Técnica histológica,

obtención de muestras,
principales técnicas te
tinción y microscopia
ROSS, M. H. y W. PAWLINA Histología: Texto y Atlas con color con Biología Celular y Molecular Ed. Panamericana, 7º
ed, 2015
GENERALIDADES DE LAS TÉCNICAS UTILIZADAS
EN HISTOLOGÍA
• Histología [ histos = tejidos; logía = ciencia], también llamada
anatomía microscópica, es el estudio científico de las estructuras
microscópicas de los tejidos y órganos del cuerpo.
• La histología moderna no es sólo una ciencia descriptiva sino que
también incluye muchos aspectos de la biología molecular y celular,
que ayudan a describir la organización y función celular.
• Las técnicas utilizadas por los histólogos son diversas en extremo.

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 INMUNOQUÍMICA Y
TÉCNICAS DE AUTORRADIOGRAFÍA
HIBRIDACIÓN

CULTIVO DE
TEJIDO Y
ÓRGANOS

TÉCNICAS
HISTOQUÍMICA Y AUXILIARES
CITOQUÍMICA

SEPARACIÓN DE
MICROSCOPIOS Y CÉLULAS Y ORGÁNULOS
TÉCNICAS POR CENTRIFUGACIÓN
MICROSCÓPICAS DIFERENCIAL
ESPECIALIZADAS

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PREPARACIÓN DEL TEJIDO
Tinción con hematoxilina y eosina con fijación en formalina

• El corte de rutina teñido con hematoxilina y eosina es la muestra que se utiliza

con mayor frecuencia.

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 El primer paso en la preparación de una muestra de tejido u órgano es la
fijación para conservar la estructura.

• La fijación: obtenida en general mediante una

sustancia química o una mezcla de sustancias
químicas, conserva de forma permanente la
estructura del tejido para tratamientos posteriores.
Las muestras deben sumergirse en el fijador
inmediatamente después de extraerse del
organismo.

El fijador de uso más común es la formalina. Debido a que

el formaldehido no altera su estructura tridimensional de
forma significativa, las proteínas mantienen su capacidad
de reaccionar con anticuerpos específicos.

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 LA FIJACIÓN

se utiliza para:

endurecer el
tejido como
impedir la destruir resultado de la
degradación microorganismos formación de
abolir el
enzimática de las patógenos tales enlaces cruzados
metabolismo
células y tejidos como bacterias, o de la
celular
por la autólisis hongos o virus desnaturalización
de moléculas
proteicas
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En el segundo paso, la muestra se dispone para su inclusión en
parafina con el fin de permitir su corte.

• Para examinar una muestra se requiere de su infiltración con un

medio de inclusión que permita realizar corte muy delgados, por lo
general en el rango de 5 mm a 15 mm (1 micrón [mm] equivale a una
milésima parte de un milímetro [mm]
• Después de la fijación la muestra se lava y se deshidrata en una serie
de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta alcanzar
alcohol al 100 %.
• En el paso siguiente, el aclarado, se utilizan solventes orgánicos tales
como el xileno o tolueno que son miscibles tanto en alcohol como en
parafinas
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En el tercer paso, la muestra se tiñe para permitir su
examen.

• Para colorear o teñir los cortes histológicos, la

parafina debe disolverse y extraerse, con xileno o
tolueno y los tejidos deben rehidratarse mediante
el uso de una serie de soluciones de alcohol de
concentración decreciente.
• Después, el tejido sobre el porta objetos se tiñe
con hematoxilina en agua
• se vuelve a deshidratar la muestra a través de una
serie de soluciones alcohólicas de concentración
creciente y después se tiñe con eosina en alcohol.
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Otros fijadores

• Para conservar los lípidos neutros, como los de las células adiposas,
se deben utilizar cortes por congelación de tejido fijado en formalina
y colorantes que se disuelvan en grasa.
• Para conservar las estructuras de la membrana, se utilizan fijadores
especiales con metales pesados, como permanganato y osmio, que se
unan a los fosfolípidos.
• El empleo de rutina de tetróxido de osmio como fijador en la
microscopia electrónica es la razón principal del excelente estado de
conservación de las membranas en las fotomicrografías electrónicas.

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Otras técnicas de tinción
• La hematoxilina y la eosina se utilizan principalmente para poner en
evidencia las características estructurales.

• se pueden utilizar otros procedimientos de tinción, en su mayoría

selectivos. Estos procedimientos incluyen el uso de orceína y fucsina-
resorcina para el material elástico y la impregnación argéntica para
fibras reticulares y las membranas basales.

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 Histoquimica y
Citoquimica
Proveen información sobre la función de la
célula y los componentes extracelulares de los
tejidos

Libro de ROSS, HISTOLOGIA TEXTO Y ATLAS correlación cin bioloía molecular y

celular, por Wojciech Pawlina. 7ma Edición
Se fundamentan en
• Tinción de anticuerpos con algún componente celular en
particular.

• Tinción de estos en alguna actividad enzimática de algún

elemento de la célula.

• Autorradiografia: Obtiene una imagen radiográfica

aprovechando la emisión de energia del cuerpo o tejido.
Libro de ROSS, HISTOLOGIA TEXTO Y ATLAS correlación cin bioloía molecular y
celular, por Wojciech Pawlina. 7ma Edición
 Tinción
Tinción con
hematoxilina/eosina
de la medula osea

https://
www.researchgate.net/
figure/Figura-2-Caso-n-o-2-
Tincion-con-hematoxilina-
eosina-40-medula-osea-en-
Autorradiografia
Autorradiografia del RNA
marcado
radioactivamente, permite
el análisis de donde se
encuentra este.

https://slideplayer.es/
slide/10965667/
Las moléculas grandes no se disuelven con
facilidad
• Nucleoproteínas

• Proteínas intracelulares del citoesqueleto

• Proteínas extracelulares

• Complejos de fosfolípidos y proteínas

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celular, por Wojciech Pawlina. 7ma Edición
Componentes solubles, iones y moléculas
pequeñas se pierden en soluciones acuosas.
• Proteínas y acidos nucleicos pequeños

• ARN de transferencia

• Glucógeno

• Proteoglucanos y glucosaminoglucanos (carbohidratos

complejos extracelulares)
Libro de ROSS, HISTOLOGIA TEXTO Y ATLAS correlación cin bioloía molecular y celular, por Wojciech
Pawlina. 7ma Edición
Colorantes Ácidos y Básicos

Basofilos y acidofilos

Libro de ROSS, HISTOLOGIA TEXTO Y ATLAS correlación cin bioloía molecular y

celular, por Wojciech Pawlina. 7ma Edición
 Los colorantes BASICOS (anilila+Cl-) tienen una
carga positiva y reaccionan con componentes
anionicos

• Grupos fosfato de los ácidos nucleicos

• Grupos sulfato de los glucosaminoglucanos

• Grupos carboxilo de las proteínas

Libro de ROSS, HISTOLOGIA TEXTO Y ATLAS correlación cin bioloía molecular y
celular, por Wojciech Pawlina. 7ma Edición
 La reaccion de estos grupos varia según el
pH del tinte
• Con pH alto (10): Los tres grupos se ionizan

• Con pH acido neutro (5-7): Se ionizan los grupos sulfato

• fosfato

• Con pH bajo (4 o -): Se ionizan los grupos sulfato

La hematoxilina no se
disocia del tejido
cuando se coloca en
agua.

Corte histologico de la traquea de

una avestruz

https://es.wikipedia.org/
wiki/Hematoxilina
 Los colorantes ACIDOS (Na+anilina-) tienen carga
negativa y reaccionan con componentes cationicos

• Estas reaciones no son tan precisas las de los básicos

• Mas sustancias dentro de la celula y extracelulares presentan

acidofilia

• A veces se usan combinados para teñir selectivamente

Libro de ROSS, HISTOLOGIA TEXTO Y ATLAS correlación cin bioloía molecular y

celular, por Wojciech Pawlina. 7ma Edición
Sustancias dentro de la celula acidofilicas

• Filamentos citoplasmaticos

• Componentes membranosos intracelulares

• Fibras extracelulares

Libro de ROSS, HISTOLOGIA TEXTO Y ATLAS correlación cin bioloía molecular y

celular, por Wojciech Pawlina. 7ma Edición
Eosina con
hematoxilina en
un folículo
ovárico.

https://es.123rf.com/photo_66212759_fol
%C3%ADculos-ov%C3%A1ricos-la-
microscop%C3%ADa-%C3%B3ptica-
hematoxilina-y-eosina-200-aumentos-los-
colores-se-han-mejorado-para-.html
 METACROMASIA

https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/5-general.php

ROSS, M. H. y W. PAWLINA Histología: Texto y Atlas con color con Biología Celular y Molecular Ed. Panamericana, 7º
ed, 2015
 METACROMASIA

• Es un cambio de absorbancia de ciertos

colorantes básicos que reaccionan con los
componentes del tejido.
• El mecanismo subyacente de la
metacromasia es la presencia de polianiones
en el tejido.

• AZUL DE TOLUIDINA

• Las estructuras celulares y tisulares con

altas concentraciones de sulfato y fosfato
ionizados exhiben metacromasia
https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/
ROSS, M. H. y W. PAWLINA Histología: Texto y Atlas con color con Biología Celular y Molecular Ed. Panamericana, 7º
ed, 2015 protocolos/p-tincion-toluidina.php
 GRUPOS ALDEHÍDO Y EL REACTIVO DE SCHIFF

• La capacidad de la fucsina básica decolorada para

reaccionar con los grupos aldehído trae como
resultado la aparición de un color rojo distintivo.
• La reacción de acido peryódico-reactivo de Schiff
tiñe carbohidratos y macromoléculas.

• Se utiliza para demostrar:

• Glucógeno en las células
• Moco en células y tejidos
• Membrana basales en los epitelios
• Fibras reticulares en el tejido conjuntivo intranet.tdmu.edu.ua/data/kafedra/internal/
histolog/classes_stud/en/stomat/ptn/
ROSS, M. H. y W. PAWLINA Histología: Texto y Atlas con color con Biología Celular y Molecular Ed. Panamericana, 7º 1/01%20Microscope.htm
ed, 2015
 INMUNOCITOQUIMICA
• Los anticuerpos (inmunoglobulinas) son glucoproteínas que se
producen por las células especificas del sistema inmunitario en
respuesta a una proteína extraña o antígeno.

• Colorantes
fluorescentes
• Fluoresceína

https://www.msdmanuals.com/es/hogar/
trastornos-inmunológicos/biología-del-sistema- ROSS, M. H. y W. PAWLINA Histología: Texto y Atlas con color con Biología Celular y Molecular Ed. Panamericana, 7º
inmunitario/inmunidad-adquirida ed, 2015
 ANTICUERPOS POLICLONALES.

• Representa mezclas de diferentes anticuerpos producidos por

muchos clones de linfocitos B donde cada clon reconoce diferentes
regiones de la molécula de actina.
• Los anticuerpos se retiran de la sangre, se purifican y conjugan con
un colorante fluorescente.

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con Biología Celular y Molecular Ed. Panamericana, 7º ed, puntesbiotecnologiageneral.blogspot.com/2015/04/anticuerpos-monoclonales.htm
2015
 ANTICUERPOS MONOCLONALES.

• Para producir anticuerpos

monoclonales contra un antigeno
especifico, se inmuniza una rata con
ese antígeno.
• Los linfocitos B activados son
aislados del tejido linfático.
• Estas se fusionan con células de
miolema
• Generan hibridomas
• Selección de hibridoma con los
anticuerpos deseados

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Celular y Molecular Ed. Panamericana, 7º ed, 2015 dunianyasari.blogspot.com/2011/06/antibodi-monoklonal.html
 LOCALIZACION DE UN ANTIGENO DIANA O
BLANCO
INMUNOFLUORESCENCIA INMUNUOFLORESCENCIA
DIRECTA INDIRECTA
• La fluorescencia se conjuga con el • La fluorescencia se conjuga con el
anticuerpo primario especifico. anticuerpo secundario.

ROSS, M. H. y W. PAWLINA Histología: Texto y

Atlas con color con Biología Celular y
Molecular Ed. Panamericana, 7º ed, 2015

http://jblabsac.blogspot.com/2017/01/inmunofluorescencia-directa-
 MICROSCOPÍA
ÓPTICA
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 • Un microscopio, es un
instrumento que amplifica una
imagen y permite ver más
detalles de lo que es posible a
simple vista. Pueden ser simples
o múltiples.

• La función de un microscopio es
la de ampliar una imagen a un
nivel en el que la retina pueda
resolver la información que, de
otro modo, estaría por debajo
de su límite de resolución.

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• La resolución depende no sólo
del sistema óptico, sino
también de la longitud de onda
de luz y de otros factores como:
• El espesor de la muestra
• La calidad de la fijación
• La intensidad de la tinción.

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Componentes

• Fuente luminosa
• Lente condensador
• Platina
• Lente objetivo
• Lente ocular

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Examen de un preparado histológico con el
microscopio óptico
• Toda muestra de tejido
preparado para su examen por
microscopía óptica debe
cortarse en rebanadas muy
finas.

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 • En todas las etapas de la
preparación del tejido
pueden generarse
artefactos en preparados
histológicos.

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Celular y Molecular Ed. Panamericana, 7º ed, 2015
Otros sistemas ópticos
 Microscopio de contraste de fases
El microscopio de contraste de fases permite el examen de células y
tejidos no teñidos y es especialmente útil para estudiar células vivas.
Aprovecha las pequeñas diferencias en el índice de refracción que hay en
diferentes partes de una muestra de células o tejidos.

https://slideplayer.es/slide/2853383/59/images/44/MICROSCOP
%C3%8DA+DE+CONTRASTE+DE+FASES.jpg

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 Microscopía de campo oscuro.
La lente objetivo no capta luz directa proveniente de la fuente luminosa.
El microscopio de campo oscuro es útil en el examen de autorradiografías,
en la que los gránulos de plata revelados Naparecen blancos en un fondo
oscuro.

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/ ROSS, M. H. y W. PAWLINA Histología: Texto y Atlas con color con

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Microscopio de fluorescencia
El microscopio de fluorescencia aprovecha la capacidad de ciertas
moléculas de fluorescer bajo la luz ultravioleta. Se utiliza para la
detección de moléculas con fluorescencia natural (autofluorescencia)
como la vitamina A y algunos neurotransmisores.

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Microscopio de polarización
El microscopio de polarización tiene su fundamento en el hecho de que
las moléculas o los conjuntos de moléculas muy bien ordenados
pueden rotar el ángulo del plano de la luz polarizada.

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