UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICO-BIOLOGICAS
INGENIERÍA BIOQUÍMICA

REPORTE DE PRÁCTICA “Elisa para antígeno de Dengue NS1”

ALUMNO: Ramírez Carrasco Jesús Humberto

MAESTRA: MC. Janette Chávez Ontiveros

MICROBIOLOGÍA Cuarto grado

CULIACÁN SINALOA 7 DE DICIEMBRE DEL 2011

50 (Relación R5 = DO R5 / CO)…Control positivo . Tras los lavados practicados al final de la incubación. los antígenos o anticuerpos se pueden conjugar al enzima sin pérdida de actividad. respectivamente. El 4nitrofenil fosfato o sustrato usado para la fosfatasa alcalina no es peligroso. La preparación de conjugados se consigue. Ésta se combina con el enzima en la proporción 3:1. deberán de cumplirse los siguientes criterios:   Valor de densidad óptica de CO debe ser mayor a 0. temperatura y pH.400 (Relación R3 = DO R3 /CO)…Control negativo Relación R5 > 1. En segundo lugar. La adsorción depende también dl tiempo.. a los 30 min de incubación a temperatura ambiente.400 Relaciones: Relación R3 < 0. Las técnicas ELISA tienen numerosas aplicaciones en bacteriología.El alumno aprenderá a validar los resultados obtenidos. que puede prolongarse hasta 12 meses. la reacción enzimática es interrumpida mediante la adición de una solución ácida. en el caso de la fosfatasa alcalina. Algunos métodos precisan que las placas se mantengan durante toda la noche a 4° C. 2. Se han utilizado toda una variedad de enzimas. Control de calidad Para validar la manipulación. entre los que citaremos la fosfatasa alcalina.ELISA PARA ANTÍGENO DE DENGUE NS1 Objetivos: 1.2% durante 2-4 horas a temperatura ambiente. Introducción Existen dos importantes variaciones en relación con ELISA. La hidrólisis de éstos sustratos da. La prueba utiliza anticuerpos monoclonales de ratón (AcM) para su captura y revelación. En presencia de antígeno NS1 en la muestra. La fracción inmunoglobúlinica de la globulina antiespecie se aísla por precipitación salina. se forma un complejo inmune AcM-NS1AcM/peroxidasa. es un método inmunoenzimático en una etapa de tipo sándwich.El alumno será capaz de realizar la técnica de ELISA. mediante la unión covalente con glutaraldehido.200 CO > . que se considera carcinogénico. en microplaca para la detección cualitativa o semicuantitativa del antígeno NS1 del virus de dengue en el suero o en el plasma humano. Se debe añadir un estabilizante enzimático antes de proceder a su conservación a 4°C. El glutaraldehído libre se elimina por diálisis. a diferencia del ácido 5-aminosalicílico o sustrato de la peroxidasa del rábano. Las muestras de pacientes y los patrones son incubados directa y simultáneamente con el conjugado durante 90 minutos a 37°C en las cúpulas (pocillos) de la microplaca sensibilizada por los AcM. que los anticuerpos o antígenos soluble se pueden hacer insolubles por adsorción a una fase sólida. la presencia del complejo inmune es revelada mediante el añadido de una solución de revelación enzimática que induce el desarrollo de una reacción coloreada. La densidad óptica obtenida a 450/620 nm es proporcional a la cantidad de antígeno NS1 presente en la muestra. como pueden ser las placas de microtitulación o los tubos de poliestireno. la peroxidasa dl rábano picante y la glucosa-oxidasa. En primer lugar. parasitología y virología. un color amarillo ( : 405nm) y oscuro ( : 450nm).. La mezcla se incuba con glutaraldehído al 0. Principio La prueba Platelia TM para dengue NS1 Ag. en un tampón de pH elevado.

18 = 0.18 = 0. 2 = .0 Resultado Negativo Equívoco Positivo Interpretación La muestra es considerada no reactiva para el antígeno NS1 Del virus del dengue La muestra es considerada dudosa para el antígeno NS1 del virus del dengue La muestra es considerada reactiva para el antígeno NS1 del virus del dengue.622 Relación R5 (+) = .55 Mtra. 1) F ( Mtra.37222 Mtra. Contaminación puntual de la solución de revelación por agentes químicos oxidantes (lejías. 1 = . 4 = 0.074/0.067 0. 3 = 0.205 0.155 0.099/0.50 Relación ≥ 0. Error en el pipeteo.50 y < 1.112 0.074 0. iones metálicos).18 = 0.155)/2 = 0. Contaminación de las muestras negativas por un suero o plasma muy concentrado.Interpretación de resultados Relación Relación < 0. 2) G (Mtra.18 Relación R3 (-) = .18 = 0.081 Promedio CO = (.205+. 3) H (Mtra.099 0.  Contaminación puntual de la solución parada. .112/0.067/0.18 = 2. Resultado obtenidos Pocillo A (-) B (CO) C (CO) D (+) E ( Mtra.4111 Mtra.18 = 0.405/0.45 Posibles Causas de error     Lavado insuficiente de las microplacas.405 0.0 Relación ≥ 1. 1) Densidad Optica 0.25 Mtra.081/0. Conclusiones y Comentarios Debido a que la prueba fue hecha por varias manos los resultados nos salieron fuera de los rangos esperados pero aprendimos lo que es el principio que era el principal objetivo de la práctica.

El micelio posee estructuras llamadas "hifas" las cuales pueden o no ser septadas (divididas). crecen a temperaturas bajas (-5 a 5 ºC). es decir. 3. (Son los hongos que aparecen comúnmente en los alimentos. dependiendo de la especie que se trate. ¿Qué diferencias existen entre la morfología microscópica de los hongos filamentosos (mohos) y las levaduras? Los mohos filamentosos poseen un micelio vegetativo "aéreo" y otro "profundo". Ejemplos de hongos filamentosos: Penicillium sp. consisten en células individuales alargadas con numerosos núcleos o subdivididas por tabiques llamados septos en muchas células. En la morfología de bacterias podemos encontrar algunas formas puntiformes. que es una masa entretejida de filamentos de una célula de espesor. 4.Micro-9 1. etc. por ejemplo. llamados hifas. 2. algunas son lisas. Saccharomyces cerevisiae. Las hifas. sus colonias típicas son como las de las bacterias y se usan mucho en la fermentación de bebidas alcohólicas. . otras como una especie de moco y en el caso de los hongos El cuerpo de casi todos los hongos es un micelio. Aspergillus flavus. c/u con una o varios núcleos.. sobre todo limones o naranjas). aun cuando su temperatura óptima de crecimiento sea alrededor de los 18 ºC. parecidos a hilos. Mencione las diferencias entre la morfología colonial bacteriana y la morfología colonial de hongos. Las levaduras son menos complejas y no poseen micelios. ¿En qué ambientes se encuentran este tipo de microorganismos? Ambos crecen en ambientes ácidos y son organismos psicrótrofos. ¿Cuáles son las condiciones óptimas para el crecimiento de hongos y levaduras? Los hongos y las levaduras pueden crecer en un sustrato o medio de concentraciones de azucares que inhiben a la mayoría de las bacterias esto por ejemplo el PDA.

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