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Biosintesis de Nucleotidos Pirimidinicos
Biosintesis de Nucleotidos Pirimidinicos
DNA
RNA
La necesaria para la sntesis de los cidos nucleicos proviene de la hidrlisis del enlace fosfoster
FAD
NAD+
Fuente de las imgenes http://en.wikipedia.org/wiki/Category:Biochemistry Creative Commons Attribution-Share Alike license
cGMP
RELACION?
Cafena
Teobromina Adenosina
Teofilina
5fluorouracilo
De recaptacin DNA RNA Localizacin: en el citosol - clulas en proliferacin: alta demanda - hgado: rgano con el mayor ndice de sntesis de nucletidos - cerebro: no sintetiza las bases nitrogenadas No todas las clulas expresan las enzimas implicadas en la va de novo Todos los organismos sintetizan nucleotidos de novo Rutas metablicas muy conservadas a lo largo de la evolucin
degradacion
Bases nitrogenadas
Recaptacin
NUCLEOTIDOS DE LA DIETA
RNA DNA digestin
enzimas intestinales
nucleasas pancreticas fosfodiesterasas nucleotidasas nucleosidasas fosforilasas
Nucletidos
Degradacin -Ala + CO2 -aminoisobutirato + NH4+ + CO2 ac.urico alantoina alantoato urea NH4+
primates, pjaros, reptiles e insectos la mayora de mamferos peces seos anfibios, peces cartilaginosos invertebrados marinos
malonil-CoA LIPIDOS
5 6 1
3 2
Carbamil-P
HCO3-
Proceso ms simple que la biosntesis de purinas 1. Sntesis de UMP: 6 reacciones enzimticas Sntesis del anillo pirimidnico (orotato) Unin del orotato a la ribosa-5P 2. Sntesis de UTP y CTP
Los productos intermediarios no se liberan al medio, sino que se dirigen directamente al centro activo que cataliza la siguiente reaccin - los sustratos no se diluyen en el medio - los intermediarios no se acumulan Ventajas - mayor rapidez y eficacia - se evita la degradacin de los productos intermediarios - regulacin gnica coordinada ms sencilla
Gln
Glu
Enzima: Carbamil-P sintetasa No requiere biotina Punto clave en la regulacin (CAD en eucariontes) 2 Isoenzimas clase I: mitocondrial, forma parte del ciclo de la urea. NH2- del NH4+ clase II: citoslica, participa en la sntesis de pirimidinas. NH2 de la Gln En procariontes: una sola carbamil-P sintetasa. El NH2 proviene de la Gln
Hidrlisis del NH4+ de la Gln en la subunidad pequea (Gln amidotransferasa) El ion NH4+ es canalizado hacia el tercer sitio activo 2. El carboxi-P reacciona con el ion NH4+ para formar el cido carbmico, liberando Pi carboxi-P + Gln + H2O carbamato + Glu + Pi
3. Hidrlisis de una segunda molcula de ATP para fosforilar el cido carbmico, produciendo carbamil-P carbamato + ATP carbamil-P + ADP
Sitio activo
carbamil-P + Asp
carbamil-Asp + Pi
CarbamilP
Asp
CarbamilAsp
Enzima: ATCasa: Asp transcarbamilasa (CAD en eucariontes) - No necesita ATP, ya que el carbamil-P es una molcula activada - Punto de regulacin en procariontes: ATP vs. CTP
PALA
Carbamil-Asp
PALA: N-fosfonoacetil-L-Asp
- Anlogo bisustrato de la ATCasa - Estructura similar al producto intermediario de la reaccin - Inhibidor muy potente de la sntesis de pirimidinas
Imagen modificada a partir de la obtenida en NCBI PubChem
carbamil-Asp
dihidroorotato + H2O
CarbamilAsp
Dihidroorotato
Enzima: Dihidroorotasa (CAD en eucariontes) - Condensacin intramolecular y cierre del anillo - Se libera una molcula de H2O
dihidroorotato + Coenzima Q
Dihidroorotato
Orotato
Enzima: Dihidroorotato DH
dihidroorotato + Coenzima Q
Enzima: Dihidroorotato DH
- El orotato ya es una pirimidina
- Reaccin irreversible - Enzima localizada en la cara externa de la membrana mitocondrial interna (m.m.i.) - Poder reductor proveniente de las quinonas - Las bacterias emplean NAD, FMN, FAD y grupos Fe no-hemo, principalmente en la ruta de degradacin del orotato (orotato dihidroorotato)
Leflunomida y la dihidroorotato DH
Leflunomida (Arava)
- Inhibidor de la dihidroorotato DH - Al abrirse el anillo isoxazol, se produce un compuesto que inhibe la catlisis - Actividad antiproliferativa y antiinflamatoria - Tratamiento de la artritis reumatoide
orotato + PRPP
OMP + PPi
Orotato
PRPP
orotato + PRPP
OMP + PPi
- OMP: orotidina monofosfato - Reaccin irreversible - unin en de la base nitrogenada - enzima utilizada en la ruta de recaptacin (CMP &) UMP
OMP
UMP + CO2
OMP
UMP
Mecanismo de accin de la OMP descarboxilasa Unin transitoria entre el OMP y el centro activo que estabiliza el estado de transicin
SINTESIS DE UTP
UMP + ATP
U UDP
+ ADP
UDP + ATP
U UTP
+ ADP
AMP +ATP
2 U
ADP
Adenilato kinasa (K 1)
SINTESIS DE CTP
UTP
CTP
Enzima: CTP sintetasa Mecanismo cataltico en 2 pasos 1. Formacin de un intermediario acil-P activado (gasto de ATP) 2. Ataque nucleoflico del N del NH4+ En bacterias, el grupo NH2 es donado por NH4+
ahorro
Aciduria ortica
- Enfermedad gentica muy rara: deficiencia en la UMP sintasa (bloqueo de las reacciones 5 & 6) No hay sntesis de novo de pirimidinas
- Excrecin de grandes cantidades de cido ortico en orina, retardo en el crecimiento y anemia severa
No se recapta la citosina Enzima muy activa en tejidos adultos con baja tasa proliferativa Timina + desoxirribosa-1P Timidina + ATP timidina + Pi Enzima: Timina fosforilasa
2. Fosforilaciones sucesivas Transformacin de los nucletidos monofosfato de pirimidina en nucletidos trifosfato (gasto de ATP) PirMP PirDP PirTP
GASTO ENERGETICO
Sntesis de novo de UMP 2 ATP en la sntesis del PRPP 2 ATP en la sntesis del carbamil-P
4 ATP
- Hidrlisis del dUTP dUTP + H2O Importancia Evitar que se acumule dUTP en el interior celular y se incorpore al DNA Causa: La DNA polimerasa no discrimina eficientemente el dUTP de la dTTP dUMP + PPi Enzima: dUTP difosfohidrolasa
dUMP
Timidilato sintasa
dTMP
Ser
NADPH
Tetrahidrofolato (THF)
dTMP + dihidrofolato
- Transferencia de un grupo metilo del N5,N10-metilen THF al dUMP - El grupo metileno se reduce a metilo - El cofactor tetrahidrofolato (THF) se oxida a dihidrofolato (DHF) - El THF es el donador de e- y de grupos metilo - Mecanismo cataltico basado en que el C6 del uracilo puede sufrir un ataque nucleoflico - Importancia evolutiva El uracilo ha de ser evolutivamente anterior a la timina
Enzima: Dihidrofolato reductasa (DHFR) Transferencia directa de un in H:- del anillo del NAPDH al DHF
THF + Ser
N5,N10-metilen-THF + Gly
Acido paminobenzoico
Glu n=16
2amino4oxo6metilpterina
dUMP
Timidilato sintasa
dTMP
Antifolatos
Metotrexato Aminopterina
N5,N10metilenTHF Gly
Serhidroximetil transferasa (+PLP)
7,8dihidrofolato(DHF) NADPH+H+
Dihidrofolato reductasa
Ser
NADPH
Tetrahidrofolato (THF)
5FdUMP
- Inhibidor suicida de la timidilato sintasa - 5-fluorouracilo = anlogo de la timina - Inmovilizacin del complejo ternario enzima -- Cys146 -- S dUMP -- F THF
Antifolatos (I)
THF
Aminopterina
Metotrexato
Antifolatos (II)
Inhiben la regeneracin del THF bloqueo de la sntesis de dTMP, de purinas, His / Met Aminopterina, metotrexato (ametopterina) Drogas anticancerosas, utilizadas especialmente en el tratamiento de leucemias infantiles y tumores de crecimiento rpido Actuan como inhibidores competitivos de la DHF reductasa Presentan 103 veces ms afinidad que el DHF Nota: Idealmente conviene utilizar una dosis letal de antifolatos y posteriormente rescatar al paciente administrando dosis masivas de THF o timidina De esta forma se evita la aparicin de resistencias a estas drogas
Antifolatos (III)
Problema:resistenciaalmetotrexato
Mecanismosderesistencia 1.Alteracindelossistemasdetransporte (elmetotrexato nosecaptadelmedio) 2.CambiosenelcentroactivodelaDHFR 3.AmplificacingnicadelaDHFR