Enzimas reguladoras.

Son catalizadores biológicos, que además

de las propiedades que caracterizan a las
enzimas, presentan características que le
confieren papeles reguladores del metabolismo.
Existen dos tipos:
Las enzimas alostéricas y
Las enzimas moduladas covalentemente.
Enzimas
alostéricas.

La actividad catalítica de la enzima es modulada

por la unión no covalente de un metabólito específico a
un centro de la proteína, diferente al centro catalítico.
 Centro Centro Centro
Centro
activo alostérico activo
alostérico

s i s

Cuando el inhibidor ocupa

En ausencia de inhibidor, el centro alostérico, tiene
el substrato se fija normal- lugar un cambio conformacional
mente al centro activo en el centro activo que impide la
fijación del substrato

Inhibición alostérica
Generalidades.
1:- Existen sistemas multienzimáticos donde el producto
de la reacción actúa como inhibidor específico de una
enzima situada al comienzo de la secuencia.

2:- Esta inhibición se asigna como inhibición por el

producto final, inhibición feed-back o retroinhibición.
Estas enzimas reciben el nombre de enzimas
alostéricas, propuesto por J. Monod, et al.

3:- Presentan un sitio diferente al centro activo, al que se

une reversiblemente y en forma no covalente al
efector o modulador.
Generalidades.
4:- El centro alostérico es específico para la unión del
modulador.

5:- Las enzimas pueden ser reguladas por

moduladores positivos, que aumentan su actividad
catalítica y moduladores negativos que la
disminuyen. Ej: L-isoleucina es un modulador (-) para
la treonin-deshidratasa.

6:- Cuando la enzima presenta un modulador

específico es monovalente y cuando hay más de uno,
polivalente.
Generalidades.
7:- Dos o más sistemas multienzimáticos, pueden
estar conectados por una o más enzimas
polivalentes, formando una red de control.

8:- Son enzimas oligoméricas, es decir, constituidas

por dos o más cadenas polipeptídicas. Son inestables
a 0ºC y estables a temperatura ambiente.

9:- La inhibición producida por el modulador negativo

no se ajusta a las inhibiciones conocidas y
muestra una dependencia atípica de la Ve. Inicial de
la reacción, no cumpliendo con la teoría de
Michaelis-Menten.
Reacción
determinante.

Se asigna a la primera etapa en una

secuencia de reacciones multienzimáticas, que es
irreversible en condiciones intracelulares.
Constituye una estrategia de la célula para regular
una ruta metabólica, desde la etapa inicial y así
lograr la máxima economía de metabólitos.
Control de las enzimas
alostéricas.

Las enzimas alostéricas muestran dos tipos de

control diferentes: Heterotrópico y homotrópico, según
la naturaleza del modulador.
Enzimas
homotrópicas.
El sustrato actúa, también como modulador.
Esta enzimas contienen dos o más centros de
unión para el sustrato. La modulación dependerá
de cuántos sean los centros del sustrato que están
ocupados.

Enzimas heterotrópicas.
Son estimuladas o inhibidas por un modulador
diferente a la del sustrato.
Cinética de las enzimas
alostéricas.
Su comportamiento cinético esta alterado por
las variaciones de la concentración del modulador
alostérico. Las enzimas homotrópicas muestran una
curva sigmoidal en las gráficas de velocidad de
Michaelis - Menten. La curva sigmoidal implica que
la unión de la primera molécula de sustrato con la
enzima intensifica la unión de las moléculas de
S subsiguientes a los otros centros activos.
 Centro Centro Centro
Centro
activo alostérico activo
alostérico

s i s

Cuando el inhibidor ocupa

En ausencia de inhibidor, el centro alostérico, tiene
el substrato se fija normal- lugar un cambio conformacional
mente al centro activo en el centro activo que impide la
fijación del substrato

Inhibición alostérica
 Una característica importante de las enzimas alostéricas
es que presentan cinéticas anómalas, normalmente
cinéticas sigmoides:

v
La presencia de una
sigmoide implica
la existencia de
cooperatividad en la
fijación del substrato

s
 La cooperatividad (positiva) consiste en que la fijación de una
molécula de substrato favorece la fijación del siguiente, y así
hasta ocuparse toda la molécula

s + s s + s s + s s
1 2 s 3 s s

En términos de Km veríamos que Km1 > Km2 > Km3

Existe también cooperatividad negativa, cuando la fijación de

una molécula de substrato dificulta la fijación del siguiente.
El comportamiento cooperativo implica:

1. Que hay más de un sitio de fijación de substrato

por molécula de enzima (estr.cuaternaria)

2. Que hay interacciones entre los sitios de fijación

 Cinéticas michaeliana y sigmoide:
Mioglobina y Hemoglobina

1.0

Y
0.8 Mioglobina

0.6

0.4
Hemoglobina

0.2

0.0
0 2 4 6 8 10 12

s
Cooperatividad
positiva.

Cuando las curvas sigmoidales son muy

inclinadas, debido a que un leve aumento en la
concentración del sustrato, puede provocar una
aceleración de la velocidad de la catálisis.
Cooperatividad
negativa.

Algunas enzimas muestran un

comportamiento opuesto, la unión del sustrato
provoca un descenso en la unión de las moléculas de
sustrato subsiguientes, mostrando una curva más
aplanada. La enzima en estas condiciones es menos
sensibles a cambios pequeños de la concentración de
sustrato y se aproxima a la saturación más lentamente,
que la enzima no regulada.
 Características.

1:- Un modulador negativo, producirá un incremento en la Km

aparente y el modulador positivo un descenso de ésta.

2:- Un modulador negativo baja la Ve de reacción a una

concentración de sustrato saturante y constante. Mientras que
el modulador positivo producirá un incremento en la Ve.

3:- Las enzimas alostéricas que responden a moduladores (+)

y (-) con cambio de la Km aparente, se asignan como enzimas
K y las que afectan la Vmax, como enzimas M.
 Inhibidores y activadores
alostéricos

1.0
Y
(+ Activador)
0.8
V+

0.6 (sin efectores)

V0

0.4 (+ Inhibidor)

0.2
V-

s
0.0
0 2 4 6 8 10 12
Características.

4:- Una enzima alostérica puede perder su regulación

por los moduladores, sin afectar su actividad
catalítica. Proceso llamado desensibilización de
la enzima. En estas condiciones la enzima se
comporta según la cinética descrita por Michaelis-
Menten.
Ejemplo enzima
alostérica.
La más estudiada es la Aspartato-
transcarbamilasa, conocida como ATCasa, que cataliza
la reacción:
Carbamil fosfato + L-aspartato ---------------------------
-----------> N-carbamil-L-aspartato + PPi

Que corresponde a la etapa inicial de la

biosíntesis del nucleótido de pirimidina (CTP). El CTP,
producto final actúa como modulador negativo de la
ATCasa. Un modulador positivo de esta enzima es el
ATP, que invierte el efecto inhibidor del CTP.
ATCasa
Síntesis de pirimidinas

ATP
+

Asp + CP Carbamil aspartato CTP

ATCasa

El producto final de la vía, CTP (citidin trifosfato) inhibe a la

primera enzima de la ruta metabólica, Aspartato transcarbamilasa

Al mismo tiempo, dicha enzima puede ser activada por ATP

 Retroalimentación negativa en vías metabólicas, 1

Síntesis de Isoleucina

Thr α-cetobutirato Ile

Treonina
desaminasa

El producto final de la ruta, Isoleucina, inhibe a la primera

enzima de la misma, Treonina desaminasa
Mecanismos de actividad reguladora
de las enzimas alostéricas.

Estudia los mecanismos moleculares

mediante los cuales la unión del modulador al
centro regulador puede, alterar la actividad del centro
catalítico. Esta explicación se ha obtenido de los
estudios con la hemoglobina, a través de dos modelos:
Secuencial y el de Simetría.
Modelo de
simetría.

Modelo propuesto por J. Monod et al.

Establece que la unión de la primera molécula de
sustrato incrementa la tendencia de las restantes
subunidades a experimentar transición a la forma
de elevada afinidad, a través de un efecto de todo o
nada. Hallándose todas las subunidades en estado de
baja o elevada afinidad.
 Modelo MWC
Forma R

s s s s s s s
s s s

i i i
i i i i i i i

Forma T
Modelo secuencial.

Modelo propuesto por D.E. Koshland. Aplicable

a las enzimas alostéricas que poseen multiples
subunidades y que se suponen que existen en dos
conformaciones diferentes, donde cada una puede
experimentar cambios secuenciales individuales en su
conformación entre los extremos de todo o nada.
Pueden existir diversos estados de conformación
intermedios, cada uno con su propia actividad
catalítica intrínseca. Este modelo propone una
sintonización más fina de la actividad de la enzima
alostérica.
Modificación covalente de las enzimas
reguladoras

Las formas activas e inactivas son

interconvertibles por modificación covalente de sus
estructuras que son catalizadas por otras enzimas.
Ej: glucógeno fosforilasa de los tejidos animales,
que cataliza la degradación del polisacárido de
reserva glucógeno en glucosa -1-fosfato.
 GLUCÓGENO FOSFORILASA

1:- Esta enzima presenta dos formas, la fosforilasa a,

forma activa y la fosforilasa b menos activa.
2:- La fosforilasa a es una proteína oligomérica con
4 subunidades principales. Cada una con serina
fosforilada en su OH. Estos grupos fosfatos
presentes en las formas a, pueden separarse por la
fosforilasa-fosfatasa, para entregar fosforilasa b.
3:- La fosforilasa b, puede reactivarse por la acción
de la fosforilasa-quinasa
4:- Por tanto la actividad de la fosforilasa del glucógeno
es regulada por enzimas que desplazan el equilibrio
entre sus formas activa e inactiva.
 Activación covalente de los
zimogenos.

Tipo de regulación enzimática que cataliza

los precursores inactivos de las enzimas (zimógenos),
para dar las formas activas. Ej. Pepsina, tripsina y
quimotripsina, que se sintetizan como zimógenos
inactivos; pepsinógeno , tripsinógeno y
quimotripsinógeno.
Isozimas.

Formas múltiples de una enzima determinada,

que puede presentarse en una sola especie de
organismo e incluso en una sola célula. Se pueden
separar por electroforesis en gel de los
extractos celulares. Las isozimas difieren en su
composición en aminoácidos y por tanto en los valores
de pH isoeléctricos. Ej: La lactato -deshidrogenasa,
aparece en 5 formas isozimicas diferentes