UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE GUERRERO

CENTRO DE INVESTIGACIONES MICROBIOLÓGICAS

Especialidad en Microbiología

Protocolo de titulación
“Resistencia fenotípica a antibióticos en bacterias de la microbiota
gástrica, aisladas de pacientes con patología gástrica”

Para obtener el grado de:

Especialidad en Microbiología

Presenta:
Roberto Limón Carranza
Director de proyecto Codirector
Dr. Donaciano Flores Robles Dr. Adolfo Román Román

Las Petaquillas, Guerrero, México. junio del 2022

 MUERTES PROYECTADAS ATRIBUIBLES A LA RAM CADA AÑO PARA 2050

La resistencia antimicrobiana
ha sido reconocida por la
Organización Mundial de la
Salud como una de las
mayores amenazas para la
salud humana, se estima que
para el año 2050 más de 10
millones de personas mueran
al año a causa de esta
resistencia.

Davies, SC y Oxlade, C. (2021).

Cronología de antibióticos. PDR, resistente a la penicilina; R, resistente; XDR,
extremadamente resistente a los medicamentos. (De Centros para el Control y la
Prevención de Enfermedades). Resistencia a antibióticos/antimicrobianos.
Mecanismos de acción y mecanismos de resistencia asociados a los principales
antibióticos. Tomado de Wright,2010
(Mancuso et al., 2021).
Transferencia horizontal de genes entre bacterias

Cómo se propaga la resistencia a los antibióticos. La

resistencia bacteriana a los antibióticos puede ser
natural o adquirida por transmisión vertical u
horizontal. A: antibiótico.

(Furuya y Lowy, 2006; Mancuso, G. et al., 2021).

 Las bacterias predominantes corresponden a
los filos:
- Actinobacteria
- Bacteroidetes
- Firmicutes
- Proteobacteria.

El género predominante es Streptococcus.

Clostridium sp, Lactobacillus sp y Veillonella sp
son las bacterias más representadas en el
estómago humano en condiciones saludables

Sipponen, P. y Maaroos, HI (2015). (Ianiro et al., 2015); (Zilberstein B., 2007)

hipoclorhidria o aclorhidria
Antecedentes
(Avilés-Jiménez et al., 2014)

En un estudio para caracterizar la microbiota de la mucosa gástrica a medida que avanza hacia el tipo de cáncer
intestinal, se analizaron muestras de 65 pacientes que presentaron una de las siguientes patologías, gastritis no
atrófica (GNA), metaplasia intestinal (MI) y cáncer gástrico de tipo intestinal (CG). 2014)

Familia Lachnospiraceae 20% de la

microbiota en todos los pacientes.

Porphyromonas y Neisseria ↓ MI y CG

Lactobacillus coleohominis y Lachnospiraceae ↑ MI y CG

 (Wang et al., 2016).

Se analizaron un total de 315 pacientes, incluidos 212

pacientes con gastritis crónica y 103 pacientes con
cáncer gástrico (CG). Se encontraron géneros que se
enriquecieron en el cáncer gástrico, tales como,
Lactobacillus, Escherichia, Shigella, Nitrospirae,
Burkholderia fungorum y Lachnospiraceae.
Nitrospirae tuvo presencia en la mayoría de los
pacientes con CG, pero estuvo ausente en pacientes
con gastritis crónica. En CG se observó una
abundancia de Escherichia y Shigella.
(Ferreira et al., 2018).
 Planteamiento del problema

¿Las bacterias aisladas de la microbiota gástrica,

tienen resistencia fenotípica a antibióticos?
 Justificación

La microbiota gástrica presenta una gran variedad de bacterias que han sido caracterizadas
en los últimos años, pero se desconoce acerca de la resistencia a antibióticos en bacterias
de la microbiota y su efecto en el tratamiento cuando la patología gástrica es de origen
infeccioso.
 Hipótesis

Las bacterias aisladas de la microbiota gástrica en pacientes con

patología gástrica, si tienen resistencia a antibióticos.
 Objetivos
Objetivo general

Analizar la frecuencia de resistencia a antibióticos en bacterias no H. pylori aisladas de pacientes

con patología gástrica.

Objetivos específicos

1. Aislar e identificar las bacterias no H. pylori en biopsias de pacientes con patología gástrica.

2. Determinar la resistencia a antibióticos en las bacterias identificadas de las biopsias de pacientes

con patología gástrica.

3. Calcular la frecuencia de resistencia en las bacterias identificadas de las biopsias de pacientes

con patología gástrica.

4. Evaluar la relación entre la patología gástrica, las bacterias identificadas y la resistencia a

antibióticos.
Diseño metodológico

• Tipo de estudio: experimental y descriptivo transversal

• Lugar donde se realizará el estudio: Laboratorio de investigación en bacteriología de la Universidad
Autónoma de Guerrero.
• Población objetivo: pacientes con patología gástrica (gastritis, gastritis crónica, ulceras, cáncer gástrico).
• Grupo de estudio:
- Grupo experimental: personas con alguna patología gástrica ( gastritis, gastritis crónica, ulceras, cáncer
gástrico).
- Grupo control: personas sin dispepsia, que no presente alguna patología gástrica.
• Criterios de inclusión: -
- Pacientes con síntomas de dispepsia.
- Pacientes sin tratamiento antimicrobiano para erradicación de H. pylori y sin consumo de inhibidores de la
bomba de protones o neutralizadores de pH gástrico.
• Criterios de exclusión:
- Pacientes que hayan consumido antibióticos e inhibidores de protones previo a la intervención (15 días)
- Pacientes con tratamiento con probióticos en las últimas dos semanas
• Variables:
- Dependientes: resistencia a antibióticos en bacterias de la microbiota gástrica, edad, tipo de patología gástrica.
- Independientes: sexo, nivel socio-económico.

• Tamaño de muestra: Se estudiarán pacientes del Instituto Estatal de Cancerología “Arturo Beltrán Ortega” en
Acapulco, Guerrero, México que acudan a realizarse una endoscopía por padecimientos gástricos, entre el 1 de
agosto de 2022 y 31 de noviembre de 2022.

• Obtención de las biopsias: Las biopsias serán otorgadas por el médico gastroenterólogo Salomón Reyes Navarrete
del Instituto Estatal de Cancerología “Arturo Beltrán Ortega” en Acapulco, Guerrero, México.

• Consideraciones éticas y de bioseguridad:

NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, clasificación y especificaciones del manejo de Residuos Peligrosos Biológicos
Infecciosos.
NOM-004-SSA3-2012. Del expediente clínico.
Diagrama de trabajo Obtención de biopsias gástricas

Cultivo de las biopsias

obtenidas

Grupo control Grupo experimental

Aislado de Obtención de cultivos

Identificación fenotípica
colonias bacterianos

Análisis de sensibilidad a Tinción de Pruebas Morfología

antibióticos Gram bioquímicas bacteriana

Obtención y análisis
de resultados

Discusión

Conclusiones
Obtención de las biopsias

-20⁰ C

4⁰ C
8 hrs

Caldo BHI (Brain En caso de no

Heart Infusion) procesar
10% de glicerol inmediatamente,
almacenar -20⁰ C

Después de un ayuno de 8
horas, el estudio endoscópico
se realizará con un procesador
de video y un gastroscopio de
video.
Diagrama de trabajo Obtención de biopsias gástricas

Cultivo de las biopsias

obtenidas

Grupo control Grupo experimental

Aislado de Obtención de cultivos

Identificación fenotípica
colonias bacterianos

Análisis de sensibilidad a Tinción de Pruebas Morfología

antibióticos Gram bioquímicas bacteriana

Obtención y análisis
de resultados

Discusión

Conclusiones
 Cultivo e identificación

3 a 5 días

Macerar la biopsia Incubar con

Colocar 50µl del Distribuir por estría Revisar al tercer
con aplicador de niveles de 10% de
homogenizado en de aislamiento en la día crecimiento
madera estéril CO₂ a 37⁰ C de 3 a
una placa Columbia placa de cultivo bacteriano
Y agitar en vortex 5 días
Diagrama de trabajo Obtención de biopsias gástricas

Cultivo de las biopsias

obtenidas

Grupo control Grupo experimental

Aislado de Obtención de cultivos

Identificación fenotípica
colonias bacterianos

Análisis de sensibilidad a Tinción de Pruebas Morfología

antibióticos Gram bioquímicas bacteriana

Obtención y análisis
de resultados

Discusión

Conclusiones
Pruebas Revisión de
morfología colonial
fenotípicas

Tinción de Gram

Pruebas
bioquímicas
Diagrama de trabajo Obtención de biopsias gástricas

Cultivo de las biopsias

obtenidas

Grupo control Grupo experimental

Aislado de Obtención de cultivos

Identificación fenotípica
colonias bacterianos

Análisis de sensibilidad a Tinción de Pruebas Morfología

antibióticos Gram bioquímicas bacteriana

Obtención y análisis
de resultados

Discusión

Conclusiones
Pruebas de susceptibilidad Se colocará discos con 15µg de
antibióticos: claritromicina,
metronidazol, amoxicilina,
tetraciclina, rifampicina y
levofloxacino sobre la
superficie de la placa.

Incubar con
niveles de 10% de
CO₂ a 37⁰ C de 3 a
5 días
Medición de zonas de inhibición

Medir y reporte la CMI de las

colonias en cada cultivo.
 Diseño metodológico
Tipo de estudio Descriptivo transversal
 Referencias

Davies, SC y Oxlade, C. (2021). Innovar para asegurar el futuro: el futuro de

la medicina moderna. Revista de salud futura , 8 (2),
e251–e256. https://doi.org/10.7861/fhj.2021-0087

Sipponen, P. y Maaroos, HI (2015). Gastritis crónica. Revista

escandinava de gastroenterología , 50 (6),
657–667. https://doi.org/10.3109/00365521.2015.1019918
Mancuso, G., Midiri, A., Gerace, E. y Biondo, C.
(2021). Resistencia bacteriana a los antibióticos: los patógenos
más críticos. Patógenos (Basilea, Suiza) , 10 (10), 1310.
https://doi.org/10.3390/pathogens10101310
Mancuso G, Midiri A, Gerace E, Biondo C. Bacterial Antibiotic
Resistance: The Most Critical Pathogens. Pathogens. 2021 Oct
12;10(10):1310. doi: 10.3390/pathogens10101310. PMID:
34684258; PMCID: PMC8541462.
Zilberstein B , Quintanilha AG , Santos MA , Pajecki
D , Moura EG , Alves PR , Maluf Filho F , de Souza
JA , Gama-Rodrigues J . Microbiota del tracto digestivo
en voluntarios sanos . Clínicas (Sao Paulo) 2007