SUSCEPTIBILIDAD EN DERMATOFITOS

Blga. Clelia Céspedes Román

Laboratorio de Referencia Nacional de Micología
Centro Nacional de Salud Pública
Instituto Nacional de Salud
 DERMATOFITOS
 Hongos de estructura típicamente filamentosa o micelar,
formada por una red de hifas.
 Reproducción: forma asexuada, por medio de esporas, y de
forma sexuada produciendo ascas y ascosporas.
 Se clasifican en función de sus características microscópicas
 Se conocen unas 250.000 especies de hongos, de los cuales
más de 100.000 pertenecen al género de los dermatofitos,
de estos sólo se conocen unas 150 especies que producen
enfermedad.
 Se dividen en tres grupos de acuerdo a su preferencia por
un ambiente: antropofílico, zoofílico y geofílico.
 CLASIFICACION DE LAS DIVERSAS
ESPECIES DE DERMATOFITOS

https://www.seimc.org/contenidos/ccs/revisionestematicas/micologia/ccs-2009-micologia.pdf
 M. Canis M. Gypseum
GEOFÍLICAS

T. Mentagrophytes T. tonsurans T. rubrum

ZOOFÍLICOS

ANTROPOFÍLICOS E. floccosum
DERMATOFITOS MAS IMPORTANTES
Producen micosis
superficiales en el Las principales
humano y especies son:
animales.

Microsporum  Trichophyton  T.
Epidermophyton mentagrophytes, T.
M. canis, M.
floccosum. rubrum, T.
gypseum
tonsurans
 DERMATOFITOSIS

Son infecciones micóticas de la queratina

Los signos y síntomas varían según el sitio de

infección.

El diagnóstico se basa en la apariencia clínica y en el

examen de muestras de raspados cutáneos en
preparados húmedos con hidróxido de potasio.
El tratamiento varía según el sitio de infección, pero
siempre se utilizan fármacos antimicóticos por vía oral
o tópicos.
SUSCEPTIBILIDAD ANTIFUNGICA
 Hasta hace dos décadas las pruebas de susceptibilidad para
dermatofitos in vitro a los diferentes antifúngicos solo se empleaban
ocasionalmente en laboratorios especializados.
 Existen varias técnicas sin embargo aun no se logra su estandarización
 Factores que lo dificultan: el tipo y tamaño del inoculo, temperatura
y medio de crecimiento, pH y tiempo de incubación.
 ALGUNAS TECNICAS USADAS
De pozos de difusión: evalúa la sensibilidad
mediante la difusión del antifúngico en un medio
sólido. Es una técnica simple y económica, pero
puede presentar limitaciones en cuanto a la
estandarización del inóculo y la interpretación de los
resultados.
https://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0075-52222006000200002
Microdilución en caldo para la evaluación de
susceptibilidad antifúngica basado en una modificación
del Documento M 38-A de la NCCLS: pero aún hay
desafíos relacionados con la determinación del inóculo
y otros factores.
 EUCAST E.Def 11.0 (método de
referencia)
 Basado en el método de microdilucion EUCAST para mohos
 Prueba la susceptibilidad de los dermatofitos productores de
microconidios.
 Objetivo: proporcionar un método adecuado, fácil y económico
 Se centra en: condiciones de prueba, inoculo, tiempo, temperatura de
incubación y punto final
 SUSPENSIÓN DE MICROCONIDIOS
Medio SD, APD, Malta
Suplementado

50mg/L - 300mg/L
Incubación 25°-28°C de 4-7 días
Cultivo fresco y maduro

5ml H2O(d) + Tween 20 al 0.1%

Frotar con hisopo el cultivo

Transferir a tubo y agitar por

15`s y filtrar

Ajustar con H2O(d) a 2x106 a

5x106 microconidios/mL
SUSPENSIÓN DE MICROCONIDIOS
Ajustar concentración a 0.5 Mc
Farland

Volver a diluir para obtener

2x105 a 5x105 CFU/mL

Concentración 1:10 H2O(d)

Complementación del inoculo

Cloranfenicol - cicloheximida

[C] final en placa mas inoculo

cicloheximida 300mg/L y
cloranfenicol 50mg/L

Volumen total de cicloheximida

y cloranfenicol al 0.8% del
inoculo
 INOCULACION DE PLACAS
Dentro de los 30´m posterior a
Garantizar la viabilidad
la suspensión del inoculo

Se inocula 100mL de suspensión

de 2x105 a 5x105 CFU/mL

Col. 11 medio sin fármaco  CC

Col. 12 H2O(d)  CE

Incubar la placas 25°C-28°C

Leer en el día 5
https://sci-hub.se/10.1016/j.cmi.2020.08.042
DISTRIBUCIÓN DE ANTIFÚNGICOS EN
LA PLACA
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CC CE
AF AF AF AF AF AF AF AF AF AF 0 0
0.008 0.015 0.03 0.06 0.12 0.25 0.5 1 2 4
IZ IZ IZ IZ IZ IZ IZ IZ IZ IZ 0 0
0.008 0.015 0.03 0.06 0.12 0.25 0.5 2 4
1
PZ PZ PZ PZ. PZ PZ PZ PZ PZ PZ 0 0
0.008 0.015 0.03 06 0.12 0.25 0.5 1 2 4
TF TF FF TF TF TF TF TF TF TF 0 0
0.004 0.008 0.015 0.03 0.06 0.12 0.25 0.5 1 2
VOR VOR VOR VOR VOR VOR VOR VOR VOR VOR 0 0
0.008 0.015 0.03 0.06 0.12 0.25 0.5 1 2 4
 RESULTADOS

Se hizo una reducción Se consideró el criterio

Las lecturas del 50 % y el 90 % de de valoración del 50 %
espectrofotométricas la D.O del control de porque permite una
fueron entre 405-540 crecimiento y se determinación objetiva.
siendo mayormente 490 comparo con la
nm. lectura visual de las
placas.
 Columna 12: control
de esterilidad

Definición Ejem
Sin reducción de crecimiento Columna 11: control de
Clara reducción crecimiento
Ligera reducción de crecimiento Punto de corte
Crecimiento muy débil para un antifúngico
Sin crecimiento
 INTERPRETACION
 Los puntos de corte clínicos
aún no se han establecido
porque no se dispone de
suficientes datos de CMI y
resultados clínicos.
 EUCAST estableció ECOFF
tentativos para terbinafina,
itraconazol, voriconazol y
amorolfina contra T.
interdigitale y T. rubrum en el
momento de establecer este
método.
 CONCLUSIONES

La interpretación de las CMI sin punto de corte puede hacerse

teniendo en cuenta los datos disponibles, la experiencia clínica
y la exposición del fármaco durante la terapia y con mucho
cuidado.

La CMI puede proporcionar información sobre la

susceptibilidad y generar CMI para dermatofitos y
posteriormente establecer los puntos de corte.
 REFERENCIA
• Arendrup et al. How to: perform antifungal susceptibility testing of microconidiaforming
dermatophytes following the new reference EUCAST method E.Def 11.0, exemplified by Trichophyton.
Clin microb and infec. 2020, 27(1) 55-60 https://sci-hub.se/10.1016/j.cmi.2020.08.042
• Colella et. Al. Susceptibilidad antifúngica en dermatofitos. Kasmera (online) 2006, 34(2) 85-92
• Denise M. Aaron. Generalidades sobre la dermatofitosis.
https://www.msdmanuals.com/es-pe/professional/trastornos-dermatol%C3%B3gicos/infecciones-mic
%C3%B3ticas-cut%C3%A1neas/generalidades-sobre-la-dermatofitosis
• Institute for international cooperation in animal biologics. Dermatofitosis Tiña, Tinea, Dermatomicosis.
2005 https://www.cfsph.iastate.edu/Factsheets/es/dermatofitosis.pdf
• M. A. Ghannoum, et al. Interlaboratory Study of Quality Control Isolates for a Broth Microdilution
Method (Modified CLSI M38-A) for Testing Susceptibilities of Dermatophytes to Antifungals
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1698433/
• Overview of antifungal ECOFFs and clinical breakpoints for yeasts and moulds - valid
from 18 January, 2022.
https://www.eucast.org/fileadmin/src/media/PDFs/EUCAST_files/AFST/Clinical_breakpoints/
AFST_EUCAST_BP_ECOFF_v3.0_18_01_22.pdf
 GRACIAS

ccespedes@ins.gob.peru