PAPEL DE LOS LABORATORIOS

EN EL CONTROL DE MASTITIS

MVZ JUAN SEPULVEDA ACEVES

 METAS
• Ver herramientas para Mejorar calidad de leche
y control de mastitis
• Desarrollar esquema de monitoreo de Calidad
de leche y trabajo de ordeñadores
• Generar información para toma de decisiones
 HERRAMIENTAS DE
LABORATORIO

1. CULTIVO DE TANQUE (CEP, CLP, PI, COLI)

2. CULTIVO DE TANQUE (PATOGENOS)
3. CULTIVO DE CASOS CLINICOS, SECAS Y
FRESCAS
4. DIAGNOSTICO DE MASTITIS CON EL
EXAMEN MICROSCOPICO DE LA LECHE
5. CONTEO DE CELULAS SOMATICAS (CCS)
6. MUESTREO ESTRATEGICO (SCC Y BACTERIOLOGÍA)
 1) CULTIVO DE TANQUE
(CEP, CLP, PI, COLI)

• Cultivo de Tanque 3
veces por semana
• Sirve para monitoreo
de rutina de ordeño
y lavado del equipo
• Sensible a cambios
diarios en la rutina
de trabajo
 CULTIVO DE TANQUE
1. Conteo Estándar en Placa (CEP):
• Número total de bacterias aeróbicas presentes en la
muestra de leche.
• Para monitorear la limpieza de los procedimientos de
ordeño, el lavado del equipo de ordeño y el enfriamiento.
Conteo Estándar en Placa (CEP):
• Las muestras se cultivan a 32°C (90°F) por 48 horas.
• Crecen colonias contables en métodos estándar
• La meta principal es tener menos de 5000 UFC por ml.
 CULTIVO DE TANQUE

2. Conteo de Leche Pasteurizada (CLP):

• Bacterias termodúricas
(sobreviven la
pasteurización), luego
crecen.
• Calentar muestra a
62.8°C por 30 min, enfriar
a 10°C, luego cultivar
como SPC
• La meta principal es tener
conteos menores a 100
UFC/ml
Conteo de Leche Pasteurizado (CLP):

• La piedra de leche y
la deposición de
minerales y grasa en
el equipo de ordeño y
en el tanque
aumentan las
unidades formadoras
de colonias (UFC) por
mililitro.
Conteo de Leche Pasteurizado (CLP):
• Monitorear la limpieza
del equipo de ordeño,
tanque de leche y el
estado de los hules
que forman parte del
equipo de ordeño.
 CULTIVO DE TANQUE
3. Conteo de coliformes. (COLI)
La meta menos de 100 UFC (unidades
formadoras de colonias) por mililitro.
 Conteo de coliformes. (COLI)
“Origen”
• Pezones y Unidad de Ordeño Sucios
Conteo de coliformes. (COLI)
“Origen”
• Manos del ordeñador
Conteo de coliformes. (COLI)
“Origen”
•Piso en la sala de ordeño
 CULTIVO DE TANQUE
4. Conteo de leche preincubado: (PI)
Meta menos de 10,000 UFC/ml

•La muestra se mantiene a 12.8°C (55°F) por 18 horas

antes de cultivar y después se realiza el mismo
procedimiento rutinario de conteo en plato estándar.
Conteo de leche preincubado. (PI)

• 1% pueden sobrevivir la pasterización

• Papel Importante en la vida de la leche

 Conteo de leche preincubado. (PI)
• Las bacterias asociadas en este conteo son bacterias que
pueden vivir en temperaturas frías (psicrófilas)

Condiciones sanitarias del establo.

Conteo de leche preincubado. (PI)
• Limpieza de la ubre
 ESTIERCOL "Coli" Fecha:

Rancho:
Comentarios

Bacterias por
Mililitro de
Leche 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
Mas de 1000
975
950
925
900
875
850
825
800
775
750
725
700
675
650
625
600
575
550
525
500
475
450
425
400
375
350
325
300
275
250
225
200
175
150
125
100
75
50
25
 Entregas de leche que califica para premios por calidad
CPS 2001 vs 2002
78
80
70
60
50
% Leche/ año

40 32 30
30 SPC 2001
20 11 11 14
10 3 63 1 01 1 1 61 SPC 2002
0

CFU / ml

(40%) 26,280,000 lbs al año con mejor calidad

 Entregas de leche que califica para premios por calidad

CLP 2001 vs 2002

60
51
50

40
%Leche/ año

30 24 25
20
20
14 12 14 14 LPC 2001
7 43 7
0 20 20 LPC 2002
10
2
0

CFU / ml
(27%) 17,730,000 lbs al año con mejor calidad
 Entregas de leche que califica para premios por calidad
Coliformes 2001 vs 2002
70 67

60 57

50

Leche / Año
40

Coli 2001
30
Coli 2002

20 17
15
9
10 8 8
42
2 11 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1
0
100 300 500 700 900 >1000

CFU / ml
(10%) 6,570,000 lbs al año con mejor calidad
 Entregas de leche que califica para premios por calidad
PI 2001 vs 2002
80
74
70

60

50
% Leche / año

40

30 25 PI 2001

PI 2002
19
20
14
12
10
977 9
5
3 2 3 1 1 2 30 20 1 0 0 10 1 0
2
0
0
0 0 0
60000
10000

20000

30000

40000

70000

80000

90000
50000

110000

120000

140000
100000

130000

150000

>150000
CFU / ml
(49%) 32,175,000 lbs al año con mejor calidad
 ENTREGAS DE TANQUES DE LECHE QUE CALIFICAN A PREMIOS DE CALIDAD
Junio 2001 - Junio 2002
AÑO AÑO Tanques / año Libras de leche
CFU / ML 2001 2002 DIFERENCIA con mejor calidad
PI < 10,000 25% 74% 49% 715 32,175,000
COLIFORMES< 100 57% 67% 10% 146 6,570,000
CLP < 50 24% 51% 27% 394 17,730,000
CPS < 5,000 32% 78% 40% 584 26,280,000
 2) CULTIVO DE TANQUE
(PATOGENOS CONTAGIOSOS)

I. MINIMO TRES MUESTREOS CADA 3 O 4

DIAS
• Valor Predictivo Negativo:
97.3% for Strep. Agalactiae
93.1% for Staph. Aureus
70.0% for Mycoplasma.

• Siete cultivos diarios negativos es mejor para

Aureus y Micoplasma.

Rubén N. González and David J. Wilson 2002

MICROORGANISMO: NIVELES NORMALES
UFC/ML

Estafilococos (Coagulasa Positivo) Negativo

Estreptococos Agalactie Negativo
Mycoplasma Negativo

Coliformes 0 – 100
Estreptococos Spp. 0 – 500
Estafilococos (Coagulasa Negativo) 0 – 500
Corynebacterium 0 – 500
Bacilos, Pseudomonas 0 – 500

Adaptado de AS-1128, April 1997 J. W. Schroeder

3. CULTIVO DE CASOS CLINICOS,
AL SECAR Y RECIEN PARIDAS

.
En el Rancho
 DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS CAUSANTES DE
MASTITIS EN MEXICO
Gram + = 28.5%
NC + Coli
71.5%
No Tratamiento?

N = 3,809
67 Establos

Adaptado Fernández 2000

No Crecimiento Aureus Agalactie

Estafilococos Spp Coliformes Estreptococos Spp
Cual tiene mas Coliformes?
 TENDENCIAS
• Tratamiento solo a mastitis por bacterias
Gram + (Estreptococos y Estafilococos)

Strep ag Strep sp
 TENDENCIAS

Tratamiento Intramuscular e
Intramamario a GRAM +

+
Para lograrlo …

+
 Identificación de Bacterias

• Por medio de Cultivos Strep ag

Strep sp

CAMP

Staph sp
 Material para Cultivos
• Incubadora (hielera, foco, termostato, cable y clavija)
 Material para Cultivos

• Tubos para
esterilizar y rejillas
para tubos
• Toallas de algodón
o gasas
• Alcohol para
desinfectar pezones
 Material para Cultivos

• Asas desechables
estériles para cultivo
o Asas de metal
• En caso de Asas de
metal = Mechero
 Material para Cultivos

• Cultivo de bacterias de
estafilococo aureus
(camp)
• Hidroxido de potasio al
3% (Prueba de gram)
• Agua oxigenada 3%
(Prueba de catalasa)
• Plasma de conejo
(prueba de coagulasa)
• Agar sangre con esculina
Material para Cultivos
Porta objetos
Ordeñadores en Rancho
 Protocolo de Aislamiento de Bacterias de Leche con Mastitis Clínica
VACA MASTITIS CLÍNICA

TOMA DE MUESTRA APROPIADAMENTE

Cultivo 35°C
24 hrs

Crecimiento
KOH 4% (-) KOH 4% (+)

- H2O2 (Catalasa)
+

NO CRECIMIENTO
ESTAFILOCOCOS

COLIFORMES
ESTREPTOCOCOS

ESTAFILOCOCO
CAMP - COAGULASA
+

AUREUS
ESTAFILOCOCOS
SPP
- +
ESTREPTOCOCO ESTREPTOCOCO
SPP AGALACTIAE Hess, 2003
 Protocolo 1 de Tratamiento Mastitis Clínica
Vaca
Mastitis
clínica

. Antinflamatorios Corral Mastitis

No Esteroidales Fiebre
o Examen 1. Esperar Cultivo
. Fluidos Orales o No Fiebre
Sistemicamente Físico 2. Monitoreo
Hipertónico IV afectada
. Antibiótico Intramuscular

Cultivo
24 hrs

Strep Ag Staph aureus Staph Coag - Strep Ambien Coliformes No Crecimiento

Antibioticos Intramamarios Antibioticos Intramamarios No Antibioticos Intramamarios
Tratar 4 cuartos Tratar Cuarto Afectado Antiinflamatorios no
Antibiotico Intramuscular Antibiotico Intramuscular Esteroidales

Perdida de
Producción del 3 cuartos Salida Eliminar Remonver Vaca
cuarto Eliminar

Curada

Regresar al hato
en ordeño (Adaptado Hess 2002)
Hess, 2003
67 a 80%
• Menos Antibióticos y Mano de Obra
67 a 80%
• Menos días en hospital
(Tiempo de Retiro de Antibióticos)

De 20 días de
retiro a 8 días
de retiro de
leche

Ruegg 2003
 67 a 80%
• Menos Leche Descartada – Mas dinero en la bolsa
 20 a 33%
• Tratamiento Intramamario e Intramuscular ( MIC )
20 a 33%
Strep Ag Staph aureus Staph Coag - Strep Ambien
Antibioticos Intramamarios Antibioticos Intramamarios
Tratar 4 cuartos Tratar Cuarto Afectado
Antibiotico Intramuscular Antibiotico Intramuscular
Cultivo vacas al Secado y al Parto
• Positivas subclínicas
a Agalactiae o Aureus
• Tratamiento 7 días
IM y cuatro cuartos
• Segregar
• Monitorear cura
(cultivos)
PROTOCOLO DE CULTIVOS
CULTIVO COMPUESTO POR VACA
(ESTAFILOCOCOS AUREUS)

Sensibilidad = 91% (54% to 92%)

Especificidad = 92% (86% - 99.8%)
Rubén N. González and David J. Wilson 2002
PROTOCOLO DE CULTIVOS AUREUS

Cultivo todo el hato #1

(19.4% de las Aureus)
1 MES

Cultivo todo el hato

(55.5% de las Aureus) 38.8% Nuevas
1 MES

Cultivo todo el hato

(25% de las Aureus) 11.1% Nuevas
• Solo aislamos 69.3%
• Contagios entre muestreos???
PROTOCOLO DE CULTIVOS AUREUS

Cultivo todo el hato

(89.7% de las Aureus)
8 días

Cultivo todo el hato

(48.2% de las Aureus) 10.3 % Nuevas
8 días

Cultivo
(44.8% de las Aureus) 0% Nuevas
 Cultivo todo el hato #2
Día Aureus Aislados Nuevas Acumulado
1 75% 75% 75%
4 71% 6% 81%
6 74% 13% 94%
8 48% 6% 100%

Prevalencia 34%
Cultivo todo el hato # 3
Día Aureus Aislados Nuevas Acumulado
1 57.0% 57% 57%
8 62.1% 30% 87%
16 67.50% 14% 100%

Prevalencia 92.5%
4. DIAGNOSTICO DE MASTITIS
CON EL EXAMEN
MICROSCOPICO DE LA LECHE
Protocolo de Tinción de Bacterias de Leche con Mastitis Clínica
VACA MASTITIS CLÍNICA

TOMA DE MUESTRA APROPIADAMENTE

Incubar Leche 35°C 2-4hrs

Tinción de Leche
Azul de Metileno

OBSERVAR EN MICROSCOPIO
ESTAFILOCOCOS
ESTREPTOCOCOS

COLIFORMES

OTROS
SOMÁTICAS
CELULAS (Sepúlveda 2005)
Hess, 2003
SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD Y
VALORES PREDICTIVOS
CULTIVO

+ -
+ 38 4 42
Prueba VP FP
MICROSCOPIO
- 4 49 53
FN VN

42 53 95
COCOS NC
Sensibilidad = 38/42 = 90% Especificidad = 49/53 = 92%
Valor predictivo positivo = 38/42 = 90%
Valor predictivo negativo = 49/53 = 92%
 Protocolo 2 de Tratamiento Mastitis Clínica
Vaca
Mastitis
clínica

1. Antiinflamatorios Corral Mastitis

Fiebre Examen No Fiebre
No Esteroidales 1. Esperar Tincion
Físico
2. Fluidos Orales 2. Monitoreo
O hipertónico IV
3.Antibiotico Intramuscular
Cultivo y Tinción
de leche
2 -4 hrs CCS Bacilos,Pleomorfos,
Cocos levaduras, hongos, etc.

Estreptococos Estafilococos Coliformes Solo Celulas

somáticas
Antibioticos Intramamarios a -No Antibioticos intramamarios
-Antiinflamatorios no esteroidales
Cuarto afectado y Atibiotico IM

Perdida de
Producción del 3 cuartos Salida Eliminar Remonver Vaca
cuarto Eliminar
Curada

Regresar al hato
En Ordeño (Sepúlveda 2005)
Hess, 2003
DESVENTAJAS
• Solo dice si son
cocos, no indica si
son contagiosos
• Recomendado para
hatos libres de
Aureus y Agalactiae
• Realizarse siempre
con cultivos
alternativos de tanque
 VENTAJAS
• Cualquier persona
entrenada puede
realizarla
• El resultado se
obtiene rápido
• El personal no
maneja cargas
bacterianas altas
5. CONTEO DE CELULAS
SOMATICAS
 CONTEO DE CELULAS
SOMATICAS EN TANQUE

• Indican estado inflamatorio de la ubre

• No indican agente etiológico
• Hatos pequeños puede ser de
principales indicadores
• Hatos grandes suele diluirse
• Recomendable realizarlos mínimo 4
veces por semana, pero ideal diario
 • No es indicador de prevalencia de vacas con
conteo de células somáticas altos
COMPARACIÓN DEL CONTEO DE CÉLULAS SOMATICAS
INDIVIDUAL CONTRA TANQUE EN DOS HATOS FICTICIOS.
HATO 1 HATO 1

VACA 1 50 120
VACA 2 60 270
VACA 3 80 320
VACA 4 890 370
PROMEDIO CCS 270 270
EN TANQUE
% > 200 25% 75%
(PREVALENCIA)
Managing Milk Quality, Pierre Levesque
 CELULAS SOMATICAS VACA
INDIVIDUAL
DISTRIBUCION RECOMENDADA DE
CELULAS SOMATICAS DEL HATO

CELULAS SOMATICAS VACAS VAQUILLAS

<200,000 CCS/ml 75% 85%
200,000 - 600,000 CCS/ml 15% 10%

>600,000 CCS/ml 10% 5%

 CELULAS SOMATICAS VACA
INDIVIDUAL
DISTRIBUCION RECOMENDADA DE
CELULAS SOMATICAS VACAS FRESCAS

CELULAS SOMATICAS VAQUILLAS VACAS

<200,000 CCS/ml >90% 80%
200,000 - 600,000 CCS/ml <5% 10%

>600,000 CCS/ml 5% 10%

Células Somáticas Vaca Individual
-Tasa de Nuevas Infecciones: Porcentaje de
vacas no infectadas que se infectan en ese
mes, la meta es tener < 8% de nuevas
infecciones.

PRUEBA ANTERIOR PRUEBA ACTUAL

CCS < 200,000 CCS >200,000
• Tasa de Vacas Crónicas:
Una buena meta es tener 8%.

PRUEBA ANTERIOR PRUEBA ACTUAL

CCS > 200,000 CCS >200,000
• Tasa de Vacas Limpias:
Una buena meta es tener >75%.

PRUEBA ANTERIOR PRUEBA ACTUAL

CCS < 200,000 CCS <200,000
 CONTEO DE CELULAS
SOMATICAS EN EL RANCHO
Procedimiento
Procedimiento
Procedimiento
Procedimiento
FACTOR MICROSCOPICO
DIAMETRO INMERSION MICRO EN CENTIMIETROS 0.019
RADIO INMERSION CENTIMETROS 0.0095
RADIO AL CUADRADO POR 3.1416 (PI) 3.1416
.=AREA VISUAL 0.00028353
1 ENTRE AREA VISUAL = NUMERO DE CAMPOS OBSERVABLES 3,526.9711
POR 100 (1 MICROLITRO)=FM PARA UN CAMPO 352,697.11
FM 1 CAMPO 352,697
FM 10 CAMPOS 35,270
FM 25 CAMPOS 14,108
FM 50 CAMPOS 7,054
FM 75 CAMPOS 4,703
FM 100 CAMPOS 3,527
6. MUESTREO ESTRATEGICO
CODO Y TANQUE
 MUESTREO ESTRATEGICO
• Excelente herramienta para conocer:

1. CCS por corral y su contribución al

tanque
2. Conteos bacterianos por corral y su
contribución al tanque
3. Tipo de microorganismos por corral
 1. CCS por corral y su
contribución al tanque
MUESTREO ESTRATEGICO CCS

2500

2250

2000
C C S X 1000 /M L

1750

1500

1250 MUESTREO
POR CORRAL
1000
MUESTREO
750 ACUMULADO
DE TANQUE
500

250

0
C O R R AL 1

C O R R AL 6

C O R R AL 7
C O R R AL 2

C O R R AL 3

C O R R AL 4

C O R R AL 5

C O R R AL 8

C O R R AL 9
2. Conteos bacterianos por corral y
su contribución al tanque
3.Tipo de microorganismos
por corral
 MUESTREO ESTRATEGICO

• Combinar con
California o
fossomatic vaca
individual
• Excelente para hatos
grandes
 GRACIAS !

MVZ JUAN SEPULVEDA ACEVES

mvzjuansepulveda@yahoo.es
Tel. 01 (477) 1 22 63 82
Incubar 2 - 4 hrs a 35°C
Actinomyces Pyogenes
Corynebacterium
Examen Físico
Incubar 35°C 24 hrs