Metabolismo del ARN

Dogma central de la biología molecular

 Metabolismo del ARN
Generalidades:

 Unica molécula con funciones de almacenamiento de información

genética y de catálisis (ribozima)

 Principales clases de ARN (procariotas y eucariotas):

 RNA mensajero (RNAm)
 RNA de transferencia (RNAt)
 RNA ribosomal (RNAr)
 Síntesis de ARN dependiente de ADN
Transcripción:

 Similitudes con replicación:

Mecanismo químico, polaridad y uso de cadena molde.

 Diferencias con replicación:

 No se requiere un iniciador (primer), se transcriben secuencias
cortas de ADN y solo una de las hebras de ADN sirve de molde.
 Síntesis de dependiente de ADN
• RNA es sintetizado por medio de RNA-
polimerasas:

RNA polimerasa dependiente de DNA: sintetiza un

polímero de ARN a partir de ribonucleósidos 5´trifosfatos
(ATP, GTP, UTP y CTP) en dirección 5´- 3´sobre un
molde de ADN.

Requiere de Mg+2
Transcripción en E. coli
 Transcripción en E. coli

Se desenrollan 17 pb en cada punto. La burbuja de

transcripción se mueve de izquierda a derecha
conforme se vá dando la síntesis de RNA.
Hebra molde y no molde (codificante) del
DNA
 Estructura de la RNA polimerasa de E. coli

La RNA polimerasa no tiene actividad exonucleasa 3’ 5’

(proofreading). Por ello, introduce 1 error por cada 104-105
ribonucleótidos incorporados durante la transcripción
 Porqué no es tan
importante el hecho de que
la RNA pol introduzca
errores en la transcripción?
 Porqué en cambio si es
de primordial importancia
evitar estos errores
durantre la replicación?
ETAPAS DEL PROCESO DE TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS

1. Ensamblaje de la RNA polimerasa y los factores de transcripción del

promotor

2. Iniciación

3. Elongación

4. Terminación

5. Liberación
Inicio de la transcripción está regulado

• *La transcripción de cada gen está regulada

cuidadosamente para asegurar que la célula tendrá las
proteínas adecuadas en la concentración y momento
adecuado.

• -Variación en la afinidad de la RNA pol por diferentes

promotores (Ej: genes del shock térmico “heat-schock
genes”)

• -Proteínas que se unen a secuencias en y alrededor de

los promotores: activadores y represores
Inicio de la transcripción está regulado

• *Por ser la transcripción el primer paso en

una via energéticamente cara y complicada
que dará origen a la síntesis de proteínas, la
regulación genética en procariotas y
eucariotas se da en mayor escala a nivel
de transcripción
Las células eucariotas poseen 3 tipos de RNA
polimerasas

• RNA pol I: síntesis de un transcrito de RNA

preribosomal que contiene al precursor de los
RNAr 18S, 5.8S y 28S.
• RNA pol II: sintetiza los RNAm y otros RNA con
funciones especiales. Reconoce miles de
promotores.
• RNA pol III: sintetiza tRNAs, el rRNA 5S y otros
RNA especializados.
• Cada una reconoce promotores diferentes.
Secuencias comunes en los promotores
reconocidos por la RNA pol II eucariota
Proteínas requeridas para la iniciación de la transcripción en
eucariotas
 Terminación de la síntesis del ARN
• En bacterias hay dos tipos de señales de terminación:

 rho-dependientes: la proteína rho tiene actividad RNA-DNA helicasa

dependiente de ATP. Se une a la secuencia de terminación (transcrita
en forma de horquilla) y produce disociación del nuevo transcrito de
RNA.

 rho-independientes: a) secuencias que permiten formación de

horquillas al ser transcritas; b) colas de adeninas que se transcriben en
urilidatos. En ambos casos la transcripcion se detiene, hay disociación
del nuevo transcrito de RNA.
La RNA pol dependiente de ADN puede ser inhibida
selectivamente

 Actinomicina D y Acridina: agentes intercalantes que

deforman la estructura del ADN impidiendo paso de la RNA
pol.

 Rifampicina: se une específicamente a la subunidad b de la

RNA pol bacteriana.

 a-amanitina: componente tóxico de hongo venenoso Amanita

phalloides. Bloquea RNA pol II y RNA pol III. No afecta
síntesis de RNA en bacterias.
 Procesamiento del ARN
• Definiciones:

 Transcrito primario: nueva molécula de ARN recién sintetizada,

sin procesar

 Intrones: secuencias no codificantes localizadas entre secuencias

codificantes

 Exones: secuencias codificantes que conforman la secuencia de

una proteína
 Procesamiento del ARN
 Splicing (corte y empalme): proceso en el que los intrones
son removidos del transcrito primario y los exones se juntan
para formar una secuencia contigua que codifique por un
polipéptido funcional.

 Transcritos con mayores modificaciones post-

transcripcionales: mRNA de eucariotas y tRNAs de bacterias
y eucariotas.

 Gran parte de las reacciones de modificación molecular del

ARN son realizadas por ribozimas mas que por enzimas
protéicas.
 Procesamiento del ARNm

• Al transcrito primario de RNAm se le agrega un casquete

constituído por 7-metilguanosina en el extremo 5´.

• Ocurre corte de intrones y empalme de exones (splicing).

• Adición de una cola de poliA´s (20 a 250 residuos) en el

extremo 3’ terminal por la enzima poliadenilato polimerasa.
RESUMEN: Formación del transcrito primario y su procesamiento durante
la maduración del RNAm eucariota

II
Demostración del procesamiento del ARNm por hibridación DNA-
RNAm maduro del gen de la ovoalbúmina

Definición del RNA maduro por hibridación.

¿Qué fue lo que pasó?
 Mecanismos de splicing (corte y empalme) del ARN
dependiendo de la clase de intrones

Existen 4 clases de intrones:

• Clase I y clase II:
• Son auto corte y empalme, no requieren enzimas protéicas.
• Intrones del grupo I se encuentran en algunos genes que
codifican por rRNAs, mRNAs y tRNAs en nucleo, mitocondria
y cloroplastos.
• Intrones del grupo II en transcritos primarios de mRNAs
mitocondriales o de cloroplastos en hongos, algas y plantas.
 Clase III:
• Incluye transcritos de mRNA nucleares (eucariotas).
• Se les llama intrones de espliceosoma porque necesitan de un
complejo protéico llamado espliceosoma, formado de
complejos especializados de RNA-proteína conocidos como
pequeñas proteínas nucleares (snRNPs, small nuclear
ribonucleoproteins).
 Mecanismos de splicing (corte y
empalme) del ARN dependiendo de la
clase de intrones

• Clase IV:
– Hallada en ciertos ARNt,
– Se distinguen de los grupos I y II
en que el corte y empalme
requiere ATP y una
endonucleasa.
RESUMEN: Formación del transcrito primario ARNm en
eucariotas y su procesamiento de maduración
 PROCESAMIENTO DE LOS RNA PRE-RIBOSOMALES SUCEDE EN
PROCARIOTAS Y EN EUCARIOTAS

En vertebrados:: las reacciones de corte requieren complejos RNA-proteína del

nucleolo denominados pequeños ARN nucleolares (snoRNA) .
 Procesamiento de los tRNAs

• Procesamiento de tRNA en bacterias y eucariotas:

tRNA
Nucleotidiltransferasa
PROCESAMIENTO:
A. Eliminación del extremo 5’
terminal por la RNAsa P y
corte del extremo 3’
terminal por RNAsa D
 Procesamiento de los tRNAs

• B. Corte y empalme y adición de la secuencia CCA

 Procesamiento de los tRNAs
• C. Modificación de algunas bases por metilación, desaminación o
reducción en posiciones características del tRNA
 Procesamiento final del ARN
Degradación completa del RNA.

Velocidad de recambio es crítica, pues determina la

concentración dinámica (estado estacionario) del producto de
un gen y la velocidad a la cual las células pueden “apagar” la
expresión de un gen cuyo producto ya no es necesario.

Punto crucial en la regulación genética.

 Los ARNm celulares se degradan a diferente velocidad
• Productos genéticos que se necesitan
por poco tiempo, su ARNm puede
permanecer íntegro en la célula por
segundos o minutos.

• Productos que la célula necesite

constantemente pueden tener ARNm
íntegros y estables por horas.

• En procariotas una estructura de

terminación rho-independiente le confiere
estabilidad contra degradación.
 Los ARNm celulares se degradan a
diferente velocidad
• En eucariotas estas mismas horquillas terminadoras
confieren estabilidad, así como el casquete 5´y la cola de
poliA 3´.

• El ARNm es degradado por ribonucleasas presentes en

todas las células.