ANLISIS CUALITATIVO Y CUALITATIVO DE DROGAS CON TANINOS

Huamani Cruz C. Mendoza de la Rosa E. Limaymanta Gonzales J. Godoy Castro E. Evangelista Tenorio E.

RESUMEN:

Palabras claves: ABSTRACT:

Keywords:

INTRODUCCION Los taninos son compuestos sintetizados de forma natural por las plantas. En funcin del origen botnico del tanino ste pertenecer a un grupo qumico distinto, pero todos pueden unirse a protenas. Esto nos explica el empleo de taninos en vindicacin: en mosto pueden usarse como agentes claricantes y en vino como aditivo. Nuestros taninos protegen y refuerzan la estructura, el cuerpo y la fruta de los vinos, destacando las caractersticas varietales. Son seleccionados en base a estrictos controles de pureza y calidad, para obtener vinos redondos, armoniosos y aterciopelados.1 CLASIFICACIN: La clasificacin de los taninos se realiza comnmente en dos grandes grupos: Taninos condensados o proantocianidnico o no hidrolizables, cuya particularidad es que liberan tras una hidrlisis cida una antocianidina. En el caso del tanino de pepita se libera cianidina, por lo que se denomina procianidina. En el caso del tanino de hollejo se trata de una mezcla de procianidina y prodelfinidina. El nombre genrico de proantocianidina se usa cuando se desconoce la antocianidina formada. Qumicamente se trata de polmeros de flavanoles.
2

carboxilo de los grupos hexahidroxidifnicos del cido elgico, mientras que los galotaninos estn constituidos por ncleos de glucosa en forma cclica que forman enlaces con la funcin cida del cido glico. En ambos casos se trata de estructuras de una 2 complejidad relativa (Figuras 1 y 2).

Figura 1: Derivados de la hidrlisis de los taninos hidrolizables a) cido 3, 4, 5 trihidroxibenzoico (c. Glico) b) cido elgico.

Taninos hidrolizables, en los cuales despus de una hidrlisis cida se libera cido glico o cido elgico. Se denominan galotaninos o elagitaninos respectivamente. Los elagitaninos estn estructurados como molculas lineales de glucosa enlazadas a las funciones

Figura 2:: Flavan-3-ol. Monmero estructural del que derivan los taninos condensados

DROGAS CON TANINOS: Los taninos industriales para agroalimentario y farmacutico uso son

obtenidos de diversas especies vegetales mediante su extraccin de las partes leosas, frutos o agallas. En enologa se utilizan comnmente como coadyuvante de clarificacin de vinos y mostos, y particularmente, en vinificacin en tinto, como coadyuvante de afinado, buscando la estabilizacin de la materia colorante y la estructuracin armnica de los vinos. La calidad del producto final depende de su riqueza en polifenoles totales y ms especficamente de la tipologa y concentracin en el principio activo, es decir, de tanino. A partir de aqu se empiezan a distinguir notables diferencias entre los productos que se pueden encontrar en el mercado. La cantidad de tanino depende, adems de su origen botnico, de su proceso de obtencin (atomizacin, liofilizacin, evaporacin, etc.), del tipo de solvente (etanol, agua, etc.) y del tiempo de extraccin, pudiendo obtener, como demuestra la tabla II, un rango de concentracin del principio activo muy amplio, lo cual condiciona sin duda la calidad de los resultados finales tras su utilizacin.2

La tara, como fuente natural integral (tallo, hojas y frutos) es utilizada desde la poca prehispnica en la medicina folclrica o popular como: astringente, cicatrizante, antidisentrico, tambin como mordiente en teidos. Se atribuye estas propiedades a su gran potencial como antioxidante. 3 Las vainas, previamente despepitadas, representan aproximadamente el 62% del peso del fruto, en esta se concentra la mayor parte de los taninos. Las vainas secas son molidas para obtener polvo de tara de diferente granulometra (grueso o ultrafino), del que se puede obtener un extracto acuoso que luego de ser decantado/filtrado, concentrado y secado por atomizacin se obtiene extracto tnico de tara, del que se puede obtener cido tnico, cido galotnico y cido glico.3 En los ltimos aos se ha incrementado la aplicacin industrial de la tara, debido a que sus vainas son fuentes importante de taninos, un compuesto fenlico que se utiliza en la industria como clarificador del vino, como sustituto de la malta en la elaboracin de cerveza y como materia prima para la produccin de cido glico que es utilizado como antioxidante en la industria de los aceites.4

La tara (Caesalpinia spinosa) es un rbol de origen peruano que crece en las zonas secas. El Per es el mayor productor de tara en el mundo con el 80% de la produccin mundial. La mayor parte de esta produccin se destina a la exportacin, como polvo de vaina de tara a pases como: Argentina, Italia, Estados Unidos, Alemania, Brasil, Uruguay, Blgica, China, Sudfrica, Mxico, Corea, Suiza y Francia3

Figura 3 ; Caesalpinia spinosa (Tara)

MATERIALES Y METODOS:

b. Anlisis Cuantitativo: Se separa 10 mL de la solucin obtenida en la etapa de extraccin de la harina de Tara y se procede a titular con Yodo segn como se muestre en los siguientes esquemas:
PREPARACIN DEL PATRN:

MUESTRA:

YODO 2.5% GASTO: C

YODO 2.5% GASTO: A

10 mL de solucin muestra problema + 2mL de NaHCO3 + c.s.p para 20 mL con agua destilada

10 mL de solucin de cido tnico 1% + 2mL de NaHCO3 + c.s.p para 20 mL con agua destilada

En las tres titulaciones el punto final de la reaccin se determina con tiras de papel almidonado (indicador externo), vira a violeta intenso en el punto de equivalencia. El blanco nos servir para determinar el gasto real de la titulacin. Gasto A Gasto B = A-B Gasto C Gasto B = C-B

PREPARACIN DEL BLANCO:

YODO 2.5% GASTO: B

Se determinara la cantidad de g obtenidos en 10 mL de muestra segn:

A-B -----------

0.1 g (patrn)
X

C-B -----------

X = contenido de taninos (g) en 10 mL de muestra problema

2mL de NaHCO3 + c.s.p para 20 mL con agua destilada

Expresar los resultados en porcentajes de taninos en la muestra

PREPARACIN DE LA

RESULTADOS: a. Anlisis Cualitativo Clculos: - Calculo del gasto real 9.1 mL 1.4 mL = 7.7 mL 8 mL 1.4 mL = 6.6 mL

- Determinacin cantidad de g obtenidos en 10 mL de muestra:

7.7 mL -----------

0.1 g (patrn) X

6.6 mL -----------

X = 0.085 g taninos en 10 mL en la muestra

b. Anlisis Cuantitativo:

Expresando los resultados en porcentajes de taninos en la muestra: 0.085g taninos ----- 10 mL 0.8571g taninos ----- 100mL

Gasto del patrn: 9.1 mL

Gasto del blanco: 1.4 mL

Gasto de la muestra: 8 mL

1g de tara ----- 100 % 0.8571 ----- X% X = 85.71 %

DISCUSIONES:

el yodo metlico el cual est en medio alcalino. La cantidad de taninos que encontramos en nuestra muestra fue de 85.71% , es decir el procedimiento tuvo un rendimiento muy cercano al 100 % .

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: 1. Gama de Taninos naturales. Herramienta para anar la impresin sensorial del vino. La Littorale Enologia S.L. (Espaa) [Disponible en] [www.lalittorale.com/es/ACTUALIDAD/ Feb09/internet_Tannin_E.pdf] 2. lvarez J.M. Tanino: la revolucin enolgica mito o realidad. Revista Enologa 2007; vol n2. 3. Campos Gutierrez, D. Obtencin y caracterizacin de taninos hidrolizados de tara (Caesalpinia spinosa) y evaluacin de su eficacia antioxidante en carnes y aceites vegetales. Per biodiverso (Lima, Per) 2010 4. Azeredo, H.; Faria, J. y da Silva M. Minimization of peroxide formation rate in soybean oil by antioxidant combinations. Food Research International 2004; 37, 689694.

CONCLUSIONES: La tara presenta taninos hidrolizables del tipo taninos glicos. El anlisis cuantitativo de taninos de la extraccin de harina de Tara se pudo determinar porque el cido tnico fija

CUESTIONARIO 1. Explique las funciones de los taninos en las especies vegetales En las plantas cumplen funciones de defensa ante el herbivorismo. Los taninos en general son toxinas que reducen significativamente el crecimiento y la supervivencia de muchos herbvoros cuando se adicionan a su dieta. Los taninos pueden inactivar las enzimas digestivas de los herbvoros y crear complejos agregados de taninos y protenas de plantas que son difciles de digerir. Adems, tienen potencial de producir rechazo al alimento ("antifeedants" o "feeding repellents") en una gran diversidad de animales. Los mamferos como la vaca, el ciervo y el simio caractersticamente evitan a las plantas o partes de las plantas con alto contenido de taninos. Las frutas no maduras, por ejemplo, con frecuencia tienen altos contenidos de taninos, que pueden estar concentrados en las capas celulares ms externas de la fruta.1 Es interesante el dato de que los humanos usualmente prefieren un cierto nivel de astringencia en las comidas que contienen taninos, como las manzanas, las zarzamoras, y el vino tinto. Recientemente, son los taninos del vino tinto los que mostraron poseer propiedades de bloquear la formacin de endotelina-1, una molcula seal ("signaling molecule") que produce la constriccin de los vasos sanguneo2, lo cual disminuira el riesgo de enfermedades cardacas a aquellos que consuman vino tinto en forma moderada. Si bien hay taninos especficos que pueden ser saludables para el hombre, en general son txicos, debido a las mismas propiedades que los hace buenos para la curtiembre: su capacidad de unir entre s protenas de forma no especfica. Durante mucho tiempo se pens que los taninos formaban complejos con las protenas del intestino de los herbvoros formando puentes de hidrgeno entre sus grupos hidroxilo y los sitios electronegativos de la protena, pero evidencia ms reciente tambin avala una unin covalente entre los taninos (y otros compuestos fenlicos provenientes de las plantas) y las protenas de los herbvoros que los consumen.1 Los taninos de las plantas tambin funcionan como defensas contra los microorganismos. Por ejemplo, el corazn de madera muerta de muchos rboles contiene altas concentraciones de taninos que ayudan a prevenir el desmoronamiento por ataques de hongos y bacterias patgenos.1

2. Describa los principales mecanismos de accin que expliquen el efecto antidiarreicos de los taninos. En los pases en desarrollo, un cuarto de la mortalidad infantil est relacionada con la diarrea . Lalas tasas de mortalidad ms altas se han informado de que en nios menores de cinco aos de edad. Durante la pasada decada la terapia de rehidratacin oral, ha reducido muertes por enfermedad diarreica aguda, mientras que la diarrea crnica sigue siendo un problema que

amenaza la vida de los diferentes pases del mundo, en las que la malnutricin es un factor de co-existente y complicacin comn. Nmero de factores, talescomo infecciosa, inmunolgica y nutricional ha sido involucrados en la perpetuacin del sndrome diarreico .Muchas plantas convenientemente disponibles en la India se utilizan en la medicina tradicional para el tratamiento de la diarrea y la disentera. De las plantas autctonas usadas, Andrographis paniculata, Asparagus racemosus, Butea monosperma, Cassia auriculata y otros. Varios estudios han demostrado que la administracin previa con algunos extractos de plantas tenaun efecto protector en el tracto intestinal. En el estudio citado , etanol y extractos acuosos de Asparagus racemosus que no han sido estudiados hasta ahora, sern evaluado por su potencial anti-diarreicas en contra de la diarrea inducida por aceite ricino, la motilidad gastrointestinal en la prueba preparado de carbn y PGE2. Entero estancamiento inducida enRatas Wistar albino. El etanol y el extracto acuoso de Asparagus racemosus exhibi actividad anti-diarreicas significativa contra aceite de ricino diarrea inducida en ratas. Los extractos tenan una actividad similar a la loperamida, cuando se prob en 200 y250 mg / kg y reduccin estadsticamente significativa en la frecuencia de defecacin y la humedad de la fecal excrementos en comparacin con las ratas de control no tratadas. Es ampliamente conocido que el aceite de ricino o cido ricinoleico su componente activo induce cambios de permeabilidad en fluido de la mucosa y el transporte de electrolitos que resulta en una respuesta hipersecretor y diarrea. La estudios experimentales en ratas demostraron un aumento significativo en la vena porta de la concentracin de PGE2 despus administracin oral de aceite de ricino. Ricinoleico cido aument notablemente la PGE2 contenido en el intestino lumen y tambin causado en aumento de la secrecin neta del agua y electrolitos en el intestino delgado. Los resultados indican que el etanol y acuosa extracto de Asparagus racemosus posee significativa actividad anti-diarreicas debido a su efecto inhibidor tanto sobre la propulsin gastrointestinal y secrecin de fluidos. La datos obtenidos son consistentes con el informe de la literatura sobre actividad antidiarreico de la raz pubescens Asparagus mediante la prueba de la motilidad gastrointestinal y diarrea oilinduced ricino y la acumulacin intraluminal de fluido en ratas . El efecto inhibidor del extracto justificado el uso de la planta como un agente anti-diarreica no especfica en la medicina popular. Otras investigaciones detalladas estn en marcha para determinar la exacta fitoconstituyentes que son responsables de la actividad antidiarreica3. 3. Describa los principales mtodos de cuantificacin de taninos

4. Proponga la metodologa de trabajo para la extraccin y cuantificacin de taninos y acido glico de la tara

Estudio de la cintica de hidrlisis de taninos:

Se realiz un proceso de extraccin de los taninos y una hidrlisis cida; teniendo como variable independiente el tiempo de hidrlisis (15 niveles) y variables dependientes la concentracin de cido glico libre y compuestos fenlicos totales. Para la evaluacin de las caractersticas antioxidantes de los taninos hidrolizados, se procedi a una purificacin del cido sulfrico, mediante una separacin lquidolquido con acetato de etilo. 4

a. Extraccin.- Se realiz una extraccin con acetona al 80% (solvente que no

interfiere con el proceso de hidrlisis y que garantiza una mxima extraccin), con una relacin materia prima: solvente de 1: 100 (p/v), durante 20 horas a 4 C; luego se centrifug a 4000 rpm durante 15 min, obtenindose el extracto entero (EE). El EE se concentr a vaco a 38 C, para eliminar la acetona luego se resuspendi en agua destilada; se enfri a 4 C y mantuvo durante 16 horas a esta temperatura y posteriormente se centrifug a 4000 rpm por 15 min, con el fin de conseguir una clarificacin adecuada. El extracto acuoso obtenido se denomina extracto bruto (EB).

b. Hidrlisis.- Al EB con una concentracin de taninos de 20 mg glico equi./ml se

adicion H2SO4 hasta una concentracin 2N y se someti en bao Mara a 100C por diferentes tiempos: 0; 0.5; 1; 1; 2; 4; 5; 6; 8; 9; 20; 24 y 28 horas. El extracto fue centrifugado para obtener el extracto hidrolizado (EH), al cual se determin su concentracin de cido glico y compuestos fenlicos totales y se determin el grado de hidrlisis (GH) mediante la siguiente relacin:

c.

Purificacin.- El EH, se someti a una purificacin mediante una separacin

liquido-liquido con acetato de etilo, en una relacin 1:2 (v/v) hidrolizado: acetato de etilo, dos veces consecutivas con la finalidad de eliminar el cido sulfrico en la fase acuosa. El acetato de etilo fue removido por evaporacin al vaco a 38 C hasta sequedad, aproximadamente 5 minutos, recuperndose los compuestos con etanol absoluto.

Figura a: Proceso de extraccin

5. Explique el fundamento de la valoracin de taninos realizada en practica

Referencias bibliogrficas:

1. GW Felton, K Donato, RJ Del Vecchio, SS Duffey. 1989. "Activation of plant foliar oxidases by insect feeding reduces nutritive quality of foliage for noctuid herbivores". Journal of Chemical Ecology 15: 2667-2694. 2. R Corder, JA Douthwaite, DM Lees. 2001. "Endothelin-1 synthesis reduced by red wine". Nature. 414: 863-864. 3. Venkatesan N, Vadivu T, Sathiya N, Arokya A, James BP. Anti-diarrhoeal potential of Asparagus racemous wild root extract in laboratory animals. J Pharm Pharmaceut Sci 2005; 8: 39-46 4. Campos Gutierrez, D. Obtencin y caracterizacin de taninos hidrolizados de tara (Caesalpinia spinosa) y evaluacin de su eficacia antioxidante en carnes y aceites vegetales. Per biodiverso (Lima, Per) 2010