Tecnología lgY o

aplicaciones de los
By Kevin Isai Garrido
Terrazas anticuerpos de
yema de huevo de
gallina
Referencias

Chacana, Pablo & Terzolo, Horacio & Gutierrez Calzado, Esteban Justo & SCHADE, R..
(2004). Tecnología IgY o aplicaciones de los anticuerpos de yema de huevo de gallina.
Revista de medicina veterinaria. 85. 179-189.
 Introducción.

 La producción de anticuerpos (Ac.) de pollo,

en especifico las inmunoglobulinas extraídas a
partir de la yema de huevo de la gallina (lgY),
es una tecnología innovadora que suscita cada
vez más el interés de la comunidad científica'
EL SISTEMA INMUNE HUMORAL DE LAS
AVES (GALLUS GALLUS)

 El sistema inmune de los pollos está compuesto por órganos primarios (bolsa de Fabricio y timo) y por
órganos secundarios (bazo, glándula de Hardel nodulos linfoides, médula ósea, tejido linfoide del tracto
alimentario).
 En las aves se han demostrado tres clases de inmunoglobulinas que son análogas a las inmunoglobulinas de
los mamíferos y que se denominan lgA, lgM e lgY.
 La lgA e lgM de las aves es equivalente a las de los mamíferos, en cuanto al peso molecular, morfología y
movilidad electroforética.
 podría considerarse que la lgY es un antecesor filogenético de las lgE, lgA e lgG mamíferas, tal aseveración
está fundamentada en el hecho de que la lgY a diferencia de la lgG, tiene la posibilidad de mediar reacciones
anafilácticas.
ESTRUCTURA MOLECULAR DE LOS
ANTICUERPOS DE POLLO

 La lgY está formada por dos cadenas livianas y dos cadenas pesadas y el PM de la lgY es de
aproximadamente 167.250 Dalton.
 La cadena liviana se compone de un dominio variable y de otro constante (PM 18 000 Da) La cadena pesada
tiene un PM de 65 105 Da y el fragmento Fab pesa alrededor de 45 359 Da.
 La porción Fc de la lgY es el sitio que presenta la mayor parte de las f unciones biológicas efectoras, en
forma similar a lo que ocurre con la IgG.
PRINCIPIOS DE LA DIVERSIDAD DE E5.
PECIFICIDADES DE LOS ANTICUERPOS

 En las aves la cadena liviana de las inmunoglobulinas se encuentra codificada por los genes V¡ (región
variable), iL(región de unión) y Cr- (regrón constante), mientras que la cadena pesada está codificada por los
genes V¡1, Ju, Dr (región variable, de unión y de diversidad, respectivamente).
 Los pseudogenes están implicados en la generación de diversidad entre los anticuerpos y gracias a estos
procesos, puede generarse en las aves una gran diversidad de inmunoglobulinas con distintas especificidades.
TRANSFERENCIA DE IgY A LA YEMA DE
HUEVO

 Se considera que la lgY es la inmunoglobulina predominante en la yema mientras que la lgA y la lgM
prevalecen en la clara del huevo.
 la lgY se transfiere exclusivamente a la yema por un proceso activo mediado por receptores.
 La cantidad de lgY transferida se relaciona con su concentración en el suero sanguíneo de las gallinas y
aparentemente la lgY se transfiere sin ningún tipo de selección previa relativa a sus especificidades.
 Para que la transferencia ocurra, es esencial que tanto una parte de la región Fc como la región bisagra se
encuentren intactas.
 Todas las inmunoglobulinas transportadas a la yema tienen la secuencia HEAL.
 La lgY demora aproximadamente unos 5 días en aparecer en un huevo desde el momento en que es
activamente transportada desde la circulación sanguínea al ovocito hasta que es puesto por la gallina.
 Durante este período de tiempo el ave ovula y el ovocito, a medida que pasa por las distintas secciones del
oviducto, va adquiriendo sucesivamente la clara, las membranas internas y finalmente en su porción
engrosada o útero se forma la cáscara.
CONCENTRACIÓ DE tgY EN LA YEMA DE
HUEVO

 La concentración de lgY en la yema varía entre los 1 0 a 20 mg/ml, pudiendo encontrarse entre 100 y 400
mg de lgY por huevo. Esta variación depende de la línea genética o raza del ave.
 Además, la cantidad total de lgY en el huevo está relacionada con el tamaño del mismo y las variaciones
fisiológicas individuales.
 El biorritmo de transferencia hacia la yema es secuencial, la gallina debe transferir una cantidad mínima de
IgY para asegurar la protección de sus desendientes.
 En poritos recién eclosionados pueden decretarse concentraciones de IgY circulante que varían entre 1 y 1,5
mg/ml lo que garantiza una adecuada protección al pollito.
 Cuando estos eclosionan la yema de huevo se encuentra unida a la su cavidad abdominal atreves del cual el
pollito recibe nutrientes y anticuerpos directamente de su intestino.
PARAMETROS FISICO-QUIMICOS DE LOS
ANTICUERPOS DEL POLLO

 El punto isoeléctrico de la lgY se encuentra dentro del rango de 5,7 a 7,6, en contraste el de la IgG es 6,1 a
8,5.
 La mitad mas hidrofóbica del Ac. es el fragmento Fc., esta propiedad puede ser de utilidad para la absorción
de la IgY a partículas de látex.
EXTRACCTÓN DE LA IgY A PARTIR DE LA
YEMA DEL HUEVO

 Entre las metodologías diseñadas se cuenta con procesos de precipitación utilizando sulfato de amonro o de
sodio, polietilénglicol (PEG), ácido caprílicos, Caragenina ó ftalato de hidroxi-propil-metil-celulosa.
 También es posible la purificación de la inmunoglobulina mediante metodologías cromatográficas, por ej.
cromatografía de afinidad, de intercambio iónico, de interacción hidrofóbica, de interacción tiofílica ó de
filtración en gel.
 Para lograr la disrupción de la emulsión de la yema de huevo y obtener el extracto acuoso, la yema se
homogeneiza con buffer ó agua, por ejemplo en una relación de 1:5 ó 1'.9, se congela por aproximadamente
24 o más horas y después se descongela lentamente a 4"C. El descongelado lento es un factor importante
para la separación de las fases acuosa y lipídica mediante filtración simple o centrifugación.
VENTAJAS DEL EMPLEO DE LA IgY

 El objetivo más importante es la reducción de las manipulaciones dolorosas. La tecnología lgY cumple
completamente con este requisito puesto los Ac. de la gallina se pueden obtener con facilidad mediante un
simple método no invasivo, que se basa en la acción de recolectar huevos.
 Además la cantidad de Ac. que se obtiene de una sola gallina multiplica considerablemente la cifra que
puede alcanzarse cuando se inmuniza un mamífero de tamaño similar.
Ventajas económicas.

 Una cantidad formidable de Ac. puede ser producida a partir de una sola gallina (aproximadarmente entre 17
y 35 g de lgY/ave/año).
 Esta producción posibilita nuevos campos de aplicación, como por ejemplo la inmunoterapia y la
inmunoprofilaxis de infecciones virales y bacterianas, tanto en medicina humana como veterinaria
Ausencia de reacciones cruzadas con factores
reumatoideos

 La lgY no reacciona con los FR debido a que carece de los sitios de unión ubicados en la región Fc. Por lo
tanto, el reemplazo de la lgG por la lgY en ciertas pruebas de ELISA evita la obtención de falsos resultados
positivos causados por la interferencia de los FR.
Reacciones cruzadas con anticuerpos
"humanos anti-ratón,' (HAR)

 En algunas pruebas únicamente se utilizan los fragmentos Fab con el fin de evitar la unión de las lgs con el
lugar de acople que se encuentra localizado en región Fc de la lgG, en algunos de estos casos una alternativa
sería el uso de Ac. específicos de pollo.
Falta de activación del sistema de complemento

 La lgY puede activar el sistema del complemento de las aves, pero en contraposición no puede iniciar la
cascada de reacciones del complemento de los mamíferos .
Ausencia de heteroaglutininas (suero de
Coombs, clasificación del grupo sanguíneo)

 El suero de Coombs es un antisuero con tra inmunoglobulinas humanas y es usado para detectar Ac.
humanos incompletos. Usualmente es elaborado a partir de mamíferos. Este suero puede contener hetero
aglutininas, las cuales pueden interferir con el sistema de detección de la prueba.
 El empleo de la lgY construye una elección alternativa muy recomendable debido a que los Ac. anti-lgG
humana obtenidos en pollos no presentan este tipo de hetero aglutininas.
Distancia filogenética

 La homología entre priones de distintos mamíferos es del 90%, mientras que entre los priones de mamíferos
y pollo es menor al 50%. Por esta razón, el empleo de lgY permite detectar priones altamente conservados en
los mamíferos.
 Probablemente la distancia filogenética sería la razón por la cual se pueden obtener Ac, que presentan
distinta especificidad, aún cuando pollos y mamíferos sean inoculados con los mismos protocolos de
inmunización.
APLICACIONES DE LA lgY EN
INVESTIGACIONES BIOMÉOICNS Y EN
ME. DICINA HUMANA Y VETERINARIA
 Usos terapeúticos o profilácticos de la lgY en medicina humana Xeno-
transplantes humanos
 Diarreas
 úlcera gástrica
 Caries
 Fibrosis quística.
 Enterotoxina estafilocócica
 Necrosis tumoral
 Antitoxinas
 Enfermedad celíaca
USOS TERAPÉUTICOS O PROFILÁCTICOS
DE LA lgY EN MEDICINA VETERINARIA

Síndrome urémico-hemolítico
Acuicultura