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Medición Del Crecimiento Bacteriano
Medición Del Crecimiento Bacteriano
2.2.2. Turbidimetría
3. Determinación de la actividad celular:
Evita:
- Riesgo de contaminación
- Gasto de material excesivo
Diluyentes:
• NaCl al 0,85 %
• Agua peptonada al 0,1 %
• Solución Ringer al ¼
– Volúmenes:
• 90 ml (para el homogenato)
• 225 ml (para el homogenato)
• 450 ml (para el homogenato)
• 9 ml (para diluciones subsiguientes decimales)
• 9,9 ml (para diluciones subsiguientes centecimales)
Homogenato o primera dilución (1/10)
2 ml
= 30 colonias/10 ml = 3 colonias/ml
Límite entre plaqueo y NMP
Muestras sólidas:
10 ml del homogenato o dilución 1/10 (= 1 g )
dividido en 5 placas (+ 2 ml en c/u)
2 ml
= 30 colonias/g
Filtración por membrana de 0,2 µm
La membrana de celulosa
retiene a los
microorganismos en su
malla con poros de 0.20-
0.45µm. Esta membrana
se transfiere a un medio
de cultivo para el
desarrollo de colonias.
Número Más Probable
También llamada técnica de dilución en tubo,
proporciona una estimación estadística de la
densidad microbiana presente en la muestra.
Se basa en que la probabilidad de obtener
tubos con crecimiento positivo disminuye
conforme es menor el volumen de muestra
inoculado.
Caldo MacConkey
2X 1X 1X
10 ml 1 ml 0,1 ml
de muestra
Número Más Probable
(< 30 microorganismos/g o < 3 microorganismos/ml)
• Interpretación de la tabla de la guía práctica
• N° clave: son tres dígitos. El 1° corresponde al último lugar en que todos los
tubos de la serie dieron positivo más los 2 inmediatamente superiores.
NMP en el inóculo
N° de Tubos Positivos en
de la serie
intermedia de
Primera serie Serie intermedia Última serie
tubos
0 0 0 < 0.03
0 0 1 0.03
0 0 2 0.06
0 0 3 0.09
0 1 0 0.03
0 1 1 0.061
0 1 2 0.092
0 1 3 0.12
0 2 0 0.062
0 2 1 0.093
0 2 2 0.12
0 2 3 0.16
0 3 0 0.094
Etc. Etc. Etc. Etc.
3 3 2 11
3 3 3 > 24
Para determinar el NMP/g o ml de muestra se aplica la
siguiente fórmula:
NMP/g o ml = Valor NMP de la tabla / cantidad de muestra inoculada en
la serie intermedia
Ejemplo:
100 ml de 10 ml de 1 ml de 0,1 ml de
10-1 10-1 10-1 10-1
= 10 g o ml = 1 g o ml = 0,1 g o ml = 0,01 g o ml
3 3 2 0
1 ml
(b)
Alternativas de cálculo de ufc/g o ml:
1. ufc/g o ml = N / vol x dil
donde:
ufc: unidades formadoras de colonias
N: número promedio de colonias obtenidas
para una dilución dada
vol: volumen de inóculo
dil: dilución
2. Dividir N por la cantidad de muestra inoculada,
independiente del método de plaqueo utilizado
es decir superficie o profundidad
Después de incubar (dependiendo del grupo de
microorganismos a determinar)
• Psicrófilos (a 4°C)
• Mesófilos (a 30 ó 35°C)
• Termófilos (a 55°C)
• Termodúricos (60°C, 30 min)
• Esporas bacterianas aerobias (80°C, 10 min
e incubación aerobia)
• Esporas bacterianas anaerobias (80°C, 10
min e incubación anaerobia)
Expresión de resultados:
b = 2 ó más de 2
1 = 1.0 X 100
Resumiendo
• > 30/g o > 3/ml realizo plaqueo.
• = 30/g o = 3/ml plaqueo en 5 placas 2 ml de la
muestra líquida o del homogenato de la
muestra sólida (total = 10 ml de la muestra
líquida ó 1.0 g de la muestra sólida).
• < 30/g o < 3/ml puedo realizar NMP o
filtración por membrana (si lo permite la
muestra, es decir si es filtrable por ej. Agua
potable)
Realizar esquema de diluciones y cuál
o cuáles deberá sembrar para:
a. 1,5 x 106 ufc/g (siembra en superficie)
b. 3,8 x 108 ufc/ml (siembra en profundidad)
c. 8,4 x 105 ufc/g (siembra en superficie)
d. 1,0 x 104 ufc/ml (siembra en profundidad)
e. 2,8 x 107 ufc/g (siembra en superficie)
f. 9,2 x 105 ufc/ml (siembra en profundidad)