA.

C. Lpez Larrea
2.- INMUNOLOGIA
2.- 2 Edicin 2001.


molecular
4.- Abbas Abul K.

2002.
42
Panamericana.
Prctica No.
Determinacin de Pregnosticn
( Prueba de Embarazo)
Fecha de
realizacin:
Marzo2013
Ubicacin:
Unidad:
Temas:
2.1-2.4


Conocer la tcnica para determinar la glucoprotena gonadotropina corinica
humana.
2.- INTRODUCCIN:
La HGC es una glucoprotena producida por las clulas trofoblsticas despus
de aproximadamente 10 das de la concepcin.
Despus de la concepcin se produce un rpido aumento en la cantidad de
HGC en la orina aproximadamente a las cinco semanas de gestacin ( 5
semanas despus del ltimo periodo menstrual), que alcanza los niveles
mximos en un tiempo aproximadamente de 10 semanas de gestacin. Las
semanas de gestacin se refieren a las semanas despus de la concepcin, ya
que sta fecha es mas difcil de determinar con certeza.
A medida que la produccin de estrgenos y progesterona aumenta por la
placenta durante el segundo trimestre, los niveles de HGC descienden. Este
nivel constituye constituye la medida mas lgica para la pronta confirmacin de
un embarazo.
42
Los eritrocitos, previamente son sometidos a un tratamiento

especial con gonadotrofina corinica humana( antgeno), actan
com portadores de ste antgeno. Al adicionar el antisuero
correspondiente se produce una reaccin inmunoqumica dando
lugar a un patrn de sedimentacin homognea de los eritrocitos. La adicin
simultnea del antgeno libre en forma de HGC, tal como se presenta en la orina
de mujeres embarazadas, bloquea los anticuerpos e impide la reaccin con los
eritrocitos.

CANTIDAD
DESCRIPCIN
Tubo de ensaye de 13x 100
Pipetas de 1 ml
Gradilla
Papel filtro
Papel filtro suave Whatman

CANTIDAD
DESCRIPCIN

CANTIDAD
DESCRIPCIN
Orina
7.- REACTIVOS:
CANTIDAD
DESCRIPCIN
Suero anti HGC
Eritrocitos contenidos en el tubo para la prueba
42
Sangre Venosa
Recolectar orina , de preferencia la primera de la maana por ser
la mas concentrada, en un frasco perfectamente limpio.
1.- Filtre una pequea cantidad de orina (5-8 ml). Se aconseja emplear papel
filtro suave, de preferencia Whatman.
Como otra alternativa, la orina puede centrifugarse durante 5-10 minutos a
3000 4000 rpm.
2.- Con una pipeta introdzcase 0.1 ml de sta orina en un tubo abierto,( una
vez abierto un tubo, debe utilizarse de inmediato para garantizar la estabilidad
de los reactivos)
3.- Adase a continuacin con una pipeta de 0.4 ml de solucin
amortiguadora.
4.- Agtese el tubo durante 1 minuto y colquese en la gradilla con espejo
inferior
5.- Deje reposar la gradilla con el tubo( o tubos) durante dos horas, sin
cambiarla de lugar, ni moverla.
6.- A continuacin puede leerse el resultado de la prueba en el espejo de la
parte inferior de la gradilla.
VALORES DE REFERENCIA:
El resultado es un patrn de sedimentacin especfico en forma de un anillo
claramente definido( resultado positivo).
Si en la orina no hay gonadotrofina corinica humana o si la hay en cantidad
insuficiente, aparece un patrn de sedimentacin difuso, de color amarillo
pardo ( la prueba es negativa).
Si la mujer est embarazada aparece un anillo claramente definido. Si el
dimetro del anillo es mayor y ste anillo es mas vago y de contornos menos
definidos, se considera el resultado como dudoso y debe repetirse la prueba
aproximadamente al cabo de una semana.
42
POSITIVO
NEGATIVO
11.- OBSERVACIONES
Se debe hacer la lectura despus de 2 horas de realizada la prueba. Sin
embargo puede ocurrir que algunas horas despus de la lectura de un
resultado negativo, aun se forme un anillo mas o menos vago. Este fenmeno
puede indicar que la cantidad de HGC presente en la muestra de orina se
encuentra en el lmite de las cantidades demostrables; sin embargo en tal caso
no puede sacarse ninguna conclusin.

El tubo o los tubos ( segn sea el nmero de pruebas) deben colocarse en un
lugar completamente libre de vibraciones, y hacer la lectura sin mover la
gradilla.
13.- ACTIVIDADES

CUESTIONARIO
1.- Hacer un breve resmen de la HGC.
2.14- GLOSARIO DE TERMINOS
Traumatismo. Lesin que sufre la vena durante la extraccin dela sangre.

AUTOR
TTULO
1.- INMUNOLOGIA.

C. Lpez Larrea
2.- INMUNOLOGIA
42
EDITORIAL
Panamericana.
2.- 2 Edicin 2001.

molecular
4.- Abbas Abul K.

2002.
Prctica No.
Determinacin de VDRL
Ubicacin:
Unidad:
Fecha de
realizacin:
Marzo2013

Temas:
2.1-2.4

Determinar la presencia de reaginas en el organismo de personas que padecen
sfilis y otras enfermedades.
2.- INTRODUCCIN:
La sfilis es una enfermedad generalizada, producida por Treponema pallidum,
transmitida habitualmente por contacto sexual. El diagnstico descansa en la
serologa; los mtodos determinan dos clases de anticuerpos: 1) tipo
cardiolipina, no treponema inespecficos y 2) Los antitreponemas especficos.
La facilidad para su determinacin ha hecho que los del tipo cardiolipina se
utilicen universalmente en las exploraciones iniciales ya sean exmenes
42
individuales o encuestas de poblacin; la variante tcnica mas

comnmente empleada es la llamada VDRL( Venereal Disease
Reseach Laboratory) que determina la floculacin en
placa( cualitativa) del antgeno con cardiolipina y lecitina.
La cardiolipina y la lecitina son dos sustancias reactivas que se aslan a partir
del msculo del corazn del buey, conduciendo al antgeno mas especfico
utilizado en la actualidad en la prueba de VDRL.
La reagina es una sustancia que aparece en la sangre y LCR de personas que
padecen sfilis y otras enfermedades como el mal de pinto, lepra y paludismo.
Cuando se mezcla un suero que contiene reaginas con el antgeno no
treponmico, las partculas de emulsin floculan formando agregados
fcilmente que podemos observar a travs del microscopio.

CANTIDAD
DESCRIPCIN
Placa cncava ( indispensable)
Agitador mecnico
Cronmetro
Pipetas automticas de 50 microlitros
Pipeta volumtrica de 1ml

CANTIDAD
1
Microscopio
DESCRIPCIN

CANTIDAD
DESCRIPCIN
3 ml.
Sangre por puncin venosa. Centrifugar y separa el suero.
42
7.- REACTIVOS:
CANTIDAD
DESCRIPCIN
Antgeno en suspensin estabilizado
Control positivo
Control negativo
Aguja No 21 sin bisel

Sangre Venosa
Se extrae sangre venosa por las tcnicas conocidas.

Mtodo cualitativo:
1.- En un anillo de una placa cncava deposite o.05 ml de un suero problema
( 50 microlitros).
2.- En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra por
separado una gota de suero control negativo.
3.- Aadir una gota del antgeno en suspensin estabilizado previamente
resuspendido, en cada una de las 3 muestras, utilizando la aguja No 21 sin
bisel.
4.- Colocar la placa sobre un agitador mecnico a 180 rpm DURANTE 4
MINUTOS. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede
provocar la evaporacin de las muestras, por lo tanto la placa en rotacin
puede ser cubierta con una tapa de caja petri humedecida previamente con una
gasa.
5.- Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10X.
Valores de Referencia:
NEGATIVO
No se observan grumos.Negativo
Pequeos agregados..Positivo dbil
Agregados medianos o grandesPositivo
Mtodo cuantitativo:
42
1.- Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba

cualitativa.
2.- Colocar en una gradilla 6 tubos de 12x75mm y numerarlos.
3.- Agregar a cada uno 0.5 ml de solucin salina isotnica al 0.9%
4.- Depositar 0.5 ml de suero al tubo No 1 y mezclar.
5.- Pasar 0.5 ml del tubo No1 al Tubo No2 y mezclar.
6.- Pasar 0.5 ml del tubo No2 al al tubo No 3, mezclar
7.- Continuar sta operacin hasta el tubo No 6.Eliminar 0.5 ml del ltimo tubo
para que todos tengan el mismo volumen.
8.- Depositar 0.5 ml de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos
del la placa cncava.
9.- Aadir una gota del antgeno en suspensin estabilizado(VDRL) utilizando
la aguja No 21 sin bisel a cada una de las diluciones.
10.- Colocar la placa sobre un agitador mecnico a 180 rpm durante 4 minutos.
11.- Leer al microscopio con objetivo ocular 10X.
Interpretacin de resultados:
El ttulo del suero problema ser la ltima dilucin que presente el resultado
positivo, de acuerdo al cuadro siguiente:
No TUBO
1
2
3
4
5
6
DILUCION
1/2
1/4
1/8
1/16
1/32
1/64
11.- OBSERVACIONES
El suero con exceso de reaginas pueden ocasionar reaccin atpica ( grumos
de tamao irregular). Es recomendable diluir el suero en solucin salina y
probar nuevamente.

Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insastifactorios para la
prueba.
2. Sueros dbiles positivos y con fuertes evidencias clnicas de la enfermedad
42
es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que

ocasionalmente pueden presentar el fenmeno de prozona.
3.- El antgeno en suspensin debe de estar a temperatura
ambiente antes de ser utilizado.
13.- ACTIVIDADES

CUESTIONARIO
1.- Qu significan las siglas VDRL?
2.- Porqu decimos que la prueba de VDRL es una prueba inespecfica?
3.- Qu otras tcnicas podemos utilizar para determinar la presencia de
reaginas y/o al agente causal de la enfermedad venrea?
4.- Menciona el agente causal de la sfilis?
5.- Describe brevemente lo que es la sfilis.
Prueba especfica.Prueba inespecfica.15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA
AUTOR
TTULO
EDITORIAL
1.- INMUNOLOGIA.

C. Lpez Larrea
2.- INMUNOLOGIA
2.- 2 Edicin 2001.

42
Panamericana.

molecular
4.- Abbas Abul K.

2002.
Prctica No.
Determinacin de Protena C. Reactiva
Fecha de
realizacin:
Marzo 2013
Ubicacin:
Unidad:
2
1.- Objetivo:
Temas:

aglutinacin pasiva indirecta
Aprender a manejar tcnicas de laboratorio de aglutinacin pasiva indirecta.

2.- INTRODUCCIN:
Tillet y Francis concluyeron en 1930 que la reaccin que se origina en el suero
de pacientes que sufren de enfermedades
inflamatorias precipita con un extracto de pneumococo noproteico llamado
polisacrido C. La protena que causa este tipo de reaccin fue llamada
Protena C Reactiva.
Como un fenmeno no especfico, el incremento en lconcentracin de Protena
C Reactiva se puede presentar en cualquier proceso inflamatorio agudo (ya sea
infeccioso o no infeccioso). La concentracin de Protena C Reactiva
42
generalmente se encuentra por debajo de 6 mg/L en el suero de

adultos sanos y en enfermedades inflamatorias estos valores
frecuentemente se incrementan en un lapso de 4 a 8 horas
despus de presentarse un evento agudo alcanzando niveles
aproximadamente de 20 a 500 mg/L.
Varios mtodos de inmunoprecipitacin se han desarrollado para la deteccin
de Protena C Reactiva. El principio del procedimiento presentado involucra una
reaccin inmunolgica entre la Protena C Reactiva (como antgeno) y el
anticuerpo correspondiente adsorbido a las partculas de ltex (ltex
sensibilizado con anti-Protena C Reactiva).

La protena C. Reactormal que aparece en la sangre de personas que han pasado
por una fase aguda producida por distintas enfermedades inflamatorias. Se valora
por reacciones de precipitacin usando como reactivo suero anti protena C
reactiva. bien con partculas de ltex revestidas de antisuero antiprotena C.

CANTIDAD
DESCRIPCIN
- Cronmetro
Lmpara de luz intensa
Placa de vidrio
aplicadores
42
CANTIDAD
DESCRIPCIN
Agitador mecnico

CANTIDAD
DESCRIPCIN
5 ml.
Obtener 3.0 mL de sangre por puncin venosa.
Centrifugar y separar el suero.
7.- REACTIVOS:
CANTIDAD
DESCRIPCIN
Antisuero adsorbido a partculas de ltex. (ltex antiPCR)
Suero Control Positivo
Suero Control Negativo
Diluyente Glicina Salina, concentrado, pH 8.2
Placa de reaccin

Sangre Venosa
Se extrae sangre venosa por las tcnicas conocidas.

Preparacin del Diluyente Glicina Salina Concentrado:
El frasco de Diluyente Glicina Salina Concentrado se afora con agua destilada
al volumen suficiente segn corresponda la presentacin. Ejemplo:
- 50 mL (para 50 pruebas)
- 100 mL (para 100 pruebas)
- 40 mL (para 40 pruebas), etctera
MTODO CUALITATIVO:
NOTA: El ltex Anti-PCR debe estar a temperatura ambiente antes de ser
utilizado.
1. Colocar en una gradilla un tubo de 13 x 100 mm.
2. Agregar 0.95 mL del frasco No. 4 (Diluyente glicina-salina concentrado pH
8.2) diluido.
3. Aadir 0.05 mL del suero problema.
42
4. Despus de haber agregado el suero problema, la dilucin

obtenida ser 1:20 y estar lista para su uso.
5. En un anillo de la placa depositar 0.05 mL del suero diluido.
6. En otro anillo depositar una gota del frasco No. 2 (suero control
positivo).
7. En un tercer anillo depositar una gota del frasco No. 3 (suero control
negativo).
8. Aadir a cada uno de los 3 anillos una gota del frasco No. 1 (Ltex antiProtena C Reactiva) previamente
resuspendido.
9. Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos.
10. Realizar la lectura del resultado en este momento bajo una fuente de luz
directa.
Interpretacin
Resultado Positivo
Presencia de agregados macroscpicos (aglutinacin
comparable al control positivo).
Resultado Negativo
Ausencia de agregados macroscpicos (sin aglutinacin,
comparable al control negativo). La no aglutinacin o una ligera
aparicin de granulocidad que no exceda a la observada en
el control negativo indican un resultado negativo.
MTODO SEMICUANTITATIVO
1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
2. Colocar en una gradilla 5 tubos de 12 x 75 mm y numerarlos.
3. Depositar al tubo No. 1, 0.95 mL del frasco No. 4 (Diluyente glicina-salina
concentrado, pH 8.2) diluido.
4. Depositar del tubo No. 2 al 5, 0.5 mL del frasco No. 4 (Diluyente glicinasalina concentrado pH 8.2) diluido.
5. Aadir al tubo No. 1, 0.05 mL del suero problema dilucin 1:20. Mezcle.
6. Pasar 0.5 mL del tubo No. 1 al tubo No. 2. Mezcle.
7. Pasar 0.5 mL del tubo No. 2 al tubo No. 3. Mezcle.
8. Continuar esta operacin hasta el tubo No. 5.
9. Depositar 0.05 mL de cada una de las diluciones en anillos diferentes de la
placa.
42
10. Aadir una gota del frasco No.1 (ltex Anti-Protena C

Reactiva) a cada una de las diluciones.
11. Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos.
12. Realizar la lectura del resultado en este momento.
Valores de Referencia:
NEGATIVO

El ttulo del suero problema ser la ltima dilucin que presente agregados
macroscpicos (aglutinacin). Ejemplo :
TUBO/Dil
1
1:20
+
+
+
2
1:40
+
+
3
1:80
+
4
1:160
-
Resultado
positivo1:20
positivo1:40
positivo1:80
11.- OBSERVACIONES
1. No deben utilizarse sueros turbios, hemolizados o contaminados
para realizar la prueba.
2. Para evitar falsos resultados NO es recomendable realizar
la lectura despus de los 2 minutos.
42
El plasma no es recomendable para la determinacin.

13.- ACTIVIDADES

CUESTIONARIO
1Qu significado clnico tiene la presencia de sta protena C en el organismo
de un individuo?
2.- Cual es el fundamento de la prctica?
3.- La PCR es una prueba especfica inespecfica? Porque?
4.- La fiebre reumtica se considera una enfermedad autoinmune?
5.- Describe brevemente sta enfermedad.
PCR.- .
AUTOR
TTULO
EDITORIAL
1.- INMUNOLOGIA.

C. Lpez Larrea
2.- INMUNOLOGIA
2.- 2 Edicin 2001.


molecular
4.- Abbas Abul K.

2002.
42
Panamericana.
Prctica No.
Determinacin de Antiestreptolisinas
Fecha de
realizacin:
Marzo 2013
Ubicacin:
Unidad:
Temas:
Aplicar metodologa de Reacciones de

Neutralizacin.

Aplicar la metodologa de la tcnica adecuada para realiza
2.- INTRODUCCIN:
Casi todas las cepas de estreptococos grupo serolgico A producen dos
factores hemolticos, estreptolisina O y S. Ambas son capaces de
dividir( hemolizar) glbulos rojos. Cuando un individuo tiene una infeccin
estreptoccica grupo A la estreptolisina O estimula el desarrollo de anticuerpos
especficos. Los ttulos sricos de antiestreptolisina O pueden tener valor
diagnstico en pacientes que tienen o han tenido recientemente una infeccin
estreptoccica grupo A.
42
La estreptolisina O es una hemolkisina de origen lbil, activa frente

a los eritrocitos humanos y a los del conejo. Esta estreptolisina es
producida en su mayora por las cepas Lancefield de estreptococos
del grupo A, as por algunas cepas de los grupos C y G.
En las infecciones causadas por estreptococo Betahemoltico, se libera
estreptolisina-O de la bacteria estimulando la produccin de anticuerpos
antiestreptolisina- O (ASO). La presencia y el nivel de estos anticuerpos en una
muestra de suero pueden reflejar la naturaleza y severidad de la infeccin. Esta
prueba de estreptolisina utiliza una suspensin buffer estabilizada de partculas de
ltex de poliestireno recubiertas con estreptolisina-O. Cuando el reactivo de ltex
se mezcla con una muestra de suero que contenga anticuerpos hacia
estreptolisina-O, ocurre la aglutinacin. El reactivo de ltex es producido de
manera de que la aglutinacin tome lugar nicamente cuando el nivel de
anticuerpos hacia estreptolisina-O sea igual o mayor a 200 IU/mL, este
es un nivel indicativo de enfermedad por estudios clnicos y epidemiolgicos.

CANTIDAD
DESCRIPCIN
Cronmetro
Fuente de luz
Tubos de prueba y gradillas (para la prueba
semicuantitativa)
Pipetas serolgicas (para la prueba semicuantitativa)
Agitador mecnico (opcional)
Placa - 6 anillos
Pipetas/agitadores desechables

CANTIDAD
DESCRIPCIN
42

CANTIDAD
DESCRIPCIN
5 ml.
Sangre sin anticoagulante.
7.- REACTIVOS:
CANTIDAD
DESCRIPCIN
ASO Reactivo de Ltex (Tapa Blanca)
Suspensin de partculas de ltex de poliestireno
recubiertas con estreptolisina-O en un buffer salino
ASO Control Positivo (Tapa Roja)
Suero humano estabilizado, conteniendo ms de 200
IU/mL de antiestreptolisina-O
Control Negativo (Tapa Verde)
Suero humano estabilizado, conteniendo menos de
100 IU/mL de antiestreptolisina-O.
Buffer Glicina-Salina (20x) Concentrado
Solucin de glicina y cloruro de sodio, pH 8.2 0.1.

Sangre Venosa

A. Mtodo Cualitativo
1. Lleve los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
2. Agite suavemente el frasco del reactivo de ltex para dispersar y
resuspender las partculas de
ltex. No agitar excesivamente.
3. Aada una gota de la muestra del paciente no diluida utilizando una de las
pipetas desechables, en un crculo de la placa. Tambin coloque una gota de
los controles positivo y negativo en otros crculos separados dentro de la
misma la placa.
4. Agite suavemente el frasco de ltex. Coloqueuna gota del reactivo de ltex
junto a la gota de la muestra de suero en cada una de los crculosocupados.
5. Mezcle ambas gotas con el agitador/mezclador desechable incluido,
cubriendo por completo
toda la superficie del crculo.
42
6. Agite manualmente la placa por 2 minutos de manera que la

mezcla rote suavemente y despacio dentro de los crculos
coloque la placa en un rotor automtico a 80-100 r.p.m.
7. Despus de 2 minutos, examine cada crculo para observar la
ausencia presencia de aglutinacin.
B. Mtodo Semi-Cuantitativo
1.- Esta reaccin puede ser utilizada para estimar la concentracin de ASO
utilizando una serie de diluciones.
La muestra del paciente se diluye con un Buffer de Glicina-Salina como se
muestra a continuacin:
Despus, cada dilucin se prueba con el ltex como se describi en la seccin

A. Mtodo Cualitativo.

A. Mtodo Cualitativo:
La presencia de aglutinacin indica una concentracin de ASO mayor a
200IU/mL 20% en la muestra.
Aquellas muestras en las que no haya presencia de aglutinacin contienen
concentraciones de ASO menores a 200 IU/mL.
B. Mtodo Semi-Cuantitativo:
Se reporta la dilucin mayor hasta que se observe aglutinacin. El contenido de
ASO de la muestra del paciente se toma de la siguiente tabla:
Dilucin de la
Concentracin de
Aglutinacin
ASO IU/mL ( 20%)
1 :2
> 400
1 :4
> 800
1 :8
> 1600
1 :16
> 3200
VALORES ESPERADOS
42
Un nivel detectable de 200IU/ml de anticuerpos de

Antiestreptolisina-O usualmente es el lmite normal superior,
ya que menos del 15-20% de los individuos sanos presentan
ttulos mayores de 200IU/mL al probar sus sueros. Los ttulos elevados
de ASO pueden estar asociados con espondilitis anquilosante,
glomerulonefritis, fiebre escarlatina y tonsilitis.
Generalmente no se encuentra incremento de losniveles de ASO en el
suero de pacientes con Artritis Reumatoide excepto durante episodios
agudos.
11.- OBSERVACIONES
Los tiempos de reaccin mayores a 2 minutos pueden dar resultados falsos
positivos (debido al efecto de secado). Los sueros muy lipmicos pueden
tambin causar reacciones no-especficas.
La fuerza de la aglutinacin no es indicativa de la concentracin de ASO en la
muestra. En el procedimiento de prueba cualitativo, pueden presentarse
reacciones dbiles con concentraciones elevadas muy marcadas. En los casos
de un ttulo de ASO con gran incremento (ms de 2000 IU/mL), la aglutinacin
puede ser inhibida debido a un exceso de anticuerpo (efecto de prozona).
Cuando se esperan estas altas concentraciones de ASO, la muestra se debe
probar diluida. Los resultados de esta prueba siempre debern de interpretarse
en conjunto con el perfil clnico y con los otros resultados de las pruebas de
laboratorio. Un resultado negativo no excluye por completo el diagnstico de
una fiebre reumtica exactamente o de una glomerulonefritis
postestreptococcica
13.- ACTIVIDADES

CUESTIONARIO
42
AUTOR
TTULO
EDITORIAL
1.- INMUNOLOGIA.

C. Lpez Larrea
2.- INMUNOLOGIA
2.- 2 Edicin 2001.


molecular
4.- Abbas Abul K.

2002.
42
Panamericana.
IV.
CREDITOS DE ELABORACIN
ESTE CUADERNO DE TRABAJO FUE ELABORADO
ACADEMIA DE LABORATORIO CLINICO

Q.F.B. XOCHITL DEL CARMEN RIOS OCHOA
Q.B.P. EDGARDO ACEVEDO CASARRUBIAS
Q.F.B. MARIA ESTHER SANCHEZ SERRA
Q.F.B. MIGUEL ANGEL QUIJANO QOUOH
Q.F.B. PEDRO PERALES SABIDO
Q.F.B. ANDRES BARRIENTOS ACOSTA
Q.F.B. ESLY HERNANDEZ TORRES
DR. MARIO ALBERTO LOPEZ
Q.F.B. ALEJANDRA GARCIA PANTOJA
MVZ RAMON PICHARDO HERNANDEZ
V.
VALIDACIN DEL CUADERNO DE PRCTICAS
PLANTEL: C.B.T.i.s. No. 32

FEB-JULIO 2013
PERODO ESCOLAR:
MDULO III: SUBMDULO 3.- APLICAR TECNICAS

INMUNOHEMATOLOGICAS
42
SEMESTRE: IV
ACADEMIA LOCAL DE: Laboratorista Clnico
Q.F.B. MIGUEL A. QUIJANO COUOH
PRESIDENTE DE LA ACADEMIA
(nombre y firma)
ACADEMIA ESTATAL DE: Laboratorista Clnico

Q.F.B. MARIA ESTHER SNCHEZ SERRA
PRESIDENTE DE LA ACADEMIA
(nombre y firma)
Villahermosa, Tabasco a 30 enero de 2013
42

Manual de Tec. Inmunohematologicas 2013

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MANUAL DE PRACTICAS DE INMUNOHEMATOLOGIA

Los conocimientos tericos de la respuesta inmunolgica

enfermedades inmunolgicas importantes.

reconocimiento, y en los vertebrados sta funcin reside en

creciente que ocupan los conceptos y tcnicas de

Aplicar las tcnicas Inmunohematolgicas accesibles de laboratorio

Determinacin de Grupo Sanguneo

Determinacin de Grupo Sanguneo

Mtodos de Aglutinacin activa directa.

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA:

4.- MATERIALES A UTILIZAR:

5.- EQUIPO A UTILIZAR:

6.- MATERIAL BIOLGICO

8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO):

Se extrae sangre venosa por las tcnicas conocidas y se deposita

12.- NOTAS IMPORTANTES

Anota tus resultados.

15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA

1.- J.R. Regueiro Gonzlez.

1.- .- 3. Edicin Editorial

2.- Oscar Rojas Espinoza

2.- 2 Edicin 2001.

3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA

3.- Nemirovsky Mario S.

3.- Trillas Mxico 2003

4.- INMUNOLOGIA CELULAR y

4.- Abbas Abul K.

4.- Mc Graw Hill Espaa

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA:

3.- FUNDAMENTO DEL MTODO

Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el

5.- EQUIPO A UTILIZAR:

6.- MATERIAL BIOLGICO

8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO): Sangre por

9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA:

La mayora de los sueros considerados como normales pueden

Anota tus resultados.

14- GLOSARIO DE TERMINOS

.15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA

Biologa y Patologa del sistema inmune.

2.- Oscar Rojas Espinoza

2.- 2 Edicin 2001.

3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA

3.- Nemirovsky Mario S.

3.- Trillas Mxico 2003

4.- INMUNOLOGIA CELULAR y

4.- Abbas Abul K.

4.- Mc Graw Hill Espaa

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA:

en pacientes con Lupus eritemataoso sistmico, tuberculosis, lepra,

4.- MATERIALES A UTILIZAR:

5.- EQUIPO A UTILIZAR:

6.- MATERIAL BIOLGICO

8.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA (MATERIAL BIOLGICO):

12.- NOTAS IMPORTANTES

Anota tus resultados.

14- GLOSARIO DE TERMINOS

15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA

1.- J.R. Regueiro Gonzlez.

1.- .- 3. Edicin Editorial

2.- Oscar Rojas Espinoza

2.- 2 Edicin 2001.

3.- FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGIA

3.- Nemirovsky Mario S.