Propiedades qumicas de las protenas

Obj.: Estudiar los efectos de los diferentes cidos para la precipitacin de las protenas. (Tipos de cidos) Estudiar los efectos de las sales en la solubilidad de las protenas. ([ ]bajas y altas de sales) I. Fundamento terico: Solubilidad de las protenas. Los mtodos para aislar protenas y enzimas dependen de la precipitacin, hay q considerar los factores que afectan su solubilidad. Es necesario extraer protenas de los tejidos, para determinar la concentracin de algn metabolito y esto se puede lograr precipitando las protenas tisulares.

Efecto del PH

Efecto de las sales

Precipitacion con acidos

Precipitacion por metales pesados

Efecto del PH El pto. Isoelctrico de una protena es el PH con carga neta cero. EJ: Ovoalbulima 4.6 El PH es caracterstico para cada protena, ya que la compasin de los Aa es variables para cada una de ellas. La atraccin electrosttica se debe a las cargas individuales. Si el PH es cambiado la carga neta aumenta, por lo tanto la repulsin mantiene a las protenas en la solucin, y la solubilidad de una protena es menor en el pto. Isoelctrico. Efecto de las sales Las [ ] de sales favorecen la solubilidad de las protenas, por la interaccin de los iones de la sal con los grupos inicos de las protenas, lo que hace las interacciones protena-protena (salting-in). Las [ ] de sales precipitan las protenas de la solucin, se debe por la competencia entre las protenas y los iones de sales por las molculas de agua en el momento de la solvatacin. (salting- out)

 La molcula de agua son insuficiente para la solvatacin de protenas y la interaccin protena-agua q la interaccin protena-protena ocurriendo la precipitacin. Sulfato de amonio y la tcnica de salting-out es usado para la purificacin de protenas.

,mientras

Desnaturalizacin consiste en la perdida de la conformacin de las protenas (estructura cuaternaria, terciaria y secundaria) sin alterar la primaria. Las protenas desnaturalizada son menos solubles, insoluble en su pto isoelctrico, posee una viscosidad alta (desenrollamiento).

Precipitacin con acido. Los cidos precipitan protenas, pq las deja con carga neta positiva y en este estado las molculas pueden ser precipitadas por la accin de los aniones de los cidos. Y tb puede desnaturalizarla. La precipitacin con cidos y metales pesados pueden ser reversibles si se remueve el agente precipitante.

Precipitacin por metales pesados. Cuando varios grupos(-S, -CO2, -NH2) se unen a un solo ion de metal quelacin La unin se realiza cuando la protena est en una solucin cuyo PH es mayor (bsico) al pto. Isoelctrico, quedando con carga neta negativa, en estos casos la unin produce la neutralizacin, lo q causa la precipitacin de la protena. Nota: protena tiene pto. Isoelctrico leve% acido. II. Experimental. 2.1 Tipos de cidos. En los 3 tubos de ensayos precipitaron las protenas (soluc. Turbia) 1.- HClO4 (Ac. Fuerte): Pp inmediata%, porq aplica mas carga positiva 2.- H2SO4 (Ac. Fuerte): Pp inmediata%, porq aplica mucho mas carga positiva (terico) 3.- HCl (Ac. Fuerte): Pp ms lento y menos turbio, es el q tiene menos carga positiva (hidrgenos), por lo q se demora en precipitar. Al dejarlo reposar a los 10 min la protena se empieza a aconchar (Pp en el fondo del tubo de ensayo). Ovoalbmina tiene un pto. Isoelctrico 4.6; tiene una carga negativa y el acido tiene una carga positiva , al juntarse se neutraliza las cargas y precipita las protenas. La solucin turbia es donde se encuentra la protena desnaturalizada que aumento su viscosidad (por desenrollamiento).

2.2 Metales pesados Sal de plomo insolubiliza a la solucin, precipitando a las protenas (se demora en precipitar). La protena debe estar al lado alcalino de su pto. Isoelctrico, es para q se realice las uniones y se produzca la neutralizacin, por ende la precipitacin de la protena. 2.3 salting in Ocurre precipitacin, porq la protena esta soluble en la solucin.