CRECIMIENTO BACTERIANO Y MUERTE

MICROBIANA

MR JACOBO S. IBAÑEZ ORELLANA

2023
 Muerte bacteriana Introducción
Introducción:

 Las causas concretas que los antimicrobianos producen la muerte bacteriana son aun
desconocidas.

 Recientemente se ha observado que algunos antimicrobianos bactericidas (con

independencia de su mecanismo bioquímico de interacción con la diana) estimulan la
producción de radicales hidroxilo, responsables directos de la muerte bacteriana; esto no
ocurre con los antimicrobianos bacteriostáticos .
Introducción:

Se acepta que un antimicrobiano es bactericida cuando es capaz de matar al menos

el 99,9% (99,99% para otros autores) del inóculo inicial 2.

Muchos agentes tradicionalmente considerados bacteriostáticos matan (sobre todo

en altas concentraciones) una parte significativa de la población bacteriana,
aunque no se alcance la cifra de referencia del 99,9%.

Así pues, se acepta implícitamente que cuando la población bacteriana se

expone a un antimicrobiano (considerado) letal, al menos 1 de cada 1.000
microorganismos puede sobrevivir y, por tanto, que las poblaciones pueden
contener individuos que responden de forma diferente a la acción letal del
compuesto.
Fases del crecimiento microbiológico:
Fases del crecimiento microbiológico:

Fase A (lag): Es la fase de adaptación al nuevo pH, nueva temperatura, alta radiación (no
hay crecimiento bacteriano).

Fase B (fase de aceleración): Fase de crecimiento gradual (progresivo).

Fase C (fase de crecimiento logarítmico) Todas la bacterias ya terminaron de adaptarse,
no hay sustratos limitados.

Fase D (Fase de desaceleración): sustratos limitados.

Fase E (Fase estacionaria): Hay proliferación bacteriana pero no crecimiento.

Fase F (fase de muerte): Tasa de muerte aumenta por encima de la tasa de proliferación.
Tasa de muerte bacteriana:

Se evalúa la eficacia de matar al microorganismo mediante una concentración fija de

droga bajo condiciones controladas.
Esta tasa es determinado midiendo el número de bacterias viables en varios intervalos de
tiempo. La representación gráfica resultante se conoce como curva de tiempo y muerte.

- Las tasas de mortalidad bacteriana ---- depende de la clase de antibiótico

y la concentración del mismo.
- En tal sentido existen antibióticos tienen actividad bactericida dependiente de la
concentración (aminoglucósidos – quinolonas).
- Existen tasas de mortalidad de las bacterias por B-lactamicos que son relativamente
lentos y para continuar con la capacidad bactericida necesitan mantenerse en las
concentraciones superiores sobre el MIC (tiempos dependientes).
Aspectos biológicos y factores técnicos interfieren
en la medición in vitro de la muerte bacteriana.

Existen factores Factores técnicos:

biológicos que incluyen:

- Fase de crecimiento del inóculo.

· Persistencia
- Tamaño del inóculo.
· Efecto paradójico - Contacto insuficiente.
- Volumen transferido.
· Tolerancia
- Resto de antibióticos.
. Resistencia fenotípica. - Elección de medios.
 FACTORES BIOLOGICOS

Persistencia:
 Para algunos antibióticos bien estudiados,
por ejemplo: B – lactamicos, un pequeño
número (generalmente <0,1% de inóculo
final) de bacterias se encontró que
sobreviven al efecto letal de un antibiótico.
La proporción de células persistentes. Es un
fenómeno --- se deba al hecho de que
algunas células están inactivos o se replican
lentamente y en consecuencia, no son
destruidos por el antimicrobiano.

La tasa de muerte inducida por

Por lo tanto cuanto más lento sea el
agentes antimicrobianos es
crecimiento bacteriano, más lento será el
estrictamente proporcional a la tasa
efecto bactericida.
del crecimiento bacteriano
Efecto paradojal:
Existe un factor conocido como efecto paradójico, que ocurre cuando la
proporción de células supervivientes ---aumenta significativamente a medida
que la concentración del ATB aumenta más allá del MBC.

Este fenómeno es particularmente común para los agentes activos de la pared

celular. Se observó que una alta concentración de penicilina inhibe la síntesis de
proteínas hasta un punto que evita el crecimiento bacteriano acelerado, periodo
importante para la acción del ATB (se ha descubierto que la penicilina también
lisa el ARN).
Tolerancia:
La tolerancia significa que el microorganismo es capaz para
evadir sólo la acción letal del agente antimicrobiano.

Existen 4 factores que logran explicar el efecto de

tolerancia:
- Dos de ellos se explican con el efecto persistencia y el
efecto paradojico.
El último mecanismo de tolerancia es
que un microorganismo posee o adquiere una
propiedad genética única, como un defecto del
sistema autolítico.
Otra es la tolerancia fenotípica: es una propiedad que
posee prácticamente todas las cepas de bacterias y se
define como disminución de la susceptibilidad a los
agentes antimicrobianos que es manifestado sólo bajo
ciertas condiciones de crecimiento.
Resistencia fenotípica

 Es frecuente que se desarrolle mecanismos de resistencia durante las pruebas

de susceptibilidad en el laboratorio (resistencia fenotípica).
 Durante las Pruebas para la actividad bactericida es particularmente
probable que se seleccionen cepas fenotípicamente resistentes de la
población bacteriana.

Un ejemplo del desarrollo de resistencia fenotípica se observa con B-lactámicos y ciertos

bacilos gramnegativos, como P. aeruginosa. La capacidad de estos microorganismos para
aumentar la cantidad de B-lactamasas periplásmica al tiempo que limita la afluencia
de agentes B-lactámicos a través de canales porínicos es un importante mecanismo de
resistencia.
 FACTORES TECNICOS
Fase de crecimiento – inoculo.
El uso de la fase estacionaria de los
El problema técnico más frecuente cultivos (como cultivos recientemente
encontrado en los laboratorios de inoculados) -- creciendo durante
microbiología que realizan pruebas períodos >8 horas, incluirá un
bactericidas es el uso de fase mayor número de células inactivas que
estacionaria de los cultivos. son poco susceptible al ATB (menor tasas
de muerte bacteriana).
Fase de crecimiento – inoculo.

 Además, el uso de cultivos en fase de latencia (p. ej. cultivos que

recientemente han sufrido un cambio en la condición de prueba, como la
temperatura o cambiar de medio agar a medio caldo)

Esto originara células menos reactivas al agente (esto causan puntos finales de
muerte bacteriana menos confiables).

Las tasas de muerte bacteriana son bien determinadas, durante el

creciendo logarítmicamente bacteriano.

Esto quiere decir que en vez de usar cultivos en fase estacionaria,

se deben realizar cultivos usado en crecimiento activo.
El efecto del inoculo.
 La tolerancia cuando se utilizan inóculos grandes y con pequeños.

• Inóculos pequeños o bajo-- pueden alcanzar tasas de

muerte bacteriana rápida ya sea en fase logarítmica o
estacionaria.

**Inóculos grades ---se puede alcanzar tasa de muerte

bacteriana rápida -- solo --- en la fase logarítmica.
Contacto insuficiente

 Los organismos de prueba pueden tener un contacto insuficiente con el

agente antimicrobiano. Esto es más frecuente debido a la adherencia de
microorganismos viables a la superficie del recipiente de cultivo por encima
del menisco.
 Esta adherencia es más probable con tubos de ensayo de plástico que con
tubos tratados con ácido cristalería de borosilicato o con plástico bandejas de
microdilución.
Arrastre de antibióticos:
 La transferencia de un volumen cuantitativo de caldo para el recuento de
supervivientes puede ser complicado por arrastre de antibióticos.

El arrastre de antibióticos; se puede eliminar mediante la

inactivación del antibiótico en una lamina de subcultivo.
Esto se puede hacer fácilmente con los agentes B-lactámicos al
inundar la placa con 1 ml de la mezcla de B-lactamasa que
contiene los tipos I y II B- lactamasas de Bacillus cereus.
Volumen transferido:

El volumen transferido para el conteo de las bacterias supervivientes

deben ser tales que después del período definido porcentual de muerte
bacteriana (99,9%), al menos diez colonias están presentes para ser
contadas después de la incubación.

Para un 99,9% como ideal para la tasa de muerte bacteriana al final

del inóculo de 5 x 10 a 5 UFC/mL, aproximadamente quedarán 100
células viables.

Un subcultivo de 10 a 100 uL es transferible. Volúmenes de transferencia

más pequeños (menos de 10 uL) puede resultar en muy pocas colonias
debido a error de la pipeta y error de muestreo intrínseco debido
a la distribución de Poisson de la respuesta muestral
(No se puede suponer que todos los organismos sean igualmente
distribuido en un caldo antes del muestreo).
Elección de medios cultivo.
- La elección de los medios también debe ser considerado que medio utilizados
habitualmente para las pruebas bactericidas tienen poco en común con el suero
estandarizado y el líquido intersticial del paciente.
- Entre las variables en medios y suero conocidas (estandarizadas) es de afectar
la actividad bactericida de ciertos agentes antimicrobianos y los microorganismos
tales como son, proteínas, pH, concentraciones de sal y cationes divalentes.
- Sin embargo, el suero humano tiene desventajas, incluida la inestabilidad del
pH, riesgo de transmisión del virus de la hepatitis B, VIH u otros virus
transmitidos por la sangre.
 Métodos para evaluar la eficacia de ATB:

a) Tasa de muerte bacteriana: Este evalua la eficacia de matar mediante una

concentración fija de droga bajo condiciones controladas.
Esta tasa es determinado midiendo el número de bacterias viables en varios
intervalos de tiempo. La representación gráfica resultante se conoce como
curva de tiempo y muerte.

- Las tasas de mortalidad bacteriana ---- depende de la clase de antibiótico

y la concentración del mismo.
- En tal sentido existen antibióticos tienen actividad bactericida dependiente
de la concentración (aminoglucósidos – quinolonas).
- Existen observan tasas de mortalidad de los B-lactamicos que son
relativamente lentos y para continuar con su eficacia solo sucede mientras las
concentraciones se mantienen superiores sobre el MIC (tiempos dependientes).
Métodos para evaluar la eficacia de ATB:

 El suero de un paciente que recibe el antibiótico puede probarse contra el

microorganismo infectante, esto puede hacerse utilizando la metodología de la
curva de tiempo muerto (es decir, tasa bactericida sérica) o usando dilución
metodología (es decir, título bactericida en suero). Los principios de estos
métodos, así como la influencia de los factores biológicos y técnicos.
 GRACIAS

Microbiota, 1 cepa es suficiente de generar una infeccion