TÉCNICAS Y COLORACIONES HISTOLÓGICAS

I. RESUMEN
Las técnicas histológicas son utilizadas en la microscopía para poder visualizar tejidos no observables
a simple vista, para esto usa una o más coloraciones para contrastar la muestra y facilitar la
observación. Por ello, nuestro objetivo general es explicar las técnicas y coloraciones histológicas
para el procesamiento, observación y diagnóstico de las células y tejidos. Para lograr esto, se revisó
bibliográficamente las literaturas de Ross, Arenas, entre otros. Resulta importante que, para ser
observados al microscopio los tejidos deben preservarse de tal manera que su estructura morfológica y
su composición molecular se mantengan como cuando estaban vivos, deben ser seccionados
finamente y con gran precisión en rebanadas delgadas y sus estructuras deben estar bien contrastadas;
para lograr este objetivo, los tejidos deben pasar por una serie de procesos físico-químicos que en
conjunto reciben el nombre de técnica histológica.
Palabras clave: “Técnicas Histológicas”, “Coloraciones Histológicas”.

ABSTRACT
Le tecniche istologiche vengono utilizzate in microscopia per poter visualizzare ad occhio nudo
tessuti non osservabili, per questo utilizza uno o più coloranti per contrastare il campione e facilitare
l'osservazione. Pertanto, il nostro obiettivo generale è spiegare le tecniche istologiche e la colorazione
per l'elaborazione, l'osservazione e la diagnosi di cellule e tessuti. Per raggiungere questo obiettivo, la
letteratura di Ross, Arenas, tra gli altri, è stata rivista bibliograficamente. È importante che, per essere
osservati al microscopio, i tessuti debbano essere preservati in modo tale che la loro struttura
morfologica e composizione molecolare rimangano come quando erano vivi, devono essere sezionati
finemente e con grande precisione in fettine sottili e le loro strutture deve essere ben contrastato; Per
raggiungere questo obiettivo, i tessuti devono passare attraverso una serie di processi chimico-fisici
che insieme prendono il nome di tecnica istologica.
Keywords: “Tecniche istologiche”, “colorazione istologica”.
 II. INTRODUCCIÓN

Es falso creer que, para conocer la estructura morfológica de una célula o un conjunto de ellas,
bastaría examinarlas a través de los instrumentos que amplían imágenes, pues al intentarlo se
presentan serias dificultades en la manipulación de las muestras, como es el inicio del desarreglo
molecular y celular (autolisis), que se presenta después de que las células y los tejidos abandonan su
hábitat natural. Por esta razón, alrededor del siglo XVII, se crea de forma paralela al microscopio
óptico, una serie de procedimientos y artificios que permitieron describir, comprender y analizar la
estructura microscópica de las células, tejidos y órganos. A este proceso se le llama técnica
histológica, que es el conjunto de procedimientos aplicados a un material biológico, ya sea animal o
vegetal, con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas para poder observar,
examinar y analizar sus componentes morfológicos a través de los microscopios fotónicos y
electrónicos. Cabe rescatar que, un componente muy importante para la técnica histológica son los
colorantes, ya que las estructuras contenidas en las preparaciones histológicas, poseen poco contraste
o carecen de él completamente, por lo que no van a poder ser distinguidas al microscopio. Entonces,
es necesario que las muestras tengan un color para poder distinguirlas, y esto se da gracias a la
propiedad que tienen los distintos componentes celulares y tisulares de incorporar con variable
intensidad sustancias colorantes. 1 Por lo expresado, el presente informe tiene la finalidad de
profundizar en el estudio de las técnicas y coloraciones histológicas.

2.1. Objetivo general

Explicar las técnicas y coloraciones histológicas para el procesamiento, observación y diagnóstico

de las células y tejidos.

2.2. Objetivos específicos

 Explicar los pasos del procedimiento de la técnica histológica

 Explica la clasificación, grupo y tipos de colorantes según el tejido histológico
 Conocer la correlación entre la morfología y la función de las estructuras celulares y tisulares

III. CONTENIDO

3.1 Definición de técnicas histológicas

Se denomina técnica histológica al conjunto de procedimientos aplicados a un material biológico
ya sea animal o vegetal con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas para
poder observar, examinar y analizar sus componentes morfológicos a través del microscopio
óptico. Es por ello que se tiene por finalidad preparar células, tejidos y órganos procedentes de
seres en los que los procesos vitales se han detenido y es necesario conservar la estructura que
tenían en vida2.

3.2 Procedimiento
Para lograr lo mencionado anteriormente es necesario realizar los siguientes pasos:

3.2.1 Toma de muestras

Primer paso que se realiza en la técnica histológica y que es de vital importancia para la calidad y
la fidelidad con que una célula o un tejido muestren una imagen al microscopio, con las
características morfológicas que poseían cuando estaban con vida. Es por ello que existen
diversos procedimientos que permiten obtener muestras de tejidos y órganos para conseguir
preparaciones histológicas de buena calidad, entre los que tenemos:
a) Mediante la Biopsia

Consiste en la toma de un fragmento de

tejido u órgano de un ser vivo. realiza a
través de una operación quirúrgica hecha
exprofesamente o durante la intervención
quirúrgica efectuada en pacientes y
corroborar así un diagnóstico de una
determinada lesión. La biopsia puede ser:
 Incisional
 Excisional
 Por sacabocados Figura 01: Biopsia Cutánea
 Por punción y absorción
 Por raspado
 Por trepanación
b) Mediante necropsia
Consiste en la toma de un fragmente de tejido u órgano de seres muertos, por lo que se debe
obtener inmediatamente después de producida la muerte.
3.2.2 Fijación

Proceso cuya finalidad, al aplicarlo es detener la vida de las células e impedir las modificaciones
post morten que pueda sufrir la célula (procesos autolíticos), manteniendo la estructura
morfológica de células y tejidos sin que ocurran cambios notables en ellos, esto se consigue
mediante agentes químicos denominados fijadores los cuales inhiben principalmente a enzimas
haciéndolas insolubles, lo cual garantiza la integridad de las células y tejidos 3.
Los fijadores se dividen en dos grandes grupos:
Tabla 01: División de los fijadores según su acción

OXIDANTES REDUCTORES

Tetraóxido de osmio (ácido ósmico), Formaldehído, Glutaraldehído, Alcohol

Bicromato de potasio, Acido crómico, etílico, Alcohol metílico.
Bicloruro de mercurio, Acido pícrico y
Ácido acético.

Es por ello que la acción oxidante o reductora de los fijadores le confieren a las células ciertas
condiciones que posibilitan una mejor aplicación de las sustancias colorantes, por ejemplo: el
alcohol etílico absoluto conserva el glucógeno, el bicloruro de mercurio provoca que las anilinas
coloreen de manera más brillante a las fibras colágenas, el bicromato de potasio facilita la
coloración de las mitocondrias, el ácido acético permite una mejor tinción de los núcleos, el
cloruro de calcio conserva e insolubiliza parcialmente a los lípidos. Así mismo para que una
sustancia fijadora pueda ejercer de manera eficiente y adecuada sus funciones debe poseer las
siguientes propiedades:
 Buen poder de penetración: Para que en contados instantes se introduzca con rapidez en el
espesor de la muestra.
 Buen poder de difusión: Para que no fije sólo la porción superficial de la muestra, sino que
alcance las porciones más profundas de la misma.
 Producir cierta dureza a los tejidos sin que se provoque excesiva retracción o hacerlos
quebradizos y friables.
 No debe disolver componentes celulares

En este proceso las muestras se sumergen en fijadores líquidos frecuentemente y el volumen del
fijador debe de estar en relación de al menos 10:1 respecto del volumen de la muestra. En el
procedimiento de fijación por inmersión, el fijador difunde desde la periferia de la muestra hasta
el centro de ésta evitando los fenómenos de autólisis, deteniendo el metabolismo celular y
preservando la estructura de las células que componen los tejidos y los órganos. Sin embargo, el
proceso de fijación no es inmediato y algunos órganos suelen experimentar alteraciones
tempranas de su estructura. En este caso el mejor método en la actualidad es la fijación por
perfusión, que consiste en introducir el fijador o la mezcla fijadora por medio de una aguja
inserta en el ventrículo izquierdo o en la arteria aorta abdominal del animal de experimentación
anestesiado. Luego se extirpan los órganos objeto de estudio y se disecan las áreas de interés, las
cuales se pueden posfijar mediante inmersión para asegurar una mejor preservación 3,4.
3.2.3 Deshidratación y aclaramiento

a) Deshidratación
La inclusión tiene por objetivo
endurecer homogéneamente el
tejido para lograr obtener secciones
delgadas que puedan observarse al
microscopio óptico. Con esta
finalidad, el tejido es embebido en
parafina, siendo este un medio
hidrofóbico; por tanto, antes de la
inclusión en parafina, la muestra
debe ser deshidratada, y la
deshidratación se logra mediante
baños sucesivos en alcoholes de
graduación creciente (alcohol 50°,
70°, 96° y 100°)4,6.

b) Aclaramiento
Las muestras deshidratadas se
encuentran totalmente embebidas
en alcohol etílico absoluto; pero la
parafina tampoco es soluble en
alcohol por lo que es necesario Figura 02: Procesos de deshidratación y
reemplazarlo por sustancias que sean aclaramiento, donde se observa los baños
capaces, simultáneamente, de sucesivos en alcoholes de graduación creciente
mezclarse con el alcohol y disolver la y posterior añadido en xileno para la
parafina. Estas se denominan líquidos diafanizacion.
diafanizadores o intermediarios,
siendo el xilol el líquido diafanizador de uso más frecuente y que va a permitir que el tejido se
vuelva translúcido4,6.
3.2.4 Inclusión
Durante este paso, el
bloque se embebe en
parafina y a temperatura
ambiente, la parafina tiene
la consistencia de una vela,
por lo que es necesario
calentarla para que pase al
estado líquido. Para ello,
los bloques de parafina se
ponen en un vaso de
precipitado en una estufa a
60 °C y una vez que el
tejido ha sido aclarado, se
sumerge la muestra en un
recipiente que contiene
parafina líquida/xilol y se
lo deja en el interior de la
Figura 03: Pasos comunes para la formación de un
estufa de inclusión.
bloque de parafina
Posteriormente, se hacen otros
dos veces el mismo procedimiento durante dos horas durante los cuales la parafina desplaza al
xilol y se construye un molde en papel, en aluminio o en barras de metal denominado “barras de
Leuckart”, en el que se coloca el bloque de tejido embebido en parafina y se llena con parafina
líquida orientando el bloque de tejido según el sentido en el que luego se quieran hacer los cortes.
Finalmente se enfría el molde obtenido, de modo que la parafina se solidifica y se obtiene el
bloque3,6.

3.2.5 Corte

Los bloques de parafina que

contienen la muestra se
cortan con un instrumento
denominado micrótomo. El
micrótomo se asemeja a una
máquina de cortar fiambre;
posee una manivela que se
gira manualmente (también
los hay automáticos) y que
hace que la pieza, donde se
fija el bloque, avance Figura 04: A) Fotografía en la que se muestran
automáticamente apenas unos ordenadamente de izquierda a derecha: el taco de
pocos micrones y descienda parafina en el que está incluido el tejido que se va a
sobre el filo de la cuchilla para cortar; el micrótomo en el que puede observarse la
posición del taco y la cuchilla que efectúa el corte; a la
derecha en el fondo se observa el baño termostático en
el que se extiende el corte recogido en el portaobjeto,
mostrado abajo a la derecha. B) Detalle de la forma de
recolectar el corte sobre la navaja con ayuda de un
realizar la sección. Generalmente, las secciones para microscopio óptico tienen un espesor de 5
mm. Las secciones se levantan con un pincel y se sumergen en un baño termostático con agua a
40 °C. Esto hace que las secciones se estiren. Luego se sumerge un portaobjeto gelatinado o
pretratado con albúmina en el baño y, con ayuda de un pincel, se ubica la sección sobre la
superficie del portaobjeto mientras se eleva éste. Los portaobjetos con las secciones se dejan
secar a temperatura ambiente o sobre una platina a 40 °C para que las secciones se adhieran a la
superficie del vidrio. La finalidad del pretratamiento con gelatina o albúmina es lograr que las
secciones se fijen al portaobjeto y no se despeguen durante los procedimientos posteriores 5,7.

3.2.6 Desparafinacion e hidratación

Para colorear las secciones,

dado que los colorantes son
soluciones acuosas, es
necesario quitar la parafina,
es decir, desparafinar las
secciones. Esto se logra
sumergiendo los
portaobjetos con las
secciones en xilol dentro de
un recipiente ad hoc
denominado Coplin. Este
solvente orgánico remueve
la parafina. Luego, las
Figura 05: Proceso de desparafinación e hidratación
secciones se hidratan
realizados en jarras de Coplin. De izquierda a derecha
sumergiéndolas en soluciones
se pueden seguir los distintos pasajes del preparado
con alcoholes de graduación
histológico incluido en parafina hasta su total
decreciente (100°, 96°, 70° y
hidratación.
50°) y, finalmente, se hace un
pasaje en agua destilada4,7.
3.2.7 Tinción

A. Coloraciones histológicas

Una vez que los cortes de los tejidos están adheridos a los portaobjetos, ya pueden ser
coloreados. El procedimiento de coloración o tinción consiste en que una estructura celular o
tisular adquiere específicamente un color bajo la acción de una sustancia colorante. Se
considera que una estructura se ha coloreado o teñido cuando al ser lavada con el líquido que
disuelve el colorante, no se decolora. Si se examina al microscopio una sección de tejido sin
colorear, ya adherida al portaobjetos, se podrá constatar que no es fácil discernir sus
componentes, pues lo delgado de los cortes y la diafanización producida en los tejidos igualan
sus índices de refracción. La coloración proporciona diferencias evidentes entre las
estructuras y al observar los cortes será fácil reconocerlas.

B. Clasificación

a) Ácidos
Son sales cuya parte básica es incolora y el componente ácido posee color. Así, en el
colorante eosina o eosinato de sodio, la propiedad colorante se debe al ácido eosínico y no
al sodio como base. Los colorantes ácidos tienen carga eléctrica negativa, por lo tanto, la
designación correcta es la de colorantes aniónicos. También se les conoce como colorantes
citoplasmáticos, pues tiñen al grupo químico, cargado eléctricamente, localizado en un
extremo de la cadena de aminoácidos que integran las proteínas citoplasmáticas. Las
sustancias que atraen eléctricamente a los colorantes ácidos se denominan “acidófilas” y
químicamente están constituidas por componentes básicos o alcalinos. 5 Ejemplos:

● Amarillo de metanilo
● Eosina
● Fucsina ácida
● Ácido pícrico
● Verde rápido
● Naranja G
● Safranina
● Azul de anilina

b) Básicos

Son sales que poseen la base coloreada e incolora la porción ácida; por ejemplo, el azul de
metileno o clorhidrato de azul de metileno, debe su propiedad colorante a la base azul de
metileno y no al ácido clorhídrico que es incoloro. Poseen una carga eléctrica positiva, por
lo tanto, son colorantes catiónicos. Se les denomina también colorantes nucleares, pues
tienen afinidad por los ácidos nucleicos (ADN y ARN). Las sustancias teñidas por los
colorantes básicos se denominan “basófilas” y están constituidas por componentes ácidos. 5
Ejemplos:

● Hematoxilina
● Rojo nuclear
● Azul de metileno
● Tionina
● Azul de toluidina
● Fucsina básica

c) Neutros

Son sales en las que tanto la parte básica como la parte ácida proporcionan color. Por
ejemplo: el eosinato de azul de metileno o el eosinato de azur de metileno. Estos
colorantes tienen la propiedad de teñir de manera simultánea, a los componentes nucleares
y a los citoplasmáticos, inclusive pueden proporcionar colores distintos (metacromasia) a
determinados componentes citoplasmáticos como las granulaciones específicas de los
granulocitos (cierto tipo de leucocitos). Forman parte de las fórmulas colorantes para frotis
de sangre como los colorantes de Wright, May Grünwald, Giemsa, Leischman. 5
 C. Grupo
Tabla 02: Colorantes según su grupo.8

CLASIFICASION EJEMPLOS

CROMOFOBOS Nitrosos Ácido pícrico

Ozoicos Naranja G, Sudan Negro

Derivados de la antroquinona Eosina Y, Fluoresceina sódica

Derivados de la acridina Acriflavina

Derivados de iminas quinónicas Orceína

Derivados de diferrilmetano y Amino-triarilmetanos

triferrilmetano

Derivados del xanteno Rojo nuclear rápido

Derivados de las talocianinas Azul alcián

Flavonoides Hematoxilina

AUXOCROMO Básicos Tionina, safranina, azul de toluidina, el

azul de metileno o la hematoxilina

Ácidos Fucsina ácida, verde rápido, naranja G

o la eosina

Neutro Eosinato de azul de metileno

D. Tipo de colorante según tejido histológico

Tabla 03: Colorante según su tejido histológico

TEJIDO HISTOLÓGICO COLORANTE

Tejido nervioso Impregnaciones argénticas

Tejido conjuntivo Reticulina, Wigert de resorcina - fucsina

Tejido óseo Tionina

Tejido muscular Hematoxilina, fosfotúngstica ácida

Hígado Hematoxilina eoina, tricrómico de Masson,

reticulina, PAS, azul de Pearls.
3.2.8 Deshidratación
 Dado que las secciones están en un medio acuoso durante la coloración, es necesario
deshidratarlas mediante pasajes en alcoholes de graduación creciente (50°, 70°, 96° y 100°) y
luego sumergirlas en xilol, el cual desplaza al alcohol y permite la penetración del medio de
montaje,6.
3.2.9 Montaje

Se añade una gota de bálsamo de Canadá o de un medio de montaje sintético e inmediatamente

se deposita una delgada lámina de vidrio (cubreobjeto) sobre la sección evitando la formación de
burbujas de aire. Una vez que el medio de montaje se solidifica, el preparado está listo para su
observación al microscopio sin riesgos de que se mueva el cubreobjeto. Los preparados así
montados duran décadas y pueden
volver a observarse cuantas veces Figura 05: Deshidratación y colocación de
sean necesarias6. cubreobjetos

3.3. Diferencia entre coloración y tinción

Tinción es el procedimiento que usa uno o más colorantes para observar un tejido a través de un
microscopio. Los colorantes son sustancias generalmente hidrosolubles, se unen a estructuras
celulares para colorear gracias a reacciones o afinidades químicas. 3
3.4. Diferencia entre técnica histológica y método

Tabla 02: Diferencia entre técnicas y métodos histológicos

METODO HISTOLOGICO
Los métodos histológicos son el conjunto de
técnicas para procedimientos vitales y
manipulación celular y pueden clasificarse en
dos grupos, a saber: los que se basan en la
observación directa de células y tejidos
vivos, y los que analizan material muerto o
inanimado.
TECNICA HISTOLOGICA
La técnica histológica se ocupa de procesos
utilizados para elaborar preparaciones
permanentes de células y tejidos con el fin de
analizarlos utilizando diversos tipos de
microscopios.

IV. CONCLUSIÓN
Para ser observados al microscopio los tejidos deben preservarse de tal manera que su estructura
morfológica y su composición molecular se mantengan como cuando estaban vivos, deben ser
seccionados finamente y con gran precisión en rebanadas delgadas y sus estructuras deben estar bien
contrastadas; para lograr este objetivo, los tejidos deben pasar por una serie de procesos físico-
químicos que en conjunto reciben el nombre de técnica histológica.
V. BIBLIOGRAFÍA
1. Arenas CEM. TÉCNICA HISTOLÓGICA. :12.
2. Matos Rodríguez Arioska, Ferro González Belkis, Concepción Obregón Tebelio, Barrabes
Mazón Ana Margarita, González León Sergio. Técnicas histológicas básicas en la formación
del especialista de Histología: una mirada de renovación estratégica. Rev Ciencias Médicas
[Internet]. 2019 Abr [citado 2021 Mayo 14] ; 23( 2 ): 310-318. Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1561-31942019000200310&lng=es.
3. Ross M., Pawlina W. Histología Texto y Atlas.Correlación con biología molecular y celular.
7ma edi. Barcelona: Wolters Kluwer; 2016.
4. Junqueira, L., Carneiro, J., González, M., Mezzano, G., Abrahamsohn, P., Tenório Zorn, T.,
Fagundes dos Santo, M. and Gama, P., 2015. Histología básica. Mexico, D.F.: Médica
Panamericana.
5. Megías M, Molist P, Pombal MA. (2019). Atlas de histología vegetal y animal. Técnicas
histológicas. [citado 2021 Mayo 14] de: http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-
introduccion.php
6. Técnicas histológicas 3. Incrustación. Parafina. Atlas de histología vegetal y animal.
[Internet]. [cited 2021 May 14]. Available from: https://mmegias.webs.uvigo.es/02-english/6-
tecnicas/3-parafina.php
7. Gorodner O. HISTOLOGÍA: MÉTODOS E INSTRUMENTOS DE ESTUDIO DE LA
HISTOLOGÍA PARTE I: TÉCNICA HISTOLÓGICA. [Internet]. 2021 [citado 12 mayo
2021];:1–13. Disponible en:
https://med.unne.edu.ar/sitio/multimedia/imagenes/ckfinder/files/files/histologia_med_cat2/G
UIA%201%20%202013.pdf
8. Principios físicoquímicos de los colorantes utilizados en microbiología [Internet]. [citado 14
de mayo de 2021]. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1794-24702020000100073