UNIDAD I

INTRODUCCIÓN
ANÁLISIS
ASIGNATURA: 420188-1
AÑO-PERIODO: 2020-1

INSTRUMENTAL Dr. Romina Romero

MÉTODO ANALÍTICO RESUMEN
Muestra Técnica Instrumental Resultado
- Alcances cualitativo/cuantitativo
- Limitaciones

Método Analítico Interpretación

Desarrollo para analito de interés -Optimizar
Variables de análisis
Analitos -Modificar
Pretratamiento de muestra
Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero
- Combinar
MÉTODO ANALÍTICO RESUMEN

DESARROLLO OPTIMIZACIÓN VALIDACÍÓN

Técnica instrumental
Variables instrumentales Parámetros analíticos
-Exactitud
Calibración -Precisión
Interferentes -Robustez
-Límite detección
Rango análisis -Sensibilidad, etc.
Pretratamientos

3
Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero
 CALIBRACIÓN MÉTODOS INSTRUMENTALES

Evaluación de la capacidad de medida de los instrumentos con objeto de garantizar la

comparabilidad de los resultados con los obtenidos por otros laboratorios.

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 4

 MÉTODOS DE CALIBRACIÓN ANALÍTICA

CLÁSICOS MODERNOS

CALIBRACIÓN EXTERNA MODELOS MULTIVARIADOS

CALIBRACIÓN INTERNA

5
Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero
CALIBRACIÓN EXTERNA (DIRECTA)

Relación matemática entre la concentración de un analito y la señal medida.

Se preparan estándares de diferentes concentraciones y se mide para

cada uno de ellos la señal de interés.

Se suele preparar un blanco de reactivos que se resta de cada estándar.

La determinación se hace por mínimos cuadrados o regresión lineal.

Muy útil cuando hay ausencia de interferentes y cuando NO hay efecto

de la matriz de la muestra.

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 6

 Calibración directa (externa)

Calibración lineal univariante

1. Se toman una serie de patrones de calibración de los que se conoce la concentración del analito.

2. Estos patrones se miden en el instrumento analítico, y se representa gráficamente la concentración

de cada uno de los patrones frente a las respuestas de medición.

3. Una vez elaborada la gráfica de calibrado, se puede obtener mediante interpolación la

concentración de la muestra a determinar, midiendo ésta con el instrumental analítico en las mismas
condiciones en las que se hizo la medida de los patrones (Miller y Miller, 2002).

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 7

EJEMPLO: CUANTIFICACIÓN DE FENOL EN AGUA DEL RIO BIO-BÍO (pH= 6.55)

BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA

AGUA
FENOL (Merck) EN AGUA AGUA DE RIO BIO BIO
DESTILADA
DESTILADA pH= 6.55 pH= 6.55
pH= 6.55

CURVA DE CALIBRADO
Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 8
Regresión lineal Y = bX + a
Concentración Señal
Analítica
0 0
2 9
4 13
6 16
8 21
10 24

X Y

CALIBRACIÓN LINEAL
C (pg/mL) Señal (FL)
2 5
4 9
6 13
8 16 Los puntos de calibración tienen un error aleatorio
causado por la respuesta instrumental, en el valor de Y.
10 21 Hay que buscar la mejor recta que pase por los puntos
12 24 de calibración y calcular la ordenada en el origen y la
pendiente de la misma.

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 10

Error en la curva

ERROR TÍPICO DE LA CURVA

(X, Y) : Centro de
gravedad
Cálculo del error aleatorio en concentración

Tiende a 0 cuando la señal se

encuentra en la zona central de
la calibración

Número de repeticiones de la lectura

Se minimiza Sx0

Centro de gravedad
Se minimizan los errores e
incertidumbre
 C (pg/mL) A (FL)
2 5
4 9
6 13
8 16
10 21 CALIBRACIÓN EXTERNA
12 24 Ventajas: Sencillo, rápido.

Limitación: Efecto de matriz

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 13

 ¿EFECTO DE MATRIZ?

En algunas ocasiones, al medir un ANALITO, hay otros componentes en la muestra que interfieren
en los resultados de medición.

¿Qué hacer?

Una primera solución, es lo que se conoce como aproximación a una matriz comparable,
consiste en tomar una muestra similar a la muestra problema, pero sin el analito a
determinar, y añadir esta sustancia para formar disoluciones patrón que poder comparar
con la muestra problema.

La segunda solución es utilizar el método de las adiciones de patrón o adición estándar.

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 14

 MÉTODOS DE CALIBRACIÓN ANALÍTICA

CLÁSICOS

CALIBRACIÓN EXTERNA

CALIBRACIÓN INTERNA ADICIÓN ESTÁNDAR

PATRÓN INTERNO

15
Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero
 ADICIÓN ESTÁNDAR
El método consiste en añadir cantidades de concentración conocida de analito a la muestra a determinar.
Y con el aumento de la señal de respuesta, se puede determinar la concentración de analito que había
antes de la adición.

Se toman volúmenes iguales de la muestra a analizar, y a todas, menos a una de ellas, se le adiciona
concentraciones conocidas y crecientes del analito, y por ultimo todas ellas se diluyen al mismo volumen.
De esta forma se tienen disoluciones con una misma concentración de analito problema, a las que se añaden
concentraciones distintas de patrón, que es la misma especie que el analito.

16
Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero
Una vez realizado, se determinan todas las señales para cada una de las disoluciones, y se
representaran gráficamente. Se calcula la línea de regresión, pero este método tiene una
diferencia con la calibración directa, y es que la concentración del analito problema se
determina mediante extrapolación al eje X.

Ventajas: se consigue que el efecto matriz sea contrarrestado.

Limitaciones: es un proceso muy laborioso. Se necesita de un material diferente para cada

adición estándar, y se tiene que hacer una o diversas adiciones a cada muestra.

¿ES NECESARIO?
17
Morris Bader “A systematic approach to standard addition methods in instrumental analysis” J. Chem. Educ., 1980, 57 (10), p 703
EFECTO MATRIZ
Para evaluar estadísticamente si existe un efecto matriz debemos comparar la curva de calibración estándar (es decir,
calibración directa) con la curva de adición estándar. Si las pendientes de ambas curvas son “iguales” podemos afirmar que
no hay evidencia de efecto matriz. 

USAR ADICIÓN ESTÁNDAR PARA CUANTIFICAR

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 18

 MÉTODOS DE CALIBRACIÓN ANALÍTICA

CLÁSICOS

CALIBRACIÓN EXTERNA

CALIBRACIÓN INTERNA ADICIÓN ESTÁNDAR

PATRÓN INTERNO

19
Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero
 PATRÓN INTERNO
Método utilizado para compensar errores de la técnica analítica.

- Errores aleatorios y sistemáticos

- Fluctuaciones instrumentales y metodológicas
- Variaciones no controlables que ocurran entre muestra y muestra

Se utiliza como estándar interno, una sustancia diferente al analito pero que tengan propiedades
físico-químicas similares, provocando que se vean afectadas de forma similar durante el análisis.

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 20

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 21
 MÉTODOS DE CALIBRACIÓN ANALÍTICA

CLÁSICOS

CALIBRACIÓN EXTERNA

CALIBRACIÓN INTERNA ADICIÓN ESTÁNDAR

PATRÓN INTERNO

22
Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero
 PROXIMA SESIÓN…

 Parámetros Analíticos

¿Límite cuantificación?

¿Límite detección?
¿Robustez?

¿Sensibilidad?

¿Rango lineal?

Análisis Instrumental- Dr. Romina Romero 23