Alergia e Inmunología

Clínica Pediátrica
UMAE HOSPITAL DE PEDIATRIA CMNO

CYNTHIA IRAIS MARTINEZ MARTINEZ R1AICP

 HISTORIA DE APOPTOSIS
1800s Numerosas observaciones sobre muerte celular
1908 Mechnikov gana premio Nobel (fagocitosis)
1930-40 Estudios sobre metamorfosis
1955 Inicio de estudio sobre lisosomas
1964-66 Se describe sobre Necrosis
1971 KERN, WYLLIE y CURRIE. Término apoptosis
1977 Gen de muerte celular en Caenorhabditis elegans
1980-82 Observa DNA & identifica ced-3
1989-91 Se identifica Apoptosis, incluyendo bcl-2,
FAS/apo1 y p53, ced-3 secuencial

Kuby. Inmunología. 7ª edición. Editorial Mc Graw Hill. 2013

 DEFINICIÓN

• La apoptosis, o muerte celular programada, es un proceso de pendiente de energía

mediante el cual una célula desencadena su propia muerte
• Se contrasta con necrosis  forma de muerte celular que surge por lesión o
toxicidad

Desmantelan su contenido sin alterar su membrana, e

inducen a las células vecinas a fagocitarlas antes de que
Células lesionadas muestran tumefacción y estallan, puedan liberar cualquier material inflamatorio.
lo cual libera su contenido y posiblemente
desencadena una respuesta inflamatoria perjudicial.

Kuby. Inmunología. 7ª edición. Editorial Mc Graw Hill. 2013

Kuby. Inmunología. 7ª edición. Editorial Mc Graw Hill. 2013
Adolfo. Mecanismos de muerte celular : apoptosis y necrosis. Rev Arg Anes 2002
 FASES DE APOPTOSIS
muerte celular programada

Fase efectora
• Aumento del contenido de Ca intracelular y activación de
grupos enzimáticos y cambios del citoesqueleto celular
• Cambios de tamaño y forma celular
Fase degradativa
• Degradan proteinas (caspasas) y ADN (endonucleasas) y se
condensa cromatina
Fase de eliminación
• Los macrofagos fagocitan los cuerpos apoptóticos atraídos
por ligandos específicos de fosfatifilserina.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 • Existen dos razones diferentes para explicar por qué las células mueren por apoptosis:
• Eliminación de células en exceso
• Eliminación de células que representan un peligro para la integridad del organismo

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 Ejemplos de eliminación de células en exceso:
• Reabsorción de la cola de los renacuajos
• Eliminación de las membranas interdigitales en la formación de los dedos en el feto.
• Nematodo el C.elegans tiene que perder por apoptosis 131 células  Adulto
• Eliminación del endometrio al iniciarse la menstruación
• La formación de las sinapsis entre neuronas en cerebro requiere la eliminación por
apoptosis de una serie de células.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 Ejemplos de eliminación de células que representan un peligro para la integridad del organismo
• Células infectadas con virus, son destruidas por los linfocitos T citotóxicos.
• Células del sistema inmune. Después de la respuesta inmune, las células efectoras han de ser
eliminadas para prevenir que ataquen a los constituyentes propios del organismo.
• Células con DNA lesionado. Incrementan producción de p53, un poderoso inductor de la
apoptosis.
• Células cancerosas. La radioterapia y la quimioterapia inducen la apoptosis en algunos tipos de
cáncer.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 INDUCCIÓN DE LA APOPTOSIS

Lesion DNA
Inhibición por
Elevados
oxidantes, luz
niveles de
Factores de UV,
Hormonas oxidante en TNFa Lingando Fas
crecimiento radiaciones,
el interior de
fármacos
la celula
quimioterapé
uticos.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 • La apoptosis está conducida por dos clases de proteasas especializadas:

Se activan después de un estímulo

INDUCTORAS apoptótico por autoproteolisis.

CASPASAS
EFECTORAS Se activan por las caspasas iniciadoras
en una cascada amplificadora.

Son cisteína proteasas que se expresan como zimógenos

inactivos y que se procesan a estado activo por proteolisis.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 • CARACTERISTICAS
1. Cisteína proteasas especificas de aspartato
2 Sintetizadas como procaspasas que adquieren su
actividad por proteólisis
3. Efectúan proteólisis irreversible
4. Las caspasas y sus inhibidores coexisten en células
normales

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 Asp Prodominio terminal
• Las procaspasas (30-50kD) contienen tres dominios:
Subunidad larga (p20)
Asp
• 14 caspasas de mamífero Subunidad pequeña (p10)

• División por similitud de secuencia de dominios de las subunidades

Grupo inflamatorio Grupo iniciador Grupo efector o ejecutor

1,4,5,11, 12, 13, 14 2, 8, 9, 10. 3, 6, 7.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 • Las caspasas inflamatorias y las iniciadoras poseen:

DOMINIOS DE LA MUERTE (PD LARGOS)

Domino efector de muerte DED
Dominio de reclutamiento de caspasas CARD
Dominio de muerte DD

Estos dominios median las interacciones proteína-proteína

entre las procaspasas, juegan importantes papeles en la
activación de las procaspasas

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 • Se componen de dos heterodímeros (p10
-p20)
• Formar tetrámero dispuesto en dirección
opuesa
• 2 subunidades pequeñas y dos
subunidades grandes.
• Cada heterodímero contiene un sitio
activo en el que se unen.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 Cortar contactos con células vecinas,

Reorganizar el citoesqueleto,
• La capacidad proteolítica de las
caspasas activas conduce a la
Activar las endonucleasas (fragmentación del
degradación de una serie de DNA),

proteínas y lleva consigo las

Desmantelar las láminas nucleares
misiones siguientes: (condensación),

Expresar señales de fagocitosis (fosfatidilserina),

y

Activar proteínas específicas para preparar a la

célula para el cese de las funciones metabólicas.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 • En general, son dos las vías que conducen a la activación de las caspasas.
EXTRINSECA
Mediada por
ligandos que se
unen a receptores
en la superficie
celular.
Vía de Granzimas
(mediada por LC T)

Mediada por estrés

celular o por lesión
en el DNA.
INTRINSECA

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

Señales de Receptores Adaptadores Activadores Reguladores Efectores
muerte para señales (Iniciadoras)
de muerte

TNF FADD/MORT Caspasa 8 Inhibidores (AA) Caspase 3

Fas
FasL TRADD Caspasa 9 Bcl-2 Caspasa 6
TNFR1 DR
Ausencia factores RIP Caspasa 10 Caspasa 7
XL
de crecimiento Caspasa 2 Caspasa 3 like
W
UV Caspasa 1 like FLIP
IAP

Promotores (PA)
BAX
BAK
Bim
Bah BH3-only
Bad
Bid

Moléculas implicadas en regulación

 VÍAS INTRÍNSECA O MITOCONDRIAL
Apoptosis inducida por estres.

• Se inicia en la mitocondria con la salida del citocromo c.

• Activación de Bax, mediada por p53
• Bax se asocia con el complejo de poro mitocondrial de permeabilidad transitoria
(MPTPC)
• Transportador de adenín nucleótido (ANT),
• Canal aniónico mitocondrial dependiente de voltaje (VACN)
• Ciclofilina D

• Participa en la regulación del calcio, el pH, el potencial de la Bax induce apertura del poro
membrana (PM), y el volumen mitocondrial al formar complejo ANT
• Funciona como un canal aniónico. (membrana interna
mitocondrial)

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 SMAC/DIABLO
APERTURA DE PORO:
• Descenso en potencial de membrana
• Salida de factores apoptóticos entre los que se incluye:

2. Smac/diablo, que
1. Citocromo c, que
bloquea la acción de
desencadena la
las proteínas
activación de las
inactivadoras de la
caspasas
apoptosis (IAP)
3. Factor inductor de
la apoptosis (AIF)
que estimula la
apoptosis a nivel
nuclear
independientemente
de las caspasas

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 • La salida al citosol del citocromo
c desencadena la apoptosis vía
caspasa-9 y Apaf-1.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 Bcl-2 (AA)
• Proteína que se expresa en membrana
externa de célula sana
• Se une a una molécula de proteína
denominada Apaf-1 (factor activador de
las proteasas apoptogénicas), por lo que
se encuentra en forma inactiva
• Habilidad pro-apoptotica y anti-apoptotica Alteración:
• Mitocondria libera citocromo c.
• Bcl-2 deja libre a Apaf-1 que se une al citocromo

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 Formado por 3 dominios

Señales de muerte

En condiciones normales se encuentra en el citosol en forma

inerte.
Formación del apoptosoma. Varias unidades Apaf-1 se unen formando el apoptosoma.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

SMAC/DIABLO
 VÍA EXTRÍNSECA MEDIADA POR RECEPTOR

• Después de la activación de un receptor de muerte

(FasL o TNF R1)
• Proteína adaptadora FADD media la inmediata
activación de la caspasa-8 (caspasa iniciadora).
• Una vez activada, desencadena su vez, la activación de
otras caspasas, entre las que se incluye la caspasa-3
(caspasa ejecutora).

Caspasa 8 activa a su vez via apoptótica mitocondrial al activar

proteína BID

FADD: Dominio de muerte asociado a Fas

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003
 (CD95)

Factor intermedio FADD

 Receptores
TNRF 1
Señalización se produce en CT activadas por
macrófagos ante infección
Union TNRF 1 + TNF a  Trimerizacion  se une
TRADD
Recluta TRAF2 (activa a NFkB y JNK/Ap1)
Se asocia a FADD  Factores
induce apoptosis
de (rotura de
procaspasa 8
transcripción que
inducen genes
proinfl e
inmonomduladores
 Receptores
Fas
• Células T citotóxicas reconocen
célula objetivo producen ligando
Fas, se une a receptor Fas de célula
infectada conduciéndola a
apoptosis
• Células T activas al final de
Eliminar

respuesta inmune
• Destrucción de células
inflamatorias e inmunes

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

Pavón. Inmunología Molecular, Celular y traslacional. 2016
 FACTOR INDUCTOR DE LA APOPTOSIS (AIF)

• Se localiza en la mitocondria y sale de ella en respuesta a un estímulo de muerte.

• Cuando la célula recibe una señal o mediante la inducción de la apoptosis  se dirige al
núcleo
• Se une al DNA
• Desencadena la destrucción del DNA y la muerte celular.

Cascales. Bases moleculares de la apoptosis. Anal Real Acad Nal 2003

 EFECTOS NUCLEARES: FRAGMENTACIÓN DE DNA

• Descrita por Willie en 1980

• DNasa activada por caspasa:
CAD
• Degrada rápidamente DNA
cromosómico.

Cascales. Bases moleculares

Cascales. Basesde la apoptosis.
moleculares Anal
de la apoptosis. AnalReal Acad
Real Acad Nal 2003
Nal 2003
 Condensación de los
componentes del citoplasma
AL FINAL cubiertos con membrana celular
y condensación de la cromatina
(cuerpos apoptóticos)

El ADN se fragmenta en trozos

de 185 pares de bases o
múltiplos.

Son reconocidas por receptores

situados y son fagocitadas con
rapidez, sin desencadenar una
respuesta inflamatoria

Adolfo. Mecanismos de muerte celular : apoptosis y necrosis. Rev Arg Anes 2002

Pavón. Inmunología Molecular, Celular y traslacional. 2016

 Proteasas que no median la fragmentacion de ADN de forma
APOPTOSIS directa, activan una via apoptosica dentro de la celula.
Perforación de la
membrana celular e
introducción de gránulos Granzimas
citoplasmáticos
(granzimas A y B)
B A

Caspasa 9 -10 Iniciadora

Activación de caspasa 3
Vía de ejecución

Ejecutora

…
Elmore S., Toxicologic Pathology
(2007), 35: 495-516
 APOPTOSIS

Vía Extrínseca Vía Intrínseca Granzimas

Ligando de muerte Cambios mitocondriales B A

Receptor de muerte

Formación de apoptosoma
Formación de
disco Caspasa 9-10
Activación de caspasa 9
Iniciadora Iniciadora
Activación de
caspasa 8

Iniciadora Activación de caspasa 3

Vía de ejecución
Ejecutora

Elmore S., Toxicologic Pathology (2007), 35: 495-516

 APOPTOSIS

• Cambios celulares
• Morfológicos
• Fragmentación de ADN
• 160-200 (185) pares de bases
• Protusiones de la membrana celular
• Reducción de volumen y perdida de la adhesión celular
con otras células
• Formación de cuerpos apoptoticos

• Bioquímicos
• Externalización de fosfatidilserina
• Fragmentacion proteolítica de enzimas intracelulares

Elmore S., Toxicologic Pathology (2007), 35: 495-516

 …
APOPTOSIS Cambios citomorfológicos
Condensación de cromatina y
citoplasma, fragmentación nuclear

Formación de cuerpos apoptóticos

Macrofago

Elmore S., Toxicologic Pathology (2007), 35: 495-516

Pavón L, Jiménez MC, Garcés ME. Inmunologia molecular, celular y traslacional. Wolters Kluwer. 2016
 ENFERMEDADES CON ALTERACIÓN DE LA
APOPTOSIS
Enfermedades Aumento Reducción

Infecciones VIH, HPV Herpes V, Adeno V

Autoinmunes T. Hashimoto LES, E. Graves, Diabetes I,

A. reumatoide

Neurodegenerativas Alzheimer, Huntington, Esclerosis múltiple

ELA,

Neoplásicas S. Mielodisplásico Ca mama, próstata, ovario,

L folicular
Cardiovasculares Infarto miocardio, AVC

Déficit de metales Cu, Se, Zn, Cd, Fe, Cr