UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICO-BIOLOGICAS
INGENIERÍA BIOQUÍMICA

REPORTE DE PRÁCTICA “Elisa para antígeno de Dengue NS1”

ALUMNO: Ramírez Carrasco Jesús Humberto

MAESTRA: MC. Janette Chávez Ontiveros

MICROBIOLOGÍA Cuarto grado

CULIACÁN SINALOA 7 DE DICIEMBRE DEL 2011

2.2% durante 2-4 horas a temperatura ambiente. Se han utilizado toda una variedad de enzimas. deberán de cumplirse los siguientes criterios:   Valor de densidad óptica de CO debe ser mayor a 0. La mezcla se incuba con glutaraldehído al 0. Tras los lavados practicados al final de la incubación. La densidad óptica obtenida a 450/620 nm es proporcional a la cantidad de antígeno NS1 presente en la muestra. la presencia del complejo inmune es revelada mediante el añadido de una solución de revelación enzimática que induce el desarrollo de una reacción coloreada. En presencia de antígeno NS1 en la muestra.El alumno aprenderá a validar los resultados obtenidos.. como pueden ser las placas de microtitulación o los tubos de poliestireno.. La preparación de conjugados se consigue. Introducción Existen dos importantes variaciones en relación con ELISA. que se considera carcinogénico.ELISA PARA ANTÍGENO DE DENGUE NS1 Objetivos: 1.400 (Relación R3 = DO R3 /CO)…Control negativo Relación R5 > 1. entre los que citaremos la fosfatasa alcalina. Las muestras de pacientes y los patrones son incubados directa y simultáneamente con el conjugado durante 90 minutos a 37°C en las cúpulas (pocillos) de la microplaca sensibilizada por los AcM. Las técnicas ELISA tienen numerosas aplicaciones en bacteriología. La prueba utiliza anticuerpos monoclonales de ratón (AcM) para su captura y revelación. Ésta se combina con el enzima en la proporción 3:1. un color amarillo ( : 405nm) y oscuro ( : 450nm). parasitología y virología. temperatura y pH. Control de calidad Para validar la manipulación. en un tampón de pH elevado. los antígenos o anticuerpos se pueden conjugar al enzima sin pérdida de actividad. a los 30 min de incubación a temperatura ambiente. Algunos métodos precisan que las placas se mantengan durante toda la noche a 4° C. El glutaraldehído libre se elimina por diálisis. la reacción enzimática es interrumpida mediante la adición de una solución ácida. En segundo lugar. Principio La prueba Platelia TM para dengue NS1 Ag.400 Relaciones: Relación R3 < 0. la peroxidasa dl rábano picante y la glucosa-oxidasa. La adsorción depende también dl tiempo. Se debe añadir un estabilizante enzimático antes de proceder a su conservación a 4°C. en microplaca para la detección cualitativa o semicuantitativa del antígeno NS1 del virus de dengue en el suero o en el plasma humano. La hidrólisis de éstos sustratos da.El alumno será capaz de realizar la técnica de ELISA. respectivamente. El 4nitrofenil fosfato o sustrato usado para la fosfatasa alcalina no es peligroso. En primer lugar.200 CO > . mediante la unión covalente con glutaraldehido. La fracción inmunoglobúlinica de la globulina antiespecie se aísla por precipitación salina. en el caso de la fosfatasa alcalina. que los anticuerpos o antígenos soluble se pueden hacer insolubles por adsorción a una fase sólida. que puede prolongarse hasta 12 meses. se forma un complejo inmune AcM-NS1AcM/peroxidasa. es un método inmunoenzimático en una etapa de tipo sándwich. a diferencia del ácido 5-aminosalicílico o sustrato de la peroxidasa del rábano.50 (Relación R5 = DO R5 / CO)…Control positivo .

074 0.18 = 0.155)/2 = 0. 2) G (Mtra.55 Mtra. Conclusiones y Comentarios Debido a que la prueba fue hecha por varias manos los resultados nos salieron fuera de los rangos esperados pero aprendimos lo que es el principio que era el principal objetivo de la práctica. Resultado obtenidos Pocillo A (-) B (CO) C (CO) D (+) E ( Mtra.112/0. .099/0.45 Posibles Causas de error     Lavado insuficiente de las microplacas. 3 = 0. iones metálicos).074/0.18 = 0.25 Mtra.0 Relación ≥ 1.18 = 0. 4 = 0.205+.50 Relación ≥ 0.4111 Mtra. 2 = .18 = 2.155 0. 1 = .081 Promedio CO = (.405/0.099 0.067/0.067 0.18 = 0.622 Relación R5 (+) = .  Contaminación puntual de la solución parada.50 y < 1.112 0.Interpretación de resultados Relación Relación < 0. 3) H (Mtra.0 Resultado Negativo Equívoco Positivo Interpretación La muestra es considerada no reactiva para el antígeno NS1 Del virus del dengue La muestra es considerada dudosa para el antígeno NS1 del virus del dengue La muestra es considerada reactiva para el antígeno NS1 del virus del dengue. Contaminación de las muestras negativas por un suero o plasma muy concentrado.081/0.37222 Mtra.18 = 0. Error en el pipeteo. Contaminación puntual de la solución de revelación por agentes químicos oxidantes (lejías.18 Relación R3 (-) = .205 0. 1) Densidad Optica 0.405 0. 1) F ( Mtra.

Ejemplos de hongos filamentosos: Penicillium sp. (Son los hongos que aparecen comúnmente en los alimentos. Las hifas. crecen a temperaturas bajas (-5 a 5 ºC). Saccharomyces cerevisiae. es decir.. sus colonias típicas son como las de las bacterias y se usan mucho en la fermentación de bebidas alcohólicas. llamados hifas. En la morfología de bacterias podemos encontrar algunas formas puntiformes.Micro-9 1. 2. que es una masa entretejida de filamentos de una célula de espesor. parecidos a hilos. otras como una especie de moco y en el caso de los hongos El cuerpo de casi todos los hongos es un micelio. Aspergillus flavus. dependiendo de la especie que se trate. 3. consisten en células individuales alargadas con numerosos núcleos o subdivididas por tabiques llamados septos en muchas células. El micelio posee estructuras llamadas "hifas" las cuales pueden o no ser septadas (divididas). ¿Cuáles son las condiciones óptimas para el crecimiento de hongos y levaduras? Los hongos y las levaduras pueden crecer en un sustrato o medio de concentraciones de azucares que inhiben a la mayoría de las bacterias esto por ejemplo el PDA. 4. sobre todo limones o naranjas). c/u con una o varios núcleos. aun cuando su temperatura óptima de crecimiento sea alrededor de los 18 ºC. por ejemplo. Las levaduras son menos complejas y no poseen micelios. etc. . ¿En qué ambientes se encuentran este tipo de microorganismos? Ambos crecen en ambientes ácidos y son organismos psicrótrofos. Mencione las diferencias entre la morfología colonial bacteriana y la morfología colonial de hongos. algunas son lisas. ¿Qué diferencias existen entre la morfología microscópica de los hongos filamentosos (mohos) y las levaduras? Los mohos filamentosos poseen un micelio vegetativo "aéreo" y otro "profundo".

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