MEDIOS DE CULTIVO DE

MICROORGANISMOS
INTRODUCCIÓN

Para permitir el crecimiento de

microorganismos en el laboratorio, es
necesario aportarles un medio con
nutrientes y condiciones fisicoquímicas
adecuadas para su desarrollo. El medio
de cultivo es aquel que contiene agua y
una serie de nutrientes, necesarios para
su metabolismo.
COMPONENTE DE UN MEDIO DE CULTIVO

• Una fuente de carbono. Normalmente son azúcares sencillos como, por

ejemplo, glucosa, lactosa, etc., pero existen también algunos organismos
que usan CO2 (en este caso serían autótrofos, al igual que las plantas).
• Una fuente de nitrógeno. Se suelen usar proteínas parcialmente
hidrolizadas, peptonas.
• Amortiguadores de pH (soluciones tampón o buffer). Son sustancias que
ayudan a mantener el pH del medio de cultivo dentro de un rango adecuado
para el crecimiento de los microorganismos. Por ejemplo, suelen usarse
como tampones los fosfatos disódicos (Na2HPO4) o monosódicos
(NaH2PO4)
TIPOS DE MEDIO DE
CULTIVO
Según la porción de agar, existen tres tipos:
• Líquidos (caldos). No contiene ningún agente gelificante, por lo que los microorganismos
crecen por todo el medio. El crecimiento en este tipo de medios es más rápido puesto que la
movilidad permite acceder de una forma más fácil a los nutrientes.
• Sólidos. Tienen una proporción de agar de, aproximadamente, el 1.5%. El crecimiento se
desarrolla en la superficie del medio. Estos medios pueden depositarse en placas de Petri o
en tubos de ensayo.
• Semisólidos. Son aquellos que contienen una proporción de agar inferior al 0.5%. Se utilizan
para pruebas bioquímicas y de movilidad
COMPONENTES DEL MEDIO

• Macronutrientes, agregados en cantidades de gramos por litro que están representados por
las fuentes de C, N, S, P, K y Mg; 
• Micronutrientes o elementos trazas representados por las sales de Fe, Mn, Mo, Ca, Zn y Co
que se agregan a los medios en cantidades de miligramos o microgramos por litro; y 
• Factores de crecimiento, que están constituidos generalmente por componentes orgánicos
suministrados en baja concentración y que no son sintetizados ni metabolizados por las
células, sino incorporados a estructuras celulares y de función metabólica específica, como
vitaminas, algunos aminoácidos, ácidos grasos no saturados, etc.
 Tipos de medio de cultivo
Según su utilidad:
• Nutritivos. Permiten el crecimiento de la mayoría de los microorganismos, por ser muy generales. Como
ejemplo de este tipo de medios están el agua de peptona y el caldo de triptosa-soja.
• De enriquecimiento. Contienen componentes adicionales (además de los básicos) para permitir el desarrollo de
microorganismos exigentes, que no crecerían en un medio general.
• Selectivos. Presentan algún componente que impide el desarrollo de microorganismos no deseados. Esto hace
que el microorganismo que se desea cultivar lo haga con mayor facilidad. Por ejemplo, el agar MacConkey
contiene cristal violeta, que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y hongos, facilitando el desarrollo
de bacterias gramnegativas.
• Diferenciales. Contienen sustancias que ponen de manifiesto alguna característica de la especie o grupo de
microorganismos. Por ejemplo, el agar MacConkey contiene lactosa y rojo neutro (como indicador); las bacterias
fermentadoras de lactosa (lactosapositivas) aparecen de color rosa intenso, mientras que las no fermentadoras
de lactosa son incoloras
En el formato en el
que se presentan los
medios de cultivo

• Sólidos en placas
• Sólido en tubos
• Líquido en tubos
• Semisólido en tubo
Diseño
El diseño de un medio de fermentación tiene como finalidad la elección de los
componentes necesarios para lograr el crecimiento y la formación de
productos correspondientes al proceso a desarrollar.
Con tal objeto se debe tener en cuenta todos aquellos aspectos relacionados con
el microorganismo, el proceso y los sustratos a ser empleados como son los
requerimientos nutricionales del microorganismo y algunos específicos del
proceso, la disponibilidad real de los componentes y consideraciones sobre las
materias primas.
Otros aspectos que son también importantes se refieren a todos los procesos y
operaciones previos y posteriores a la etapa de fermentación y al
conocimiento de los mecanismos bioquímicos que regulan la formación de
algunos productos, como es el caso de la importancia del anión PO4-3 .
Trataremos especialmente de los tres primeros.
Requerimientos nutricionales
Los requerimientos nutricionales están determinados por el tipo de
metabolismo celular, ya sea autotrófico, que corresponde a los
microorganismos que obtienen el carbono del CO2 como las algas y
algunas bacterias, y los heterotróficos que necesitan compuestos
orgánicos como fuente de carbono.
Otro factor esencial está determinado por las condiciones del cultivo, si es
aerobio o anaerobio.
El O2 es uno de los oxidantes más comunes en el metabolismo energético.
En la ausencia del O2 , el NO3- o SO4-2 son utilizados como aceptores de
electrones por algunas bacterias.
Las bacterias metanogénicas son auxótrofos anaerobios que utilizan H 2
para reducir el CO2 a CH4 para obtener energía.
Otras protistas obtienen su energía, en condiciones anaerobias por
reacción de óxido - reducción realizadas sobre compuestos orgánicos.
Las fuentes de carbono cumplen también el rol de ser fuente de energía.
Otro requerimiento nutricional está constituido por las fuentes de nitrógeno que
pueden ser de naturaleza inorgánica u orgánica.
El nitrógeno es utilizado para la biosíntesis de proteínas, ácidos nucleicos y
polímeros de la pared celular.

Para la síntesis de proteína se requieren en general L-aminoácidos, aunque

también son necesarios algunos aminoácidos de la serie D como D- alanina y D-
aspártico para su incorporación a la pared de la células. En algunos casos se
requieren también péptidos de histidina.

Los requerimientos de otros macronutrientes como el P y el S son suministrados

en forma de PO4 H-2 y SO4-2 (o aminoácidos azufrados).

El fósforo se incorpora en ácidos nucleicos, y polímeros celulares.

El S es asimilado para la síntesis de aminoácidos azufrados, y además se necesita

para la biotina, coenzima A, tiamina y otros componentes.

Los requerimientos de K y Mg son también esenciales. Una parte importante del

primero está unida al RNA de manera que los requerimientos de K aumentan con
los factores que influyen en el aumento del RNA de las células, como la velocidad
de crecimiento.
El ión K actua como coenzima y probablemente actúa como catión en la estructura
aniónica de varios componentes celulares.
El ión Mg es esencial para la estabilidad de los ribosomas y actua como cofactor en
numerosas reacciones del metabolismo.

Tanto el K como el Mg se incorporan a los medios en forma de sales como fosfato y

sulfato.

Con respecto a los micronutrientes se distinguen 2 categorías: 

• Los que son frecuentemente esenciales para el crecimiento como Ca, Mn, Fe, Co,
Cu y Zn y 

• Los que son raramente esenciales como B, Na, Al, Si, Cl, V, Cr, Ni, As, Se, Mo, Sn,
e I.
En general los requerimientos de trazas de elementos son conocidas
cualitativamente.

A veces es difícil demostrar un requerimiento de un micronutriente porque

generalmente está presente en suficiente cantidad como impureza de los
componentes principales.

Los requerimientos de éstos compuestos pueden aumentar varias veces cuando el

cultivo ha estado sujeto a "strees", como por ejemplo por aumento de temperatura
por encima de un valor óptimo.
Los requerimientos de factores de crecimiento comprenden ciertos aminoácidos
y vitaminas del grupo B como tiamina, riboflavina, ácido pantotético,
niacina,etc., que representan para muchas bacterias y levaduras factores
esenciales en los medios sin los cuales no se produce crecimiento celular.

La mayor parte de las vitaminas son constituyentes de coenzimas. Otros factores

de crecimiento son las purinas, poliaminas, putrescinas, etc.

En algunos procesos existe la necesidad de efectuar otros agregados, aparte de

los nutrientes requeridos por los microorganismos y que representan los
requerimientos específicos del proceso considerado.

Un ejemplo es el caso de los precursores que constituye la base de una molécula

que debe ser sintetizada por el microorganismo, como el ácido fenil acético para
la penicilina.

Otro ejemplo es el agregado de ciclo dextrinas en procesos de producción de

Bordetella pertussis que puede actuar como complejante de inhibidores de
crecimiento celular.

El agregado de cloruros o bromuros en el caso de algunos antibióticos como

cloro y bromotetraciclinas, tetraciclidas producidas por el Streptomyces
aureofaciens, responde también a requerimientos específicos para inhibir la
síntesis de productos no deseados, como ocurre también con el agregado de
mananos y barbitúricos en la producción de estreptomicina por S. griseus.
El agregado de sulfato, en el proceso de fermentación alcohólica, que favorece la
formación de glicerol, es otro ejemplo de un requerimiento específico.

El diseño correcto tiene que ver con las características bioquímicas propias y
evolución de los parámetros de cada proceso.

Por ejemplo, un proceso caracterizado por un descenso continuo de pH, debido

al uso de una sal de amonio como fuente de nitrógeno, obliga a considerar en su
diseño algún agregado que no corresponda a una exigencia nutricional, como es
el caso del control de pH del mismo. 

Este puede efectuarse por agregados al medio de agentes "buffer" como mezclas
de fosfatos o de carbonato de calcio o como más generalmente se hace, con
agregados periódicos de soluciones alcalinas que pueden efectuarse en forma
más conveniente mediante un control automático de pH.

El diseño de un medio específico para la producción de ácido cítrico debe

considerar la influencia negativa que para el proceso tiene un exceso de hierro en
su composición; por lo tanto dicho medio debe diseñarse de manera tal que su
preparación (a partir de diversas materias primas) considere una eliminación
total del hierro y posterior agregado del mismo en cantidades controladas.
EJEMPLOS DE MEDIOS DE CULTIVO
AGAR SANGRE USO
◦ Es un medio enriquecido
que se utiliza además para
la investigación de los
diversos tipos de
hemólisis(α, ß ó gamma ).
Se utiliza para el
crecimiento de
estreptococos.
AGAR CHOCOLATE USO
◦ Es un medio enriquecido muy parecido
al agar sangre; la diferencia es que los
glóbulos rojos están lisados y liberan al
medio nutrientes como la
hemoglobina.
◦ Se utiliza para el cultivo de bacterias
exigentes que necesitan estos factores
para su desarrollo, como es el caso de
Neisseria gonorrhoeae (agente causal
de la gonorrea) y varias especies del
género Haemophilus.
AGAR S.S

Medio de cultivo utilizado

para el aislamiento de
Salmonella spp. y de algunas
especies de Shigella spp. a
partir de heces, alimentos y
otros materiales en los cuales
se sospeche su presencia.
AGAR
MACCONKEY

Es un medio diferencial y
selectivo muy utilizado para el
aislamiento e identificación de
enterobacterias (bacilos
gramnegativos). Llevan en su
composición sales biliares y cristal
violeta que inhiben el crecimiento
de bacterias grampositivas y
hongos.
AGAR EOSINA
AZUL DE
METILENO

Contiene eosina y azul de

metileno como indicadores. Se
utiliza para el aislamiento y
diferenciación de enterobacterias
fermentadoras y no fermentadoras
de lactosa. El crecimiento de E.
Coli aparece oscuro y con brillo
verde metálico
Suspender 38 g del medio en un

N
litro de agua purificada. Calentar

DO O

C IÓ
TA IV
con agitación suave hasta su

S
RA
RA ULT
completa disolución y hervir
durante un minuto. Esterilizar en

EPA
HID E C
autoclave a 121°C (15 libras de

PR
presión) durante 15 minutos.

DE S D
Dejar enfriar a una

DE
temperatura entre 45-50 °C y

DIO

LO
vaciar en placas de Petri estériles

S
Para obtener desarrollo de

ME

MP
Neisseria enfriar el medio a 45-

EJE
50 °C y agregar sangre estéril al
5% calentada a 80°C.