UNIVERSIDAD DE ORIENTE

NUCLEO DE SUCRE
DEPARTAMENTO DE BIOANÁLISIS
CUMANÁ

BACTERIOLOGÍA CLÍNICA
UNIDAD XI:
ACTINOMICETOS Y GÉNEROS
RELACIONADOS

Profa. Elvia Michelli

CAPACITAR AL ESTUDIANTE EN EL
DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DEL
GÉNERO Mycobacterium y otras
Micobacterias, MEDIANTE EL ESTUDIO
DE SU MORFOLOGÍA, FISIOLOGÍA Y
ECOLOGÍA, ASÍ COMO LA PATOGENÍA Y
EPIDEMIOLOGÍA DE LAS
ENFERMEDADES PRODUCIDAS POR
ÉSTE.
Tuberculosis y micobacteriosis
Las enfermedades ocasionadas por micobacterias constituyen
sin duda un capítulo importante de la patología infecciosa
humana, encuadrando enfermedades tan antiguas como la
tuberculosis y la lepra; así como las micobacteriosis.

Reseña Histórica
Mycobacterium tuberculosis: bacteria responsable de la
mayor cantidad de casos de tuberculosis en el mundo.
Fue descrito por primera vez el 24 de marzo de 1882, por
Robert Koch (Premio Nobel de Fisiología o Medicina en 1995)
Su genoma se ha secuenciado, lo que permitirá aclarar su
relación con las otras especies del complejo Mycobacterium
tuberculosis
Las micobacteriosis son ocasionadas por micobacterias diferentes
a Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae

Su incidencia aumenta en pacientes inmunodeprimidos,

especialmente en pacientes con SIDA, en los cuales Mycobacterium
avium intracellulare se ha convertido en un patógeno oportunista
frecuente y de difícil tratamiento (países como USA).

En la actualidad, el retraso diagnóstico y terapéutico y el no

cumplimiento correcto de los tratamientos ha complicado el panorama
de estas enfermedades, con la aparición de cepas con resistencia
múltiple a fármacos.
Phylum: Actinobacteria
Clase: Actinobacteria
Familia: Mycobacteriaceae
Género: Mycobacterium
Complejo Mycobacterium tuberculosis
El género comprende 50 especies, entre ellas patógenos primarios,
oportunistas y saprofitas.

MICOBACTERIAS NO TUBERCULOSAS
De crecimiento lento De crecimiento rápido
No fotocromógenas Con potencial patógeno
Complejo M. avium M. fortuitum
M. celatum M. chelonae
M. haemophilum M. smegmatis
M. simiae M. septicum
 Escotocromógenas
(producen pigmento en oscuridad y en
Fotocromógenas ambientes con luz)
(producen pigmento tras M. gordonae
exposición a la luz)
M. scrofulaceum
M. kansassi M. lentiflavum
M. asiaticum M. kubicae
M. marinum
M. intermedium
Rara Vez Patógenas No Cultivable
M. paratuberculosis M. leprae
M. parafortuitum
M . vaccae
M. thermoresistible
1)PCR (polymerase chain reaction )-RFLP (restriction fragment length polymorphism) del gen
gyrB y digestión con RsaI, TaqI o Sac II y PCR-RFLP del gen hsp65 y digestión con HhaI,
2) PCR multicebador, para detectar la ausencia o la presencia de las regiones RD9 y RD1.
Clasificación de Runyon
Nº NOMBRE DEL GRUPO CARACTERÍSTICAS
Colonias crecen en oscuridad.
I FOTOCROMÓGENAS Producen pigmento al exponer a luz.
7 días para crecer en medios sólidos
Colonias que producen pigmento en
II ESCOTOCROMÓGENAS luz y oscuridad. Más de 7 días en
aparecer en medios sólidos
Carecen de pigmento. Cultivadas en
NO
III luz o la oscuridad, más de 7 días en
FOTOCROMÓGENAS
aparecer en medios sólidos
DE CRECIMIENTO Colonias que aparecen en medios
IV
RÁPIDO sólidos en menos de 7 días

Micobacterias no tuberculosas: capacidad de producir pigmentaciones en

prescencia o ausencia de luz, y velocidad de crecimiento in vitro en medios de cultivo.
Ampliamente distribuidos en la
naturaleza
Saprófitos de agua y suelos
Patógenos en humanos
Complejo Mycobacterium
tuberculosis
Bacteria Gram positiva, débilmente teñida con Gram
Las micobacterias varían en su morfología, desde formas
cocoides pequeñas a largos filamentos.
Ocasionalmente, forma ramificaciones verdaderas que se
observan en cultivos enriquecidos y en frotis de ganglios
linfáticos caseosos.
No forma flagelos, esporas, ni cápsula

Bacilos ligeramente curvos o

rectos de 0,2-0,6 x 1,0-10 μ,
agrupados en empalizadas o
aislados.

Bacilos ácido resistentes

Coloreados con Zielh Neelsen.
 CARACTERÍSTICAS DE CULTIVO
Aerobios estrictos.
Temperatura de crecimiento 37ºC; rango entre 30 y 42 ºC.
pH: 6,4-7,0
Su crecimiento está subordinado a la presencia de oxígeno y al valor
del pH circundante.
Su multiplicación es muy lenta (se divide cada 16 a 20 horas)
Medios de Cultivo

Líquidos
Youmans: Suero de buey, glicerina, oligoelementos
Caldo Dubos Midle-brook 7H10: Suero de buey y albúmina
bovina

Sólidos (desarrollo de colonias en tres a cinco semanas)

Lowestein –Jensen: Yema de huevo, sales minerales, papa,
glicerina y verde de malaquita
 Colonias de Mycobacterium tuberculosis
sobre un medio de cultivo : rugosas, eugónicas
secas de bordes irregulares
Oxidan la glucosa
Producen la enzima catalasa
No produce catalasa a 68ºC
Reducen nitratos a nitritos.
Acción sobre la leche
Acumula Niacina
Crecimiento inhibido por hidracida del
ácido Carboxílico
 RESISTENTES:
Ante circunstancias adversas puede entrar en estado latente,
pudiendo retrasar su multiplicación desde algunos días hasta
varios años.
Permanecen viables en el esputo desecado de seis a ocho
meses, cuando están protegidas de la luz solar directa
Resistente al frío, la congelación y la desecación
Resistente a los desinfectantes

SENSIBLES:
Sensible al calor, la luz solar y la luz ultravioleta
Son destruidos por procedimientos de pasteurización
PARED CELULAR – constituida por tres capas:
- Capa interna moderadamente electrón-densa
Compuesta por el peptidoglicano cuya estructura es similar a la
de otras bacterias

Capa interna
moderadamente electrón-
densa
- Capa media, más ancha que la anterior
Electrón-transparente, compuesta por: polisacárido
arabinogalactano, cuyos extremos distales están esterificados con
ácidos grasos de alto peso molecular, los ácidos micólicos, de
tamaño y estructura única para las Mycobacterias (70-90 átomos
de Carbono).

Capa media
electrón-transparente

Capa interna moderadamente

electrón-densa
 - Capa externa de grosor variable, electrón-opaca: Se le
atribuye una estructura glucolípida.
Proteínas asociadas a la pared:
- Algunas con función enzimática (necesarias para formación de pared
durante el proceso de división celular y crecimiento)
- Otras recientes: con función de porina
En bajo número, asociadas a la baja permeabilidad de las Mycobacterias a
las moléculas hidrofílicas.

Capa externa, electrón-

opaca

Capa media
electrón-transparente

Capa interna moderadamente

electrón-densa
MEMBRANA CITOPLASMICA –
En cortes ultrafinos: membrana biológica trilaminar
clásica
Dos capas electrón-densas
Una capa transparente

Característico: la presencia de moléculas de

lipopolisacáridos, lipoarabinomananos (LAM),
lipomonanos y fosfatidil-inositol-manósidos
 Capa externa,
electrón-opaca

Capa media Electrón-

transparente

Capa interna moderadamente

electrón-densa
Estructura antigénica compleja

Polisacáridos: no generan hipersensibilidad retardada

Fosfatidil-inositol-manósido

Cera D y muramildipéptido: pueden desencadenar

inmunidad adaptativa celular

Factor cuerda (dimicolato de 6,6’ trehalosa)

actividad inmunorreactiva

Proteínas termoestables: liberadas al medio de

cultivo, las más estudiadas son PPD (purified protein
derivate)
FACTORES DE VIRULENCIA
 MECANISMOS DE VIRULENCIA
A. Sobrevida en fagocitos

A.1. Habilidad para crecer dentro de monocitos y

macrófagos:
1. Mediante el proceso habitual de fagocitosis, mediado por
la opsonización y por C3b.
2. La bacteria estimula su propia fagocitosis a través de
invasinas.
3. Habilidad para prevenir la acidificación del fagosoma
Paso importante en la fusión lisosoma-fagosoma, y en la
activación de los factores bactericidas liberados durante la
fusión: Los sulfolípidos (impiden la fusión lisosoma-
fagosoma en los fagocitos)
 MECANISMOS DE VIRULENCIA

4. Otro mecanismo contra la destrucción fagocítica:

Glucolípidos abundantes de la pared de
Mycobacterias, que protegería las bacterias de las
formas tóxicas de O2 producidas en el fagolisosoma

A.2. El complejo superóxido dismutasa

(SOD)/catalasa:
Neutraliza el poder oxidante de los iones superóxido
(O2-) y del peróxido de hidrógeno (H2O2), presentes en
los lisosomas de los fagocitos.
 MECANISMOS DE VIRULENCIA
B. Interferencia con la activación de los macrófagos

B.1. El lipoarabinomanano que suprime la

activación de las células T.

B.2. El antígeno 85A, puede prevenir la activación

de células T mediada por la fibronectina y, de ese
modo, impedir la activación
 MECANISMOS DE VIRULENCIA
C. Destrucción tisular

C.1. Ácidos micólicos de la pared celular (factor

cuerda): Son tóxicos cuando son inyectados a animales y
pueden desencadenar respuesta inflamatoria. Inhiben la acción
de la succinato deshidrogenasa, provocando el hinchamiento de
sus mitocondrias y separa los ribosomas del retículo
endoplásmico rugoso
C.2. Muramil dipéptido, estimula el sistema inmune y
dispara la producción de citoquinas
C.3. Compuestos de la pared no identificados y
productos tóxicos liberados por los lisosomas que estimulan la
producción de factor de necrosis tumoral alfa (NFT).
Número de bacilos presentes en el
inóculo: gotas con pocos bacilos, provenientes de
un sujeto con tuberculosis pulmonar abierta, son lo
suficientemente pequeños para no quedar atrapados en el
aparato mucociliar bronquial y alcanzar el espacio
terminal aéreo donde se multiplican.
Virulencia del microorganismo
Disminución de las defensas: 95% de
los casos, los hospederos inmuno competentes controlan
la infección primaria, por formación de granuloma
caseoso, el cual encierra al bacilo y controla su
proliferación
95% de los casos
 INOCULACIÓN:

Inhalación Ingestión Contacto Directo Piel

Pulmón, ganglios Mucosa Y Amigdalas Ulceración en sitio de

1.- Lesión linfáticos (ganglios cervicales) o inoculación (ganglios
Primaria traqueobronquiales pared intestinal linfáticos regionales)

Lesión exudativa→ pocas bacterias , PMN escasos y monocitos

Tardiamente→ A.-Cura (Se Reabsorve)
2. Inflamación: B.-Necrosis caseosa del tejido
C.-Lesión productiva o tubérculo (puede curar por
calcificación ó fibrosis)
Zona central (células gigantes)
3.Tubérculo: Zona media celulas epitelioides
Zona periférica de fibroblastos, monocitos y linfocitos
Las células en el interior contienen gran cantidad de bacilos
Necrosis caseosa a las 6 semanas
Desintegración de células y bacilos
4.-Caseificación:
Formación de masa coagulada que semeja queso (caseum). Escasos
bacilos. Condensación del caseum y encapsulamiento ó formación de
cavernas ricas en oxígeno, bacilos se multiplican activamente
 CUADROS CLÍNICOS

CUADRO CLÍNICO CARACTERÍSTICAS

Mycobacterium tuberculosis o más
raramente Mycobacterium bovis. Los
Tuberculosis Meníngea síntomas pueden ser: dolor de cabeza,
rigidez de nuca, convulsiones, deficits
neurológicos

Tuberculosis oftálmica: Cuerpos ciliares y coroides

Tuberculosis tuberculosis que afecta a corazón,
cardiovascular: pericardio o vasos sanguíneos
Cerebro, médula espinal o meninges.
Tuberculosis del Sistema Generalmente causada por
Nervioso Central: Mycobacterium tuberculosis y más
raramente por Mycobacterium bovis

Forma de tuberculosis debida a la

Tuberculosis miliar: diseminación sanguínea del bacilo,
afectando a distintos órganos.
PRUEBA INTRADERMICA
PPD Ó TUBERCULINA
Esta prueba estudia la hipersensibilidad frente a
antígenos proteicos de M. tuberculosis
PRUEBA CUTÁNEA
(intradermorreacción De Mantoux):
ERITEMA DE 10 mm (+) a 48-72 h

VACUNACIÓN BCG: (Bacilo Calmette y Guerin)

→obtenida de bacilo bovino
Aplicación : 1er mes de vida o edad escolar
TBC: tuberculosis, se manifiesta por un gran polimorfismo con
variadas localizaciones, ya sean pulmonares o extrapulmonares (menos
frecuentes).

Primo infección: ocurre en cualquier

área donde el bacilo se localice, reacción inflamatoria que constituye el
chancro de inoculación

Reinfección: infección tuberculosa meses o

años después de la infección por el mismo bacilo. Reinfección exógena,
(adquisición de un nuevo bacilo del exterior).

Reactivación bacilar:
Complejo Mycobacterium
leprae
COMPLEJO LEPRA
M. leprae: productor de la lepra humana,
Mycobacterium lepraemurium: produce lepra en roedores

CARACTERÍSTICAS MICROBIOLÓGICAS
M. leprae: bacilo recto o ligeramente incurvado, con extremos
redondeados
Tamaño: 1-8 μ de longitud por 0,3 0,5 μ de ancho
Se agrupan dentro de células, denominándose a estas formaciones
"globis".
Es no esporulado, inmóvil y no capsulado.
Gram positivo débil
Cuando se tiñe con método de Ziehl-Neelsen: bacilo rojo sobre
fondo azul, ácido-alcohol-resistente, forma uniforme o gránulos con
mayor tamaño que el diámetro promedio de la célula
 La ácido-alcohol-resistencia de M. leprae puede ser
eliminada por medio de la extracción preliminar con
piridina, una propiedad útil para diferenciar a este
microorganismo de la mayor parte de las otras micobacterias

También se emplea la fluorescencia con auramina o naranja

de acridina.

M. leprae se desarrolla lentamente y tiene un tiempo de

. generación de 1 día. Se comporta como un parásito
intracelular obligado.

Hasta el presente no se ha conseguido su cultivo en medios

de laboratorios.
Triple cubierta rica en polisacáridos externos y en peptidoglicano
basal, pared que rodea al citoplasma. (Peptidoglicano
arabinogalactanos y micolatos).
Moléculas glicolípidos asociados
a la pared celular, el glicolípido
fenólico I (PGL-I), con un
trisacárido especial especie
específico e inmunogénico

La presencia de glicina en
vez de alanina en la pared le
dota de fragilidad y
crecimiento aberrante

El citoplasma posee una

estructura central con ácidos
nucleícos y ribosomas
 CUADROS CLÍNICOS

LEPRA
Infección producida por M. leprae por contacto persona –
persona
Vía digestiva, pumonar y nasal

Manifestaciones clínicas
Lesión nervios superficiales
Nódulos, infiltrados :eritematosos y cutáneos
Alteraciones neurológicas
Acortamiento de extremidades
Evolución 10 a 20 años
 CUADROS CLÍNICOS
LEPRA
LEPRA TUBERCULOIDE
Evolución lenta y benigna
Afección cutánea
Nervios periféricos
Focos infecciosos: pocos bacilos y formación de granulomas

LEPRA LEPROMATOSA
Evolución progresiva, maligna.
Lesiones cutáneas nodulares y desfigurantes
Invasión lenta simétrica de los nervios
Foco infeccioso: abundantes BAR
CADENA EPIDEMIOLÓGICA

M. tuberculosis

Agente
Causal

Hospedero Reservorio
Hombre Enfermo convaleciente,
susceptible bacilífero

Puerta de Puerta de
entrada salida
Transmisión TRS
TRS

Directa
Indirecta
Lucha contra el reservorio animal

Vacunación sistemática

Prueba de la PPD

Pasteurización de la leche

Quimioprofilaxis
 TRATAMIENTO

Isoniacida (INH) por 1 año

Dosis: adulto 300mg/ kg/ día
Niño: 10 mg/kg/día
Pautas clásicas:
INH + ESTREPTOMICINA
INH + RIFAMPICINA

Pirazinamida 
• Etambutol
• Otros agentes: otras
Esputos, LCR, Liq. Pleural, Aspir. bronq,
Asp. gástrico

DESCONTAMINACIÓN Exámen directo:

ZIELH NEELSEN(Baciloscopia)
homogeneización
Colorantes fluorescentes

Siembra en medios:
Liquidos: Youmans
Sólidos: Lowestein Yensen

Crec. Rápido. < 5 días Incubar 37ºC

Grupo IV Runyon
Crec. Lento
< 5 días
Crec. Rápido. < 5 días Crec. Lento
Grupo IV Runyon < 5días

Prueba de Sulfato de arilo Prueba niacina

Crec. Escaso Col. Rugosa

+ Colon. Hemisfericas +
+ó-
Lisas M. tuberculosis
Otras micobaterias M. fortuitum
Grupo IV
ID: AZÚCARES

Tapados: no
Tubos tapados: Tapados: no pigmentada pigmentada
Pig amarillo naranja T. destapados: T. destapados:
T. destapados: pigmentada Pig amarillo -naranja No Pig
Grupo II Runyon Grupo I Runyon Grupo III Runyon
Escotocromógenas Fotocromógenas No pigmentadas
CONFIRMACIÓN DEL
DIAGNÓSTICO
POR
BACILOSCOPIA
BACTERIOLOGÍA

CULTIVO
 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
1.-) EXAMEN DIRECTO: ZIEHL-NEELSEN: BAAR

2.-) CULTIVO: Löwestein-Jensen con y sin glicerol

Muestras contaminadas: Esputo

Método de Petrof: Descontaminación con NaOH al 4%
Homogenización
Centrifugación
Muestras estériles: Líquidos corporales y biopsias de tejido
de órganos internos

3.-) PRUEBAS BIOQUÍMICAS: Identificación

ESPECI M.tuberculosis M.bovis

E
Niacina + -
Nitrato + -
Catalasa
- -
DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
4.-) PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS
No se utiliza el medio Mueller Hinton, ni el método de difusión
en agar. Se emplea medio Lowenstein-Jensen y distintas técnicas
para el antibiograma

5.-) Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

BUSQUEDA DE CEPAS RESISTENTES

Es la herramienta primaria en el diagnóstico de
la tuberculosis (TBC) pulmonar activa. Es la
técnica más utilizada internacionalmente en la
búsqueda de casos infecciosos

Examen microscópico directo que permite

detectar la presencia de bacilos ácido resistentes
(BAR) en una muestra de esputo, a través de la
coloración de Zielh Neelsen con objetivo 100X

Permite medir la eficacia del tratamiento en

estos pacientes, ya que los resultados se
reportan desde el punto de vista semi
cuantitativo en cruces
 Diagnóstico
(3 muestras)
Baciloscopía
Control
de tratamiento
(una baciloscopía
mensual)
 CONTROL DEL
TRATAMIENTO
SEGUIMIENTO
CONFIRMAR LA
CURACIÓN DEL PACIENTE

El criterio a seguir en la baciloscopia es:

el número de campos varía según la cantidad de
bacilos encontrados
1. Si no se encuentran bacilos debe examinarse por lo menos
100 campos útiles.
2. Si se encuentran de 1 a 10 bacilos por campo es suficiente
observar 50 campos.
3. Si se encuentran más de 10 bacilos por campo es suficiente
observar 20 campos.
INFORME DE RESULTADOS

Negativo: no se observan BAAR en 100 campos

observados.
Positivo +: se observan menos de un bacilo por campo
en promedio en 100 campos observados.
Positivo ++: se observan de 1 a 10 bacilos por campo en
promedio en 50 campos observados.
Positivo +++: Se observan más de 10 bacilos por
campo en promedio en 20 campos observados.