Capitulo II

Planificación de un Laboratorio de
Cultivo de tejidos e invernadero
 Condiciones de la unidad de
micropropagación

• Un laboratorio de cultivo de tejidos “In vitro” y

• Un invernadero de propagación.
 Condiciones del laboratorio de cultivo de
tejidos.
• Ubicación: El laboratorio debe estar ubicado
en un lugar donde no hay corrientes de aire,
lugares no contaminados y de poca circulación
de personas.
• Tamaño: Su determinación depende de:
• Recursos financieros.
• Capacidad de producción.
• Naturaleza del trabajo.
 Clasificación de las unidades de
micropropagación.

• Espacio disponible.
• Según la capacidad de producción y el espacio
disponible podemos clasificar las unidades de
micropropagación.
Pequeña escala: Las unidades de producción
pueden ubicarse en una casa particular
utilizando materiales y equipos adecuados a las
labores básicas de micropropagación.
Ej. Laboratorio de la UNASAM – FCA.
Clasificación de las unidades de propagación.

• A mediana escala: Se requiere implementar y/o

adecuar áreas especificas de trabajo, adquirir
materiales y equipos para este tipo de labor lo que
permite incrementar la eficiencia y uniformidad de
los resultados en la producción.
• A gran escala: Las instalaciones y equipos deben
ser diseñados en función al trabajo que
desarrollaran con la tendencia a la automatización
para mantener un flujo de producción óptimo.
 Ambientes del laboratorio
• El laboratorio debe tener 3 ambientes ó áreas:
• Área de Lavado.
• Área de transferencia.
• Área de mantenimiento de cultivo bajo condiciones
controladas. ( Cuarto de Cultivo).
Cómo mínimo debe haber dos ambientes separados,
uno para el lavado, esterilización, almacenaje de
materiales y preparación de medios de cultivo y otro
para la transferencia a condiciones “ In vitro” y para el
mantenimiento de los cultivos.
 Ambientes del laboratorio
• El laboratorio debe permanecer cerrado para
evitar la entrada de contaminantes (hongos,
bacterias, ácaros) y polvo.
• El piso y las paredes de los diferentes
ambientes deben ser pulidos, sin grietas, ni
hoyos para facilitar una limpieza y
desinfección completa.
 Área de Lavado
• Está es la que tiene más contacto con el exterior por lo
tanto esté debe ser separado con respecto a los otros
ambientes.
Funciones:
 Lavado de material de vidrio.
 Preparación de los medios de cultivo.
 Esterilización de los medios y equipos.
 Recepción del material vegetal del campo y /o del
invernadero.
 Preparación de los explantes para la transferencia.
 Área de Lavado
 Autoclavado y eliminación del material vegetal
contaminado.
 Preparación de las soluciones desinfectantes.
 Obtención del agua destilada y su
esterilización.
 Guardar el material de vidrio e instrumentos
del trabajo del laboratorio.
 Funciones de oficina.
 Área de lavado
• Recepción de visitantes al laboratorio.
Acondicionamiento:
Debe contar con un lavadero grande ( ácero
inoxidable resistente a ácidos y álcalis), agua
corriente, mesas que permitan trabajar de pie
y anaqueles para secar y guardar el material
lavado.
 Materiales y equipos del Área de lavado.

• EQUIPOS:
 Refrigeradora: Para guardar los productos
químicos y soluciones (hormonas y sales)
utilizadas en la preparación de los medios de
cultivo.
 Balanzas: a) Análitica.- Son las de mayor
precisión se utilizan para pesar pequeñas
cantidades de reactivos, hormonas y vitaminas.
Pesa en unidades microgramos, miligramos.
 Materiales y equipos del Área de lavado.

b) Balanza mecánica: Para pesar cantidades de

reactivos, azucares, en unidades mayores de
peso: gramos, kilogramos.
 Potenciómetro: Mide el pH de los medios de
cultivo, este valor es de acuerdo a la especie.
 Cocina: Para calentar el medio de cultivo para
disolver el agar.
 Destilador de agua y desionizador de agua: Se
utiliza para obtener el agua quimicamente pura.
Materiales y equipos del Área de lavado.

 Autoclave ó Olla de presión: Se utiliza para

hacer la esterilización en húmedo del material,
instrumentos, medio de cultivos, suelo.
Estos dos equipos deben estar cerca del
lavadero.
Materiales:
Probetas ( 500 ml, 1000 ml )
 Materiales y equipos del Área de lavado.

• Beaker ( 50,100,500,1000,2000,4000 ml).

• Bidón de 20 l.
• Placas petrí grandes, chicos y medianos.
• Campana de vacio.
• Erlemeyer (50, 125,250, 500, 1000, 2000 ml).
• Espátulas (grande y chica).
• Gradillas (para tubos de 10 X100, 25 x 150)
 Materiales y equipos del Área de lavado.
• Hojas de bisturí N° 10,11.
• Alcohol rectificado de 96°.
• Mangos de bisturí N° 7.
• Termómetro de máximas – mínimas.
• Tubos de 10 X100, 25 x 150.
• Tijeras 7”.
• Mecheros.
• Mandil.
• Material de lavado: detergentes, hipoclorito de Sodio,
jabones, etc.
Hormonas y otros componentes del medio
de cultivo
Hormonas , vitaminas y otros.
 Área de transferencia.
• Es el área de manipulación aséptica del
material vegetal.
• Este ambiente debe ser totalmente aislado del
medio externo.
Equipos:
 Cámara de Flujo laminar.
 Microscopio estereoscopio.
Cámara de Flujo Laminar.
Cámara de transferencia.
 Área de transferencia
• Materiales.
 Algodón.
 Alcohol 96°.
 Placas petrí y papel filtro.
 Mechero.
 Bisturís, hojas de bisturí N° 10, 11.
 Tijeras pequeñas.
 Pinzas de diferentes tamaños.
 Cuarto de cultivo
• Es el área de incubación de los cultivos, donde las
condiciones ambientales están en función de la
especie.
• La temperatura optima varia de 25°C +/- 2°C.
• Las temperaturas y la humedad relativa que es
controlada indirectamente por los equipos de aire
acondicionado.
• Si la humedad relativa baja en 50% se producirá una
perdida de agua y la concentración de sales se
incrementará en perjuicio de los cultivos.
 Cuarto de cultivo
• La humedad (80 – 100%) relativa alta favorece el
ingreso de contaminantes.
• El promedio ideal es de 60 -70%.
• Las fuentes de luz está dado por lámparas
fluorescentes de luz blanca, porque tienen mejor
calidad de luz y su distribución debe ser
uniforme.
• La iluminación puede variar entre 500 a 3000 lux.
Cuarto de cultivo
 Área de cultivo
• Los cultivos se colocan sobre estantes de color
banco y pueden ser metálicos o de madera y
pueden tomar diferentes dimensiones.
• Equipos
• Aire acondicionado.
• Termómetro de máximas y mínimas.
• Estantes iluminados.
• Timer. ( reloj controlador del tiempo).
Cuarto de cultivo
Croquis de distribución de un cuarto de
cultivo de tejidos “ In vitro”
 Condiciones de Asepsia
• Las condiciones de asepsia es uno de los
requerimientos más importantes, para
asegurar un buen crecimiento de plantas.

Oficina Cuarto de Cuarto de Cuarto de

lavado tranferencia cultivo

- Nivel de limpieza +
 Asepsia en el Laboratorio.
• La asepsia se mantiene principalmente :
1. manteniendo los ambientes aislados del
ambiente exterior.
2. Limpieza exigente de pisos, muebles, repisas con
el uso de desinfectantes.
3. Las puertas de ingreso deben contar con tapetes
con cal ó un acaricida.
4. Al ingresar usar mandiles para evitar dispersar el
polvo que puede llevarse en la ropa.
 Asepsia en el Cuarto de Lavado.
• Debe tener los materiales necesarios para la
limpieza.
• El material de vidrio (tubos, erlemeyer, beaker,
etc.) deben ser guardados en anaqueles para
evitar que se empolven.
• El material contaminado antes de ser
desechado debe autoclavarse para evitar la
contaminación del ambiente.
 Asepsia en el Cuarto de Lavado
• Este ambiente es el lugar donde se esteriliza el
material por lo tanto debe estar limpio, para
evitar la contaminación antes de usarlos.
 Asepsia en el Cuarto de transferencia
• Es el ambiente que necesita mayor cuidado en la
limpieza.
• Los principales cuidados en esta área deben hacerse
al interior de la cámara de flujo laminar y las paredes
internas deben limpiarse con alcohol 70%. Los filtros
y pre-filtros deben ser revisados continuamente.
• Las manos y superficie de la mesa serán
continuamente limpiados con un algodón embebido
durante la propagación.
 Asepsia en el cuarto de cultivo
• La limpieza con desinfectantes debe ser continua
en los pisos y repisas.
• Las gradillas de los tubos deben ser enjuagados
con una solución acaricida/fungicida entes de
ingresar al cuarto de propagación en el primer uso.
• Se debe revisar con frecuencia el ambiente para
detectar la presencia de hongos.
• Controlar continuamente el funcionamiento del
aire acondicionado.
 Invernadero – Definición

Es una estructura cerrada cubierta por

materiales transparentes, dentro de la cual es
posible obtener unas condiciones artificiales
de microclima, y con ello cultivar plantas fuera
de estación en condiciones óptimas, en cultivo
“In vitro” se realiza la aclimatación de las
plántulas obtenidas en el laboratorio.
 Invernadero- Planificación
• Las condiciones climáticas locales son determinantes
del microclima generado dentro de un invernadero y
de su manejo futuro, por lo que su conocimiento
previo es necesario para construir el invernadero.
• El clima de una zona está condicionado por los
intercambios radiactivos entre el sol y la tierra.
• Los elementos más importantes del clima para los
invernaderos son la radiación solar, la temperatura,
la humedad, el viento y las precipitaciones.
 Invernaderos - Planificación.
• La estructura más adecuada será aquélla que
proporcione las mejores condiciones al
cultivo:
• Evite los cambios bruscos de temperatura,
aquélla que sea más diáfana.
• Permita una gran ventilación y debe estar
correctamente orientado para que genere las
menores sombras posibles.
 Invernaderos - Planificación.
• Diseño: Existen diferentes diseños ( formas y
tamaño) dependiendo de la zona, clima,
disponibilidad de terreno, naturaleza del
trabajo, medios económicos.
• Existen diferentes materiales para su
construcción: madera, adobe, material noble
(ladrillo, cemento), mixto.
 Planificación – Invernaderos.
• Ubicación: Debe estar en zonas no
contaminadas.
• Aislada de otros cultivos.
• Evitar zonas de fuertes corrientes de aire.
• Cercano al laboratorio.
• Debe estar aislado como mínimo de otro
ambiente a una distancia de 5 m. del
perímetro del invernadero.
 Planificación – Invernaderos
• Orientación de este a oeste, para asegurar
que tenga la misma luminosidad en el
ambiente todo el día.
• Distribución de ambientes del invernadero.
 Área de aclimatación.
 Almacén.
 Oficina.
 Área de preparación del sustrato.
 Planificación – Invernaderos
• Área de aclimatación y producción.
• Esta área debe ser aislada ò de acceso
restringido, en este lugar se hace la
transferencia del material “In vitro” a
condiciones naturales.
• Está es la fase más crítica, pues se hace la
aclimatación gradual de las plántulas, para lo
cual debe cumplir con ciertos requisitos.
 Planificación – Invernaderos
• Debe tener conexiones de agua y desagüe.
• Los pisos deben ser pulidos.
• Debe tener buena ventilación.
• La temperatura debe ser controladas ( T=22º
C).
• Las camas de multiplicación deben instalarse
con una buena distribución de caminos, para
la realización de las labores culturales.
 Equipos y materiales
• Equipos.
Termómetro de máximas y mínimas
temperaturas.
Ventiladores.
Sistema de riego tecnificado ( goteo,
aspersión).
Equipo para medir la humedad del ambiente.
Balanza mecánica.
 Equipos y materiales.
• Sistema de iluminación y timer.
• Materiales:
• Ladrillo de techo.
• Alambre.
• Carretillas.
• Mangueras.
• Lampas, picos.