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Manual de Preparación de Reactivos-06
Manual de Preparación de Reactivos-06
Lic. PEDRO ELAS PATIO MARTNEZ Lic. EDGAR ENRIQUE RAMREZ PARRA
Facultad de Ciencias Exactas Fsicas y Naturales Universidad de Santander Telfono (57) 6516500 Ext 253 Fax (57) 6516492
BUCARAMANGA 2006
Justificacin
Durante el proceso de formacin del estudiante de la UDES, los conceptos tericos requieren ser corroborados mediante la experimentacin los cuales muchos de ellos se privilegian al interior de las prcticas de laboratorio. Para dichas prcticas el alumno debe utilizar una serie de sustancias y/o soluciones de reactivos qumicos los cuales son preparados por laboratoristas o docentes. La preparaciones de las sustancias o soluciones de reactivos qumicos requieren especial cuidado ya que no se trata de una simple mezcla de sustancias; por el contrario hay que seguir unos parmetros para cada sustancia teniendo en cuenta las cantidades, la forma de prepararlos y cuidados bsicos. El presente manual permitir a los laboratoristas o docentes tener una gua para la preparacin de las diferentes soluciones utilizadas en las practicas de la Facultad de Ciencias Exactas Fsicas y Naturales
Pedro Patio
Que la balanza donde se pesan las sustancias este debidamente nivelada y calibrada. Al terminar el pesaje de las sustancias la balanza debe quedar completamente limpia. La vidriera donde se preparan los soluciones debe estar completamente limpia y en algunos casos estril. Las soluciones que lo requieran deben almacenarse en frascos oscuros para evitar procesos de oxidacin por accin de la luz. Las soluciones deben codificarse, teniendo en cuenta: nombre, concentracin, fecha de preparacin, fecha de vencimiento y cdigo de riesgos. Siempre se deben mezclar lentamente los cidos fuertes sobre el agua. La preparaciones de cidos fuertes o reactivos voltiles debe hacerse en las campanas extractoras de gases. NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL
Usar guantes desechables o guantes de nitrilo de acuerdo a la preparacin que se realice Utilizar bata, mascara artigases y gafas de seguridad, siempre que se prepare una solucin. No realizar preparaciones bajo condiciones anormales de salud como: fiebre, problemas respiratorios, cefalea, mareos, etc.
En caso de inhalar alguna sustancia buscar la zona mas aireada de la zona de preparacin de reactivos o fuera de esta y consultar un mdico.
SOLUCIONES
AGUA DE BROMO Pesar 4,17 gr. de bromo en 100 ml de agua destilada o agua de bromo en tetracloruro de carbono. Cuidados: solucin altamente txica para el organismo
Uso: Para determinacin de compuestos orgnicos ACETO-ORCEINA Pesar 2 gr de orceina, y adicionarle 60 ml de cido Actico Glacial y 40 ml de Agua destilada, y someter a ebullicin por 2 minutos, dejar enfriar y luego filtrar. Filtrar por lo menos cada 2 meses Cuidados: Txicos y corrosivos
ACETO CARMIN Pesar 0,5 gr de carmn, adicionarle 45 ml de cido actico glacial y completar con 55 ml de agua destilada
Uso: Para tincin de material nuclear (cromosomas)
Cuidados: Txicos
y corrosivos
Cuidados: Txicos y corrosivo Uso: En pruebas de divisin celular (mitosis) ALCOHOL- CETONA Medir 70 ml de Alcohol Etlico absoluto y completar a 100 ml de solucin con Acetona pura
Cuidados: Comburente Uso: Decolorante para la coloracin de Gram
ACIDO CLORHIDRICO 0.1 N Medir 50 ml de agua destilada, adicionarle 0,83 ml de HCl 37% y completar a 100 ml con agua destilada Cuidados: Txicos corrosivos
ACIDO SULFURICO 1 M Medir 49 ml de cido Sulfrico destilada y aforar a 1000 ml con agua
Cuidados: Txicos
corrosivos
Uso: Para titulacin cidobase ACIDO ACETICO 1 N Medir 60.05 ml de cido actico 100% y aforar a 1000 ml con agua destilada.
Cuidados: Txicos
corrosivos
AZUL DE METILENO 1% Pesar 1 gr. de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua destilada hasta obtener una solucin uniforme
Cuidados: Txicos Uso : Para tincin de tejidos animales (epitelio bucal) y tejidos vegetales, pruebas de difusin celular
ALCOHOL ACIDO 3% Medir 97 ml de alcohol etlico absoluto, adicionarle con mucho cuidado por las paredes del recipiente 3 ml de cido Clorhdrico al 37%
BARFOED Medir 13.3 gr. de acetato de cobre en 200 ml de H2O, luego adicionarle 1.8 ml de cido actico glacial
BUFFER DE FOSFATOS Solucin I: Pesar 13.8 gr. De NaH2PO4 y disolverlo en 250 ml de H2O destilada Solucin II: Pesar 35.85 gr. De Na2HPO4 y disolverlo en 500 ml de H2O destilada Mezclar 212.5 ml de solucin I + 37.5 de solucin II y aforar a 500 ml con H2O destilada
Cuidados: Txicos
Uso: Extraccin de DNA
corrosivos
BUFFER LISIS II Medir 4.8 ml de EDTA Na 0.5 M pH 8.0 y adicionarle 0.438 gr NaCl y aforar a 1000 ml con agua destilada
Cuidados: Txicos
Uso: Extraccin de DNA
corrosivos
BUFFER LISIS I Pesar 103 gr. de sucrosa, adicionarle 10 ml de triton x100, adicionarle 10 ml de Tris-HCl 10mM. pH 7.5 y 5 ml de MgCl2 1M aforar a 1000ml con H2O destilada destilada. (Tris-HCl 10mM. PH 7.5)=0.15756 gr 100 ml s/n Para 500ml (51.5 gr. Sucrosa, 5 ml triton x 100+ 5 ml tris + 2.5 ml Mgcl2 1M).
Cuidados: Txicos
Uso: Extraccin de DNA
corrosivos
BFER DE EXTRACCIN Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl pH 8.0 100 mM, EDTA 50 Mm, NaCl 500 mM, BMercaptoetanol 10 mM y SDS 1.3%. Completar con agua destilada en baln aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar
Cuidados: Txicos
Uso: Extraccin de DNA
corrosivos
BFFER DE DILUCIN (TE) Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl pH 8.0 50 mM, EDTA 10 Mm Completar con agua destilada en baln aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar
BUFFER PARA ACTIVIDAD ENZIMATICA Solucin A : Fosfato cido de disodio (Na2HPO4 ) 0.2 M Solucin B : cido ctrico (C6H8O7. H2O) 0.1 M BUFFER pH 5.0 (515 ml S/N A + 485 ml S/N B). BUFFER pH 6.8 (772 ml S/N A + 227,5 ml S/N B) BUFFER pH 8.0 (972,5 ml S/N A + 27.5 ml S/N B). CLORURO DE SODIO 0.1 M Pesar 5.85 gr. de NaCl y aforar a 1000 ml con H2O destilada Uso: Para Fenmenos de membranas
DAMASHECK Pesar 8 gr. de sucrosa, adicionarle 0.4 gr. de Citrato de sodio y 0.15 gr. de azul de cresilo. Completar a 100 ml de H2O destilada. Adicionarle 3 gotas de formol 37 % Uso: Para recuento de reticulocitos | DRABKIN Pesar 0.05 gr de Cianuro de Potasio (KCN), adicionarle 1 gr. de bicarbonato de sodio (NaHCO3) y 0.2 gr. de ferrocianuro de potasio (K3Fe(CN)6) Completar a 1000 ml con H2O destilada. Uso: Para Recuento en Hematolgico
Cuidados: Txicos
corrosivos
2,4 DINITROFENILHIDRIZINA Pesar 3 gr. de 2.4 dinitrofenilhidrizina y disolver en 15 ml de H2SO4 concentrado y disolver en 20 ml de agua destilada y 70 ml de Etanol absoluto, decantar y utilizar el filtrado. Uso: Indicador
Cuidados: Txicos
DISOLUCION DE FERROCIANURO Pesar 1.65 gr. de K3(Fe(CN)6) recristalizado, adicionarle 10.6 gr. carbonato de sodio anhdrido y aforar a 1000 ml de H2O destilada. Guardar en frasco oscuro (duracin 2 meses) . Uso: Indicador
Cuidados: Txicos
ETANOL 0.6 M Medir 34.9 ml de alcohol etlico absoluto y completar a un 1 litro de solucin con H2O destilada Uso: Para Fenmenos de membrana. ERLICH (PRUEBA) cido sulfanilico 0.5 % en HCl 2% con solucin de NaNO3 0.5% y Na2CO3 FOUCHER 25 gr. de tricloroacetico en 100 ml de H2O y 10 ml de cloruro frrico al 10 %
FEHLING
A y disolverlo en 500 ml
Cuidados: Txicos Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling B para determinacin de azucares reductores
FEHLING B
Pesar 173 gr. de tartrato de Na y K ( sal de Rochelle) se le aaden 62.5 gr. de NaOH y se lleva hasta 500 ml de H2O
Cuidados: Txicos
y corrosivo
Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling A para determinacin de azucares reductores FENOLFTALEINA Pesar 0.1 gr. de fenolftaleina y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico al 96 % Uso: Indicador cido-Bsico Cuidados: Txicos
GLUCOSA 0.1 M Pesar 1.8 gr de glucosa y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Uso: Para Fenmenos de membrana. GLICEROL 0.6 M Medir 4.39 ml de glicerol y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Uso: Para Fenmenos de membrana.
HAYEN 2.5 gr. de sulfato de sodio 0.5 gr. de cloruro de sodio 0.25 gr. cloruro de mercurio completar a 1000 ml de H2O HIDROXIDO DE SODIO 1M Pesar 4.0 gr. de NaOH y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Nota: La disolucin del NaOH en el agua se debe realizar en la cmara extractora de gases Uso: Diferentes usos, principalmente Titilacin cido-Bsico Cuidados: Corrosivo JUGO GASTRICO ARTIFICIAL Medir 40 ml de cido Actico 0.1 N, adicionarle 15 ml de cido Clorhdrico 0.1 N y aforar a 100 ml con agua destilada Uso: Titilacin cido-Bsico Cuidados: Corrosivo
LUCAS Pesar 17 gr. de ZnCl2 y adicionarle 12 ml de HCl concentrado en bao fro, agitar continuamente, prepararlo cada vez que se utilicen y guardar en nevera. Uso: Diferenciacin de alcoholes primarios, secundarios y terciarios Cuidados: Txico y corrosivo
LUGOL Tejidos vegetales 0.5 gr. de yodo 1 gr. de yoduro de potasio 100 ml de agua destilada Uso: Colorante Parsitos 0.5 gr. de yodo 1 gr. de yoduro de potasio 300 ml de agua destilada
Cuidados: Corrosivo
LIQUIDO DILUYENTE PARA ESPERMOGRAMA Pesar 5 gr. de Bicarbonato de sodio y llevarlo a 100 ml de H2O destilada y adicionarle 1 ml de Formol 37% MILLON Pesar 40 gr. de nitrato de mercurio, adicionarle 57 ml de HNO3 concentrado, luego se calienta y se lleva a 200 ml, se deja sedimentar y se decanta (preparacin en cmara extractora ).
Cuidados: Corrosivo
MOLISCH Pesar 50 gr. de naftol y llevarlo a 1000 ml de Etanol 95% (estable 1 semana) Uso: Para determinacin general de Azucares Cuidados: Txico y corrosivo
MEZCLA CROMICA (SULFOCROMICA) Medir 500 ml de H2O destilada y adicionar lentamente 250 ml de H2SO4 concentrado y agitar constantemente se deja enfriar se le mezcla dicromato de potasio y finalmente s afora a 1000 ml con H2O destilada. Uso: Limpieza de material con restos carbnicos
Cuidados: Corrosivo
METIL NARANJA Pesar 0.04 gr. de metil naranja y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico al 20 % o en 100 ml de H2O destilada Uso: Indicador cido Bsico Cuidados: Txico
NESSLER Pesar 15 gr. de HgI2 en un vaso de precipitado, en otro vaso se disuelven 10 gr. de KI en 20 ml de H2O. Esta disolucin se vierte en el vaso con HgI2 , disolver muy bien con agitacin. En un matraz de 500 ml disolver 40 gr.de NaOH en 300 ml de H2O Luego se le adiciona la otra solucin y se agita, al final decantar y separar el exceso de sales de mercurio (precipitado amarillo) Cuidados: Txico
NITRATO DE PLATA
0.1 N
Pesar 1,7 gr. de nitrato de plata y disolverlo en 100 ml de Agua destilada. Uso: Determinacin de cloruros (formacin de un precipitado blanco) Cuidados: Txico y corrosivo
NYLANDER Pesar 2 gr. de nitrato dibsico de bismuto y adicionarle 4 gr. de tartrato de Na Y K. Se disuelve 100 ml de NaOH al 10%. Se hierve para disolucin completa de la sal , se enfra y se separa por filtracin.
NINHIDRINA 0.2% Pesar 0.2 gr. de Ninhidrina aforar a 100 ml con Etanol absoluto o acetona Uso: Determinacin del grupo amino de aminocidos y protenas
Cuidados: Txico
y corrosivo
NEGRO DE ERICROMO Pesar 0.5 gr. de negro de ericromo y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico al 96 % (o triturarlo con solucin al 1 % de cloruro de sodio) Uso: Indicador
Cuidados: Txico
O-TOLUIDINA Pesar 10 gr. de O-Toluidina y adicionarle 0.03 gr. de tiourea, luego disolverlos hasta completar a 1000 ml con cido actico al 95 %
Cuidados: Txico
ROJO CONGO 5%
destilada
REACTIVO DE SCHIFF Pesar 2 gr. de fucsina bsica y disolverlo en 400 ml de H2O hirviendo, enfriar a 50 C luego aadir 10 ml de HCl 2N, 4 gr. de metasulfito de potasio, 1 gr. de carbn activado filtrar y adicionarle 10 ml de HCl 2N Almacenar en frasco oscuro y en nevera SELIVANOFF Pesar 0,05 gr. de resorcina (resorcinol) y disolverlo en 100 ml de cido Clorhdrico al 20% Uso: Para reconocimiento de cetosas (fructosa)
Cuidados: Txicos
corrosivos
SOLUCION DE RINGER(Holfretter) ( S/N madre) A: Pesar 3,5 gr. de NaCl, adicionarle 0.05 de cloruro de potasio y 0.2 gr. de bicarbonato de sodio en 1000 ml de H2O destilada Holfretter al 10 % una parte de A + 9 partes de H2O destilada (1:9)
SOLUCION PATRON DE LIPIDOS Pesar 1 gr. de cido esterico y disolver en 100 ml de cloroformo Uso: Determinacin de lpidos
Cuidados: Txico
corrosivos
SOLUCION DE YODO DE RESERVA(0.1mol/l ) Pesar 3.6 gr. de KIO3 y 45 gr. de KI, disolverlo en 300 ml de H2O destilada, aadir 9 ml de HCl 12M lentamente y llevar a 1000 ml de solucin. Conservar a 4 C. Uso: Determinacin de lpidos
Cuidados: Txicos
SOLUCION FIJADORA PERMANENTE DE PLACAS MICROSCOPICAS Proporcin 1: 3 1 ml de cido actico en 3 ml de alcohol etlico
SOLUCION DE Mn 20 ppm A PARTIR DE KMnO4 Pesar 0.05745 gr. de KmnO4 y disolverlo en 1000 ml de H2O destilada Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra y calibracin del espectrofotmetro
Cuidados: Txicos
SOLUCION 30 ppm DE K2Cr2O7 EN KOH 0.05 N Pesar 2.8 gr. de KOH y 0.030 gr de dicromato de potasio (K2Cr2O7) y llevarlo a 500 ml de solucin con agua destilada. Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra
Cuidados: Txico
corrosivos
SOLUCION DE Mn 50 ppm A PARTIR DE KMnO4 Pesar 71.8 mg de KMnO4 y llevar a 500 ml de solucin con H2O destilada Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra
Cuidados: Txico
SACAROSA 0.1 M 3, 4 gr. de sacarosa y completar hasta 100 ml de solucin con H2O destilada Conservar en Nevera a 8 grados
SUDAN III 0.2% Pesar 200 mg de sudan III en 100 ml de alcohol etlico al 70%, se mezclan(calentando en bao de Mara a 90 grados centgrados) y se dejan en reposo durante 24 horas. Uso: Para coloracin de cutcula y gotas de grasa en clulas vegetales
Cuidados: Txico
SUDAN III 1 gr. de sudan en polvo +30 ml de cido actico y completar con 70 ml de H2O. (calentar para lograr una mejor disolucin) Uso: Para determinacin de lpidos por solubilidad en muestras biolgicas
Cuidados: Txico
SUSTRATO DE ALMIDON EN BUFFER pH 7 Pesar 13.3 gr. de Na2HPO4 y 4.3 gr. de cido benzoito, llevar a 250 ml de H2O destilada, calentar y aadir 0.2 gr. de almidn y 5 ml de H2O destilada y completar a 500 ml con H2O destilada y conservar a 4 C. SULFATO DE COBRE (CuSO4) 2000ppm Pesar 2 gr. de CuSO4 y llevar 1000 ml de H2O destilada Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra
Cuidados: Txico
SULFATO 100 ppm Pesar 0.1825 gr. de K2SO4 en un litro de H2O destilada TIONINA Pesar 0,1 gr. de tionina, adicionarle 10 ml de Etanol absoluto y completar a 100 ml con H2O destilada. Uso: Para coloracin de tejidos vegetales
Cuidados: Txico
TOLLENS Solucin A: Preparar 50 ml nitrato de plata al 5 % en agua destilada Solucin B: Preparar 20 ml de NaOH al 10% Mezclar Solucin A y Solucin B, luego adicionarle amoniaco concentrado hasta disolver el precipitado. Guardar preferiblemente en frasco oscuro Uso: Para formacin del espejo de plata
Cuidados: Txico
corrosivos
TURK
100 ml de cido actico al 3% + 3 gotas de azul de metileno TIMOL AL 1 % Pesar 1 gr. de timol y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico absoluto Uso: Indicador de pH
Cuidados: Txico
TIMOLFTALEINA
TANRED
Solucin A: 18 gr. KI + 200 ml de H2O destilada. Solucin B: 6.75 gr. de HgCl2 +200 ml de H2O destilada La solucin B se disuelve sobre la A, agitar hasta que desaparezca el naranja , completar con cido actico glacial hasta 500 ml.
Cuidados: Txico
VIOLETA DE METILO Pesar 0.1 gr. de violeta de metilo en 10 ml de alcohol etlico al 20 % Uso: Indicador de pH
WRIGHT Pesar 0.1 gr. de Colorante de Wright, pulverizarlo, adicionarle poco a poco 60 ml de Metanol Analtico y homogenizarlo, dejarlo en maduracin por lo menos ocho (8) das. Filtrarlo cada dos meses Uso: Colorante para identificacin de Clulas Sanguneas
Cuidados: Txico
Bibliografa
Merck, Merck KGaA, Reactivos y productos qumicos 20052007. Frankfurter Strabe 250 64293 Darmstadt.GERMANY. J.T.Baker.Catalog 2004-2005.Tyco Specialty Mallinckrodt Baker,Inc. Printed in USA. Promega, Life Science Catalog-2004 Merck, Productos de Laboratorio para la prctica-IndicadoresSustancias patrn primario. Patio, Pedro; Edgar Ramrez, Manuel de Preparacin de Soluciones-Manual de Protocolos UDES 2002 Plumer, David; Introduccin a la Bioqumica Prctica. McGraw Hill Products.2003