Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Departamento de Microbiología
Academia de Bioquímica Microbiana

Manejo de datos y cálculos

Realizado por
M en C. Patricia Mendoza Hernández
M. en C. Julián Antonio Jiménez Tenorio
 Manejo de datos experimental:
a) Obtención de la suspensión celular
b) Proceso de fermentación
a) Volumen necesario de KOH para Neutralizar el TCA
b) Determinar la Glucosa inicial
c) Determinación de Glucosa residual
a) Curva tipo de glucosa 0-500µg
b) Diluciones y alícuotas
c) Determinación de Glucosa Residual y Consumida (mg/10mL de muestra)
d) Determinación de etanol
a) Obtención de la curva tipo de Etanol de 0 a 2500µg
b) Determinar la cantidad de Etanol formado (mg/10mL de muestra)
e) Determinación de CO2 por Gravimetría
a) Determinación de la cantidad de CO2 producido durante la fermentación (mg)
 Cual seria el volumen necesario de la sal de KOH al 10% para Neutralizar 2 mL de TCA que se
utilizaron para detener la fermentación?

1.- Primero debemos considerar las soluciones involucradas
KOH al 10% y Acido Tricloro acético (TCA) al 10%
2.- una de las maneras de realizar el calculo del volumen de KOH para neutralizar
el TCA es por la formula de N1V1 = N2V2 en donde debemos considerar la
concentración de unidades porcentuales pasarlas a unidades de Normalidad por
lo que debemos tomar en cuenta sus pesos moleculares de dichas moléculas y
calcular las normalidades de dichas soluciones

PM (TCA) = 163.36 g/mol PM (KOH) = 56.1 g/mol

𝑔
𝑁𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 =
P eq 𝑋 𝑉𝑜𝑙 (𝐿ሻ

𝑔
Peso Molecular
P eq = 𝑚𝑜𝑙
𝑉𝑎𝑙𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎

3.- A partir de las soluciones de KOH al 10% (10 g en 100 mL) y el TCA esta al 10 % (10 g en 100 mL) determinamos la NORMALIDAD

10 𝑔 10 𝑔
𝑁𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝐾𝑂𝐻 = = 1.78 𝑁𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑇𝐶𝐴 = = 0.612
56.1 (0.1 𝐿ሻ 163.3 (0.1 𝐿ሻ

3.- Posteriormente, aplicaremos la formula N1V1=N2V2, en donde se halla el volumen necesario para una solución previamente preparada
• N1= 0.612 𝑁1𝑉1 0.612ሻ(2 𝑚𝐿
• V1= 2 mL 𝑉2 = = = 0.68 mL
𝑁2 1.78
• N2= 1.786 0.68 mL de KOH para neutralizar 2 mL de TCA
• V2= ¿?. Despejar el volumen necesario de KOH para neutralizar el TCA
 Que concentración de glucosa inicial tiene el matraz de Fermentación?

Glucosa 2 M 1.- DETERMINAR LOS mg DE GLUCOSA INICIAL añadida al fermentador, debemos considerar la
concentración de la solución así como las cantidades adicionadas.
En el matraz de fermentación se adicionaron 0.5 mL de glucosa 2 M
Por lo tanto
¿Cuantos gramos de GLUCOSA se usan para preparar una solución de Glucosa 2 M?

180 g de Glc – 1 M en 1 L
X – 2 M en 1 L

2 𝑀 ∗ 180 𝑔
𝑋= = 360 𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑒𝑛 1 𝐿
1𝑀

Sin embargo, se debe considerar que se adicionaron 0.5 mL de la solución de Glc, por lo tanto:

360 g de Glc – 1000 mL 360 𝑔 ∗ 0.5 𝑚𝐿

X – 0.5 mL 𝑋= = 0.18 𝑔 = 180 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎
1000 𝑚𝐿

Se adicionaron 180 mg de glucosa 2M en el fermentador (GLUCOSA INICIAL)

 Curva tipo de Glucosa de 0-500 µg

1. Obtener la ecuación de la recta de la curva tipo de Glucosa que va de 0 a 500µg. Esta

se realizara con los datos de Absorbencia a 540nm a partir de los datos generados
2. Graficar los datos colocando en el eje “X” las cantidades de glucosa y el en el “y” las
absorbencias a 540nm de manera que tendremos la ecuación de la recta µg de Absorbancia a
glucosa 540 nm
y 𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
0 0
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
Donde; y = Abs 540nm 100 0.058
x = µg de glucosa 200 0.159
x 300 0.283
Por lo tanto; 400 0.405
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑎 540 𝑛𝑚 = m X + b 500 0.497

Despejando; Abs 540nm - b

µg de glucosa =
m
 ¿Que diluciones y alícuotas se deben realizar para que los datos entren dentro
de la curva tipo ?
1.- DETERMINAR LA GLUCOSA RESIDUAL

a) Al finalizar la fermentación en la muestra problema y en el testigo

(sin adición de Glc). Se debe considerar que se aforó a 10 mL la
mezcla de fermentación.
Glucosa inicial 180mg/ 0.5mL ----10mL ≈ µg
Si 180mg de Glc/0.5 mL ------ volumen final de 10mL
b) Se pasan en µg, debido a que la curva tipo se encuentra en µg
Concentración 180mg/ 10mL
Glucosa inicial 180mg----10mL ≈ µg
c) Esta concentración de Glucosa es muy grande por lo
que tendríamos que diluirla para que los datos Glucosa inicial 180,000 µg ----10mL
entren dentro los valores de la curva tipo por lo que X ---------- 1mL X= 18,000 µg/mL
se realiza a partir de esta mezcla, una dilución 1:10.

Dil 1:10 [Glc] = 1800 µg/mL

[Glc] = 1800 µg/mL
d) Posteriormente se tomaron
alícuotas para la Si la Glucosa fermenta el 50% de la Glucosa
determinación de glucosa 900 µg----------1mL
residual por el método de 450 µg----------0.5mL
DNS, ¿Cual será la alícuota 270 µg----------0.3mL
IDEAL para esta 180 µg----------0.2mL
determinación
 Determinación de La Glucosa Residual y Consumida
1. Para conocer la cantidad de Glc residual en el fermentador se debe considerar el volumen de la alícuota
(0.2 mL), el factor de dilución (1:10) y el volumen al que se aforo la mezcla de fermentación (10 mL)

1
𝐺𝑙𝑐 𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑𝑢𝑎𝑙/10ml = 𝑚𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑝𝑜𝑙𝑎𝑑𝑎 10 10𝑚𝐿
al𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎

𝐺𝑙𝑐 𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑𝑢𝑎𝑙/10ml = 𝑋𝑋 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐺𝑙𝑐 𝑒𝑛 10 𝑚𝐿

2. Debemos conocer la Glucosa Real por lo que debemos hacer la diferencia de la cantidad de glucosa
obtenida en el problema y el matraz testigo

𝐺𝑙𝑐 𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑𝑢𝑎𝑙𝑅𝑒𝑎𝑙 = 𝑚𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 − 𝑚𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑖𝑔𝑜

2. Una vez teniendo el dato teórico de glucosa inicial (180 mg) y la glucosa residual (mg) se calcula la
cantidad de Glc que fue metabolizada con ayuda de la siguiente fórmula:

𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑎 = 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 − 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑𝑢𝑎𝑙

NOTA: RESULTADO UTILIZADO PARA EL BALANCE DE FERMENTACIÓN

 Curva tipo de Etanol

• 1.- Obtención de la curva tipo de Etanol de 0 a 2500µg

• Se realizó una curva de etanol, para determinar las concentraciones de las muestras
problema, partiendo de la curva tipo, tendremos la ECUACIÓN DE LA RECTA:

𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏

• Despejamos a X y teniendo los datos de absorbancia, obtendremos lo siguiente

Donde; y = Abs 445nm µg de etanol Absorbancia a

y 445 nm
x = µg de Etanol
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏 0 1.083
250 1.074
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑎 445 𝑛𝑚 = m X + b
500 0.945
x
1000 0.828
Abs 445nm - b 1500 0.710
µg de etanol =
m
≈ 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙
2000 0.560
2500 0.512
 Determinación Etanol
• 2.- Determinación de etanol producido. A partir de la mezcla de fermentación (aforada a 10 ml) se realizó una dilución 1:10, y se
utilizó una alícuota de 0.2 ml para determinar el etanol en la muestra problema

• Para conocer el etanol producido en el fermentador se debe considerar el volumen de la alícuota (0.2 mL), el factor de dilución
(1:10) y el volumen al que se aforo la mezcla de fermentación (10 mL)

1
𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑎𝑑𝑜 = 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑝𝑜𝑙𝑎𝑑𝑜 F. D 10𝑚𝐿
aliciota

Ejemplo:
1
𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑎𝑑𝑜 = 2.161 𝑚𝑔 10 10𝑚𝐿 = 1.080 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 𝑒𝑛 10 𝑚𝐿
0.2𝑚𝐿

• NOTA: RESTAR LA CANTIDAD DE ETANOL OBTENIDO EN EL TRATAMIENTO TESTIGO

• NOTA: RESULTADO UTILIZADO PARA EL BALANCE DE FERMENTACIÓN
 Determinación CO2 por gravimetría
• 1.- Determinación de la cantidad de CO2 producido durante la fermentación. Primeramente debemos conocer el
peso del papel filtro a peso constante, y posteriormente el peso del papel filtro con muestra.
• Papel filtro sin muestra = 0.8370 g
• Papel filtro más muestra = 0.9859 g

• Para conocer la cantidad de BaCO3 obtenido se resta el peso del papel filtro con muestra, al peso del papel filtro sin
muestra

𝐵𝑎𝐶𝑂3 = 0.9859 − 0.8370 = 0.148g = 148.9 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐵𝑎𝐶𝑂3

• Para conocer la cantidad de CO2 se realizará una relación entre el peso molecular del CO2 y del BaCO3

PM CO2 PM BaCO3 𝑚𝑔
148.9𝑚𝑔 44
44 mg - 197 mg 𝑋= 𝑚𝑜𝑙 = 33.20 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐶02
𝑚𝑔
197.3
X - 148.9 mg de BaCO3 𝑚𝑜𝑙

• NOTA: RESTAR LA CANTIDAD DE ETANOL OBTENIDO EN EL TRATAMIENTO TESTIGO

• NOTA: RESULTADO UTILIZADO PARA EL BALANCE DE FERMENTACIÓN
 Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Departamento de Microbiología
Academia de Bioquímica Microbiana

Ejemplo de balance de fermentación

Realizado por
M en C. Patricia Mendoza Hernández
M. en C. Julián Antonio Jiménez Tenorio
 ¿Cómo se determinan estos resultados?

1 2 3 4 5 6 7
mg/10mL mmol Mmol de producto/ Edo. de Productos Productos Carbonos
Producto mmol de fuente de oxidación oxidados reducidos totales
energía

Glucosa 106.6
Etanol 29.37
CO2 10.23

Los resultados de la Columna 1, serán los datos generados de los resultados

experimentales, representados en mg/10 mL
 1 2 3 4 5 6 7
mg/10mL mmol Mmol de producto/ Edo. de Productos Productos Carbonos
Producto mmol de fuente de oxidación oxidados reducidos totales
energía

Glucosa 106.6 0.59

Etanol 29.37 0.63
CO2 10.23 0.23

Columna 2, convertir mg/mL en mmol

Si para glucosa 180 mg equivalen a 1 mmol, ¿Cuánto valdrá para 106.6 mg?. El resultado se
colocará en la columna 2
106.6𝑚𝑔 1𝑚𝑚𝑜𝑙
Cálculo para glucosa 𝑚𝑚𝑜𝑙 = = 0.59 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎
180𝑚𝑔
PM 180 mg - 1 mmol
106.6 mg - X

NOTA: REALIZAR EL CÁLCULO DE LA MISMA FORMA PARA ETANOL Y CO2

 1 2 3 4 5 6 7
mg/10mL mmol Mmol de producto/ Edo. de Productos Productos Carbonos
Producto mmol de fuente de oxidación oxidados reducidos totales
energía

Glucosa 106.6 0.59 1

Etanol 29.37 0.63 1.06
CO2 10.23 0.23 0.38

Columna 3. Calcular los mmol de producto/mmol de fuente de energía

• NOTAS:
• LAS CANTIDADES DE SUSTRATO
𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 0.59 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 FERMENTADO Y LAS DE PRODUCTOS FINALES
Por lo tanto para glucosa = =1 FORMADAS EN MILIMOLES PUEDEN SER
𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 0.59 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 EXPRESDOS POR 100 MILIMOLES DE
SUSTRATO UTILIZADO
mmol de producto – 0.59
• REALIZAR ESTE MISMO CÁLCULO PARA
ETANOL Y CO2, CONSIDERANDO COMO
mmol de sustrato – 0.59 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 0.63 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 MMOL DE SUSTRATO A LA GLUCOSA (YA QUE
= = 1.06 ES LA FUENTE DE CARBONO)
𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 0.59 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎
 1 2 3 4 5 6 7
mg/10mL mmol Mmol de producto/ Edo. de Productos Productos Carbonos
Producto mmol de fuente de oxidación oxidados reducidos totales
energía

Glucosa 106.6 0.59 1 0

Etanol 29.37 0.63 1.06 -2
CO2 10.23 0.23 0.38 +2

Columna 4. Determinar el estado de oxidación, tal como se muestra a continuación:

𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝐻𝑖𝑑𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜𝑠
𝐸𝑑𝑜 𝑑𝑒 𝑜𝑥𝑖𝑑𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑂𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜𝑠 −
2
Considerando que
O2 = 1
𝐸𝑑𝑜 𝑑𝑒 𝑜𝑥𝑖𝑑𝑎𝑐𝑖ó𝑛 del CO2 = 2 − 0 = 2
H = 0.5

• NOTA: REALIZAR ESTE MISMO CÁLCULO PARA GLUCOSA Y ETANOL

 1 2 3 4 5 6 7
mg/10mL mmol Mmol de producto/ Edo. de Productos Productos Carbonos
Producto mmol de fuente de oxidación oxidados reducidos totales
energía

Glucosa 106.6 0.59 1 0

Etanol 29.37 0.63 1.06 -2 2.12

CO2 10.23 0.23 0.38 +2 0.76

Columna 5 y 6. Determinar los productos oxidados. Multiplicaremos el valor de estado de oxidación (columna 4) con el
resultado de mmol de prod/mmol de fuente de energía (columna 3), dependiendo del valor de oxidación, se colocará en la
columna de productos oxidados o reducidos

Ejemplo para CO2

𝑃𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠 𝑜𝑥𝑖𝑑𝑎𝑑𝑜𝑠 = +𝟐 𝟎. 𝟑𝟖 = 0.76

• NOTA: REALIZAR ESTE MISMO CÁLCULO PARA TODOS LOS PRODUCTOS Y COLOCARLOS EN LAS COLUMNAS DE PRODUCTOS OXIDADOS O REDUCIDOS SEGÚN CORRESPONDA
 1 2 3 4 5 6 7
mg/10mL mmol Mmol de producto/ Edo. de Productos Productos Carbonos
Producto mmol de fuente de oxidación oxidados reducidos totales
energía

Glucosa 106.6 0.59 1 0 6

Etanol 29.37 0.63 1.06 -2 2.12 2.12
CO2 10.23 0.23 0.38 +2 0.76 0.38
2.5
Columna 7. Determinar los carbonos totales. Multiplicaremos los carbonos del sustrato o producto por mmol de producto/mmol de fuente
de energía (columna 2).

𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 = 6 𝐶𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑜𝑠 𝟏 = 6 𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 2 𝐶𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑜𝑠 𝟏. 𝟎𝟔 = 2.12 𝐶𝑂2 = 1 𝐶𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑜𝑠 𝟎. 𝟑𝟖 = 0.38

Posteriormente se realizará la sumatoria de los carbonos de los productos totales (en esta fermentación Etanol y CO2
 productos totales =2.5
 1 2 3 4 5 6 7
mg/10mL mmol Mmol de producto/ Edo. de Productos Productos Carbonos
Producto mmol de fuente de oxidación oxidados reducidos totales
energía

Glucosa 106.6 0.59 1 0 6

Etanol 29.37 0.63 1.06 -2 2.12 2.12

CO2 10.23 0.23 0.38 +2 0.76 0.38

2.5
Calcular el índice O/R mediante el siguiente procedimiento

𝑂  𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠 𝑜𝑥𝑖𝑑𝑎𝑑𝑜𝑠 0.76

Í𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 = = = 0.35
𝑅  𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠 𝑟𝑒𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑜𝑠 2.12

Si el valor es mayor a 1= tenemos una mayor cantidad de productos oxidados

Si el valor es menor a 1= tenemos una mayor cantidad de productos reducidos

 1 2 3 4 5 6 7
mg/10mL mmol Mmol de producto/ Edo. de Productos Productos Carbonos
Producto mmol de fuente de oxidación oxidados reducidos totales
energía

Glucosa 106.6 0.59 1 0 6

Etanol 29.37 0.63 1.06 -2 2.12 2.12

CO2 10.23 0.23 0.38 +2 0.76 0.38

2.5
Calcular el % de carbono recuperado mediante el siguiente procedimiento
A partir de la sumatoria de los carbonos de los productos (2.5), calcular el % de carbono recuperado,
teniendo en cuenta que la glucosa (sustrato) tiene 6 carbonos, representando el 100%.

6 C de Glucosa - 100% 2.5 𝐶 100

2.5 C de carbonos totales - X % 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑜 𝑟𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑑𝑜 = = 41.66%
6𝐶