Bioquimica Laboratorio

UNIVERSIDAD DE CUNDINAMARCA Extensin Facatativa FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
PROGRAMA DE INGENIERA AMBIENTAL PRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRACTICA 1 Bioseguridad Introduccin Las normas de bioseguridad son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud y seguridad de las personas que realizan actividades en el laboratorio frente a riesgos procedentes del manejo de agentes biolgicos, fsicos o qumicos. Objetivos

Identificar mtodos y tcnicas para la observacin cuantitativa de poblaciones microbianas Aplicar criterios disciplinares para la intervencin segura en ambientes de laboratorio
Normas de Bioseguridad En el laboratorio de Microbiologa todas las reas deben estar debidamente marcadas con la seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin. Se deben utilizar siempre elementos de barrera apropiados segn las necesidades: blusa blanca limpia y en buen estado, guantes, tapabocas, gorro y gafas protectoras. No se debe pipetear con la boca. El pipetear lquidos con la boca es una prctica inadecuada y altamente riesgosa. Deben utilizarse pipetas mecnicas para evitar cualquier riesgo de contaminacin oral. Todas las pipetas deben tener tapones de algodn para reducir la contaminacin de los dispositivos de pipeteo. Las pipetas contaminadas deben sumergirse en un recipiente irrompible con hipoclorito de sodio al 5% a 5000 ppm durante 18 24 horas. En la zona de trabajo del laboratorio no se debe comer, beber, fumar, guardar alimentos ni aplicar cosmticos. No se deben llevar a la boca lpices, etiquetas o cualquier otro material utilizado en el laboratorio. Para evitar esto acostumbre el uso de tapabocas. Se debe mantener el laboratorio limpio y aseado. Una vez concluida la prctica, se debe organizar el laboratorio, desinfectando la superficie de trabajo con hipoclorito de sodio a 500 ppm o alcohol y dejando tanto el material como el equipo utilizado limpio y en el lugar adecuado. Se deben lavar las manos despus de haber manipulado material infeccioso, as como al abandonar el laboratorio.
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Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados se deben descontaminar antes de eliminarlos o de limpiarlos para su reutilizacin. Se deben introducir en bolsas de plstico de cierre hermtico con cdigo de color, para esterilizar en autoclave o incinerar fuera del laboratorio. Slo se debe permitir el paso a la zona de trabajo del laboratorio a las personas autorizadas. Durante el trabajo se mantendrn cerradas las puertas del laboratorio. Todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con materiales potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes cuando se manipulen muestras o cultivos que contengan posibles patgenos. Los guantes deben ser desechados antes de salir del rea de trabajo. Jams se debe salir de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se debe coger el telfono. Si un cultivo lquido se voltea o salpica, se debe cubrir el rea con hipoclorito de sodio a 10.000 ppm y avisar al instructor. Posteriormente se debe enjuagar las manos con jabn y agua. Marque y rotule adecuadamente las lminas, cajas y tubos con las siembras realizadas. Estos deben llevar claramente escrito en un lugar visible, el nombre o identificacin del grupo de trabajo, el ensayo o experiencia realizada, el medio de cultivo, la temperatura de incubacin y la fecha. A la terminacin de cada prctica es indispensable que organice adecuadamente las cajas o tubos por incubar y los entregue segn instrucciones. Es importante conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio. de igual manera el manejo de cada uno de los equipos existentes en el laboratorio. El transporte de las muestras dentro o entre laboratorios se debe realizar de tal manera que, en caso de cada, no se produzcan salpicaduras. Lo recomendable es hacerlo en cajas hermticas o neveras transportables. Estas cajas o neveras deben ser rgidas y resistentes a los golpes, contar con materiales absorbentes en su interior y de fcil desinfeccin. Se deben etiquetar o identificar de forma oportuna y no deben ser utilizadas para otros fines. Bajo ningn concepto se pueden transportar las muestras a mano. En la nevera no deben almacenarse cultivos de microorganismos patgenos por inhalacin en recipientes que no estn convenientemente cerrados. No deben almacenarse reactivos que contengan compuestos voltiles inflamables (ter etlico, por ejemplo) en neveras que no posean un sistema de proteccin antideflagracin. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. Nivel de Contencin
Al hablar de contencin, se hace referencia a las medidas de seguridad (protocolos y mtodos) que se deben tener en cuenta en el laboratorio al manejar materiales o agentes biolgicos (determinadas bacterias, hongos, virus, Rickettsias, Chlamidias, parsitos, productos recombinantes, alrgenos, cultivos de clulas humanas y animales y los agentes infecciosos potenciales que contengan estas clulas, viroides, priones) potencialmente infecciosos, con el fin de eliminar o reducir el riesgo que estos podran ocasionar tanto a las personas que estn expuestas a ellos como al medio ambiente. Para el manejo de agentes biolgicos existen cuatro niveles de contencin o protocolos a seguir segn el nivel de riesgo de infeccin, y la funcin del laboratorio. Nivel 1. Es el nivel bsico en el cual los agentes biolgicos no causan enfermedades en los seres humanos, pero se deben tener precauciones en el manejo de estos agentes para evitar la contaminacin del medio ambiente. Este nivel hace referencia a los laboratorios para prcticas estudiantiles y deben seguir protocolos para el diseo, construccin de laboratorios y equipos. En este nivel es importante tener cuidado con las personas inmunodeprimidas debido a que microorganismos no causantes de enfermedades en personas sanas, pueden convertirse en patgenos al ser manipulados por personas inmunodeprimidas. Nivel 2. Este nivel hace referencia a agentes biolgicos de riesgo moderado que pueden causar enfermedades en las personas que los manipulan si no siguen los protocolos de seguridad. Generalmente aplica en laboratorios clnicos y diagnsticos, y algunos laboratorios de enseanza donde se manipulan sangre, fluidos corporales (lquido cefalorraqudeo, secrecin vaginal), tejidos o clulas humanas. La contaminacin puede ser ocasionada por cortes accidentales, por salpicaduras o ingestin del material contaminante, motivo por el cual ha de tenerse extremo cuidado con agujas o instrumentos contaminados. El uso de tapabocas, guantes, el cuidado en el manejo de objetos corto punzantes, entre otros, son medidas de prevencin tiles. Entre las posibles enfermedades ocasionadas en este nivel estn las causadas por virus como son. el sida, la hepatitis y la toxoplasmosis. Nivel 3. Es el nivel relacionado con estudios clnicos, diagnstico, de enseanza e investigacin donde se manipulan agentes biolgicos que no son autctonos y pueden transmitirse por va respiratoria originando enfermedades graves como es el caso de la tuberculosis causada, por la bacteria Mycobacterium tuberculosis. Este nivel exige un mayor y estricto grado de cumplimiento en las medidas de seguridad como colocacin de la seal de riesgo biolgico, acceso restringido al personal, instalaciones con ventilacin que eviten la liberacin de aerosoles infecciosos a otras zonas, tratamiento del aire mediante filtros. En este nivel se pone especial nfasis en evitar la autoinoculacin. Nivel 4. Es el nivel de mayor riesgo de contaminacin, para el que no existe ningn tratamiento clnico. Razn por la cual el diseo de la construccin y el equipo de seguridad debern estar en un lugar totalmente aislado, con sistemas de ventilacin y
manejo de desechos que impidan la salida de los agentes contaminantes. Ejemplos de agentes contaminantes en este nivel seran Ebola y otros virus que producen fiebre hemorrgica. Cuestionario desarrollo en el laboratorio 1. Que es bioseguridad? 2. Cules seran para usted las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiologa? 3. Cmo puede usted evitar en el laboratorio daos a su salud? 4. Mencione las clases de esterilizacin, cuales son los agentes de esterilizacin con ms uso en el laboratorio; en que consiste cada uno de ellos y para qu materiales se utilizan.
PRACTICA 2 DETERMINACION DE pH Y ACIDEZ DE PRODUCTOS 1. OBJETIVO Determinar el pH de diferentes sustancias Determinar el contenido de acidez de diferentes sustancias Identificar la relacin existente entre pH y Acidez 2. FUNDAMENTO TERICO La teora de Brnsted-Lowry define los cidos como las sustancias que donan iones hidronios, H30+ (protones) y las bases como las sustancias que reciben iones hidronios. De esta manera, solo existe el cido, si la base est presente y viceversa. La ecuacin general se puede escribir as: HA + cido I H20 Base II H30+ cido II + ABase I
En esta ecuacin A- es la base conjugada de HA. Por otro lado H30+ es el cido conjugado de H20. Los cidos y bases se clasifican en fuertes y dbiles. Los cidos y bases fuertes son aquellas sustancias que se disocian (ionizan) totalmente. Para los cidos fuertes, la concentracin de iones hidronios es muy grande. Los cidos y bases dbiles son las sustancias que en soluciones acuosas se disocian (ionizan) parcialmente. Para los cidos dbiles la concentracin de iones hidronios (H30+) es muy pequea.
Un cido de Brnsted-Lowry donar iones hidronios (H30+) a cualquier base cuyo cido conjugado sea ms dbil que el cido donante. Se define el pH como el logaritmo decimal negativo de la concentracin de los iones hidronios. pH = - log [H30+] Las soluciones acuosas de cidos tienen un pH < 7 y las soluciones bsicas un pH > 7 y las soluciones neutras pH = 7 Un indicador cido-bsico es un cido dbil que cambia de color cuando pierde iones hidronios. Por ejemplo, la fenolftalena, que es un indicador que cambia de incolora (en medio cido) a rosado intenso (en medio bsico). Fenolftaleina Incoloro + 0HFeolftalenaRosado + H20
En una solucin neutra las dos formas de la fenolftalena incolora y rosada se encuentran en equilibrio y predomina la incolora. Para medir el valor exacto del pH de una solucin o producto, se utiliza un pH-metro. Tambin utiliza para indicar la caracterstica de cido de una sustancia el contenido o porcentaje de acidez. Mediante una determinacin, generalmente gravimtrica, se determinan los equivalentes de cido que se encuentran presentes en la sustancia. Ya que las sustancias tienen en general ms de un cido haciendo parte de su composicin, se refiere el contenido de acidez en trminos de que se encuentra e mayor proporcin. 3. BSQUEDA DE INFORMACIN Los estudiantes debern ampliar el fundamento terico presentado en esta gua y si es el caso, completarlo. Especficamente consultar formas de determinar acidez y pesos equivalentes de los cidos ctrico y lctico que se requerirn para los clculos al finalizar la prctica.
4. MATERIALES Y REACTIVOS - Beakers o vasos de precipitado de 50 y 100 m - Erlenmeyers - Embudo de vidrio - Potencimetro (opcional)/ papel para determinar pH - Balanza analtica Balanza de precisin - Frasco lavador - Agitador - Papel de filtro - Bureta de 25 50 ml - Pipetas de 10 ml - Un pipeteador o pera de caucho - Agua destilada - Hidrxido de sodio 0.1 N - Fenolftalena en solucin alcohlica 1% - Materiales adicionales: Naranja o limn, jugos (preferiblemente diferentes sabores), leche, un trozo de carne o hgado crudo, una muestra de orina, agua (potable y de charco), leche de magnesia, vinagre 5. PROCEDIMIENTO A. DETEMINACIN DE pH En el caso de la papa, la naranja y el limn, se precisa obtener su extracto o jugo para realizar la determinacin. Pselos, por separado y tritrelos o lcuelos con un 100 150 ml de agua destilada, agite y filtre a travs de papel de filtro. Tome el filtrado e introduzca en l el electrodo del potencimetro o en su defecto la tira de papel indicador universal de pH. Determine de esta forma el pH de todos filtrados y/o lquidos dispuestos parra esta prctica. Cuando la inicial se encuentra en estado lquido, la determinacin se puede hacer directamente. *Se sugiere verificar que el pH del agua destilada sea 7.0 para evitar que su acidez influya sobre el resultado correspondiente a la muestra. Tome todos los datos necesarios, escriba sus resultados.
B. DETERINACION DE ACIDEZ Tome en un vaso de precipitado pequeo 10 ml del filtrado obtenido de los productos slidos que ha llevado a la prctica; en el caso de sustancias lquidas con densidad similar a la del agua, toma 10 ml del lquido y en caso de sustancias lquidas con densidad diferente a la del agua, tome un vaso de precipitado, pselo, tome la respectiva tara y dispense dentro del mismo 10 g de muestra. Adicione unas tres gotas de solucin de fenolftalena, agite y con ayuda de la bureta dispense la solucin de NaOH lentamente y sin detener la agitacin hasta que observe la aparicin de una cloracin ligeramente rosa. Repita el mismo procedimiento para cada una de las muestras. volmenes de solucin de soda gastados en cada caso. Calcule los miliequivalentes de soda presentes en cada uno de los volmenes utilizados. miliequivalentes = vol (ml) * 0.1 Determine ahora la acidez par cada una de las muestras, considerando que el cido presente en cada muestra sea el cido ctrico o el cido lctico, segn sea el caso. Indique la acidez de cada producto en % p/p 6. TABLAS DE DATOS MUESTRAS valor pH Muestra No 1 Muestra No 2 7. PARA EL ANLISIS DE LA PRCTICA Compare y analice los datos obtenidos. - Hay diferencia entre los valores de pH obtenidos de un producto a otro? - Cual es el pH normal de estos productos? - Que indica el pH en cuanto a calidad y/o funcionalidad de los productos? de peso de volumen de NaOH 0.1 N miliequivalent es % de Acidez la muestra Tome nota de los
- Por qu en algunos casos se indica la acidez como % de cido lctico y en otros como acido ctrico? - Se pueden comparar los datos obtenidos para la acidez? Por que? - Cuales son su apreciaciones generales respecto a la prctica? Justifique
PRACTICA 3 SOLUCIONES BUFFER 1. OBJETIVO Verificar el comportamiento de las soluciones buffer o tampn 2. FUNDAMENTO TEORICO a. Acidos y Bases. El entendimiento de los conceptos de cido y base es esencial para la comprensin del comportamiento bioqumico de las molculas orgnicas. Las macromolculas poseen caractersticas fisicoqumicas que son muy importantes en la homeostasis. Por ejemplo, las cargas elctricas son importantes en la catlisis enzimtica, as como en la estabilidad de protenas y cidos nucleicos. En general se define un cido como un donador de protones y una base como un aceptor de protones. b. Constante de disociacin. En sistemas cerrados todas las reacciones son reversibles y en la naturaleza muchas de ellas lo son. Los productos formados por los reactantes reaccionan para dar nuevamente origen a los reactantes originales incluso cuando estos estn formando ms productos. Luego de cierto tiempo la reaccin directa e inversa ocurrirn a la misma tasa. Cuando esto ocurre se dice que la reaccin ha alcanzado el equilibrio, que se define como Keq. Un donador de protones y su aceptor correspondiente conforman un par conjugado cido-base. El cido actico, un donador de protones y el anin acetato, su aceptor de protones correspondiente, constituyen por ejemplo, un para conjugado relacionado por la siguiente reaccin: CH3COOH ===== H+ + CH3 COO-
Cada cido tiene un tendencia caracterstica para perder sus protones en solucin acuosa. Cuanto ms fuerte el cido, mayor la tendencia a perder su protn. La tendencia de cualquier cido (HA) a perder su protn y formar su base conjugada (A-) est definida por la constante de disociacin Ka para la reaccin reversible: HA ===== H+ + A-
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Keq =
[[H+] [A-]] / [HA] = Ka
La constante de equilibrio para las reacciones de ionizacin se llama constante de disociacin y se designa como Ka. c. Tampones, Buffers o Amortiguadores. El buen funcionamiento de los sistemas biolgicos requiere de un control estricto del pH. Las enzimas son bastante sensibles a los cambios de pH, tienen una actividad mxima a un pH caracterstico llamado ptimo fuera del cual su actividad se ve afectada notoriamente. Por tal razn, los organismos tiene un control de pH muy estricto y efectivo. La regulacin del pH del suero (pH srico) es necesaria para la supervivencia, el organismo mantiene este valor de pH entre 7,4 +/- 0,4. valores de pH fuera de este rango son perjudiciales para el organismo. Un tampn es una solucin que ante la adicin de cantidades pequeas de H+ o de OH- se resiste a cambios dramticos de pH. Los tampones comunes estn formados por dos sustancias: un cido y su base conjugada. Si tomamos el logaritmo de la constante de disociacin escrita ms arriba Ka Log ka = log [H+] + log [A-] log [HA] Reordenando Multiplicando por 1 De donde log [H+] = log Ka log [A-] + log [HA] -log [H+] = -log Ka + log [A-] log [HA] pH = pKa + log [A-] / [HA]
Que en su forma general es pH= pKa + log (aceptor de protones /donador)
Esta es la ecuacin de Henderson-Hasselbach y permite calcular la relacin molar entre una sal y un cido que forman parte de un tampn para un pH y pK determinados. Una solucin buffer o tampn puede consistir en un cido dbil y su sal (pH 1-7) o un base dbil y su sal (pH 7 14) dependiendo del pH deseado para la solucin buffer. La clave para comprender la accin de un buffer es recordar que un cido dbil o
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base dbil, slo est disociada en una proporcin muy pequea mientras que las sales estn completamente disociadas. La combinacin resultante del cido dbil y su sal completamente disociada resulta en la solucin tampn con el cido mayormente en su forma molecular, una gran proporcin del in comn de la sal y una pequea proporcin del in H+. Podemos ignorar la gran proporcin del in positivo de la sal. d. Curvas de titulacin revelan el pKa de los cidos dbiles. La titulacin se usa para determinar la cantidad de un cido en una solucin dada. Un volumen medido de un cido es titulado con una solucin de una base fuerte de concentracin conocida. La base es adicionada en pequeos incrementos hasta que el cido es consumido (neutralizado) comprobando esto con un indicador o pH-metro. La concentracin original del cido puede ser calculada a partir del volumen y concentracin de la base usada. 2. MATERIALES Y REACTIVOS 3 Beakers de 100 ml papel indicador de pH pipetas solucin tampn 3. PROCEDIMIENTO Tomar 100 ml de solucin tampn fosfato 0.02 M pH 7,5. Medir el pH y separar la solucin en dos beakers de 50 ml. Preparar otros dos beakers con 50 ml de agua cada uno. En el beaker 1: a. agregar 0.5 ml de solucin de HCL 0,1 N a la solucin tampn. Medir nuevamente el pH b. medir el pH de 50 ml de agua destilada. Agregar 0,5 ml de solucin de HCl y medir nuevamente el pH. En e l beaker 2:
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c. agregar
0.5 ml de solucin de NaOH 0,1 N a la solucin tampn.
Medir
nuevamente el pH d. medir el pH de 50 ml de agua destilada. Agregar 0,5 ml de solucin de NaOH y medir nuevamente el pH. En los beakers que contienen la solucin tampn seguir agregando segn corresponda volmenes de solucin de HCl o NaOH, mezclar y medir el pH. Repetir 10 veces 4. INFORME Anote las lecturas realizadas en el pHmetro o con papel indicador Cmo reaccionaron las soluciones tampn al adicionar solucin de cido o base? Como cambi el pH? Cambi el pH del agua al aadir HCl o NaOH? Se comporta la solucin tampn de la misma manera que el agua frente a las adiciones de soluciones? Grafique la respuesta del buffer ante la adicin de diferentes cantidades de cido o base.
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PRCTICA 4 GLCIDOS - CARBOHIDRATOS 1. OBJETIVO Estudiar y comparar algunas propiedades de los azcares. 2. FUNDAMENTO TEORICO Los carbohidratos, llamados tambin hidratos de carbono o glcidos, son un grupo numeroso y diverso de sustancias compuestas principalmente de carbono, hidrgeno y oxgeno y son los aldehdos y cetonas polihidroxilados. Los carbohidratos se forman en las plantas por efecto de fotosntesis a partir de agua y el bixido de carbono bajo efecto de la radiacin ultravioleta y catalizado por la clorofila: 6CO2 + 6H2O + luz UV ----------------- C6H12O6 + 6O2. En el organismo humano los carbohidratos constituyen una fuente de energa, cuando son sometidos al proceso de digestin. Segn la posibilidad de desdoblamiento, los carbohidratos se clasifican en hidrolizables (oligosacridos y polisacridos) y no hidrolizables (monosacridos). Segn los grupos funcionales que poseen, los monosacridos pueden ser aldosas (los que tienen la funcin aldehdo) y cetosas (los que tienen funcin cetona). Segn el nmero de tomos de carbono que contienen, los monosacridos se clasifican en triosas, tetrosas, pentosas, hexosas, etc. GLUCOSA: La glucosa o dextrosa es el monosacrido ms importante. Su estructura corresponde al hexopentol-al y se trata de una aldosa: O=CH - CH(OH) - CH(OH) - CH(OH) - CH(OH) - CH2OH.
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La glucosa se encuentra en composicin de muchas frutas, principalmente la uva. Es un elemento de fcil digestin y provee energa inmediata. En medicina se emplea en forma intravenosa, cuando el paciente necesita una fuente de energa disponible rpidamente. FRUCTOSA: La fructosa es una cetohexosa que se encuentra en algunos frutos y en la miel de abejas. Se obtiene junto con la glucosa en la hidrlisis de la sacarosa. Su frmula es: CH2OH - CO - CH(OH) - CH(OH) - CH(OH) - CH2OH. SACAROSA La sacarosa o azcar de mesa es el disacrido ms importante por su uso como edulcorante. Est formada por el enlace glicosido de las molculas de glucosa y fructosa. ALMIDON El almidn es un polisacrido formado por la polimerizacin tipo condensacin de un elevado nmero de molculas de glucosa y su peso molecular sobrepasa de 300 000. El almidn constituye la reserva de energa ms importante en las plantas, encontrndose en los frutos, tubrculos, races, trigo, maz, etc. Al tratarse con agua caliente, el almidn puede separarse en una fraccin soluble, llamada amilosa (20%) y una fraccin insoluble, llamada amilopectina (80%). La amilosa se reconoce por la coloracin azul intensa que toma en contacto con la solucin de yodo, mientras que la amilopectina da una coloracin rojiza. Bajo el efecto de los cidos y de las enzimas, que actan en la digestin, el almidn se hidroliza en dextrinas (polisacridos de menor peso molecular), desdoblndose finalmente el estado de glucosa, por lo que el almidn constituye una importante fuente de energa. 3. PROCEDIMIENTO MATERIALES Gradilla con 4-5 tubos 2 vasos de precipitacin
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Capsula de porcelana Varilla Espatula Probeta de 25 o 50 ml Glucosa Almidn soluble Miel de abeja Azcar comn Reactivo de Fehling HCl concentrado Lugol Solucin saturada de carbonato de sodio
MONOSACARIDOS Solubilidad en agua: Coloque una pequea cantidad de glucosa en un tubo de ensayo conteniendo 1 ml de agua destilada, y agite. Anote sus observaciones. Prueba de Fehling: En un tubo de ensayo mezcle 10 gotas de solucin A con 10 gotas de solucin B del reactivo de Fehling. A esta mezcla agregue 10 gotas de la solucin de glucosa del ensayo anterior. Caliente la mezcla a bao-mara. Anote sus observaciones. DISACRIDOS Y MEZCLAS DE MONOSACRIDOS MIEL Prueba de Fehling: Disuelva 5 gotas de miel de abeja en 1 ml de agua destilada. Agregue esta solucin a una mezcla de soluciones A y B del reactivo de Fehling (10/10 gotas de cada una) y caliente a bao-mara. Anote sus observaciones. SACAROSA Prueba de Fehling: Disuelva una pequea cantidad de azcar comn en 1 ml de agua destilada, agite y ensaye con el reactivo de Fehling, como en caso anterior. Anote sus observaciones.
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INVERSION DE SACAROSA (HIDROLISIS) Disuelva en 1 ml de agua destilada una pequea cantidad de azcar comn, agite y agregue dos gotas del cido clorhdrico concentrado. Caliente a bao-mara por unos 10 minutos y neutralice con una solucin saturada de carbonato de sodio, hasta que ya no se formen ms las burbujas de bixido de carbono. Ensaye con el reactivo de Fehling como en casos anteriores. Anote sus observaciones. Explique la diferencia de las propiedades de la miel y del azcar comn. ALMIDON (polisacridos) Solubilidad: En un vaso de precipitados ponga 25 ml de agua destilada y caliente a ebullicin. Aparte, en un tubo de ensayo mezcle aproximadamente 0.25 g de almidn y unas gotas de agua destilada fra hasta formar una pasta. Vierta la pasta al agua hirviendo, agitando con la varilla de vidrio. Anote sus observaciones. Prueba de yodo: En un tubo de ensayo ponga unas 10 gotas de la solucin preparada de almidn y adale unas gotas de solucin de lugol (yodo). Anote las observaciones. Ensayo de Fehling.: En un tubo mezcle 10 gotas de solucin A del reactivo de Fehling con 10 gotas de la solucin B. A esta mezcla adicione 10 gotas de la solucin de almidn. Caliente a bao-mara. Anote las observaciones. Transformacin del almidn en dextrina: Con la ayuda de una esptula coloque una pequea cantidad de almidn en una cpsula de porcelana, caliente lenta y suavemente mientras agita con una varilla de vidrio para no quemar el almidn. Cuando el almidn adquiera un color caf, contine calentando 1-2 minutos ms y enfre. Con la esptula pase una pequea cantidad del residuo a un tubo de prueba, aada 2 ml de agua destilada, agite y agregue 2-3 gotas de solucin de yodo (lugol). Anote sus observaciones. Ensayo De Fehling: Tome otro poco del residuo de la cpsula y disulvalo en 2 ml de agua destilada en un tubo de ensayo. Realice la prueba de Fehling, como en casos anteriores. Anote sus observaciones.
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HIDROLISIS DE ALMIDON En un tubo de ensayo coloque 1 ml de la solucin de almidn, aada 5 gotas del cido clorhdrico concentrado. Caliente a bao-mara durante unos 15 minutos. Enfra y neutralice con la solucin de carbonato de sodio hasta que ya no se desprendan ms burbujas de bixido de carbono.. Efecte la prueba de Fehling, como lo hizo en ensayos anteriores. Prueba de yodo: Tome 1 ml de almidn hidrolizado y aada unas gotas de lugol (yodo). Compare el resultado con el ensayo del almidn no hidrolizado 6. PARA EL ANALISIS DE LA PRCTICA o Aparte del in cprico, qu otros iones pueden ser reducidos por la solucin de glucosa? o o Qu nombre qumico tiene el azcar comn? Cul es la diferencia entre la miel de abeja y el azcar comn? Cmo se puede demostrar esta diferencia? Explique, en qu consiste la hidrlisis del almidn.
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PRACTICA 5 LIPIDOS
1. OBJETIVO: Comprobar la solubilidad de los lpidos en diversos solventes. Ensayar las reacciones de saponificacin y la solubilidad de sales metlicas de cidos grasos en agua dura. Ensayar las reacciones de identificacin de colesterol. 2. FUNDAMENTO TEORICO Los lpidos representan una serie de sustancias insolubles en agua, que se encuentran en las clulas animales y vegetales y se pueden extraer con los solventes poco polares como ter, hexano o cloroformo. Los lpidos son los esterides, los terpenos. Las ceras y las grasas. GRASAS Las grasas son productos de esterificacin de cidos carboxlicos de cadena larga (cidos grasos) saturados e insaturados y el glicerol. A las grasas tambin se les llama glicridos. Las grasas lquidas se llaman aceites y son generalmente de origen vegetal. Cuando las grasas se exponen al calor y al aire, stas se oxidan y se descomponen en aldehdos, cetonas y cidos grasos de bajo peso molecular. El proceso de rancidez se debe a la ruptura de las cadenas insaturadas de los cidos superiores que se rompen formando compuestos menores. Las uniones de ster en las grasas son dbiles y se destruyen fcilmente por accin de agua y soluciones cidas y bsicas. La hidrlisis acuosa regenera los cidos grasos y glicerol. En la digestin de grasas esta reaccin sucede bajo accin de las sustancias llamadas enzimas, especficamente, estearasas. La hidrlisis de las grasas con los lcalis se llama saponificacin y da, como producto principal, sal metlica, llamada jabn.
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CERAS Las ceras son steres de cidos grasos de cadena larga y alcoholes primarios de cadena larga. FOSFOLIPIDOS Los fosfolpidos son steres mixtos del glicerol en los que un grupo hidroxlico est esterificado con el cido fosfrico y otros dos con los cidos grasos. ESFINGOLIPIDOS: Son derivados del aminoglicerol, similares a los fosfolpidos en su estructura. Intervienen en la conformacin del sistema nervioso. ESTEROIDES Los esterides se encuentran en las plantas y animales y su estructura anular de 17 tomos de carbono (cuatro anillos) se conoce como ciclo-pentano-perhidro-fenantreno. El esteide ms comn es el colesterol. Se encuentra en la mdula y en forma de los clculos en la vescula biliar. Un adulto tiene como promedio, unos 250 mg de colesterol. El colesterol tiene una reaccin muy peculiar frente al cido sulfrico, por lo que ste se utiliza para su identificacin.
3. PROCEDIMIENTO MATERIALES o o o o o o o Gradilla con 5 tubos Dos vasos Varilla Pinza para tubos Colesterol Solucines de MgCl2, CaCl2, Aceite vegetal
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o o o o o o o o o
Etanol Acetona Cloroformo Benceno Solucin de NaOH 25% Acido sulfrico concentrado Solucin saturada de NaCl Fenolftalena FeCl3
Ensayos de solubilidad. En 5 tubos limpios y secos coloque 0.5 ml de aceite y agregue a cada tubo 2 ml de los siguientes solventes: AGUA, ETANOL, ACETONA, CLOROFORMO y benceno, respectivamente. Agite fuertemente y observe el efecto del solvente en cada uno de los tubos. Anote el resultado en la siguiente tabla: SOLVENTE AGUA ETANOL ACETONA CLOROFORMO BENCENO Saponificacin. En un vaso pese 10 gramos de aceite (o cualquier tipo de grasa) y aada 5 ml de una solucin al 25% de NaOH. Caliente a bao-mara agitando con varilla, durante unos 20 minutos. Aada 10 ml ms de solucin de NaOH y 5 ml de etanol y contine el calentamiento hasta la obtencin de un masa pastosa. Terminado el calentamiento, enfre un poco el vaso y agregue 50 ml de solucin saturada de NaCl para precipitar el jabn y separar el glicerol. SOLUBILIDAD DE ACEITE
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La reaccin, es: CH2-O-CO-R | CH-O-CO-R | CH2-O-CO-R +3 CH2-OH | NaOH - CH-OH | CH2-OH + 3R-COONa jabn
Ensayos del comportamiento del jabn en agua dura: Con el jabn obtenido prepare una solucin acuosa. Coloque 5 ml de la solucin jabonosa en 3 tubos de ensayo y aada a cada uno 3 ml de las soluciones de: MgCl2, CaCl2 y FeCl3. Anote sus observaciones. Escriba las ecuaciones de las reacciones que pudieran tener lugar en estos ensayos. Identificacin del colesterol (reaccin de Salkowsky): En un tubo de ensayo limpio y seco coloque unos 2 mg (0.002 g) de colesterol. Aada 2 ml de cloroformo para solubilizar, luego, con sumo cuidado, agregue 1 ml de cido sulfrico concentrado y observe la aparicin del anillo rojo en la interfase. 5. PARA EL ANALISIS DE LA PRACTICA Aprovechando sus conocimientos en Biologa Celular y revisando las fuentes bibliogrficas, describa en forma muy sinttica la importancia de las grasas, ceras, fosfolpidos, esfingolpidos y esteroles.
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PRACTICA 6 PROTEINAS 1. OBJETIVO Efectuar ensayos fsicos y qumicos caractersticos de una protena. 2. FUNDAMENTO TEORICO Las protenas son las sustancias que conforman los tejidos de los organismos vivientes: los msculos, la piel, las uas, los cabellos, la sangre, leche, huevos, plumas, la sangre, etc. (NOTA: La presencia del exceso de protena (albmina) en la orina es, usualmente, una indicacin del funcionamiento anormal de los riones.) Son sustancias de estructura compleja formando largas cadenas peptdicas. Los aminocidos son los cidos carboxlicos que poseen, adems, una funcin amina, generalmente en posicin alfa con respecto al grupo carboxlico (alfa-aminocidos), pero tambin hay beta-aminocidos. Por ejemplo: H2N - CH2 - COOH (alfa-aminocido) (beta-aminocido) que llegan a tener pesos moleculares
superiores a 300000,000 y su estructura se basa en la unin de unos 20 aminocidos
H2N - CH2 - CH2 - COOH
Los aminocidos se pueden polimerizar mediante la reaccin de condensacin entre los grupos amina de un aminocido y grupo carboxlico, de otro, formando entre ellos una unin llamada enlace peptdico: -CO-NH-: H2N - CH2 - COOH + H2N - CH2 - COOH
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H2N - CH2 - CO - NH - CH2 - COOH
H2O
Las protenas no se pueden analizar con exactitud debido a su complejidad, pero se ha desarrollado una serie de ensayos caractersticos muy sensibles que proporcionan valiosa informacin sobre su estructura y propiedades. 3. PROCEDIMIENTO MATERIALES o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o Gradilla con tubos Vaso de 250 ml Embudo Gasa y algodn Probeta Termmetro Pinzas para tubos Vaso de 600 ml Albmina de huevo Reactivo de Milln NaOH al 20% y al 10% Solucin de NaCl al 1% (suero) Solucin de CuSO4 al 1% Solucin de Pb(CH3COO)2 al 10% Acido ntrico concentrado Agua destilada Solucin de K4[Fe(CN)6] al 10% Alcohol etlico comercial Solucin de ninhidrina al 0.1% Hidrxido de amonio 6M Solucin de AgNO3 al 1%
ENSAYOS DE SOLUBILIDAD
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A los 4 tubos de ensayo coloque aproximadamente 1 ml de clara de huevo (albmina). A cada tubo adale respectivamente 5 ml de:
agua fra agua caliente solucin de NaCl (suero) solucin de NaOH al 20%
Resuma sus observaciones en la siguiente tabla: SOLVENTE AGUA FRIA AGUA CALIENTE SOLUCION DE NaCl SOLUCION NaOH 20% PREPARACION DE LA SOLUCION DE ALBUMINA Vace en el matraz aforado la clara de huevo sobrante de la primera parte. Adicione aproximadamente 1/2 de litro de agua destilada, tape l el matraz aforado y agite fuertemente. Arme un equipo de filtracin utilizando como filtro una gasa medicinal con una capa de algodn en medio y filtre la solucin preparada a un vaso grande. ENSAYOS DE COLORACION Reaccin de biuret: A 1 ml de la solucin de albmina adale 1 ml de la solucin de NaOH al 10% y gota a gota la solucin de CuSO4 hasta observar cambios. La formacin de una coloracin violeta denota la presencia del enlace peptdico -CO-NH-, ya que los grupos imina NH- del enlace peptdico forman un complejo de coordinacin con el in cprico:
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SOLUBILIDAD MUY BUENA
SOLUBILIDAD PARCIAL
INSOLUBLE
PRECIPITA
\ HN: / 2 R - CH \ CO / HN: / + Cu+2 -
\ HN / R - CH | CO \ HN / complejo violeta Cu+2
/ NH \ CH - R | CO / NH \
Reaccin con ninhidrina: Coloque 3 ml de la solucin de albmina en un tubo de prueba y agrguele 5 gotas de la solucin de ninhidrina al 1%. Caliente hasta la ebullicin y enfre. Anote sus observaciones. La coloracin azul con ninhidrina la producen todos los aminocidos, excepto prolina e hidroxiprolina que dan color amarillo. O || OH + NH2 R ------ 2 OH || O || O | O-H+ O || N O ||
Ensayo xantoprotico:
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Vierta a un tubo de ensayo 2 ml de la solucin de albmina y agregue unas 5 gotas del cido ntrico concentrado. Caliente a bao-mara por unos instantes. Deje enfriar. Luego agregue unas cuantas gotas de hidrxido de amonio NH4OH 6M. La aparicin de una coloracin amarilla, que se torna de color naranja intenso con la adicin del hidrxido de amonio denota la presencia de grupos fenilo, que se forman las nitromodificaciones amarillas.
-[-NH-CH-CO-]- + HNO3 ------------ -[-NH-CH-CO-]| | NO2
NO2 Anote sus observaciones. Ensayo de Milln:
amarillo
coloque 2 ml de la solucin de albmina a un tubo de prueba y agregue 5 gotas del reactivo de Milln. Caliente a bao-mara en ebullicin. La aparicin del precipitado blanco, que se torna rojo posteriormente, indica la presencia de los grupos fenlicos no sustituidos. -[-NH-CH-CO-]- + Hg2 (NO3)2 ----- -[-NH-CH-CO-]| |
OH
OHg
rojo
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Anote sus observaciones. ENSAYOS DE PRECIPITACION Las protenas por efecto de sales metlicas dan precipitados de proteinatos metlicos, formados por la parte cida de las protenas. Las sales neutras hacen precipitar las protenas debido al efecto de la
desnaturalizacin y deshidratacin. Las protenas precipitadas de esta manera, pueden redisolverse en el solvente original. En tres tubos de ensayo limpios coloque 3 ml de solucin de albmina y agregue a cada uno respectivamente, 1 ml de:
solucin de AgNO3 al 5% solucin de CuSO4 solucin de Pb(CH3COO)2 .

Anote sus observaciones . DESNATURALIZACION DE PROTEINAS Efecto de calor: Coloque 3 ml de la solucin de albmina a un tubo de ensayo y caliente en un vaso con agua y termmetro . Anote la temperatura a la que comenz coagularse la albmina. Efecto de alcohol etlico: A un tubo de ensayo con unos 3 ml de la solucin de albmina, agrguele 5 ml de alcohol etlico comercial. Anote sus observaciones. 4. PARA EL ANALISIS DE LA PRACTICA o o Qu caractersticas presenta la solucin acuosa de la clara de huevo? Por que la solucin preparada de la clara de huevo no se puede filtrar en el
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papel filtro? o o Cul es la protena principal de la clara de huevo? Cuando el cido ntrico cae casualmente en la piel, cul de las reacciones efectuadas se produce? o De acuerdo a lo realizado en la prctica, explique lo que ocurre al cocinar un huevo. o La clara de huevo o la leche se usan a menudo como antdotos en los envenenamientos con algunos metales pesados. como plomo, mercurio, bario, etc. En qu fenmeno, de los que realizamos en la prctica, se basa esta aplicacin?
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PRACTICA 7. RECONOCIMIENTO DE PRINCIPIOS INMEDIATOS EN LA LECHE 1. OBJETIVO Se pretende conseguir la comprobacin de forma sencilla la existencia de diversos principios inmediatos fundamentales como protenas, grasas y azcares en un alimento bsico como la leche, as como el comportamiento de las protenas lcteas ante determinados cambios fsicos y qumicos. 2. PROCEDIMIENTO MATERIALES o o o o o o o o o o o o o o o o o o Gradilla con 12 tubos de ensayo. - Pinza de madera para sujetar los tubos. - Esptula metlica. - Embudo. - Papel de filtro. - Mechero. - Vaso de precipitados. - Pipeta Pasteur o gotero - Pipetas graduadas. Leche entera. Leche fermentada de forma natural. cido clorhdrico puro. cido clorhdrico: solucin al 50 %. cido ntrico puro. Cloruro sdico: solucin concentrada. Hidrxido sdico: solucin al 20 %. Reactivo de Benedict o de Fehling. Sudan III: solucin alcohlica al 0,5 %.
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Desnaturalizacin o coagulacin de protenas lcteas. Hacer una serie de cuatro tubos de ensayo y numerarlos. Al tubo n 1 se le aade 2 ml de leche y 2 ml de HCl puro. Al tubo n 2 se le aade igual cantidad de leche y 2 ml de una disolucin concentrada de NaCl. Al tubo n 3 aadir 2 ml de leche y 2 ml de NaOH al 20 %. Al tubo n 4 se le aade 2 ml de leche y despus se le calienta levemente. Anotar los resultados obtenidos y comparar los diferentes tubos. Reconocimiento de grasas en la leche. Colocar 2 ml de leche en un tubo de ensayo, aadir 10 ml de agua y unas gotas de Sudan III y agitar fuertemente. Observar que se tie todo de rosa. Si aadimos 1 ml de HCl al 50 % y calentamos pueden aparecer dos o tres fases: a) Superior, de color rosa, formada por las grasas teidas por el Sudan III, que es un colorante especfico de grasas. b) Intermedia, con el agua y ciertos compuestos solubles, como la lactosa y algunas protenas disueltas (lactoalbmina y lactoglobulina). c) Inferior, con las protenas coaguladas y precipitadas. Reconocimiento de glcidos en la leche. Se recoge aparte con una pipeta Pasteur o cuentagotas la fase soluble de la prueba anterior, se filtra y se aade 1 ml del filtrado a un tubo de ensayo. A este tubo se le agrega 1 ml del reactivo de Fehling (o de Benedict) y se le calienta durante unos minutos. Si la prueba es positiva (hay presencia de un glcido reductor, en este caso la lactosa) aparecer un precipitado de xido de cobre, de color rojo. Reconocimiento de protenas en la leche: Prueba xantoproteica. Recoger con una esptula el precipitado de la leche coagulada (casena), llevarlo a un trozo de papel de filtro y secarlo. Poner en un tubo de ensayo una pequea
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porcin del precipitado seco, aadir unas gotas de cido ntrico puro y calentar ligeramente. Anotar los resultados obtenidos.
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PRACTICA 8 ESTUDIOS ENZIMTICOS
1. OBJETIVO Verificar el funcionamiento y accin de las enzimas 2. PROCEDIMIENTO Hidrlisis enzimtica del almidn por la saliva: Accin digestiva de la amilasa salivar. Primero se hace un tubo patrn con 2 ml. de una disolucin de almidn al 2 % y unas gotas de disolucin de yodo (lugol). Observar el resultado. Despus se calienta suavemente el tubo hasta que la mezcla pierda el color. Dejar enfriar el tubo bajo el agua del grifo y esperar unos minutos. Anotar lo sucedido. Colocar en un segundo tubo 2 ml. de la disolucin de almidn y una cierta cantidad de saliva, mezclar bien la saliva con la disolucin y calentar muy suavemente durante unos segundos. Aadir unas gotas de lugol. Anotar los resultados y dar una explicacin a lo ocurrido. Reconocimiento de la enzima catalasa en tejidos. La catalasa se encuentra tanto en tejidos vegetales (patata, zanahoria, lechuga, etc.) como en tejidos animales (carne, pescado, etc.) produciendo la siguiente reaccin qumica: H2O2 (agua oxigenada) ==== H2O + O2 (gaseoso) Es decir, la enzima descompone el perxido de hidrgeno o agua oxigenada en agua y oxgeno gaseoso, que se desprender en forma de burbujas en un medio acuoso.
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Poner en varios tubos de ensayo previamente numerados distintos tejidos (ms o menos el mismo peso de cada tejido). Aadir 5 ml. de agua oxigenada a cada tubo y anotar lo que sucede. Explicar lo ocurrido y ordenar los tejidos segn su actividad. Repetir el proceso anterior, pero hervir antes los tejidos durante diez minutos. Explicar los resultados obtenidos. Actividad cataltica de la catalasa. En un tubo de ensayo se coloca un trozo de hgado (o 1 ml. de extracto de hgado) y 10 ml. de agua oxigenada. Se cierra el tubo con un tapn, que se deja algo flojo para el escape de los gases producidos en la reaccin, en cuyo centro exista un orificio por el cual se pueda introducir un termmetro. As, hemos hecho un calormetro. Se anota la temperatura ambiente, que se toma como temperatura inicial de la reaccin, y despus se va anotando las variaciones de temperatura que se producen en el interior del calormetro cada treinta segundos durante un perodo de cinco minutos. Hacer la grfica de la reaccin y explicar los resultados.
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PRACTICA 9 REACCIONES DE ALDEHIDOS,CETONAS Y ACIDOS CARBOXILICOS OBJETIVOS Aplicar en el laboratorio un mtodo de identificacin de aldehdos y cetonas Aprender a distinguir un aldehdo de una cetona por su comportamiento qumico . PROCEDIMIENTO: MATERIALES: Acetaldehdo, Acetona, Reactivo fehling A y B, 2,4dinitrofenilhidracina, tubos de ensayo, gradillas, pipetas, peras de seguridad, Agitador de vidrio, mechero, vaso de precipitado, etanol al 95%, Probeta de 100 ml bicarbonato de sodio.
ALDEHIDOS Y CETONAS Para la deteccin de la funcin aldehdo o cetona se hace primero un ensayo general para compuestos carbonilos (2,4 dinitro fenil hidracina). Si ste es positivo, indica la presencia de un aldehdo o de una cetona. El paso siguiente es diferenciar entre ambas clases de compuestos, lo cual se hace con reactivos de fehling , Tollens y Schiff. Los compuestos carbonilicos (aldehdos y cetonas) pueden reacciones de adicin semicarbazonas. reconocerse por sus
nucleofilica, entre ellas las reacciones mas usadas son :
Reaccin con 2,4 dinitro fenil hidracina, Adicin de bisulfito de sodio. Formacin de
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Ensayo con 2,4 dinitro fenil hidracina El reactivo se prepara disolviendo 3 g de 2,4 dinitrofenil hidracina en 15 ml de cido sulfrico. Esta se aade con agitacin a 20 ml de agua y 70 ml de etanol al 95%. Se mezcla fuertemente.
En un tubo de ensayo diferentes, disuelva 2 gotas del compuesto a ensayar (acetaldehdo o acetona) en 0,5 ml de metanol o etanol al 95 % En un tubo de ensayo coloque 1 ml de 2-4 dinitrofenilhidracina y adale unas gotas de la solucin a ensayar ( acetaldehdo o acetona) Agitar, si no se forma un precipitado inmediatamente deje reposar por 10 minutos. Si se obtiene un precipitado de color amarillo naranja o amarillo rojizo, la prueba es positiva para aldehdo y/o cetonas.
Ensayo con el reactivo de Fehling. Para diferenciar aldehdos de cetonas se usa el reactivo de Fehling, el cual consta de dos soluciones A y B que se mezclan a partes iguales en el momento de usarse, se dispone asi de un in cprico en medio alcalino que oxida los aldehdos pero no las cetonas. Mezcle 1 ml de reactivo A con 1 ml de reactivo B , y adale 10 mg o 0,5 ml del compuesto a ensayar (acetaldehdo o acetona)
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Coloque el tubo en un bao de agua hirviendo por 3 minutos. Anote sus observaciones. Un precipitado amarillo naranja de Cu2O es prueba positiva para aldehdos.
ACIDOS CARBOXILICOS Ensayo con bicarbonato de sodio En un tubo de ensayo agregue a unos pocos ml del compuesto a ensayar (cido actico) bicarbonato de sodio. Si se obtiene efervescencia es indicativo de que el compuesto es de carcter cido o una sustancia fcilmente hidrolizable.
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PRACTICA 10, 11 y 12 SINTESIS Y REACCIONES DEL ETANOL 1. OBJETIVO Aplicar en el laboratorio un mtodo comn de sntesis de alcoholes a partir del uso de microorganismos. Verificar la obtencin experimental del etanol realizando las reacciones tpicas de los alcoholes. Aprender a identificar ensayos. un alcohol por su comportamiento qumico en algunos
MATERIALES PARTE A ( PRIMERA SESIN) Erlenmeyer de 250 ml con tapn de caucho, Unin de vidrio, Esptula, Vaso de precipitado de 150 ml, glucosa, 15 g, levadura, fosfato de amonio, solucin de hidrxido de sodio 10 %. PARTE B ( SEGUNDA SESIN) Baln de fondo redondo de 250 ml, con desprendimiento lateral y corcho con hueco, termmetro, refrigerante con corcho, erlenmeyer de 125 ml, trpode, placa de cermica, mechero de Bunsen. PARTE C ( TERCERA SESIN) Vidrio de reloj, microscopio, mechero de Bunsen, vaso de precipitado de 150 ml, tubo de ensayo, pipeta pasteur, Etanol 5 ml, sodio slido ( pedazo recin cortado),
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DICROMATO DE POTASIO AL 10 % 3 ML, Acido sulfrico concentrado 5ml, hipoclorito de sodio 10 % 1ml, Acido actico glacial 1 ml. PROCEDIMIENTO PARTE A ( PRIMERA SESION) Disolver aproximadamente 15 gramos de caa de azcar o glucosa en 50 ml de agua en un erlenmeyer. Aada dos medidas de esptula de levadura y 3 gramos de fosfato de amonio ( nutriente). Tape el erlenmeyer y permita que alcance una temperatura tibia . 30 a 35 C Observe el erlenmeyer ocasionalmente y cuando la solucin comience a fermentar coloque el otro extremo de la unin de vidrio dentro de un vaso de precipitado con solucin de hidrxido de calcio. Registre sus observaciones Deje que la solucin fermente hasta la prxima sesin de laboratorio. PARTE B ( SEGUNDA SESION)
Despus de estos das decante la mayor parte de la solucin fermentada, en un baln de fondo redondo y arme el aparato de la figura y realice la destilacin simple de esa solucin: Asegrese que el agua este circulando por el condensador antes de iniciar el calentamiento.
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Inicie el calentamiento y la recoleccin del destilado en un erlenmeyer de 125 ml. Anote la temperatura a la cual destil el compuesto. Ensaye por ignicin unas gotas de destilado y unas gotas de compuesto son destilar. Anote sus observaciones. Conserve el destilado para la prxima sesin. PARTE C ( TERCERA SESION) Coloque unas pocas gotas del etanol en un vidrio de reloj y haga el ensayo de ignicin con un fsforo. Vierta aproximadamente 2 ml de etanol en un tubo de ensayo y aada una pequea pieza de sodio recin cortado del tamao de un grano de arroz ( tenga mucho cuidado) Ensaye cualquier gas que se desprenda con un fsforo encendido. Cuando todo el sodio este disuelto, cuidadosamente, tibie la solucin y coloque unas pocas gotas sobre el microscopio usando una pipeta Pasteur. Permita que el etanol se evapore. Registre todas sus observaciones Vierta cerca de 2 ml de solucin dicromato de potasio en un tubo de ensayo, aada cuidadosamente 1 ml de cido sulfrico concentrado , luego a esta solucin aada 2 gotas de etanol y agite el tubo con mucho cuidado. Caliente con una pequea llama de mechero de Bunsen por unos minutos el tubo de ensayo y anote los cambios ocurridos. Intente detectar el olor del vapor desprendido, con sumo cuidado
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Registre sus observaciones. Preguntas complementarias: La palabra fermentacin deriva del latin fervere, que significa en ebullicin. De las observaciones realizadas en la prctica usted piensa que es correcto este nombre para este proceso. Que evidencia puede indicar usted de que la fermentacin es una reaccin qumica. Investigue y responda las reacciones qumicas que ocurrieron para la conversin de glucosa a etanol.
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PROGRAMA DE INGENIERA AGRONMICA PRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA
BIBLIOGRAFA RECOMENDADA o Amato M, S y Granados P, F. Manual de Laboratorio. Ctedra de Bioqumica. Universidad Nacional, 1994 o Angulo Ugalde, Y. Bioqumica Manual de Laboratorio. Universidad de Costa Rica. 1999 o Brown, T.L. LeMay, H.E. & Bursten, B.E. Qumica: La ciencia central. Pearson-Prentice may, sptima edicin. Mxico. 1999 o Budavari, S. The Merck Index: an enciclopedia of chemical drugs and biological. Guide for safety in the chemical laboratory. Manufacturing Chemists Association. Whitehouse station, Merck & CO. doceava edicin. New York o o Chang, R. Qumica, editorial McGraw Hill, sptima edicin, Colombia. 2002 Kaplan, L et al. Clinical Chemistry: theory, analysis and correlation. 2nd edition. CW. Mosby Company, 1989 o Facultad de Medicina UNAM, Departamento de Bioqumica. Bioqumica y Biologa Molecular. Objetivos del curso y manual de prcticas de laboratorio. Mc Graw-Hill Interamericana Editores, Mxico, 2000. o Switzer, R. y L. Garrity. Experimental Biochemistry: Theory and exercises in fundamental methods. 3rd edition, Freeman and Company, New York 1999 o Skoog, D.A. & West, D.M. Qumica analtica. McGraw Hill. Sptima edicin. Mxico. 2001
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[[H+] [A-]] / [HA] = Ka

Que en su forma general es pH= pKa + log (aceptor de protones /donador)

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0.5 ml de solucin de NaOH 0,1 N a la solucin tampn.

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superiores a 300000,000 y su estructura se basa en la unin de unos 20 aminocidos

H2N - CH2 - CH2 - COOH

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H2N - CH2 - CO - NH - CH2 - COOH

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SOLUBILIDAD MUY BUENA

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\ HN: / 2 R - CH \ CO / HN: / + Cu+2 -

\ HN / R - CH | CO \ HN / complejo violeta Cu+2

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